氟喹诺酮药物对金黄色葡萄球菌同源耐药突变株的耐药突变选择窗研究

目的通过测定不同氟喹诺酮（FQ）药物对同源金黄色葡萄球菌耐药突变株的MIC和防耐药突变浓度（mutant prevention concentration。MPC），分析不同药物的抗菌活性及限制耐药突变株选择的能力。方法分别采用环丙沙星和加替沙星琼脂平板筛选金黄色葡萄球菌ATCC25923同源的第一步和第二步耐药突变株。采用琼脂平板稀释法测定各耐药突变株的MIC和MPC。计算选择指数（MPC／MIC）。结果加替沙星和莫西沙星对金黄色葡萄球菌ATCC25923第一步耐药突变的MPC值（1—2μg／ml）明显低于环丙沙星、左氧氟沙星和帕珠沙星（4—16μg／m1），以上5种FQ药物对第一步耐药突变的MPC值和选择指数分别为ATCC25923的2—8倍和1-4倍。加替沙星和莫西沙星对第二步耐药突变的MPC值为8—16μg／ml。结论对于金黄色葡萄球菌ATCC25923同源的第一步耐药突变株。加替沙星和莫西沙星限制下一步耐药突变株选择的能力强于环丙沙星、左氧氟沙星和帕珠沙星，结合药动学参数，环丙沙星、左氧氟沙星和帕珠沙星很容易选择出下一步耐药突变株；而加替沙星和莫西沙星则能够限制下一步耐药突变株的选择。对于第二步耐药突变株，加替沙星和莫西沙星则很容易筛选出对这两种药物也耐药的菌株。临床上为延长加替沙星和莫西沙星的应用时间，对于已对左氧氟沙星耐药的菌株应避免应用加替沙星和莫西沙星单药治疗。     

氟喹诺酮类药物对金黄色葡萄球菌及其耐药突变体的耐药性研究

目的:研究5种氟喹诺酮类药物(FQ)对金黄色葡萄球菌ATCC29213及其同源耐药突变体的最低抑菌浓度(MIC)、防细菌耐药突变体选择浓度(MPC)和突变选择窗(MSW),比较其防耐药变异能力,了解细菌对FQ耐药的发生发展过程。方法:肉汤法富集1010CFU.ml-1金黄色葡萄球菌ATCC29213,采用平板稀释法测定莫西沙星、加替沙星、司帕沙星、左氧氟沙星和环丙沙星对金黄色葡萄球菌ATCC29213及筛选的耐药突变体的MIC、暂定MPC(MPCpr)和MPC。结果:莫西沙星、加替沙星、司帕沙星、左氧氟沙星和环丙沙星对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MPC分别为0.2、0.3、0.3、1.4、3.2μg.ml-1。选择指数(MPC/MIC)分别为6.5、4.8、9.7、11.2、12.8。5种氟喹诺酮类药物筛选的第一步突变体对筛选药物的MIC较ATCC29213升高2~8倍。左氧氟沙星筛选的第二步突变体的MIC较第一步突变体又升高8~16倍。所有突变体的MSW边界都较其源菌株明显升高。结论:莫西沙星、加替沙星限制金黄色葡萄球菌耐药突变菌体选择的能力强于司帕沙星、左氧氟沙星和环丙沙星。金黄色葡萄球菌对FQ药物产生耐药是逐步发生的。第一步耐药突变体的产生,使筛选出下一步耐药突变体的几率明显增大,从而导致耐药菌的富集和扩散。     

6种氟喹诺酮类药物对凝固酶阴性葡萄球菌的防耐药变异浓度分析

目的 比较6种氟喹诺酮类药物对临床分离凝固酶阴性葡萄球菌耐药突变体的选择能力.方法 选择呼吸道标本,对苯唑西林、环丙沙星敏感的凝固酶阴性葡萄球菌34株,采用标准琼脂二倍稀释法、标准琼脂平板稀释法,测定6种氟喹诺酮类药物对凝固酶阴性葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)、防耐药变异浓度(MPC).结果 MPC值比较,莫西沙星最低(MPC90为1 mg/L),左氧氟沙星和环丙沙星最高(MPC90均为32 mg/L).莫西沙星、卡屈沙星和加替沙星的MPC90/MIC90较低,均为2.结论 莫西沙星、卡屈沙星和加替沙星对凝固酶阴性葡萄球菌的MPC值较低,突变选择窗范围相对较窄.     

比较6种氟喹诺酮类药物对金黄色葡萄球菌的防耐药变异浓度

目的比较6种氟喹诺酮类药物对临床分离金黄色葡萄球菌耐药突变体的选择能力。方法用呼吸道标本,选择对苯唑西林、环丙沙星敏感的金黄色葡萄球菌36株,采用标准琼脂二倍稀释法、标准琼脂平板稀释法,测定6种氟喹诺酮类药物对金黄色葡萄球菌的MIC、MPC。结果 MPC值比较,莫西沙星最低;而环丙沙星最高。选择指数(MPC90/MIC90)较低有如下4种:莫西沙星、卡屈沙星、加替沙星和帕珠沙星,均为2。6种药物MPC90值与其体内药动学参数比较,莫西沙星和卡屈沙星小于其Cmax。结论莫西沙星、卡屈沙星和加替沙星对金葡菌的MPC值较低,突变选择窗范围相对较窄。     

粪肠球菌Ⅱ型拓扑异构酶QRDR基因突变与耐氟喹诺酮类药物关系的研究

目的 检测临床分离的粪肠球菌对6种氟喹诺酮类药物的敏感性,研究粪肠球菌Ⅱ型拓扑异构酶基因突变与对氟喹诺酮类药物耐药性的关系,以了解粪肠球菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制.方法 采用CLSI M7-A8方案推荐的琼脂稀释法检测临床分离的112株粪肠球菌对6种氟喹诺酮类药物的MIC;筛选出环丙沙星耐药株,PCR扩增其gyrA、gyrB,parC和parE基因的喹诺酮耐药决定区(QRDR),并与标准敏感株核苷酸序列进行比较,分析基因突变与耐药的相关性.结果 6种FQs药物对112株粪肠球菌的抗菌活性(MIC50,MIC90)从强到弱依次为:莫西沙星＞加替沙星＞左氧氟沙星＞环丙沙星、氧氟沙星＞诺氟沙星.5株耐环丙沙星粪肠球菌的Ⅱ型拓扑异构酶QRDR基因都发生了突变:有4株的gyrA基因QRDR发生了点突变,其中3株表现为Ser83→Ile(AGT→ATT),1株表现为Glu87→Gly(GAA→GGA),4株parC基因QRDR发生突变,突变方式为Ser80→ Ile(AGC →ATC),gyrB和par基因未发现突变.     

2种氟喹诺酮类药物对临床分离金黄色葡萄球菌突变选择窗的影响

目的通过测定左氧氟沙星及莫西沙星对金黄色葡萄球菌临床分离菌株防突变浓度(MPC),比较氟喹诺酮类对金黄色葡萄球菌突变选择窗(MSW)的影响,为临床合理使用抗菌药物,防治细菌耐药产生提供依据。方法采用标准琼脂二倍稀释法测定2种氟喹诺酮药物对38株临床分离的金黄色葡萄球菌和金黄色葡萄球菌质控菌株ATCC25923的最低抑菌浓度(MIC),采用肉汤法富集3×1010CFU.mL-1的金黄色葡萄球菌测定2种氟喹诺酮药物MPC,计算MPC50、MPC90、MPC/MIC。结果左氧氟沙星对38株金黄色葡萄球菌的MPC90、MPC90/MIC90分别为16 mg.L-1、8,莫西沙星分别为2 mg.L-1、4;结合药物动力学参数莫西沙星400 mg.次-1,1次.d-1,其Cmax/MPC90、AUC/MPC90分别为2.3、18,左氧氟沙星500 mg.次-1的Cmax/MPC90、AUC/MPC90明显高于300 mg.d-1组,分别为0.5、2.4。结论对金黄色葡萄球菌的临床分离菌株莫西沙星比左氧氟沙星MPC90低,MSW窄,防突变能力更强。左氧氟沙星500 mg.次-1,1次.d-1,能够提高左氧氟沙星的防突变能力。     

六种氟喹诺酮对肠球菌的体外抗菌活性及利血平的影响

目的：研究氟喹诺酮类抗菌药物对临床分离肠球菌的体外抗菌活性,以及多重耐药泵抑制剂利血平对抗菌活性的影响.方法：收集临床分离的101株肠球菌（66株粪肠球菌和35株屎肠球菌）,用琼脂稀释法测定应用利血平前后6种氟喹诺酮对菌株的最低抑菌浓度（MIC）.结果：诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、加替沙星、莫西沙星对66株粪肠球菌的MIC90依次为256、64、64、16、16、8 mg/L,对35株屎肠球菌的MIC90依次为＞512、512、128、128、32、32 mg/L.应用利血平之后,上述6种药物对粪肠球菌抗菌活性提高（MIC下降2倍或2倍以上）的株数依次为66（100%）、54（81.8%）、4（6.1%）、4（6.1%）、32（48.5%）和3（4.5%）株,对屎肠球菌抗菌活性提高的株数依次为35（100%）、29（82.9%）、1（2.9%）、0（0%）、6（20.7%）和2（5.7%）株.结论：新氟喹诺酮加替沙星、莫西沙星增强了对肠球菌的抗菌活性,利血平能够提高全部或部分被检测肠球菌对诺氟沙星、环丙沙星和加替沙星的敏感性,但仅使少数被检测肠球菌对氧氟沙星、左氧氟沙星和莫西沙星的敏感性提高.     

两种氟喹诺酮类药物对肺炎克雷伯菌防耐药突变浓度及耐药突变体耐药性的研究

目的测定两种氟喹诺酮类药物（FQNs）对肺炎克雷伯菌（KP）的防耐药突变浓度（MPC），比较其防耐药突变能力，了解突变耐药菌对FQNs的耐药性。方法肉汤法富集10^10CFU／ml的菌液接种于不同浓度环丙沙星及加替沙星琼脂平皿上，采用琼脂二倍稀释法测定环丙沙星、加替沙星对临床分离肺炎克雷伯菌、ATCC700603及其耐药突变体的最低抑菌浓度（MIC）、防耐药突变浓度（MPC）。对不同药物浓度筛选出的耐药突变株进行编码拓扑异构酶VIC亚单位基因parC和回旋酶A亚单位基因gyrA喹诺酮耐药决定区的PCR扩增和测序，并测定外排泵抑制剂羟基氰氯苯腙（Carbonyl Cyanide m-chlorophenylhydrazone，CCCP）对环丙沙星和加替沙星MIC的影响。结果环丙沙星、加替沙星对ATCC700603的MPC分别为4、1.6mg／L，细菌耐药选择指数分别为16、4。两种药物的耐药突变体均出现了gyrA的第83位（TCC→ATC／TTG）均出现了突变，引起了相应氨基酸的改变（Ser-83→Ile／Leu）。其中有一株同时也出现了第87位点（GAC→AAC）的改变，氨基酸也由Asp→Asn。除第二步突变体parC第80位点突变（AGC→ATC），引起氨基酸由Ser→Ile的改变外，其余几株均没有发生parC的突变。MIC测定结果显示，单用两种FQNs及合用CCCP的结果一样。结论加替沙星限制KP耐药突变株选择的能力强于环丙沙星，KP的耐药突变株对FQNs耐药的主要原因是gyrA和parC基因突变。     

3种氟喹诺酮类药物对鲍曼不动杆菌的防耐药突变浓度研究

目的研究3种氟喹诺酮类药物对临床分离的鲍曼不动杆菌敏感株及其环丙沙星诱导突变株的防耐药突变浓度（MPC）,比较其防耐药突变能力。方法用环丙沙星琼脂平板筛选鲍曼不动杆菌临床分离株的突变株,用琼脂平板稀释法测定各实验菌株的最低抑菌浓度（MIC）和MPC。结果加替沙星和左氧氟沙星对临床分离株及其突变株的MPC低于环丙沙星。对临床分离株的MPC,加替沙星和左氧氟沙星均为0．25μg／mL,环丙沙星为2μg／mL;对突变株的MPC,加替沙星和左氧氟沙星为1～8μg／mL,环丙沙星为4～32μg/mL。结论对临床分离的鲍曼不动杆菌敏感株及其环丙沙星诱导的突变株,加替沙星和左氧氟沙星限制其耐药突变株的选择能力强于环丙沙星;对环丙沙星敏感的鲍曼不动杆菌的临床治疗,建议要避免这3种氟喹诺酮类的单药治疗。     

氟喹诺酮类药物对鲍曼不动杆菌及其环丙沙星诱导突变株的防耐药突变浓度

目的研究环丙沙星、左氧氟沙星及加替沙星(均为氟喹诺酮类抗生素)对临床分离的鲍曼不动杆菌敏感株及其环丙沙星诱导的突变株的防耐药突变浓度(MPC),比较防耐药突变能力。方法用环丙沙星琼脂平板,筛选鲍曼不动杆菌临床分离株的突变株;用琼脂平板稀释法,测定各实验菌株的最低抑菌浓度(MIC)和MPC。结果加替沙星和左氧氟沙星对临床分离株及其突变株的MPC低于环丙沙星;对临床分离株的MPC,加替沙星和左氧氟沙星均为0.25μg·mL-1,环丙沙星为2μg·mL-1;对突变株,前者为1~8μg·mL-1,后者为4~32μg·mL-1。结论对临床分离的鲍曼不动杆菌敏感株及其环丙沙星诱导的突变株,加替沙星和左氧氟沙星限制其耐药突变株选择的能力强于环丙沙星;建议临床对环丙沙星敏感的鲍曼不动杆菌,要避免这3种氟喹诺酮的单药治疗。     

防耐药突变体选择浓度和耐药突变选择窗理论的研究进展

目的：阐述防耐药突变体选择浓度和耐药突变选择窗理论的最新研究进展。方法：查阅近年来国内外相关文献资料进行整理归纳。结果与结论：体外MPC测定、体外药效学研究、动物感染模型、人体内研究验证了MSW理论，防耐药突变体选择浓度和耐药突变选择窗理论为评价细菌耐药新的重要指标。     

雷帕霉素产生菌突变株的遗传稳定性研究

本文研究了雷帕霉素产生菌－吸水链霉菌ＦＣ９０４的高产突变株Ｃ１４的性状，稳定性。Ｃ１４菌株冷藏稳定性较好，存放４℃冰箱３个月，效价基本不变。Ｃ１４变株经传代后Ｉ型菌落减少，生产能力下降，其高产性状不稳定，需不断自然分离，进一步提高效价。     

万古霉素联合用药降低对金黄色葡萄球菌防耐药突变浓度的研究

目的 体外研究万古霉素(vancomycin,VAN)分别与左氧氟沙星(levofloxacin,LVX)、利福平(rifampincin,RFP)、磷霉素(fosfomycin,FOM)联用对降低对金黄色葡萄球菌防耐药突变浓度(MPC)的比较,为指导临床联合应用抗菌药物,制定新的用药策略,防止细菌耐药产生提供理论依据.方法 采用肉汤富集1010CFU/mL金黄色葡萄球菌ATCC29213,采用琼脂平板二倍稀释法测定单独用药的最低抑菌浓度(MIC),琼脂平板稀释法测定单独应用VAN以及与其他三种药物联用对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MPC.并计算出各药单独应用的MSW(MPC/MIC).结果 VAN、LVX、RFP、FOM单药对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MIC分别为1,0.125,0.008和2μg/mL; MPC分别为64,2,＞32,64μg/mL,MSW为64,6,＞4000,32.联合用药后各药的MPC(μg/mL)降低程度如下:VAN+LVX (MPCNVA-4,MPCLVX-0.125),VAN+RFP(MPCNVA-4,MPCRFP-0.008),VAN+FOM(MPCNVA -1,MPCFOM-2).联合LVX和RFP可使VAN的MPC降至原来的1/16倍,联合FOM可使VAN的MPC降至原来的1/64倍.结论 VAN与另三种药物联用,可以明显降低各自单独用药对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MPC,其中联合FOM降低其MPC幅度最大,缩小其MSW效果最好.     

泰洛星产生菌弗氏链霉菌变株TM4—180的生物学特性

本文报道泰洛星产生菌弗氏链霉菌诱变株的生物学特性:(1)变株TM4—180是弗氏链霉菌(StrePtomyces fradiae)A41多次诱变衍生的产生泰洛星并对泰洛星有高抗性(Tyl~ Tyl~r)的变株,其泰洛星产量是原始菌种A41的18倍。(2)用紫外线、亚硝基胍和光敏诱变剂等诱变剂做菌种诱变,效果很好。筛选的Tyl~ Ty1~r菌株,如TM1-32、TM4—180等产生抗生素的能力为直接亲株的160～200％。(3)TM4-180经γ—射线处理获得阻断变株TM5-221、TM5—257,它们不产生泰洛星,但其发酵时能产生泰洛星,其效价是单独发酵的10～20倍。(4)TM5—257(Tyl~-Tyl~r)用紫外线处理得变株TM5-257-60,它是泰洛星生物合成的回复突变株,具有隔代亲株TM4-180的相同功能。(5)变株TM4-180及有关菌株(Tyl~r)对泰洛星具有抗性,在含5～10mg/ml的培养基中正常生长。而TM5—221等变株Tyl~3)对泰洛星敏感,可能泰洛星抗性基因tlr C缺失。抗药标记的变化,是DNA突变多样性的表现。     

防细菌耐药突变浓度理论文献计量分析

目的：采用文献计量学的方法分析防细菌耐药突变浓度理论（MPC）的研究进展,旨在为抗菌药物防耐药的深入研究提供参考。方法：电子检索Medline、Embase、Science Citation Index（SCI）、《中国医院知识仓库》、《中文科技期刊数据库》1999年1月–2010年3月国内外公开发表的文献,利用EndNote软件进行分类整理,然后对其发表年份、作者、研究机构、国别、研究内容等进行计量分析。结果：经各数据库检索去除重复文献后纳入国内外MPC相关文献270篇,其中,英文203篇,中文67篇。论著156篇,综述63篇,会议论文43篇。第一篇报道在1999年,2004年发表最多。加拿大的皇家大学医学院是发文量最多的机构,国内解放军总医院呼吸科发文量居第一位。从内容上看,关于MPC理论的研究以体外实验和动物实验为主,1篇文献是关于MPC理论临床验证的文章。研究最多的菌种是金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和铜绿假单胞菌。结论：MPC新理论的研究日益受到全球范围的广泛关注,研究内容愈加深入。     

4种氟喹诺酮类药物对嗜麦芽寡养单胞菌防耐药变异浓度的测定

目的为了解4种氟喹诺酮类药物对嗜麦芽寡养单胞菌的防耐药变异能力,以指导临床合理用药。方法采用标准琼脂二倍稀释法测定莫西沙星、左氧氟沙星、洛美沙星、环丙沙星对嗜麦芽寡养单胞菌的最低抑菌浓度;将总量为1.2×1010CFU的细菌接种于含不同浓度药物的琼脂平皿上,无菌落生长的最低药物浓度即为该药的防耐药变异浓度(MPC)。结果莫西沙星和左氧氟沙星对嗜麦芽寡养单胞菌的敏感率为100%,洛美沙星敏感率为64.5%,环丙沙星敏感率为9.7%。莫西沙星和左氧氟沙星MPC90为64mg/L,洛美沙星和环丙沙星MPC90为256m g L/。4种药物的M PC90/MIC90均为64。结论莫西沙星和左氧氟沙星对嗜麦芽寡养单胞菌具有高度的抗菌活性,但结合药代动力学参数,4种药物血药浓度均位于MIC和MPC之间,提示单药治疗易导致耐药突变菌株的富集生长,应联合用药以限制细菌耐药的发生。     

4种氟喹诺酮类药物对肺炎克雷伯杆菌的防耐药变异浓度

目的 为了解4种氟喹诺酮类药物对肺炎克雷伯杆菌的防耐药突变能力，以指导临床合理用药。方法 采用标准琼脂二倍稀释法测定加替沙星、左氧氟沙星、洛美沙星、环丙沙星对肺炎克雷伯杆菌的最低抑菌浓度；将总量为1．2×10^10CFU的细菌接种于含不同浓度药物的琼脂平皿上，无菌落生长的最低药物浓度即为该药的防耐药变异浓度。结果 加替沙星的敏感率为91．3％。左氧氟沙星的敏感率为82．6％，洛美沙星的敏感率为70％，环丙沙星的敏感率为52％。就MPC90而言，加替沙星=左氧氟沙星〈环丙沙星〈洛美沙星。突变选择窗由小至大为左氧氟沙星〈加替沙星〈环丙沙星〈洛美沙星。结论 加替沙星、左氧氟沙星对肺炎克雷伯杆菌有高度的抗菌活性，但结合药代动力学参数，4种药物的血药浓度均位于最低抑菌浓度和防耐药变异浓度之间，提示单药治疗易导致耐药突变株的富集生长，应联合用药以防止细菌耐药的发生。     

聚乙二醇单修饰的重组人粒细胞集落刺激因子突变体的纯化与分析

目的 获得高活性的聚乙二醇定点单修饰的产物PEG-rmhG-CSF-Cys176.方法 用聚乙二醇马来酰亚胺基和高活性的重组人粒细胞集落刺激因子突变体(rmhG-CSF)的半胱氨酸(Cys)基团特异性结合,并用离子交换层析分离纯化修饰产物,通过高效凝胶过滤色谱检测纯度,MTT法检测体外的生物活性.结果 蛋白纯度为97%,体外生物活性为0.8×10~8 IU·mg~(-1).结论 半胱氨酸反应性PEG和游离Cys的结合是在rmhG-CSF活性区以外的位置C末端,修饰后的蛋白活性基本未受影响.     

组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)及其突变体的表达研究进展

对组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)及其突变体在大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞、丝状真菌、昆虫细胞和转基因动物乳腺等表达系统中进行表达的研究工作情况进行了综述，并对各个表达系统的优缺点进行了比较。