原花青素抑制病毒性心肌炎大鼠心肌纤维化的机制

目的探究原花青素对病毒性心肌炎大鼠心肌纤维化的抑制效应机制,观察转化因子-β(TGF-β)/Smads信号通路的变化,研究其抑制病毒性心肌炎心肌纤维化的机制。方法选择60只雄性SD大鼠随机分为空白组(腹腔注射生理盐水)、模型组、阳性对照组(腹腔注射利巴韦林药液36 mg/kg)及原花青素高、中、低剂量组(400、200、100 mg/ml原花青素灌胃)各10只,除空白组外,均采用柯萨奇B3病毒法制作病毒性心肌炎大鼠模型,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定大鼠血心肌酶谱、心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量及I型前胶原羧基端前肽(PICP)、I型胶原交联羧基末端肽(ICTP)水平;免疫组化染色光镜下观察各组大鼠心肌组织纤维化程度;测定各组全心质量指数(HMI)与左心室质量指数(LVMI);蛋白印迹法(WB)测定各组大鼠心室组织TGF-β/Smads信号通路相关蛋白TGF-β1及Ⅰ型、Ⅲ胶原纤维蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定心肌组织TGF-β1 mRNA、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA水平。结果与空白组比较,模型组、阳性对照组肌红蛋白(MB)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、cTnI、PICP、ICTP、HMI、LVMI、TGF-β1、I型胶原纤维蛋白、Ⅲ型胶原纤维蛋白及TGF-β1 mRNA、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA均上升(P<0.05),与模型组比较,阳性对照组、原花青素低、中、高剂量组MB、CK-MB、cTnI、PICP、ICTP、HMI、LVMI、TGF-β1、I型胶原纤维蛋白、Ⅲ型胶原纤维蛋白及TGF-β1 mRNA、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA均降低(P<0.05),与阳性对照组比较,原花青素低、中、高剂量组MB、CK-MB、cTnI、PICP、ICTP、HMI、LVMI、TGF-β1、I型胶原纤维蛋白、Ⅲ型胶原纤维蛋白及TGF-β1 mRNA、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA均下降(P<0.05),原花青素各剂量组各指标比较差异无统计学意义。结论原花青素可减轻病毒性心肌炎大鼠心肌纤维化病变程度,其作用可能与抑制TGF-β/Smads信号通过转导,阻止胶原合成及沉积有关。     

安立生坦对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌纤维化保护作用及机制研究

目的观察安立生坦对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌纤维化保护作用及机制。方法将24只健康成年雄性wistar大鼠随机分为对照组、模型组以及安立生坦组各8只,对照组予以背部注射生理盐水+胃灌生理盐水,模型组予以背部皮下注射异丙肾上腺素+胃灌生理盐水,安立生坦组予以背部皮下注射异丙肾上腺素+胃灌安立生坦,3组大鼠均每天进行一次,连续处理4周后处死大鼠,比较3组大鼠心肌组织结构、心功能及细胞因子水平及TGF-β1/Smad信号传导通路表达情况。结果模型组大鼠LvIDd和LvIDs较对照组大鼠明显增加,FS和EF较对照组明显降低,而安立生坦组大鼠LvIDd、LvIDs较对照组明显有所升高(P<0.05)。模型组大鼠血AngⅡ、TGF-β1、ET-1、Hyp水平及心肌组织内Hyp含量均显著高于对照组和安立生坦组(P<0.05),而安立生坦组血AngⅡ、TGF-β1、ET-1、Hyp水平及心肌组织内Hyp含量较对照组稍高,但比较差异间均无统计学意义(P>0.05)。与对照组大鼠比较,模型组大鼠TGF-β1和Smad2表达水平明显上升,而Smad7表达水平明显下降,与模型组大鼠相比较,安立生坦组大鼠TGF-β1和Smad2表达水平明显下降,但Smad7表达水平明显上升(P<0.05),而安立生坦组大鼠TGF-β1、Smad2和Smad表达水平与对照组大鼠比较无差异(P>0.05)。结论安立生坦可有效抑制异丙肾上腺素诱导大鼠心肌纤维化和改善其心功能,可作为临床上抵抗心肌纤维化治疗的重大靶点,考虑原因可能为通过影响血管生成因子以及调控TGF-β1/Smad信号转导通路的表达来达到效果。     

2型糖尿病合并正常高值血压血管重构的研究

目的探讨2型糖尿病合并正常高值血压患者血管重构情况。方法选择2011年7—10月在泰安市第四人民医院门诊就诊及住院的2型糖尿病患者182例,根据血压水平分组,A组:糖尿病合并正常高值血压组96例,B组:糖尿病合并理想血压组86例,所有研究对象均禁饮食12 h后清晨空腹静脉采血5 ml,测定空腹血糖、TC、TG、HDL-C及LDL-C水平,检测血清转化生长因子β(1transforming growth factorβ1,TGF-β1)和骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP-7)。计量资料采用t检验,计数资料采用χ2检验,指标间相关性采用Pearson相关分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果 A组收缩压[(124.62±10.51)mmHg(1mmHg=0.133kPa)]及舒张压[(86.04±3.62)mmHg]明显高于B组[(108.45±8.52)、(74.54±4.74)mmHg];A组TG[(2.49±1.19)mmol/L]、LDL-C[(2.90±0.17)mmol/L]、TGF-β1[(279.58±98.76)ng/L]水平明显高于B组[(2.07±0.97)、(2.82±0.14)mmol/L、(207.72±48.65)ng/L],HDL-C[(0.97±0.40)mmol/L]、BMP-7[(185.46±112.48)ng/L]水平明显低于B组[(1.09±0.33)mmol/L、(358.19±187.67)ng/L],两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。A组血清TGF-β1水平与收缩压及空腹血糖、血脂间存在相关性,血清TGF-β1及BMP-7与空腹血糖、血脂间存在相关性。结论 2型糖尿病合并正常高值血压患者存在导致血管重构的危险因素,对2型糖尿病合并正常高值血压患者的血压、血糖、血脂早期干预可能有助于延缓血管病变的发生发展。     

转化生长因子-β信号转导分子Smads在染石英小鼠肺组织中的表达

目的 观察染石英小鼠肺组织Smads蛋白的表达情况,探讨其与矽肺肺纤维化的联系。方法 采用暴露式气管内注入法给小鼠一次性染石英(0.2 g/kg体重)。染石英后第1、3、5、7、14、28天分批取小鼠肺组织,用免疫组织化学技术结合图像定量分析检测其TGF-β1、Smad2/3、Smad4和Smad7蛋白的表达。结果 小鼠Smad2/3蛋白表达在染石英后第3天[(39.7±2.9)PU]开始增高,与对照组[(35.6±1.7)PU]的差异有统计学意义(P<0.05),第14天达到高峰[(42.2±2.4)PU],而后呈现下降趋势;Smad4蛋白表达在染石英后第5天开始增高,同样在第14天达到高峰[(40.0±1.8)PU],而后逐渐下降;Smad7蛋白表达开始呈现下降趋势,第28天回升,其表达水平最低在第14天[(33.5±3.3)PU],但仍低于对照组。小鼠Smad2/3和Smad4的表达分别与TGF-β1蛋白表达呈明显相关(r分别为0.91、0.71,P<0.05),Smad7则未见相关。Smad2/3的表达在染石英后第1-14天之间与肺组织羟脯氨酸含量呈正相关(r=0.85,P<0.05)。结论Smads蛋白与矽肺肺纤维化可能有一定的联系。     

补阳还五汤对矽肺大鼠肺组织Smad3、Smad7蛋白质表达的影响

目的观察补阳还五汤对矽尘染毒肺纤维化大鼠肺组织Smad3、Smad7蛋白质表达的影响。方法 2017年9月将实验室饲养一周的144只雄性健康SD大鼠随机分成对照、模型、给药干预组(包括泼尼松组、补阳还五汤高、中、低剂量组),每组24只。以矽尘混悬液注入大鼠气管染毒造模,造模后第2d起,各药物干预组给予相应药物灌胃。造模后第7、14、28d分3批次处死大鼠,每组8只。分离肺组织制备病理切片,观察病理变化;采用免疫组化染色法(S-P法)检测大鼠肺组织Smad3、Smad7蛋白质的表达情况。结果 (1)与对照组相比,各组大鼠肺组织Smad3蛋白质的表达升高(P0.01),Smad7的表达下降(P 0.01),其中模型组smad3和smad7的IOD值分别为(450.97±14.39)×103、(217.61±20.32)×103,变化最为明显;(2)与模型组相比,各给药干预组大鼠肺组织Smad3蛋白的表达水平均有不同程度的下降(P 0.01或0.05),Smad7表达增高(P 0.01或0.05);(3)与泼尼松组相比,补阳还五汤中、低剂量组大鼠肺组织Smad3蛋白的表达有所下降(P 0.01或0.05),Smad7的表达有所增高(P 0.05)。结论补阳还五汤可以有效控制TGF-β/Smad信号通路中可致纤维化的Smad3蛋白质的增高,同时促进该通路中Smad7蛋白的增加以发挥负性调控效应。     

缬沙坦对急性肺损伤大鼠TGF-β／Smads信号通路的影响

目的观察缬沙坦对急性肺损伤大鼠TGF-β／Smad信号通路的影响。方法24只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组和缬沙坦组三组,每组8只。缬沙坦组于气管内滴注博莱霉素（BLM）生理盐水溶液（5mg／kg）以复制急性肺损伤动物模型,并于造模当天每日给予缬沙坦（20mg／kg）灌胃;模型组以生理盐水代替缬沙坦灌胃;对照组则均用生理盐水代替BLM和缬沙坦。各组动物均于制模开始后第7天处死,分取肺组织行病理切片HE染色观察肺损伤程度、免疫组化技术检测肺组织TGF—β1、Smad2／3和Smad7蛋白的表达水平。结果缬沙坦组大鼠肺组织损伤程度较模型组比较明显减少（P〈0．01）。模型组肺组织内TGF-β1、Smad2／3蛋白表达水平较对照组明显增强（P〈0．01）。缬沙坦组TGF-β1、Smad2／3蛋白表达水平较模型组降低（P〈0．01）。Smad7蛋白在模型组肺组织内表达明显低于对照组（0．23±0．02vs0．36±0．03,P〈0．01）,缬沙坦组Smad7蛋白表达同模型组比较明显增强（P〈0．01）。结论缬沙坦可下调急性肺损伤大鼠肺组织内TGF—β、Smad2／3蛋白表达,上调Smad7蛋白表达,从而阻断TGF-β／Smad信号通路,减轻急性肺损伤程度。     

西红花提取物对病毒性心肌炎小鼠的保护作用

目的探究西红花提取物对柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌炎小鼠模型心肌细胞凋亡和心肌纤维化的影响。方法采用CVB3感染小鼠构建病毒性心肌炎模型,西红花提取物组以3 mg/kg西红花提取物灌胃处理,1次/d,连续处理7 d,对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。药物处理7 d后,采用超声评价小鼠心功能情况,观察血清心肌损伤标记物[心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)]和炎性因子[白细胞介素(IL)-6、-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,心肌组织苏木素-伊红(HE)染色评价病理变化、原位末端转移酶标记(TUNEL)染色检测心肌凋亡情况及马松(MASSON)染色评价纤维化水平,蛋白印迹(WB)法检测心肌组织中半胱天冬酶(caspase-3、-9)、凋亡基因Fas、转化生长因子(TGF-β1)、Smad2/3表达情况。结果与对照组比较,病毒性心肌炎小鼠血清cTnT、CK-MB水平升高(P0.05),心率(HR)和左心室射血分数(LVEF)降低(P0.05);与病毒性心肌炎组比较,西红花提取物组cTnT、CK-MB水平降低(P0.05),HR、LVEF升高(P0.05);与对照组比较,病毒性心肌炎组血清IL-6、-1β、TNF-α表达增加(P0.05),与病毒性心肌炎组比较,西红花提取物组IL-6、-1β、TNF-α表达减少(P0.05);与对照组比较,病毒性心肌炎组凋亡细胞数、caspase-3、caspase-9、Fas表达增加(P0.05);与病毒性心肌炎组比较,西红花提取物组凋亡细胞数、caspase-3、caspase-9、Fas表达减少(P0.05);与对照组比较,病毒性心肌炎组心肌组织纤维化、TGF-β1、Smad2/3磷酸化水平升高(P0.05),与病毒性心肌炎组比较,西红花提取物组心肌组织纤维化、TGF-β1、Smad2/3磷酸化水平降低(P0.05)。结论西红花提取物通过减轻炎症反应、抑制心肌细胞凋亡和纤维化,保护CVB3感染引起的病毒性心肌炎,可能与调控心肌组织中caspase-3、caspase-9、Fas及TGF-β/Smad通路表达有关。     

白藜芦醇对力竭运动大鼠心肌细胞凋亡影响

目的摘探讨白藜芦醇对力竭运动大鼠心肌细胞氧化应激、凋亡影响及机制。方法成年雄性SD大鼠随机分为5组:对照组、力竭运动组、白藜芦醇50、100、200 mg/kg组,检测大鼠心肌组织缺血缺氧面积、心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、Ca~(2+)-ATPase含量,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,Western blot法检测心肌细胞Bax和caspase-3蛋白表达。结果与对照组比较,力竭运动组大鼠心肌缺血缺氧面积[(112.27±48.27)μm~2]与心肌组织丙二醛含量[(3.98±0.75)nmol/mgpro]明显升高、心肌组织SOD活性[(30.54±4.29)U/mgpro]与Ca~(2+)-ATPase活性[(0.32±0.03)mol/(mg·h)]明显下降、心肌细胞凋亡指数[(23.4±2.3)%]与心肌组织Bax、caspase-3蛋白表达[(1.28±0.32)、(1.59±0.12)]明显升高;与力竭运动组比较,200 mg/kg白藜芦醇组大鼠心肌缺血缺氧面积[(22.12±10.22)μm~2]与心肌组织丙二醛含量[(1.65±0.11)nmol/mgpro]明显减少、心肌组织SOD、Ca~(2+)-ATPase活性[分别为(69.57±9.02)U/mgpro、(0.72±0.11)mol/(mg·h)]明显升高、心肌细胞凋亡指数[(10.4±1.3)%]与心肌组织Bax、caspase-3蛋白表达[(0.36±0.11)、(0.62±0.13)]明显降低(P0.01);呈明显剂量效应关系。结论白藜芦醇可有效缓解大鼠力竭运动所致氧化应激状态,其机制可能与降低心肌组织Bax、caspase-3表达水平,减少心肌细胞凋亡有关。     

积雪草苷对心肌梗死大鼠TGF-β1、ColⅠ和Col Ⅲ表达的影响

目的研究积雪草苷对心肌梗死(心梗)大鼠左室心肌纤维化和心肌组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、胶原Ⅰ(collagenⅠ,ColⅠ)和胶原Ⅲ(collagenⅢ,ColⅢ)表达的影响。方法结扎雄性SD大鼠左冠状动脉前降支建立心梗模型,随机分为假手术组(Sham组)、假手术+积雪草苷组(Sham+Asiaticoside组)、心梗模型组(MI组)和心梗模型+积雪草苷组(MI+Asiaticoside组)。造模当天给药,早晚各1次,2周后分别测定各组大鼠心脏左室重量与体重之比、左室梗死面积;免疫组织化学(免疫组化)检测心肌组织非梗死区TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ的表达。计量资料采用t检验,P0.05为差异有统计学意义。结果 MI组左室梗死面积为(24.37±5.69)%,MI+Asiaticoside组左室梗死面积为(25.89±6.27)%,差异无统计学意义(P0.05);MI组左室重/体重为(3.46±0.26)mg/g,MI+Asiaticoside组左室重/体重为(2.53±0.35)mg/g,差异有统计学意义(P0.05);免疫组化染色结果显示,与MI组相比[(8.34±0.62)、(37.66±2.21)、(12.39±1.37)μm2],MI+Asiaticoside组非梗死区心肌TGF-β1、ColⅠ、ColⅢ的表达[(5.97±0.78)、(17.90±1.36)、(8.14±1.23)μm2]明显降低,差异均有统计学意义(均P0.05)。心梗大鼠非梗死区心肌组织ColⅠ、ColⅢ表达与心肌组织TGF-β1的表达正相关。结论积雪草苷可减少心梗大鼠非梗死区TGF-β1的表达,从而减弱非梗死区心肌组织ColⅠ、ColⅢ异常合成与沉积,减轻心梗后左室心肌纤维化程度,延缓左室重构的发展。     

抗肺纤中药颗粒抑制SiO_2诱导的大鼠肺组织上皮-间质转化

目的研究抗肺纤中药颗粒的干预对染矽尘大鼠肺组织上皮-间质转化的影响及其可能的作用原因。方法将斯波累格·多雷(SD)大鼠随机分为4组,每组16只。对照组大鼠灌注1.0 mL 0.9%生理盐水造模,然后每天灌胃0.9%生理盐水;模型组、高剂量组和低剂量组大鼠均灌注1.0 mL 50 mg/mL SiO_2悬浊液造模,其后模型组每天灌胃0.9%生理盐水,高剂量组和低剂量组大鼠分别灌胃1 000、500 mg/kg中药,每天1次。于灌胃第14、28天处死大鼠,观察大鼠肺组织病理学变化,并检测大鼠肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和转录激活因子(Smad2/3)的阳性表达及E-钙粘蛋白(E-cad)、波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平。结果 SiO_2刺激14天和28天后,模型组大鼠肺组织有明显的炎症反应及胶原纤维的积聚,中药的干预可有效抑制其肺组织病理学的改变;中药干预后可升高大鼠肺组织E-cad的表达、降低肺组织Vimentin的表达水平,进而改善肺组织上皮-间质的转化,且高剂量组的效果较明显,差异均有统计学意义(均P0.05);同时SiO_2刺激14天和28天后,模型组大鼠肺组织TGF-β1的表达(15.78±3.09,17.73±3.09)及Smad2/3表达(4.91±1.12,5.86±1.55)明显升高,而中药的干预抑制了SiO_2诱导的肺组织TGF-β1和Smad2/3蛋白的阳性表达,且高剂量组TGF-β1和Smad2/3的表达(12.87±2.52,1.98±0.57)较低,差异有统计学意义(P0.05)。结论抗肺纤中药颗粒可改善大鼠肺泡炎症和矽肺纤维化的程度,抑制Si O2诱导的上皮-间质转化,该作用可能是大鼠肺组织中TGF-β1、Smad2/3蛋白阳性表达降低的结果。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对TGF-β1介导Smad通路调节在大鼠矽肺纤维化形成中的作用

[目的]观察N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠矽肺纤维化肺组织中胶原含量、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2/3和Smad 7表达的调节,探讨AcSDKP拮抗矽肺纤维化的作用机制. [方法]选用非暴露式气管灌注法制作大鼠矽肺模型,并给予AcSDKP,采用羟脯氨酸测量法和Western-blot法定量分析肺组织中胶原蛋白的含量.Western-blot法检测肺组织内TGF-31、phospho-Smad2/3及Smad7蛋白的表达. [结果]AcSDKP治疗组胶原含量和Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达低于相对应的矽肺模型组.与相应的对照组相比,矽肺模型组大鼠肺组织内TGF-β1、phospho-Smad2/3蛋白表达均增加,而Smad7蛋白表达减弱.与相应矽肺模型组相比,给予AcSDKP后,大鼠肺组织内TGF-β1、phospho-Smad2/3蛋白表达表达均明显降低.而Smad7蛋白表达增强. [结论]AcSDKP可能是通过对TGF-β1介导Smad通路调节而发挥抗矽肺纤维化的作用.     

来氟米特对转化生长因子β_1诱导的体培养的大鼠肾小球系膜细胞中Smad2表达的影响

目的观察来氟米特(leflunomide,LEF)在转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β_1刺激大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)表达Smad2过程中发挥的作用。方法建立体外培养大鼠肾小球系膜细胞模型,经鉴定造模成功后第7代用于实验。按照对模型大鼠体外培养的肾小球系膜细胞的处理方式不同,将其分为TGF-β_1组(TGF-β_1 5 ng/mL),LEF-1组(LEF 5μg/mL+TGF-β_1 5 ng/mL),LEF-2组(LEF 50μg/mL+TGF-β_1 5 ng/mL)和对照组(无血清RPMI 1640培养液+20%胎牛血清)。分别于15 min,30 min,1 h,2 h和6 h收集标本,用间接免疫荧光法检测各组磷酸化Smad2(phosphorylation-Smad2,p-Smad2)蛋白表达变化;采用荧光半定量RT-PCR法检测各组Smad2mRNA表达变化。结果对照组磷酸化Smad2蛋白少量表达,阳性细胞率为(21.40±1.51)%。TGF-β_1组阳性细胞率为(70.00±3.23)%,30 min时表达开始升高,1 h及2 h时表达明显增高,6 h表达开始下降。各时间点LEF-1组和LEF-2组磷酸化Smad2蛋白表达下降,阳性细胞率分别为(23.60±2.80)%和(25.81±1.29)%,细胞荧光强度呈减弱趋势。与TGF-β_1组相比,LEF-1组和LEF-2组磷酸化Smad2蛋白表达下降,差异有显著意义(P0.05)。但LEF-1组和LEF-2组与对照组比较,差异无显著意义(P0.05)。肾小球系膜细胞中Smad2mRNA相对表达量,TGF-β_1组显著高于对照组,2 h时达高峰。LEF-1组和LEF-2组Smad2mRNA显著低于TGF-β_1组,差异有显著意义(P0.01);但LEF-1组和LEF-2组间比较,差异无显著意义(P0.05)。LEF-1组和LEF-2组Smad2mRNA相对表达量1h时较低,之后逐渐升高,说明随时间延长,来氟米特对体外培养的肾小球系膜细胞干预作用逐渐减弱。结论经转化生长因子-β_1刺激后,体外培养的大鼠肾小球系膜细胞磷酸化Smad2蛋白和Smad2mRNA相对表达量分别增加,来氟米特可降低Smad2蛋白和Smad2mRNA表达水平,为来氟米特的肾脏保护作用提供理论依据。     

中药颗粒对染矽尘大鼠肺组织 TGF-β1 / Smads通路的调节作用

目的研究中药颗粒对染矽尘、Col-Ⅰ的影响,并从TGF-β1/Smads通路探讨其可能的作用机制。方法将SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组和中药高、低剂量组,每组16只。对照组大鼠气管灌注1.0 ml生理盐水,其余组大鼠均给予1.0 ml 5%无菌SiO_2悬浊液;造模后第2天开始给大鼠灌胃给药,1次/d,高剂量组、低剂量组大鼠分别灌胃1 000 mg/kg、500 mg/kg中药,对照组、模型组给予0.9%生理盐水。于灌胃第14、28天处死大鼠,并检测大鼠肺组织Col-Ⅰ、TGF-β1的含量及TGF-β1、Smad2/3蛋白的表达水平。结果造模后第14天和第28天,模型组大鼠肺组织Col-Ⅰ、TGF-β1含量高于对照组,中药干预后Col-Ⅰ、TGF-β1含量有所降低,不同剂量组间差异均具有统计学意义(P0.05);模型组大鼠肺组织TGF-β1、Smad2/3及p-Smad2/3蛋白的表达水平高于对照组,中药干预后TGF-β1、Smad2/3及p-Smad2/3蛋白的表达水平有所降低,不同剂量组间差异也具有统计学意义(P0.05)。结论中药颗粒可以抑制SiO_2诱导的大鼠肺组织Col-Ⅰ含量的升高,且该抑制作用可能与中药颗粒对大鼠肺组织TGF-β1/Smads通路的调节有关。     

法尼醇Ｘ受体激动剂奥贝胆酸抑制百草枯诱导的肺纤维化机制研究

目的探讨法尼醇X受体激动剂奥贝胆酸抑制百草枯诱导的肺纤维化机制,为其临床应用提供理论依据。方法细胞实验选择人肺成纤维细胞(HFL1细胞),分为空白组、百草枯组、百草枯+奥贝胆酸组,染毒1 d后采用Elisa方法对转化生长因子β1 (TGF-β1),a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)及Smad3、Smad2蛋白的表达进行检测。动物实验选用健康清洁级SD大鼠60只,随机分为空白组、百草枯组、百草枯+奥贝胆酸组,采用Elisa方法对染毒第1、3、7、14、21天大鼠血浆中TGF-β1、a-SMA及Smad3、Smad2蛋白的表达进行检测。采用Western Blotting方法对第21天大鼠肺组织中TGF-β1、a-SMA及Smad3、Smad2蛋白的表达进行检测。HE染色观察第1、3、7、14、21天大鼠肺组织病理变化。结果细胞实验和动物实验中百草枯组均随着中毒时间延长,TGF-β1、a-SMA及Smad3、Smad2蛋白的表达逐渐升高,各时点均明显高于空白组(P0. 05)。百草枯+奥贝胆酸组TGF-β1、a-SMA及Smad3、Smad2蛋白的表达各时点均明显低于百草枯组,但仍高于空白组,差异有统计学意义(P0. 05)。结论奥贝胆酸可通过抑制TGF-β1、a-SMA及Smad3、Smad2蛋白的表达来抑制百草枯诱导的肺纤维化。     

单侧输尿管梗阻大鼠Smad3,7的表达及肾通胶囊的影响

目的研究大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)后TGF-β1,Smad3,7在肾组织的表达及肾通胶囊的影响.方法将24只中16只行左侧输尿管结扎,另8只行假手术,结扎后大鼠随机分为手术组、肾通治疗组,术后第8d观察梗阻肾组织病理改变,纤维化程度通过测定肾间质纤维化的面积变化,应用免疫组织化学检测肾组织TGF-β1,Smad3,7的表达.结果手术组TGF-β1、Smad3的表达增加,Smad7的表达减少,与假手术组相比有显著差异(P＜0.01),肾通治疗组与手术组相比,TGF-β1、Smad3的表达下调,Smad7的表达上调,差异显著(P＜0.05).结论肾通胶囊通过促进Smad7、抑制Smad3的表达,从而抑制TGF-β1的表达而阻抑肾间质纤维化.     

双氢青蒿素对矽肺大鼠肺组织TGF-β1、 Smad2/3、Col-Ⅰ蛋白表达的影响

目的观察双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对矽肺大鼠肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2/3、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)表达的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分成对照组、模型组、DHA组,每组20只。模型组和DHA组给予1 ml二氧化硅(SiO_2)混悬液造模,对照组给予1 ml生理盐水造模,造模后第2天开始灌胃给药,DHA组每只大鼠给予DHA 75 mg/kg灌胃,模型组和对照组给予1 ml/100 g生理盐水灌胃,每周给药6 d,连续给药4周,并于第7、14、28天处死大鼠取肺组织,检测肺脏器系数,观察肺组织病理学变化,免疫印迹(Western blot)法检测TGF-β1、Smad2/3、Col-Ⅰ的蛋白表达。结果与对照组相比,DHA组肺系数升高,差异具有统计学意义(PSymbol|@@0.01);与模型组相比,DHA组肺系数降低,差异有统计学意义(PSymbol|@@0.05);苏木素-伊红(HE)染色法显示DHA组肺泡内的巨噬细胞和中性粒细胞低于模型组。Western blot实验结果显示,与模型组相比,DHA组TGF-β1、Smad2/3、Col-Ⅰ蛋白表达降低,差异具有统计学意义(PSymbol|@@0.05)。结论 DHA可以降低矽尘大鼠肺系数,减轻大鼠肺组织炎症,减少肺泡内巨噬细胞和中性粒细胞浸润,抑制TGF-β1、Smad2/3、Col-Ⅰ蛋白的表达,起到抑制肺纤维化作用,其机制可能与调控TGF-β1/Smad信号通路有关。     

五味子乙素对染矽尘大鼠肺组织转化生长因子β1信号转导通路分子mRNA表达的影响

目的 观察五味子乙素(sehisandrin B,Sch-B)对染矽尘大鼠肺组织转化生长因子β1(TGF-β1)信号通路分子mRNA表达的影响,探讨其防治矽肺纤维化的作用及机制.方法 将96只Wistar大鼠随机分为对照组、染矽尘组、Sch-B干预组,每组32只,气管暴露法一次性染尘建立大鼠矽肺模型,染矽尘组和Sch-B干预组每只大鼠气管内注入1 ml(50 mg/ml)SiO2混悬液,对照组注入1 ml灭菌生理盐水.染尘后第1天开始灌胃干预,Sch-B组给予Sch-B(80mg·kg-1/d-1),染矽尘组和对照组给予等体积的橄榄油.不同处理3、7、14和28 d后,各组处死8只大鼠,对肺组织HE染色观察病理改变;用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定大鼠肺组织中TGF-β1、转化生长因子βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)和Smad4基因表达.结果 染矽尘组肺损伤明显,在3和7 d时表现为明显的肺泡炎,可见肺泡间隔水肿,大量炎性细胞浸润,在14d时,肺泡间隔明显增宽,成纤维细胞和胶原基质明显增多;在28 d时,肺泡结构破坏,肺泡壁明显增厚,肺组织以胶原沉积和肺纤维化改变为主.Sch-B组肺泡炎和肺纤维化程度均较染矽尘组明显减轻.染矽尘组3、7、14、28 d时大鼠肺内TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad4的mRNA表达(TGF-β1:1.03±0.31、1.33±0.39、1.08±0.26、0.82±0.16,TGF-βRⅡ:0.65±0.11、0.80±0.16、0.83±0.24、0.62±0.15,Smad4:0.87±0.15、0.68±0.11、0.78±0.19、0.30±0.08)均明显高于对照组(TGF-β1:0.59±0.22、0.55±0.25、0.56±0.20、0.55±0.12,TGR-βRⅡ:0.28±0.13、0.31 ±0.15、0.34±0.15、0.27±0.09,Smad4:0.23±0.11、0.40±0.12、0.39±0.12、0.18±0.06),差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05),其中TGF-β1在第7天时达高峰后开始下降.Sch-B干预组各时间点TGF-β1和Smad4(TGF-β1:0.68±0.28、0.88±0.25、0.75±0.11、0.61±0.14,Smad4:0.25±0.12、0.45±0.09、0.44±0.07、0.21±0.04)均低于染矽尘组,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).与染矽尘组相比,Sch-B干预组TGF-βRⅡmRNA表达无明显改变,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Sch-B能减轻染矽尘大鼠肺组织的纤维化程度,其作用机制可能是通过抑制TGF-β1和Smad4的mRNA表达上调,从而干扰TGF-β1/Smad4信号通路对靶基因的激活来实现的.

Abstract：

Objective To investigate the effects of schisandrin B (Sch-B) on expression of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) and signal transduction molecule mRNA in rat lungs exposed to SiO2,and explore the intervention mechanism of Sch-B on pulmonary fibrosis induced by SiO2. Methods Ninety six Wistar rats were randomly divided into control (normal saline) group, SiO2 group and SiO2 plus Sch-B group.The rats were exposed to SiO2 by direct tracheal instillation to establish the silicotic animal models. SiO2 group and SiO2 plus Sch-B group were treated with 1ml SiO2 (50 mg/ml) for each rat From the first day after model establishment, SiO2 plus Sch-B group were orally given Sch-B (80 mg/kg) a day, control group and silica group were orally given olive oil. On the 3rd, 7th,14th and 28th days after treatment, 8 rats in each group were sacrificed and samples were collected. The histo-pathological examination of lung was performed by HE staining. The expression levels of TGF-β1 、TGFβR Ⅱ and Smad4 mRNA in the lung tissues were detected by RT-PCR. Results The results of histo-pathological examination showed that in SiO2 group, lung tissues were injured obviously; the alveolar inflammation with alveolus interval edema and inflammation cell infiltration appeared on the 3rd and 7th days; the alveolus interval became thicker, became thicker, fibroblast and collagen matiix increased markedly on 14th day; the alveolar structure was damaged, alveolar wall thickened obviously,collagen aggradation and pulmonary fibrosis displayed on 28th day. The alveolar inflammation and pulmonary fibrosis in SiO2 plus Sch-B group were significantly less than those in SiO2 group. The expressions levels of TGF-β1、TGFβR Ⅱ and Smad4 mRNA (TGF-β1: 1.03±0.31 、1.33±0.39、1.08±0.26、0.82±0.16,TGF-βR Ⅱ:0.65 ±0.11、0.80 ±0.16、0.83 ±0.24、0.62 ±0.15, Smad4: 0.87 ±0. 15、0.68 ±0.11、0.78 ±0.19、0.30 ±0.08) in SiO2group were significantly higher than those in the control group (TGF-β1:0.59±0.22、0.55 ±0.25、0.56±0.20、0.55 ±0.12,TGR-βR Ⅱ:0.28 ±0.13、0.31 ±0. 15、0.34 ±0.15、0.27 ±0.09,Smad4:0.23 ±0.11、0.40 ±0. 12、0.39 ±0.12、0.18±0.06)(P＜0.01 or P＜0.05), but the expression level of TGF-β1 mRNA was the highest on the 7th day. The expression levels of TGF-β1 and Smad4 mRNA (TGF-β1: 0.68 ±0.28、0.88 ±0.25、0.75 ±0.11、0.61 ±0. 14,Smad4:0.25 ±0.12、0.45 ±0.09、0.44 ±0.07、0.21 ±0.04) in SiO2 plus Sch-B group were significantly lower than those in SiO2 group (P＜0.01 or P＜0.05),but there were no significant differences of the TGFβR Ⅱ mRNA expression levels between SiO2 group and SiO2 plus Sch-B group. Conclusion Sch-B can reduce the pulmonary fibrosis induced by SiO2 through inhibition of the mRNA express of TGF-β1 and Smad4 in the lung tissue, modulating the TGF-β1/Smad4 signal transduction pathway and inhibiting the target gene activation.     

P16、P15、Smad7及TGF-β1在宫颈癌中的表达及意义

目的:研究P16、P15、Smad7和TGF-β1在宫颈癌中的表达,研究其在不同临床病理特征中的意义。方法:选取三峡大学医学院自2008年1月～2010年5月收集的76例宫颈癌标本作为实验组,以50例正常宫颈组织作为对照组,采用免疫组织化学技术,分别检测P16、P15、Smad7及TGF-β1在两组中的表达情况,以及在肿瘤不同临床病理特征之间的关系。结果:①P16及P15蛋白在宫颈癌组织中的表达率与正常宫颈组织中P16、P15的表达率比较,差异具有统计学意义(P<0.05);②P16、P15蛋白的阳性表达率与宫颈组织的病理学分级具有相关性,P16、P15在宫颈癌Ⅰ级中的阳性表达率明显高于Ⅱ级和Ⅲ级;③Smad7、TGF-β1在宫颈癌组织中表达的阳性率明显高于对照组(P<0.05),同时Smad7、TGF-β1的表达与宫颈癌的临床分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论:P16、P15、Smad7、TGF-β1的表达与宫颈癌的发生和进展有一定的相关性,其表达的降低或缺失在宫颈癌的发展过程中具有协同作用,检验P16、P15、Smad7、TGF-β1的表达可以作为判定宫颈癌危险程度的指标,为正确的评估宫颈癌患者的预后提供依据。     

TGF-β1、Smad7及VEGF在脑胶质瘤中表达及与病理特征、预后的关系

目的分析转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad-7及血管内皮生长因子(VEGF)在脑胶质瘤中表达及与病理特征、预后的关系。方法收集57例2017年5月至2019年1月于本院神经外科行肿瘤切除术的胶质瘤患者,据预后情况分为生存组(n=41)及死亡组(n=16)。同时选取50例无任何肿瘤性疾病的脑外伤患者的新鲜脑组织,作为对照组。分析TGF-β1、Smad7及VEGF与脑胶质瘤患者各病理参数的相关性,采用多元Logistic回归分析影响脑胶质瘤患者预后生存的危险因素,绘制KaplanMeier生存曲线研究TGF-β1、Smad7及VEGF对患者预后生存的影响。结果实验组TGF-β1、Smad7、VEGF高表达率较对照组高(P<0.05)。TGF-β1、Smad7及VEGF表达与脑胶质瘤患者组织分化程度、WHO分级有显著相关性(P<0.05)。死亡组TGF-β1、Smad7、VEGF高表达率较生存组高(P<0.05)。组织中低分化、WHO分级:Ⅲ+Ⅳ级、TGF-β1、VEGF及Smad7高表达是影响脑胶质瘤患者预后生存的独立危险因素(P<0.05)。TGF-β1低表达组、Smad7低表达组、VEGF低表达组平均生存时间较高表达组长(P<0.05)。结论 TGF-β1、Smad7、VEGF在脑胶质瘤患者中呈高表达状态,可VEGF在脑胶质瘤中低表达TGF-β1、Smad7蛋白高表达及VEGF蛋白低表达参与脑胶质瘤临床生物学进展,并与患者预后生存关系密切。     

慢性阻塞性肺疾病合并肺部感染患者 TGF-β1/Smads信号通路的表达

目的探究慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并肺部感染患者转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads信号通路的表达。方法选取2015年1月-2018年12月南通大学附属医院收治的因肺部阴影行肺叶切除术患者150例,其中COPD患者100例,根据其诊断结果将合并肺部感染的COPD患者设置为感染组(52例),未合并感染的患者设置为未感染组(48例);将非COPD患者50例作为对照组。采用酶联免疫吸附法测定血清中白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、TGF-β1水平。采用蛋白质免疫印迹法测定肺组织Smad2/3/6/7、TGF-β1蛋白的表达。结果肺部感染COPD患者致病菌以革兰阴性菌为主,多个菌种感染发生率高。感染组IL-8、TNF-α和TGF-β1水平,Smad2、Smad3和TGF-β1蛋白表达水平均高于未感染组和对照组,且未感染组的水平高于对照组,各组间比较差异具有统计学意义(P0.05);感染组Smad6和Smad7蛋白表达水平低于未感染组和对照组,且未感染组的水平低于对照组,各组间比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论 COPD患者发生肺部感染会导致各种炎性细胞合成并释放TGF-β1,从而使TGF-β1/Smads信号通路被激活,同时促进患者体内IL-8、TNF-α等炎性介质释放,TGF-β1/Smads信号转导途径中Smad2、Smad3发挥促进作用,而Smad6、Smad7则发挥抑制作用。