过氧化氢诱导TM3细胞氧化应激模型建立

目的构建过氧化氢(H2O2)诱导小鼠睾丸间质细胞(TM3)氧化应激模型,为肥胖相关雄性生殖功能低下机制研究提供参考。方法分别以不同浓度H2O2处理TM3细胞4 h,采用噻唑蓝法测定细胞活力,酶联免疫吸附试验检测睾酮水平,比色法测定细胞内活性氧(ROS)含量、总抗氧化能力(TAOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢酶(CAT)活性。结果 300、600μmol/L H2O2组细胞存活率[(86.7±4.3)%、(46.3±2.0)%]均低于对照组[(100.0±1.7)%](P<0.05);与对照组[(250.09±26.70)pg/m L]比较,150、300、600μmol/L H2O2组TM3细胞睾酮水平[(188.93±7.06)、(179.23±6.66)、(131.59±11.26)pg/m L]均明显降低(P<0.05);与对照组比较,150、300、600μmol/L H2O2组TM3细胞SOD和CAT活性[分别为(2.42±0.17)、(2.69±0.30)、(0.44±0.41)和(56.76±12.17)、(23.45±2.17)、(24.55±18.05)U/mg protein]均明显下降(P<0.05)。结论成功构建以H2O2为诱导剂的TM3细胞体外氧化应激模型。     

染料木黄酮对油酸诱导脂肪变HepG2细胞PPARα表达和糖脂水平的影响

目的研究染料木黄酮(genistein,Gen)对油酸(oleic acid,OA)诱导脂肪变HepG2细胞的过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferators-activated receptorα,PPARα)蛋白表达和糖、脂代谢水平的影响。方法将HepG2细胞在含有0⁵0?mol/L的Gen,0.5mmol/L的OA的培养基内,且设置对照组,培养24h后收集细胞,分别采用蛋白质印迹法(Western blotting)、酶法、选择性沉淀法测定PPARα、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量;收集培养基上清液,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定葡萄糖消耗量。结果浓度为1050?mol/L的Gen,0.5mmol/L的OA的培养基内,且设置对照组,培养24h后收集细胞,分别采用蛋白质印迹法(Western blotting)、酶法、选择性沉淀法测定PPARα、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量;收集培养基上清液,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法测定葡萄糖消耗量。结果浓度为10⁵0?mol/L的Gen可以减轻HepG2细胞脂肪变的程度,总体上呈现剂量效应关系。Gen各组与模型组比较,高浓度的Gen(50?mol/L)可有效提高OA诱导脂肪变HepG2细胞内PPARα和HDL-C含量,降低TC和葡萄糖消耗量,但低浓度的Gen(1050?mol/L的Gen可以减轻HepG2细胞脂肪变的程度,总体上呈现剂量效应关系。Gen各组与模型组比较,高浓度的Gen(50?mol/L)可有效提高OA诱导脂肪变HepG2细胞内PPARα和HDL-C含量,降低TC和葡萄糖消耗量,但低浓度的Gen(10³0?mol/L)对细胞内TC和HDL-C作用不明显。结论高浓度Gen能改善OA诱导的脂肪变HepG2细胞内的糖脂代谢情况,并可能与PPARα表达有关。[营养学报,2014,36(1):49-52]     

1,25二羟维生素D3对肝癌HepG2细胞增殖侵袭影响

目的探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)_2D_3]及PI3K/AKT信号通路抑制剂(LY294002)对人肝癌Hep G2细胞的增殖、侵袭影响及作用机制。方法实验设10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)mol/L 1,25(OH)_2D_3组及2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0μmol/L LY294002组,10~(-7)mol/L 1,25(OH)_2D_3+5μmol/L LY294002联合组,噻唑蓝法检测人肝癌Hep G2细胞增殖抑制率;Compu Syn软件计算联合指数;Tanswell小室检测HepG2细胞侵袭数;Western blot检测Hep G2细胞增殖细胞核抗原(PCNA),细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)、磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)、10号染色体缺失且与张力蛋白同源物磷酸脂酶基因(PTEN)蛋白。结果 1,25(OH)_2D_3及LY294002对人肝癌HepG2细胞增殖抑制率呈时间-剂量依赖效应(P0.05);1,25(OH)2D3联合LY294002组细胞增殖抑制率明显高于二者单独处理组(P0.05),联合指数=0.728,2者具有协同效应;10-7mol/L 1,25(OH)2D3组、5μmol/L LY294002组以及联合组Hep G2细胞侵袭数[分别为(45.9±6.4)、(49.9±6.0)、(27.8±4.0)个]明显低于对照组[(64.6±8.0)个](P0.05)。与对照组比较,10-7mol/L 1,25(OH)2D3组及联合组HepG2细胞PTEN蛋白表达量增加,差异有统计学意义(P0.05),10-7mol/L 1,25(OH)_2D_3组、5μmol/L LY294002组及联合组HepG2细胞PCNA、MMP-9、p-AKT蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P0.05),且联合组蛋白表达量低于二者单独处理组(P0.05)。结论 1,25(OH)_2D_3可抑制人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭,其机制可能与上调PTEN表达,抑制PI3K/AKT信号通路活性,下调PCNA、M M P-9蛋白有关;与LY294002合用具有协同效应。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对HepG2细胞脂质代谢的影响

[目的]观察邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)及其代谢产物邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯(MEHP)对人肝癌细胞株HepG2细胞脂肪代谢的影响,及其致肝损伤的作用机制。[方法]分别用不同浓度的DEHP(31.25、62.5、125、250、500、1 000μmol/L)、MEHP(3.125、6.25、12.5、25、50、100、250μmol/L)、完全培养基(阴性对照)、0.1%(体积分数)二甲基亚砜(溶剂对照)处理HepG2细胞24 h、48 h和72 h,采用MTT试剂盒检测细胞活力。不同浓度的DEHP(10.0、250.0μmol/L)、MEHP(4.0、100.0μmol/L)、完全培养基(阴性对照)、0.1%(体积分数)二甲基亚砜(溶剂对照)、0.5 mmol/L油酸(阳性对照)处理HepG2细胞48h,油红O染色法观察HepG2细胞脂肪累积。不同浓度的DEHP(2.0、10.0、50.0、250.0μmol/L)、MEHP(0.8、4.0、20.0、100.0μmol/L)、完全培养基(阴性对照)、0.5 mmol/L油酸、0.5μg/m L布雷德菌素A处理HepG2细胞24 h和48 h,Western blot法检测细胞内固醇元件调节蛋白(SREBP-1c)、肉毒碱棕榈酰基转移酶(CPT1A)、丙二酰辅酶A脱羧酶(MLYCD)和脂肪组织三酰甘油水解酶(ATGL)的蛋白表达。[结果]与阴性对照组相比,250.0~1 000.0μmol/L DEHP及50.0~250.0μmol/L MEHP染毒组HepG2细胞存活率降低,差异具有统计学意义(P0.05)。染毒48 h后,10.0、250.0μmol/L DEHP染毒组与4.0、100.0μmol/L MEHP染毒组HepG2细胞内可见红色脂滴,且伴有脂滴融合现象。与阴性质对照组相比,250.0μmol/L DEHP或100.0μmol/L MEHP染毒HepG2细胞24 h,50.0~250.0μmol/L DEHP或4.0~100.0μmol/L MEHP染毒HepG2细胞48 h,使CPT1A表达降低,差异具有统计学意义(P0.05);10.0~250.0μmol/L DEHP或4.0~100.0μmol/L MEHP染毒HepG2细胞48 h使MLYCD表达降低,差异具有统计学意义(P0.05);250.0μmol/L DEHP与20.0~100.0μmol/L MEHP染毒HepG2细胞24 h,10.0~250.0μmol/L DEHP与0.8~100.0μmol/L MEHP染毒HepG2细胞48h,可使ATGL表达降低,差异具有统计学意义(P0.05)。[结论]DEHP及MEHP染毒可引起HepG2细胞发生脂肪堆积,其过程可能与脂肪酸β-氧化受阻及三酰甘油水解受到抑制有关。     

镉暴露对HepG2细胞NRF2信号通路影响

目的探讨镉暴露对HepG2细胞转录因子NF-E2相关因子2(NRF2)信号通路的影响。方法采用甲臢比色法测定CdCl_2(0、1、2.5、5、10、25、50、100、200μmol/L)处理24 h后,HepG2细胞活力变化;应用蛋白免疫印迹法检测CdCl_2(1、2、5、10、20μmol/L)处理细胞6 h后,NRF2蛋白水平;采用RT-q PCR方法检测10μmol/L CdCl_2处理细胞2、4、6、12、24 h后,GCLC、GCLM、HO1和AKR1C1 m RNA水平变化,检测CdCl_2(1、2、5、10、20μmol/L)处理细胞6 h后,GCLC、GCLM、HO1和AKR1C1 m RNA水平变化。结果 HepG2细胞活力随镉处理剂量升高而降低(P0.05);与对照组(0.60±0.01)比较,1、2、5、10、20μmol/L镉处理组HepG2细胞NRF2蛋白表达水平[分别为(0.65±0.01)、(1.37±0.04)、(1.94±0.05)、(2.24±0.07)、(2.22±0.05)]均明显升高(P0.05);与对照组比较,镉处理6 h时,HepG2细胞内GCLC、GCLM、HO1和AKR1C1 m RNA水平[分别为(45.76±7.04)、(114.21±5.23)、(59.52±1.50)、(674.13±27.12)]明显升高(P0.05);与对照组比较,5μmol/L镉处理组HepG2细胞内GCLC和GCLM m RNA水平[分别为(24.77±2.16)、(29.93±0.67)]升高,2μmol/L镉处理组HepG2细胞内HO1和AKR1C1 m RNA水平[分别(28.55±2.02)、(186.32±12.63)]升高(P0.05)。结论镉暴露能激活HepG2细胞系中NRF2信号通路。     

乙肝表面抗原和乙肝e抗原均阳性产妇乙肝病毒宫内感染情况及与Toll样受体4和干扰素-γ的相关性分析

目的分析探讨乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigens,HBs Ag)和乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigens,HBe Ag)均阳性产妇乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)宫内感染情况及与Toll样受体4 (Tolllike receptor 4,TLR 4)和干扰素-γ的相关性。方法回顾性分析延安市人民医院2015年1月至2017年2月收治的198例HBs Ag和HBe Ag均阳性产妇的临床资料,根据产妇是否出现HBV宫内感染将其分为甲乙两组,有HBV宫内感染的100例为甲组,无HBV宫内感染的98例为乙组。分别测定两组产妇分娩前的外周血HBV DNA含量和外周血干扰素-γ水平,分娩后脐带血中HBe Ag和HBs Ag水平,利用免疫组化测定两组产妇胎盘TLR 4和干扰素-γ等的表达情况。结果分娩前甲组产妇干扰素-γ水平[(212. 38±35. 49) pg/m L]低于乙组产妇[(1 279. 39±126. 38) pg/m L](P 0. 05);甲组产妇的HBV DNA水平[(6. 36±0. 36)×10~3copies/m L]高于乙组产妇[(0. 18±0. 03)×10~3copies/m L](P 0. 05)。甲组产妇分娩后脐带血中的HBe Ag和HBs Ag水平分别为(2. 23±0. 31) PEI U/m L和(3. 41±0. 32) ng/m L,均高于乙组产妇的(0. 32±0. 12) PEI U/m L和(0. 30±0. 09) ng/m L(P 0. 05)。甲组产妇分娩后的脐带血中TLR 4和相应m RNA以及干扰素-γ水平分别为(36. 49±6. 12) pg/m L、(0. 71±0. 13) pg/m L、(79. 17±10. 98) pg/m L,均低于乙组产妇的(49. 32±7. 18) pg/m L、(0. 97±0. 12) pg/m L、(114. 38±18. 92) pg/m L(P 0. 05)。结论干扰素-γ和TLR4在抑制HBs Ag和HBe Ag均阳性产妇HBV宫内感染中起重要作用,对于预防和控制HBV孕产妇宫内感染具有较高的临床价值。     

镉通过类雌激素样作用促进人乳腺癌MCF-7细胞增殖

[目的]研究镉对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及雌激素受体(estrogen receptor,ER)蛋白表达水平的影响及其可能机制。[方法]用1×10~(-6)、1×10~(-7)、1×10~(-8)、1×10~(-9)、1×10~(-10)、1×10~(-11) mol/L的17β-雌二醇(后称雌激素)培养不同来源的A、B两株MCF-7细胞4 d,应用CCK8法筛选敏感细胞株并确定雌激素促细胞增殖作用最强的浓度。用1×10~(-6)、1×10~(-7)、1×10~(-8)、1×10~(-9)、10~(-10)、1×10~(-11) mol/L的镉溶液染毒敏感细胞株,确定镉促进细胞增殖的最大浓度。设置阴性对照组(去雌激素培养液)、实验组(1×10~(-8) mol/L镉)、阳性对照组(1×10~(-9) mol/L雌激素),通过克隆形成实验检测镉对MCF-7细胞集落形成能力的影响。利用ER抑制剂(ICI182780)初步探讨镉致细胞增殖的可能机制,增设实验抑制剂组(1×10~(-8) mol/L镉+1×10~(-7) mol/L ER抑制剂)、阳性抑制剂组(1×10~(-9) mol/L雌激素+1×10~(-7) mol/L ER抑制剂),通过CCK8法、流式细胞术和Western blot分别检测各组的细胞增殖率、细胞周期S期比例和ER表达水平。[结果]实验所用B株MCF-7细胞为雌激素敏感细胞株,且当雌激素浓度为1×10~(-9) mol/L时,对MCF-7细胞的促进增殖作用[(203.55±36.65)%]最大(P0.001)。与阴性对照组(100%)相比,1×10~(-8)~1×10~(-10) mol/L镉溶液可促进MCF-7细胞增殖[(163.78±31.90)%~(176.88±10.06)%](P0.001)。1×10~(-8) mol/L镉可促进细胞集落形成(P0.05),增加细胞S期比例(P0.001),提高细胞ER蛋白表达水平(P0.001)。与实验组相比,加入ER抑制剂能够抑制镉对MCF-7细胞的促增殖作用[由(135.17±23.96)%降至(107.66±7.64)%](P0.01),抑制镉诱导的细胞S期比例增加[由(24.17±0.53)%降至(12.36±0.43)%](P0.001),拮抗镉诱导的ER表达增加[由(56.19±3.67)%降至(38.84±1.04)%](P0.05)。[结论]镉可以促进人乳腺癌细胞MCF-7增殖和ER表达,这种作用可被ER抑制剂所抑制,提示镉可能具有雌激素样作用。     

五氯联苯PCB126对人肝癌细胞SMMC-7721有氧糖酵解的影响

目的探讨五氯联苯PCB126对人肝癌细胞有氧糖酵解的影响和机制。方法取人肝癌细胞SMMC-7721,用浓度分别为10~(-11)、10~(-10)、10~(-9)、10~(-8)、10~(-7) mol/L PCB126分别处理24、48 h,并以0.1%DMSO作为对照组。用试剂盒检测培养基中葡萄糖含量和乳酸生成量,以实时荧光定量PCR法检测丙酮酸激酶M2(PKM2)和有氧糖酵解通路中关键因子葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、乳酸脱氢酶(LDHA)、丙酮酸脱氢酶激酶(PDK)的表达。用RNA干扰技术敲减PKM2,检测其对培养基中葡萄糖含量、乳酸生成量和有氧糖酵解关键因子表达的影响。结果与对照组相比,人肝癌细胞SMMC-7721经10~(-10)、10~(-9)、10~(-8)mol/L PCB126处理48 h后,培养基中葡萄糖含量明显下降,乳酸生成量明显增加,差异有统计学意义(P0.05);与对照组相比,处理48 h后对细胞存活率无明显影响,72 h时细胞存活率明显升高。PCB126暴露可明显升高PKM2、GLUT1、LDHA和PDK mRNA水平,差异有统计学意义(P0.05)。用PKM2 shRNA敲减PKM2后,与10~(-9) mol/L PCB126处理组相比,培养基中葡萄糖含量升高,乳酸生成量下降,GLUT1、LDHA和PDK mRNA水平明显降低,差异均有统计学意义(P0.01)。结论 PCB126可通过PKM2上调肝癌细胞GLUT1、LDHA和PDK的表达,从而促进有氧糖酵解,这可能与PCB126促进肝癌的发展有关。     

4-羟基异亮氨酸改善肝癌细胞胰岛素抵抗

目的研究HepG2细胞在4-羟基异亮氨酸(4-HIL)作用下葡萄糖摄取率的变化情况,探讨4-HIL作为治疗非酒精性脂肪肝药物的可能性。方法通过MTT比色法检测在三种不同浓度4-HIL作用下对HepG2细胞活性影响,通过3H-2脱氧葡萄糖检测法检测HepG2细胞在三种不同浓度4-HIL中葡萄糖摄取率的变化,评估4-HIL在HepG2细胞胰岛素抵抗中所起到的作用。结果4-HIL药物在100μmol/L以下浓度均是安全的,其对HepG2细胞生长无抑制作用,在胰岛素抵抗HepG2细胞中,不同浓度(5、10、20μmol/L)的4-HIL组与胰岛素抵抗模型组均存在显著差异,3H-2脱氧葡萄糖摄取率分别增加154.33cpm,116.67cpm,179.33cpm,差异均有统计学意义(P0.05)。结论4-HIL可以通过改善葡萄糖代谢从而达到治疗非酒精性脂肪肝的作用。     

锌对胰岛素抵抗靶细胞活力和葡萄糖消耗量影响

目的探讨锌对胰岛素抵抗靶细胞活力和葡萄糖消耗量的影响。方法建成Hep G2细胞、3T3-L1细胞和L6成肌细胞胰岛素抵抗模型后,用10-7mol/L胰岛素和不同浓度锌(0、20、50、100、200、400μmol/L)孵育细胞,通过MTT法和葡萄糖氧化酶法测定基础状态和胰岛素刺激状态下3种胰岛素抵抗细胞葡萄糖的消耗量。结果不同剂量的锌孵育3种细胞3 h后,200、400μmol/L的锌可明显抑制各组细胞的活力(P<0.05);50~100μmol/L的锌干预3 h能在不同程度上提高Hep G2、3T3-L1正常细胞和胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗量,但其作用效果明显低于胰岛素;其中100μmol/L的锌与胰岛素共同作用的效果分别优于胰岛素或锌单独作用的效果(P<0.05);对于L6肌细胞,20、50和100μmol/L锌均能明显提高基础状态下正常细胞和胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗量(P<0.05);仅有20μmol/L锌和胰岛素共同作用的效果优于胰岛素或锌单独作用的效果(P<0.05)。结论不同浓度的锌可以在一定程度上提高3种胰岛素抵抗的靶细胞葡萄糖摄取量,且不同的细胞具有不同的适宜作用剂量。     

硒诱导HepG2细胞凋亡与活性氧的关系

目的探讨亚硒酸钠(Na2SeO3)诱导细胞凋亡的可能作用机制。方法用0、2.5、5、10和20μmol/L的Na2SeO3以及加有N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)的Na2SeO3(10μmol/L)处理HepG2。用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞活性;流式细胞仪测细胞内活性氧(ROS)的水平以及细胞凋亡情况。结果5、10和20μmol/LNa2SeO3作用于HepG21h即引起ROS增加,12h后HepG2细胞活性降低,24h后细胞早期凋亡以及晚期凋亡/坏死率均增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);抗氧化剂NAC有效抑制了ROS的增加,并增加了细胞活性,降低了细胞凋亡率,与未加NAC的Na2SeO3组(10μmol/L)相比差异有显著性(P<0.05)。结论一定浓度的亚硒酸钠使HepG2细胞活性下降,促进了细胞凋亡,ROS的增加在其中发挥了作用。     

多囊卵巢综合征孕妇孕期B型脑钠肽的变化及其与左心室功能的相关性

目的监测多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)孕妇孕期血B型脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)的变化,分析其与左心室功能变化的相关性。方法选取2013年2~9月在华北理工大学附属医院就诊,孕前诊断为PCOS的孕妇110例为观察组,同期正常孕妇125例为对照组,测定两组孕妇孕早期(10~12周)、孕中期(28~32周)、孕晚期(34~37周)血BNP水平,并当日行超声监测孕妇左心室功能相关指数。结果两组孕前心血管相关风险因素及心脏超声指数比较差异均无统计学意义(P0.05);两组孕早期BNP水平[(244.20±2.54)pg/m L、(245.10±2.48)pg/m L]比较差异无统计学意义(P0.05),观察组孕中期和孕晚期BNP水平[(330.10±4.68)pg/m L、(353.17±4.90)pg/m L]高于对照组[(259.48±3.27)pg/m L、(255.10±5.57)pg/m L],差异有统计学意义(P0.05);孕中期观察组左心室舒张末期内径(left ventricular end diastolic diameter,LVEDd)[(47.32±2.57)mm]、左心室收缩末期内径(left ventricular endsystolic diameter,LVEDs)[(32.10±4.09)mm]均大于对照组[(43.20±2.46)mm、(30.48±3.21)mm],差异有统计学意义(P0.05);两组左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF%)[(45.10±4.68)%、(55.13±4.54)%]、左心房内径(left atrial diameter,LAD)[(31.23±4.75)mm、(29.17±4.22)mm]比较差异无统计学意义(P0.05)。孕晚期观察组LVEDd[(48.10±2.43)mm]、LVEDs[(33.10±4.08)mm]、LAD[(32.26±4.65)mm]均大于对照组[(44.10±2.58)mm、(31.48±3.28)mm、(30.18±4.21)mm],LVEF%[(42.07±4.76)%]小于对照组[(53.10±4.27)%],差异均有统计学意义(P0.05)。结论 PCOS孕妇较正常孕妇易发生心肌功能及BNP水平的变化,监测孕妇血浆BNP水平可提示孕妇发生左心功能变化的风险。     

胆红素及牛黄拮抗苯乙烯所致肝癌细胞株损伤

目的　观察苯乙烯诱导的人肝癌细胞株 (HepG2 )细胞DNA链断裂损伤以及天然牛黄和胆红素对其损伤的拮抗效应。方法　采用单细胞凝胶电泳法观察HepG2细胞体外暴露于苯乙烯出现的DNA链断裂损伤 ,同时观察天然牛黄和胆红素对于苯乙烯诱导DNA损伤的拮抗作用。结果　在细胞存活未受到苯乙烯影响的浓度下 ,0 2μmol/L的苯乙烯即可诱导HepG2细胞明显的DNA链断裂损伤 ,彗星细胞频率和DNA迁移距离分别为 (9 5±2 1) %和 (4 5± 0 7) μm。在明显诱导DNA损伤浓度的苯乙烯处理时同时加入天然牛黄或胆红素 ,发现二者对苯乙烯诱导的DNA链断裂损伤在一定浓度下均有良好的拮抗作用 ,10 μmol/L的胆红素或天然牛黄与 1μmol/L的苯乙烯共同处理时 ,HepG2细胞的DNA损伤水平基本回复到本底水平。 结论　苯乙烯能够诱导HepG2细胞出现DNA链断裂损伤 ,10 μmol/L的胆红素或天然牛黄基本能完全拮抗苯乙烯诱导的DNA链断裂损伤。     

丝氨酸对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及粘附功能的影响

目的探讨丝氨酸对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及粘附功能的影响及其调控机制。方法体外培养HepG2细胞,采用不同浓度(0.01~100μmol/L)丝氨酸处理,CCK8法、划痕实验和体外基质粘附实验检测HepG2细胞的增殖、迁移及粘附功能;采用1μmol/L丝氨酸处理,Western blot检测pERK和pAKT。结果与空白对照组细胞相比,1μmol/L丝氨酸处理组显著促进HepG2细胞的增殖,且在48 h和72 h差异具有统计学意义(P0.05)。1μmol/L丝氨酸处理组24 h的迁移促进率为6%(P0.05)。0.01和1μmol/L丝氨酸处理组对HepG2细胞粘附功能的促进率分别为15%(P0.05)和20%(P0.01)。1μmol/L丝氨酸处理组ERK和AKT活性(pERK和pAKT)明显升高。结论丝氨酸通过促进ERK和AKT磷酸化促进HepG2细胞的增殖、迁移和粘附。     

活性氧在硒致HepG2 DNA损伤中的作用

目的探讨亚硒酸钠(Na2SeO3)致HepG2细胞DNA损伤的作用机制。方法用0、2·5、5、10、20μmol/L的Na2SeO3、及分别加有还原性谷胱甘肽(GSH)和N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)的Na2SeO3(10μmol/L)处理HepG2。用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞活性;流式细胞仪测细胞内活性氧(ROS)的水平以及用彗星实验检测细胞的DNA损伤。结果5、10、20μmol/L Na2SeO3作用于HepG21h即引起ROS增加,12h后即导致细胞HepG2活性下降,24h后DNA损伤增强,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0·05);抗氧化剂GSH和NAC有效抑制了ROS升高,并增强了细胞活性,减弱了细胞DNA损伤,与未加GSH和NAC的Na2SeO3组(10μmol/L)相比,差异有统计学意义(P<0·05)。结论ROS的产生可能是亚硒酸钠造成HepG2DNA损伤的重要原因。     

氯原酸对高胰岛素与高油酸状态下HepG2细胞葡萄糖利用的影响

目的探讨氯原酸(CGA)对胰岛素抵抗(IR)及高脂状态下糖代谢的调节作用。方法通过培养HepG2细胞,分别在正常、高胰岛素诱导肝细胞胰岛素抵抗以及油酸(OA)诱导脂肪变性状态下,给予不同剂量的CGA(10、20、40、80mg/L)共培养24h后,观察细胞形态学变化,用葡萄糖氧化酶法检测细胞的葡萄糖消耗量。结果在正常环境中,与对照组比较,CGA可显著增加细胞葡萄糖消耗量,且在10～40mg/L剂量范围内呈量效关系(P<0.05)。在胰岛素抵抗状态下,葡萄糖消耗量下降了39.5%(P<0.05);给予CGA后,细胞耗糖量较IR组增加了60.5%～93.5%(P<0.05),其中20mg/LCGA的作用最强。在脂肪变性状态下,葡萄糖消耗量下降了26.2%(P<0.05);给予CGA后,耗糖量较OA组增加了27.3%～63.5%(P<0.05),其中20mg/L组作用最强。结论CGA对高胰岛素和高脂诱导的糖代谢紊乱具有改善作用。     

氢醌对A549细胞人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶基因mRNA表达的影响

目的 观察不同浓度氢醌(hydroquinone,HQ)对人肺腺癌A549细胞活性氧(reactiveoxygen species,ROS)、脂质过氧化损伤产物丙二醛(malonaldehyde,MDA)、抗氧化酶活性以及氧化损伤修复酶人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(human 8-oxo-guanine DNA glyeoslase,hOGG1)基因mRNA表达的影响,探讨HQ毒作用的分子机制.方法 不同浓度HQ作用于A549细胞,噻唑兰(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率,荧光探针检测细胞内ROS的变化,比色法测定MDA含量和过氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力,逆转录聚合酶链反应(reverse transeription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术分析hOGG1基因mRNA的表达.结果 随着HQ浓度的增加,各实验结果为:(1)A549细胞的吸光度值(A值)下降,160 μmol/L和320 μmoL/L浓度组[(0.584±0.098)、(0.328±0.066)]与对照组(0.989±0.150)相比差异有统计学意义(q值分别为5.56、9.07,P值均<0.05),且两组细胞存活率均低于80%;(2)A549细胞内ROS生成增多,40 μmol/L和80 μmoL/L浓度组A值[(39.80±4.15)、(101.99μ9.45)]与对照组(5.71±0.50)相比差异有统计学意义(q值分别为10.74、30.32,P值均<0.05);(3)SOD、GSH-Px活性下降,活性值在80 μmol/L时[(22.93±0.56)U/mg prot、(25.60±2.31)U/mg prot]均低于对照组[(25.62±0.28)U/mg prot、(38.97±2.61)U/mg prot],差异有统计学意义(q值分别为12.17、8.78,P值均<0.05);MDA含量升高,在40 μmol/L和80 μmol/L[(1.07±0.01)nmol/mg prot、(1.19±0.08)nmol/mg plot]时高于对照组[(0.77±0.04)nmol/mg prot],差异有统计学意义(q值分别为10.90、15.49,P值均<0.05);SOD(r=-0.95,F=20.00,P=0.04)与GSH-Px(r=-0.99,F=115.48,P=0.01)活力的下降和MDA(r=0.96,F=21.31,P=0.04)含量的升高均与HQ浓度的变化具有剂量-反应关系;(4)RT-PCR结果显示:HQ作用后,A549细胞hOGG1 mRNA的表达呈下降趋势,80 μmoL/L浓度组hOGG1 mRNA的表达(0.478±0.017)与对照组(0.715±0.038)相比降低较明显(q=11.70,P<0.05).结论 HQ可以诱导细胞活性氧增加和hOGG1基因mRNA表达水平下降,提示氧化损伤是HQ毒作用的重要机制.     

NS-398对肝癌细胞系HepG2环氧合酶-2表达的影响

目的 研究环氧合酶-2(COX-2)抑制剂氮-2,环己氧-4,硝基苯-甲基磺胺(NS-398)对肝癌细胞株HepG2细胞体外抗肿瘤作用,探讨其抗癌作用的分子机理.方法 分别用100、200、300、400μmol/L NS-398处理HepG2细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定肿瘤细胞增殖抑制率,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的改变及凋亡百分比的变化,用Westen blotting检测COX-2蛋白的表达,用放射免疫测定法检测NS-398对HepG2细胞前列腺素E2(PGE2)释放水平.结果 NS-398呈剂量依赖性的方式抑制HepG2细胞增殖,并诱导其凋亡,细胞周期分析表明,随着浓度增大,S期细胞明显减少,有G1期细胞累积现象,24 h时半数有效剂量(IC50)为300μmo/L.NS-398明显抑制COX-2的活性和表达.随着浓度的增加,其COX-2蛋白表达逐渐降低,100、200、300、400μmol/L NS-398组灰度值分别为1515.1±127.2、1023.5±108.4、691±94.3和493.6±86.6,与对照组1822±157.4相比差异有统计学意义(t值分别为3.736、1.623、1.810、2.587,P<0.01).NS-398可明显抑制HepG细胞PGE2释放水平,其吸光度值(A值)分别为0.70±0.02、0.48±0.02、0.29±0.01和0.18±0.01,与对照组比较0.03±0.01差异有统计学意义.结论 NS-398对肝癌细胞增殖有抑制作用并诱导其凋亡,可能与细胞G1期阻滞以及通过抑制COX-2活性,抑制COX-2下游产物PGE2表达有关.     

多发性硬化症患者血清INF-γ、MMP-9及TIMP-1水平检测的临床意义

目的探讨多发性硬化症患者血清干扰素-γ(INF-γ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶一1组织抑制因子(TIMP-1)水平检测的临床意义。方法选择2015年8月—2017年3月收治的46例多发性硬化症患者作为观察组,另选择同期行健康体检的健康人30例作为对照组。两组均检测INF-γ、MMP-9及TIMP-1指标水平。同时分别统计观察组急性发作期和缓解期INF-γ、MMP-9及TIMP-1指标水平,与对照组进行比较分析。结果观察组INF-γ、MMP-9、TIMP-1[(11.35±4.58)pg/m L、(22.04±11.24)ng/m L、(4.74±1.13)ng/m L]与对照组[(3.14±1.05)pg/m L、(15.68±4.43)ng/m L、(5.31±1.32)ng/m L]比较,差异有统计学意义(均P0.05)。急性发作期患者INF-γ、MMP-9[(15.32±5.24)pg/m L、(24.05±4.97)ng/m L]指标水平均高于缓解期[(6.28±4.25)pg/m L、(20.13±5.67)ng/m L)]和对照组,差异有统计学意义(均P0.05);缓解期患者INF-γ、MMP-9指标水平高于对照组(均P0.05)。急性发作期TIMP-1指标[(4.48±1.23)ng/m L]水平低于缓解期[(5.20±0.47)ng/m L]和对照组,(均P0.05);但缓解期TIMP-1指标水平与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论多发性硬化症存在血清INF-γ、MMP-9及TIMP-1指标异常改变,可作为临床诊断的参考依据,各指标临床检验意义重大。     

饮食及运动干预对高血压伴糖尿病前期患者氧化应激的影响

目的观察饮食及运动干预对高血压伴糖尿病前期患者氧化应激及糖代谢的影响。方法选取76例高血压伴糖尿病前期患者,随机分为干预组和对照组。两组患者药物治疗同前,干预组给予低热量、低钠饮食、控制烟酒摄入等生活干预,并每日增加中等强度运动训练,为期12个月。结果通过12个月的饮食及运动干预,干预组和对照组比较结果显示:体质指数[(21.3±5.6)kg/m2 vs(24.8±6.1)kg/m2]、收缩压[(135.9±6.7)mm Hg vs(142.1±5.2)mm Hg]、舒张压[(81.7±6.2)mm Hg vs(85.1±4.9)mm Hg]降低,血清丙二醛[(7.5±1.5)μmol/L vs(8.2±1.3)μmol/L]降低,超氧化物歧化酶[(98.7±10.8)U/ml vs(87.1±14.2)U/ml]、一氧化氮[(81.7±14.2)μmol/L vs(71.8±13.3)μmol/L]含量升高,空腹血糖[(4.90±1.92)mmol/Lvs(6.50±2.48)mmol/L]、餐后2h血糖[(7.63±3.72)mmol/Lvs(9.73±2.63)mmol/L]、糖化血红蛋白[(4.78±2.54)%vs(6.12±1.68)%]降低,P均0.05。结论饮食及运动干预能降低高血压伴糖尿病前期患者体质指数、血压,还能改善患者氧化应激及糖代谢异常,可以预防、延缓糖尿病的发生。