肉苁蓉细胞悬浮培养体系的建立

目的 研究由肉苁蓉愈伤组织建立细胞悬浮培养体系的培养条件.方法 在固体培养基上添加不同比例的生长激素,考察生长激素、细胞种龄和接种量对细胞生长和次生代谢产物苯乙醇糖苷(PeG)量的影响.结果 在添加1 mg/L 2,4-D的B5固体培养基上形成的愈伤组织松散易碎,适于进行悬浮培养.细胞种龄为25 d和接种量为3%～4%时细胞悬浮培养的结果最好,PeG产量达到最大,为0.82 g/L.细胞在悬浮培养时聚集体由大变小,直径小于0.5 mm的细胞聚集体由接种时的5%逐渐增加至第20天时的81%,其PeG量为10.1%.结论 通过摇瓶培养建立了较好的细胞悬浮培养体系.     

应用高效离心分配色谱技术分离肉苁蓉中苯乙醇苷化合物

目的应用高效离心分配色谱技术分离肉苁蓉中的苯乙醇苷类化合物。方法采用醋酸乙酯∶正丁醇∶乙醇∶水(1∶1∶0.1∶2,V/V/V/V)为分离体系。结果从肉苁蓉中成功分离得到了6种苯乙醇苷类化合物。结论采用电喷雾多级串联质谱(ESI-MSn)技术分析并鉴定了6种苯乙醇苷化合物的结构。     

肉苁蓉中苯乙醇甙类化合物的LC-MS分析

目的:研究肉苁蓉(Cistanche deserticola Y.C.Ma)在不同采收季节苯乙醇甙类化合物含量的变化.方法:采用LC-MS法对肉苁蓉中的四种苯乙醇甙类化合物(麦角甾甙、海胆甙、肉苁蓉甙A、2′-乙酰基麦角甾甙)进行定性分析和含量测定.结果:在春季和秋季肉苁蓉中分别检测出了四个苯乙醇甙类化合物,但除麦角甾甙外,其余三种化合物的含量有较大的差别.结论:肉苁蓉采收季节不同,苯乙醇甙类化合物的含量也不同,药材质量有一定的差异.     

肉苁蓉种子质量评价及药材初加工研究

目的：对肉苁蓉种子质量进行评价并建立种子质量分级标准;考察不同初加工方法对肉苁蓉主要有效成分影响,确定肉苁蓉的适宜加工方法。方法：以种子千粒重、空胚率、水分含量等方面对肉苁蓉种子进行质量评价;分别对冷冻干燥法、自然烘干法和热风循环烘干法进行初加工方法考察,采用HPLC-UV法测定不同初加工方法下肉苁蓉中苯乙醇苷的含量。结果：建立肉苁蓉种子质量分级标准并根据评级指标将种子分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3个等级;通过对加工方法的考察表明最优加工方法为冷冻干燥法,该方法有效成分损失少、饮片外形美观、质地酥脆、干燥速度快。结论：本研究结果为肉苁蓉种子资源的质量控制提供参考,也为肉苁蓉鲜品的初加工方法提供了科学依据。     

盐生肉苁蓉愈伤组织培养与苯乙醇苷类化合物合成的研究

目的 利用肉苁蓉组织培养技术生产苯乙醇苷类活性成分。方法 研究碳源、生长素和培养条件对细胞中松果菊苷、洋丁香酚苷(类叶升麻苷)和2′—乙酰基洋丁香酚苷3种苯乙醇苷类化合物合成的影响。结果 葡萄糖有利于上述3种成分的合成，6—BA 1mg/L与IAA 1mg/L或6—BA 1mg／L与2，4—D 2mg／L的激素配比有利于松果菊苷和洋丁香酚苷(类叶升麻苷)的积累。15℃黑暗和25℃光照处理可以促进松果菊苷和洋丁香酚苷(类叶升麻苷)的积累。其中IAA 2mg／L与6—BA 1mg／L、25℃黑暗条件下培养时3种苯乙醇苷类的总产量达到1937.7mg／L。盐生肉苁蓉愈伤组织中的主要成分与天然肉苁蓉基本相同，而且愈伤组织中的松果菊苷、洋丁香酚苷(类叶升麻苷)和2′—乙酰基洋丁香酚苷含量高于天然肉苁蓉。结论 盐生肉苁蓉的愈伤组织或细胞可以代替肉苁蓉生产苯乙醇苷类活性成分。     

一氧化氮、茉莉酸甲酯与水杨酸对肉苁蓉悬浮细胞生长及苯乙醇苷生物合成的影响

 目的 研究一氧化氮（NO）、茉莉酸甲酯（methyl jasmonate, MJ)与水杨酸（salicylic acid, SA)对肉苁蓉悬浮细胞生长和苯乙醇苷（PeGs）生物合成的影响。方法 肉苁蓉细胞悬浮培养体系中加入硝普钠（sodium nitroprusside, SNP)、MJ和SA诱导子。结果 低浓度外源性NO有利于悬浮细胞的生长,但对PeGs的积累作用不明显,MJ和SA有利于PeGs的积累,但抑制悬浮细胞的生长,且三者的最适作用浓度和作用时间存在差异。在细胞培养初期（0 d）加入0.05 mmol·L-1SNP,细胞对数生长初期（12 d）加入50 μmol·L-1 SA,对数生长中期（16 d）加入20 μmol·L-1 MJ,细胞干重可达对照组的1.42倍,PeGs总量可达373.52 mg·L-1,约为对照的4.17倍;松果菊苷可达21.892 mg·g-1,为对照的4.02倍。结论 3种诱导子协同作用能够显著提高肉苁蓉细胞悬浮培养体系中次生代谢产物的含量。     

肉苁蓉全生育期物质成分动态变化研究

 目的 明确肉苁蓉全生育期物质成分动态变化规律,试图明确肉苁蓉碳水化合物和有效成分的变化规律并为确定肉苁蓉高产、高效、优质的采收时期提供理论依据。方法 采用分光光度法、范氏洗涤法和HPLC,研究了肉苁蓉全生育期体内碳水化合物和有效成分的动态变化情况。结果 肉苁蓉全生育期体内碳水化合物和有效成分含量不断变化,表现为非结构性碳水化合物迅速消耗,结构性碳水化合物不断累积,有效成分含量逐渐降低,但是在蒴果形成期及之前肉苁蓉有效成分均能达到《中国药典》的标准。结论 蒴果形成期及之前的肉苁蓉均可作为药用。     

肉苁蓉组织培养研究进展及应用前景

肉苁蓉由于采挖过度而濒临灭绝,组织培养是合理利用肉苁蓉,防止其资源枯竭的有效方法。组织培养研究较多的是荒漠肉苁蓉和盐生肉苁蓉,分别对这两种肉苁蓉愈伤组织的诱导、培养基的优化和药用成分的诱导条件等方面的研究进行综述,介绍了应用组织培养生产肉苁蓉药用成分的经济价值和生态效益,以及利用组织培养进行肉苁蓉快速繁殖的实践意义,浅析了肉苁蓉大规模细胞培养的产业化前景。     

干旱胁迫对管花肉苁蓉组织培养体系中苯乙醇苷类成分含量的影响

目的建立管花肉苁蓉Cistanche tubulosa组织培养体系,并考察干旱胁迫对其中苯乙醇苷类成分含量的影响。方法通过液质联用技术分析管花肉苁蓉愈伤组织与悬浮培养体系中的主要化学成分,绘制其生长曲线,并通过渗透压调节剂(NaCl、甘露醇和PEG6000)模拟干旱胁迫环境,考察组织培养体系中松果菊苷和毛蕊花糖苷含量的变化。结果管花肉苁蓉愈伤组织与悬浮培养细胞均能生成松果菊苷和毛蕊花糖苷;绘制管花肉苁蓉愈伤组织生长曲线,确定30d为最佳继代时间;NaCl和甘露醇所诱导的干旱胁迫不利于愈伤组织细胞的生长及其苯乙醇苷类成分的积累,而6%PEG6000能显著促进悬浮细胞中苯乙醇苷类化合物的生成,诱导15d后,松果菊苷和毛蕊花糖苷的生物量分别为(1.07±0.10)g/L和(0.12±0.01)g/L,分别可达细胞干质量的20.94%和2.27%,为对照组的1.29倍和1.19倍。结论 PEG6000介导的干旱胁迫对管花肉苁蓉悬浮细胞中松果菊苷和毛蕊花糖苷的积累有明显促进作用。     

怀牛膝愈伤组织悬浮培养及其多糖含量的初步研究

目的：研究怀牛膝悬浮培养条件及其对愈伤组织中ABPS含量的影响。方法：采用正交试验和单因素试验，研究接种时间、接种量、碳源添加及pH对细胞生长量及多糖含量的影响。结果和结论：适宜ABPS生产的培养基是1／4MS＋6-BA0．5mg·L^-1＋2，4-D1．0mg·L^-1＋蔗糖2％＋葡萄糖2％＋果糖1％，pH6．0，培养时间50d，接种量7g·L^-1。     

三叶青松散型和致密型愈伤组织悬浮培养及黄酮积累的比较研究

目的比较三叶青松散型和致密型愈伤组织悬浮培养细胞生长及其次生代谢产物黄酮的积累情况。方法将三叶青叶诱导的愈伤组织在不同外源植物激素种类和配比的培养基上多次继代培养,筛选获得松散型和致密型愈伤组织,分别建立相应悬浮细胞体系,研究了两种悬浮培养细胞生长和总黄酮积累的动态。结果三叶青松散型愈伤组织悬浮培养的继代周期为8 d,增加质量倍数最高达到3.68倍,黄酮积累的最大值11.7 mg/g,较最初接种时的浓度增加34.5%,该悬浮系继代4～5次后生命力衰退且褐化加重;而致密型愈伤组织悬浮培养的继代周期为20 d,增加质量倍数最高达到2.65倍,黄酮积累的最大值40.9 mg/g,较最初接种时的浓度增加212.2%,该悬浮系继代多次细胞无明显变化。结论与松散型愈伤组织悬浮培养相比,致密型愈伤组织悬浮培养更有利于继代培养和次生代谢产物的积累。     

石蒜悬浮细胞系的建立及其生物碱累积的研究

目的 研究由石蒜愈伤组织建立细胞悬浮培养体系的条件及其生物碱的累积。方法 以石蒜鳞茎为外植体进行愈伤组织的诱导,筛选出优质的愈伤组织进行悬浮培养,考察了激素、接种量、肌醇和条件培养对石蒜悬浮细胞系建立的影响,并利用HPLC检测石蒜悬浮细胞和培养基中生物碱的量。结果 石蒜悬浮细胞系培养的最佳条件为：MS为基本液体培养基,添加2, 4-D 0.5 mg/L＋KT 0.1 mg/L,肌醇300 mg/L,接种量15%;对数期的培养基能明显缩短细胞系生长的延迟期;细胞系和培养基中加兰他敏分别是石蒜鳞茎中的4.18和0.69倍。结论 利用石蒜愈伤组织建立了较好的细胞悬浮培养体系,且石蒜悬浮细胞系是一种获取加兰他敏的较好途径。     

怀牛膝愈伤组织悬浮培养及其多糖含量的初步研究

目的：研究怀牛膝悬浮培养条件及其对愈伤组织中ABPS含量的影响。方法：采用正交试验和单因素试验，研究接种时间、接种量、碳源添加及pH对细胞生长量及多糖含量的影响。结果和结论：适宜ABPS生产的培养基是1/4MS+6-BA 0.5 mg·L-1+2,4-D 1.0 mg·L-1+蔗糖2%+葡萄糖2%+果糖1%，pH 6.0，培养时间50 d，接种量7 g·L-1。     

培养条件对西洋参悬浮细胞生物量和 活性成分的影响

目的:研究主要理化因子对西洋参细胞悬浮培养的影响.方法:利用组织培养技术结合高效液相色谱法和紫外分光光度法,考察接种量、培养基种类、基质pH和光照条件对西洋参悬浮细胞生长,人参皂苷Re,Rb1以及西洋参多糖含量的影响.结果:当接种量为25 g·L~(-1)时,西洋参细胞的干重增殖倍数显著增加;通过考察Ms,SH,B_5 3种培养基对西洋参细胞的影响,结果表明MS培养基最有利于西洋参细胞生长,B_5培养基最有利于人参皂苷和西洋参多糖的合成.3种培养基中西洋参细胞多糖含量均高于栽培西洋参;pH变化对西洋参细胞生长影响不大,pH 6.0时,最有利于人参皂苷Re和西洋参多糖的合成;光照培养显著促进西洋参细胞次生代谢物的合成,但对多糖合成没有太大影响.结论:接种量、培养基种类、基质pH和光照条件对西洋参悬浮细胞生长,人参皂苷Re,Rb_1以及西洋参多糖合成有显著影响.     

川贝母细胞团块悬浮培养生产生物碱的研究

目的:建立川贝母细胞团块悬浮培养体系,筛选出快速获取细胞团块增殖的最佳培养条件和激素配比。方法:以MS培养基为基本培养基,比较了接种量、激素配比和生长调节物质等对川贝母细胞团块悬浮培养的影响,并比较了细胞团块在不同培养条件下的生长情况,测定了增殖细胞团块中总生物碱含量。结果与结论:用川贝母细胞团块进行悬浮培养,其生长速度明显快于固体培养;细胞团块中总生物碱含量均高于市售川贝母和野生川贝母鳞茎;川贝母细胞团块悬浮培养最适的接种量为30 g/L,最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L。     

不同理化因子对野葛悬浮培养细胞生长及异黄酮合成的影响

目的：探讨几种理化因子对野葛悬浮培养细胞的生长和异黄酮化合物生成的影响。方法：采用高效液相色谱法和植物细胞培养的方法。结果与结论：随着蔗糖质量浓度的提高,野葛培养细胞生长量和异黄酮的累积均逐步增高；野葛细胞培养体系中pH维持在5.4～5.8,对异黄酮的形成最为有利；随着活性炭处理用量的增加,野葛培养细胞的干重和异黄酮积累急剧下降；与此相反,XAD-4处理促进野葛细胞的干重增长和异黄酮的积累。     

几种因素对悬浮培养人参细胞生长和皂苷积累的影响

为了完善人参细胞悬浮培养体系,论文研究了人参细胞悬浮培养的动态,探明了培养瓶瓶盖透气滤膜的有无,摇床转速和接种量对人参细胞生长和皂苷积累的影响。结果表明人参细胞悬浮培养过程中,细胞生物量和皂苷产量在培养20 d时达到最大值,因此,可将培养期定为20 d。培养瓶盖上有透气滤膜时有利于人参细胞生长和皂苷合成;悬浮培养时摇床转速影响细胞生长但对皂苷合成无影响,转数为120 r·min^-1时,皂苷生产量最高。每个培养瓶接种6 g鲜重的细胞时,细胞生长和皂苷积累明显好于其他接种量,总皂苷质量分数达12.8 mg·g^-1DW,生产量达146.6 mg·L^-1。     

杠柳细胞悬浮培养体系的建立及有效成分杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量的测定

[目的]建立杠柳细胞悬浮培养体系,并测定悬浮细胞中杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量。[方法]无菌条件下切取杠柳幼根诱导愈伤组织,将其进行继代增殖培养,然后再将愈伤组织接种到液体培养基中建立细胞悬浮培养体系,并测定细胞中杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量。[结果]建立了杠柳细胞悬浮培养体系,并测定了细胞中杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量分别为4.06μg/g和1.92μg/g。[结论]通过组织培养方式可以成功建立杠柳细胞悬浮培养体系,细胞生长旺盛,但细胞中有效成分含量低,需要进一步对其基本培养基和培养条件进行考察。     

水飞蓟悬浮培养体系的建立及不同因子对水飞蓟宾量的影响

目的建立水飞蓟Silybum rnarianum悬浮培养体系,测定不同影响因子对水飞蓟宾量的影响。方法采用正交试验确定水飞蓟悬浮培养体系,采用HPLC法测定水飞蓟宾的量。结果激素配比6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L+ZT 1.5 mg/L的MS培养基、光照12 h/d、p H值为7、转数110 r/min,为水飞蓟悬浮培养的最佳生长条件。当水杨酸、壳聚糖、硝普钠质量浓度分别为0.05、3、1μg/L时水飞蓟增长量达到最大值,水飞蓟宾量也达到最大值。结论建立的悬浮培养体系可用于水飞蓟的快速繁殖,适宜质量浓度的壳聚糖和硝普钠利于悬浮细胞的生长及水飞蓟宾的积累。     

Ca2+对悬浮培养半夏类原球茎生长及次生代谢物累积的影响

目的研究Ca2+对半夏类原球茎生长、高温胁迫及次生代谢产物量的影响。方法以半夏叶柄为外植体,固体培养基培养获得类原球茎,悬浮培养,采用不同质量浓度Ca2+处理,测定类原球茎生长速率、抗逆性指标,以及生物碱、鸟苷、有机酸的量。结果在(25±2)℃条件下培养,随Ca2+质量浓度增加,半夏类原球茎生长呈慢-快-慢变化趋势,质量浓度为440 mg/L时,生长速率达到最大值;不同处理半夏类原球茎中生物碱、鸟苷、有机酸量差异显著,Ca2+质量浓度为440 mg/L时,生物碱量最高(0.158%),Ca2+质量浓度为660 mg/L时,鸟苷、有机酸累积量最高(分别为0.017 3%、0.608%)。在(35±2)℃条件下,质量浓度为0～660 mg/L,随Ca2+质量浓度升高,SOD、POD活性逐渐增强,Ca2+质量浓度为660 mg/L时,活性最高,但Ca2+质量浓度为880 mg/L时,SOD、POD活性均降低;不同质量浓度Ca2+处理MDA量变化不显著。结论一定质量浓度的Ca2+能促进半夏类原球茎生长,增强抗逆性,提高有用次生代谢产物的量。