肾阴虚证和肾阳虚证基因表达谱的比较研究

目的 探讨肾阴虚证和肾阳虚证基因表达谱的异同. 方法 选取IgA肾病以及亚健康状态肾阴虚证和肾阳虚证患者作为研究对象,以健康人作为正常对照组;应用基因芯片技术,研究肾阴虚证和肾阳虚证的基因表达谱;结合MAS软件对差异表达基因进行分析. 结果 肾阴虚证组和肾阳虚证组基因表达谱存在明显的差异,全部的差异表达基因有145条;肾阴虚证组、肾阳虚证组与正常对照组比较,二者共同的差异表达基因有9条. 结论 基因芯片是研究中医证候相关基因的比较理想的一种技术方法;肾阴虚证与肾阳虚证差异表达基因存在明显不同,提示可为中医辨证分型提供科学依据.     

比较虚寒证与虚热证模型大鼠肝全基因表达谱的差异

目的采用基因芯片技术研究虚寒证与虚热证大鼠肝全基因表达谱的差异。方法使用中药复方虚寒证、虚热证大鼠模型,基因芯片检测各组大鼠基因表达,筛选差异表达基因,进行基因功能分类注释,荧光定量PCR验证芯片结果。结果虚寒模型组与虚热模型组比较有114条基因差异表达,主要涉及氧化还原酶相关基因。脂代谢相关氧化还原酶基因显著下调,细胞色素P450家族基因显著下调,提示虚寒证模型大鼠脂代谢与生物转化能力的降低。结论虚寒证与虚热证虽然同为虚证,但有寒证和热证不同的表现,氧化还原酶活性相关基因的异常表达可能是虚寒证与虚热证出现不同症状的物质基础。     

基于差异基因表达谱的慢性乙型肝炎病证结合研究

【目的】通过检测分析慢性乙型肝炎(简称乙肝)典型证候的差异基因表达谱,探讨乙肝中医证候分型与基因表达之间的关联。【方法】采集乙肝患者和健康者的外周血样本,提取白细胞中的总RNA;运用基因芯片技术检测基因表达,并对其表达谱进行比较分析;使用实时定量RT-PCR验证部分基因表达。【结果】乙肝患者与健康者之间以及乙肝肝郁脾虚证、湿热蕴结证和肝肾阴虚证3个证候的患者之间的基因表达谱均存在明显差异。对3个证候组相对于健康组的差异表达基因进行差异基因、聚类、功能(gene ontology,GO)分析和信号传导通路(Pathway)分析发现,肝郁脾虚证单独调变的基因主要与细胞动力学过程等有关;湿热蕴结证单独调变的基因主要与脂质储存的正向调节等有关;肝肾阴虚证单独调变的基因主要与氮氧化合物合成酶调节物活性等有关。采用实时定量RT-PCR验证部分基因的表达,结果与基因芯片检测结果趋势基本一致。【结论】乙肝肝郁脾虚证、湿热蕴结证和肝肾阴虚证患者白细胞具有特征性的基因表达谱和显著性差异表达基因,提示乙肝中医临床辨证分型具有分子生物学物质基础。     

气滞血瘀证大鼠舌部基因表达谱变化初探

目的采用基因芯片技术研究气滞血瘀证模型大鼠舌部全基因表达谱的变化以及差异基因涉及的生物过程和通路,以期为研究血瘀证相关理论和药物治疗提供科学依据。方法采用高脂饲料复合慢性不可预知刺激复制气滞血瘀动物模型,利用基因芯片技术分析正常大鼠与模型大鼠舌中全基因表达谱的变化以及所涉及通路。结果气滞血瘀证大鼠与正常大鼠比较,结果显示差异表达基因有277个,其中上调基因68个,下调基因209个。GO和Pathway分析结果显示气滞血瘀证分别与炎症、脂代谢、免疫反应等生物过程以及补体与凝血级联通路、PPAR信号通路、细胞色素P450异物代谢通路等7条通路的改变有关。结论 CYP450以及补体与凝血级联通路、PPAR信号通路中的差异基因可能涉及血瘀证的发病机制,为血瘀证以及相关药物的研究提供依据。     

基因芯片技术在免疫学研究中的应用及其对中医药研究的启发

基因芯片技术是一种高通量的研究手段,可以在同一时刻对成千上万个基因的表达情况进行分析,形成完整的细胞基因表达谱.目前该技术已应用于免疫学研究中,如免疫细胞发育、成熟、活化、分化及其免疫应答的调控机制,变态反应的分子基础,疾病的临床表型和基因表达谱的关系,免疫药理学等,加深了人们对免疫系统的认识.同样,它也将有助于中医药对免疫细胞和免疫应答的调控机制研究、中医药治疗变态反应性疾病机制的研究、中医辨证的标准化以及中药药理研究等.基因芯片实验结果的数据分析一是比较不同种类样本基因表达量的差异,二是为了获得特征性的基因表达谱,但关于样本量的多少、统计方法的使用尚没有统一的认识,研究人员正努力制定关于基因芯片实验的标准.     

心脏重塑时基因表达谱改变及基因调节网络的初步研究

近年发展起来的基因芯片(DNA microarray)技术可以一次检测千百种基因的表达水平,具有传统基因表达检测方法无可比拟的高通量特点.由此得到的基因表达谱不仅可以提供基因间相互作用的信息,还可以此为线索进一步探索这些基因在细胞中的功能.我们利用基因芯片技术检测不同肥厚状态下心脏及心肌细胞的基因表达谱,研究与心肌肥厚相关的基因表达谱变化, 并对获得的系列基因表达谱进行聚类分析,找出表达行为相似的基因群组,为研究多个基因之间的相互关系提供线索,探索复杂系统的研究方法.     

慢性乙型病毒性肝炎肝肾阴虚证与湿热蕴结证患者外周血的差异基因表达谱分析

目的：通过检测和分析慢性乙型病毒性肝炎（以下简称乙肝）肝肾阴虚证、湿热蕴结证患者的差异基因表达谱,探讨乙肝中医证候分型与基因表达之间的关联。方法：从上海龙华医院肝科选择乙肝患者中诊断为肝肾阴虚证和湿热蕴结证者各3例,并选择3例健康者作为对照。采集乙肝患者和健康者的外周血样本,提取白细胞中的总RNA,运用基因芯片技术检测外周血基因表达情况,并对其表达谱进行比较。另外选择肝肾阴虚证和湿热蕴结证患者各10例和健康者10例,使用实时定量逆转录酶-聚合酶链式反应法验证部分基因的表达情况。结果：在乙肝肝肾阴虚证和湿热蕴结证患者之间、乙肝患者与健康者之间,基因表达谱都存在明显的差异表达。两种证型患者之间共有403个差异表达的基因,其中,239条基因表达有显著性差异（｜差异倍数｜≥2,P〈0.05）,基因表达上调的有142条,下调的有97条。肝肾阴虚证单独调变的基因主要与过氧化物酶的活性和干细胞的维持等相关,湿热蕴结证单独调变的基因主要与细胞因子、免疫应答和炎症反应等相关。实时定量逆转录酶-聚合酶链式反应验证ATP结合盒亚家族C成员3、过氧化物酶增殖体激活受体α等基因的表达与基因芯片检测结果趋势一致。结论：乙肝肝肾阴虚证和湿热蕴结证患者白细胞中基因表达存在差异,提示乙肝中医临床辨证分型具有分子生物学基础,与基因差异表达密切相关。     

肾阴虚证患者的基因差异表达

目的 探讨肾阴虚证的特征性基因差异表达谱.方法 选取IgA肾病以及亚健康状态肾阴虚证患者作为研究对象,确诊为肾阴虚证患者为实验组,选择健康志愿者作为正常对照组;应用基因芯片技术,研究肾阴虚证的基因表达谱;结合MAS软件对差异表达基因进行分析.结果 肾阴虚证组和正常对照组间存在差异基因表达特征图谱.获得差异表达基因共79条.其中,表达水平上调(Ratio值大于2)的有6条,表达水平下调(Ratio值小于0.5)的有73条.结论 基因芯片技术可以快速、高通量筛选肾阴虚证的相关基因;初步获得肾阴虚证的相关基因.     

基因芯片分析釉基质蛋白对hBMSCs基因表达谱的影响

目的 应用基因芯片技术分析釉基质蛋白(EMPs)对人骨髓基质细胞(hBMSCs)基因表达谱的影响.方法 全骨髓法体外传代培养hBMSCs.以200 μg/mL EMPs刺激hBMSCs作为实验组,以正常培养的hBMSCs作为对照组.培养5 d后,选择含4 096种人类基因的cDNA基因芯片进行检测和分析.运用实时PCR方法对呈差异表达基因中的4条进行扩增和检测,以验证基因芯片分析结果.结果 hBMSCs经EMPs刺激后,有27条差异表达基因,其中18条基因表达上调,9条基因表达下调.经实时PCR检测的4条差异表达基因结果与基因芯片结果一致.结论 应用基因表达谱芯片可筛选经EMPs诱导后hBMSCs的差异表达基因.为进一步研究EMPs促进牙周组织再生的分子学机制奠定了基础.     

基因芯片技术在中医药领域中的应用研究

基因芯片技术是当今微观整体研究的一项最新技术,现对应用基因芯片技术在寻找中医证候的基因组、探索针灸作用机制以及研究中药疗效的基因表达谱方面取得的成果进行综述。     

抗结核病药物异烟肼致大鼠肝脏损伤的基因表达谱

目的 利用毒理基因芯片技术研究抗结核病药物异烟肼对大鼠肝脏毒性效应的分子机制.方法 将20只Wistar大鼠随机分为对照组(n=10)和异烟肼组(n=10),分别用生理盐水和400mg/kg异烟肼连续灌胃14 d,以cD-NA微阵列技术研究异烟肼对大鼠肝脏基因表达谱的影响,根据差异表达基因的生物学功能探讨异烟肼对大鼠肝脏的毒性机制.结果 异烟肼组与对照组杂交的表达差异基因共37条,其中上调基因25条,下调基因12条,功能已知基因18条,已知功能基因主要包括一些与肝药酶活性、脂肪代谢和蛋白质代谢等相关的基因.结论 异烟肼可导致大鼠肝脏基因表达谱明显变化,这对阐明异烟肼的肝损伤机制具有十分重要的作用.     

肾阴虚证患者基因差异表达研究

目的 探讨肾阴虚证的特征性基因差异表达谱。方法 选取IgA肾病以及亚健康状态肾阴虚证患者作为研究对象,确诊为肾阴虚证患者为实验组,选择健康志愿者作为正常对照组;应用基因芯片技术,研究肾阴虚证的基因表达谱;结合MAS软件对差异表达基因进行分析。结果 肾阴虚证组和正常对照组间存在差异基因表达特征图谱。获得差异表达基因共79条。其中,表达水平上调（Ratio值大于2）的有6条,表达水平下调（Ratio值小于0.5）的有73条。结论 基因芯片技术可以快速、高通量筛选肾阴虚证的相关基因;初步获得肾阴虚证的相关基因。     

亚健康状态肾阳虚证基因差异表达研究

目的探讨亚健康状态肾阳虚证的特征性基因差异表达谱。方法选取亚健康状态肾阳虚证患者作为研究对象,确诊为肾阳虚证患者为实验组,选择健康志愿者作为正常对照组;应用基因芯片技术,研究亚健康状态肾阳虚证的基因表达谱;结合MAS软件对差异表达基因进行分析。结果亚健康状态肾阳虚证组和正常对照组间存在差异基因表达特征图谱。获得差异表达基因共75条。其中,表达水平上调(Ratio值大于2)的有22条,表达水平下调(Ratio值小于0.5)的有53条。结论基因芯片技术可以快速、高通量筛选亚健康状态肾阳虚证的相关基因;初步获得亚健康状态肾阳虚证的相关基因。     

基因芯片分析釉基质蛋白对hBMSCs基因表达谱的影响

目的应用基因芯片技术分析釉基质蛋白(EMPs)对人骨髓基质细胞(hBMSCs)基因表达谱的影响。方法全骨髓法体外传代培养hBMSCs。以200μg/mLEMPs刺激hBMSCs作为实验组,以正常培养的hBMSCs作为对照组。培养5d后,选择含4096种人类基因的cDNA基因芯片进行检测和分析。运用实时PCR方法对呈差异表达基因中的4条进行扩增和检测,以验证基因芯片分析结果。结果hBMSCs经EMPs刺激后,有27条差异表达基因,其中18条基因表达上调,9条基因表达下调。经实时PCR检测的4条差异表达基因结果与基因芯片结果一致。结论应用基因表达谱芯片可筛选经EMPs诱导后hBMSCs的差异表达基因。为进一步研究EMPs促进牙周组织再生的分子学机制奠定了基础。     

基因芯片在肿瘤研究中的应用

人类已逐步进入功能基因组时代,基因芯片作为近期发展起来的一项新技术,能够研究细胞内所有基因的表达谱,同时获得成千上万基因活化的模式,并为研究肿瘤发生发展过程中的基因表达情况提供了强有力的工具。本文对基因芯片技术在肿瘤研究中的应用,包括寻找新的肿瘤相关基因,基因表达谱研究、基因功能研究,肿瘤分子病理分型及诊断芯片等方面进行了探讨。     

正常及饥饿大鼠胃壁组织基因表达谱的研究

目的 通过荧光芯片技术从整体水平研究正常及饥饿大鼠胃壁组织基因表达谱,探讨饥饿大鼠胃壁组织基因表达的变化.方法 用SD大鼠建立正常和饥饿两种模型,动物断头取胃壁组织抽提RNA,荧光芯片杂交,并对实验结果 采用real time PCR、Northern blot 和Western blotting方法 验证.结果 在由基因或表达序列标签(ESTs)组成的9233个杂交点的大鼠基因芯片上,共有504个在饥饿大鼠胃壁组织呈差异表达.其中263个为已知基因,87个为已知的ESTs.在差异表达的基因或ESTs中,上调262 个,下调242个,这其中包括与细胞信号转导、细胞结构运动等相关的基因或ESTs.经初步验证,芯片数据的可靠性达80%.结论 利用荧光芯片技术研究正常及饥饿大鼠胃壁组织的基因表达谱,可以大规模、高通量发现胃在饥饿状态发生改变的基因,为进一步阐明饥饿胃肠生理、寻找新的与能量代谢及食欲调节相关的基因以及发现基因的新功能奠定基础.     

抗衰汤对血瘀证大鼠肾脏衰老相关基因表达的影响

[目的]探讨血瘀与衰老的相关性、抗衰汤抗衰老的分子生物学机制,以利中药抗衰老制剂的开发。[方法]使用基因芯片技术,确定血瘀影响的衰老基因表达,并考核抗衰汤对血瘀证大鼠衰老相关基因表达谱的影响。[结果]确定16个基因为与血瘀相关的衰老基因,但其表达水平受到抗衰汤用药的影响。[结论]抗衰汤对与血瘀相关的衰老基因有明显地调控作用,血瘀是导致衰老的关键因素之一。     

基因芯片技术筛选哮喘大鼠差异表达基因的研究

目的 利用基因芯片技术寻找哮喘大鼠与正常大鼠之间差异基因的动态变化,寻找参与哮喘发病的新基因.方法 分别于激发哮喘2、4、8周处死大鼠收集肺泡灌洗液行炎性细胞及嗜酸性粒细胞计数,取肺组织行HE染色、病理图像分析,提取肺组织RNA行基因芯片筛选及实时定量PCR验证.以基因表达倍数值2.0和基因表达倍数值-2.0为阈值来确定差异表达基因,然后用GO及Pathway分析对差异表达基因进行功能分类分析,结果以P ＜0.05为差异显著性标准.结果 从24 358条表达基因谱中,筛选出哮喘大鼠与正常大鼠持续性差异表达2倍以上的基因有13条,其中发现Mal和TPD52L1等新基因参与哮喘疾病过程.结论 Mal、TPD52L1基因在肺组织中异常表达,影响哮喘的病程进展.     

基因芯片研究糖尿病肾病大鼠肾皮质基因表达

目的：研究正常与糖尿病肾病大鼠肾脏的基因表达谱,大规模分析糖尿病时基因表达水平的变化。方法：（1）实验大鼠分为两组,一组为正常对照组,另一组为糖尿病组;（2）从肾皮质中抽提mRNA,经反转录分别用Cy3,Cy5荧光标记,获得两组动物来源的cDNA探针;（3）cDNA探针与Biodoor基因表达谱芯片杂交,结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。结果（1）18．4％的基因表达谱发生明显的变化,其中12条基因在糖尿病时表达量明显下降,而323条基因在糖尿 时表达量明显上升;（2）已报道基因占了差异表达基因总数的18．8％左右,大多数已报道基因在糖尿病时的表达模式与其他作者的报道类似。结论：利用基因芯片技术结合实验动物模型能大规模,高通是地研究糖尿病的基因表达谱,初步筛选出选出疾病相关基因,对进一步阐明疾病在基因水平上的发病机制有十分重要的作用。     

两型星形胶质细胞基因表达谱差异的初步观察

目的:研究不同型别星形胶质细胞的基因表达谱,比较1型和2型星形胶质细胞基因表达谱之间的差异,以进一步研究两者的生物学特性及其功能。方法:原代培养新生SD大鼠大脑皮质混合胶质细胞,经振荡和差速消化纯化培养1型星形胶质细胞(T1A)和2型星形胶质细胞(T2A);应用基因芯片技术获取T1A和T2A的基因表达谱,并对两者的基因表达谱进行初步分析。结果:基因芯片上检测点4096个,共有差异表达基因267条,其中113条在T1A中高表达,154条在T2A中高表达。结论:本实验获得大鼠大脑T1A和T2A的基因表达谱,首次报道267条存在于T1A和T2A之间的差异表达基因。