微血管相关因素在瘢痕组织增生中作用的实验研究

瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕微血管有明显异常,是皮肤损伤后组织过度修复的结果。二者的发病机理尚不完全清楚。为进一步明确微血管及其相关因素在瘢痕增生中的作用,本课题采用免疫组化、原位分子杂交、脐静脉内皮细胞和皮肤成纤维细胞体外培养、同位素掺入、流式细胞仪分析等技术方法,对瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕组织中内皮素－１（ＥＴ－１）和一氧化氮（ＮＯ）的表达,细胞间粘附分子１的表达（ＩＣＡＭ－１）,血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的表达,凋亡相关基因。ｃ－ｆｏｓ、ｂｃｌ－２的表达,内皮…     

心脉神口服液对氧化型低密度脂蛋白介导的内皮细胞ICAM-1表达变化的影响

目的：探讨中成药制剂心脉神口服液对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)致血管内皮细胞（VEC）表面ICAM－1表达升高的保护作用。方法：以原代培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为研究对象，采用细胞培养，免疫荧光染色，中药血清药理学方法，免疫荧光细胞化学染色法等技术，观察ox-LDL对培养的VEC细胞间粘附分子－1（ICAM－1）表达的影响并研究心脉神口服液的保护作用。结果：培养液中加有ox-LDL的内皮细胞ICAM－1表达明显升高，预先或同时加入心脉神口服液可使ICAM－1表达降低，结论：心脉神口服液能浓度依赖性地拮抗ox-LDL致内皮细胞ICAM－1表达升高。     

瘢痕组织HO-1的表达与血管生成的关系

目的：探讨瘢痕组织HO-1的表达与血管生成的关系，为研究瘢痕形成机制提供理论依据。方法：标本均采集自无严重并发症的志愿者，共24例，分为增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、扁平瘢痕3组，每组8例，第4组正常皮肤组织由上述24例患者正常皮肤标本中随机抽取8例。所取标本采用免疫组织化学的方法进行HO-1的表达和CD34血管计数以及成纤维细胞计数，比较不同类型瘢痕及正常皮肤HO-1量化指标、成纤维细胞数量与血管密度之间的关系。结果：CD34染色结果示增生性瘢痕、瘢痕疙瘩血管较丰富，而扁平瘢痕和正常皮肤较少，相比差异有统计学意义（P<0.01）。HO-1在各组瘢痕及正常皮肤表皮中均有不同程度表达，在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩中表达较强，与其他组比较差异有统计学意义（P<0.01）。HO-1在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、扁平瘢痕及正常皮肤真皮中表达依次减弱；血管计数与表皮、真皮HO-1（均P<0.01）表达均存在正相关(r=0.761,P<0.01)。成纤维细胞数在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、扁平瘢痕及正常皮肤中依次减少；血管计数与成纤维细胞计数间存在正相关（r=0.731,P<0.01）。结论：HO-1可能是促进瘢痕血管生成的重要因素；烧伤瘢痕内HO-1及血管生成变化的原因可能在局部而不在全身；过量血管生成可能是病理性瘢痕的一种表象。     

NAC对体外循环血清诱导的多形核粒细胞与血管内皮细胞粘附的影响

目的 观察N－乙酰－L－半胱氨酸（NAC）对体外循环（CPB）血清诱导的培养血管内皮细胞细胞间粘附分子1（ICAM－1）的表达及对多形核粒细胞（PMN）粘附的影响,探讨NAC对体外循环后全身炎症反应的作用及机制。方法 以CPB血清加NAC处理培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,采用中性粒细胞－血管内皮细胞粘队模型研究HUVEC对PMN的粘附作用,以免疫组化方法观察培养血管内皮细胞表达ICAM－1的表达。结果 NAC加入CPB血清共同处理HUVEC,能抑制CPB血清诱导的HUVEC对PMN的粘附增加,下调CPB血清诱导的HUVEC表面ICAM－1表达的增高。结论 NAC通过抑制内皮细胞表达ICAM－1的表达,可抑制体外循环诱导的PMN与血管内皮细胞的粘附,从而可能在体外循环后全身炎症反应的防治中发挥作用。     

细胞间粘附分子—1在妊高征子宫蜕膜及胎盘中的表达

为探讨细胞间粘附分子－1（ICAM－1）在妊高征子宫蜕膜及胎盘中的表达,在20例正常妊娠及24例中、重度妊高征患者中,以选择性剖宫产取其子宫蜕膜及胎盘,用免疫组织化学方法检测其ICAM－1的表达,发现妊高征子宫蜕膜的血管中可见ICAM－1阳性的滋养细胞侵入,且这些血管周围有淋巴细胞浸润（P＜0.05）;胎盘合体滋养细胞染色明显强于正常妊娠（P＜0.001)。结果表明：ICAM－1阳性滋养细胞侵入蜕膜血管伴血管周围淋巴细胞浸润,以及胎盘合体滋养细胞ICAM－1表达增强。提示ICAM－1介导的免疫机制在妊高征的发病中可能有重要作用。     

银屑病皮损区c—myc、c—jun、Ki—67、PCNA、VEGF的表达

目的 探讨原癌基因c-myc、c-jun、ki-67、细胞核增殖性抗原（PCNA）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）在银屑病发病中的作用。方法 采用免疫组化方法，检测了32例寻常型银屑病皮损区及5例正常人表皮中c-myc、c-jun、ki-67、PCNA、VEGF的表达及分布特点。结果 银屑病皮损区c-myc、c-jun、ki-67、PCNA、VEGF表达均较正常表皮中的表达明显增强。分布于除角质层以外的表皮各层，而正常表皮表达阴性或仅在基底层有弱阳性表达。结论 c-myc、c-jun、ki-67、PCNA在银屑病皮损中过度表达，提示其与银屑病的表皮细胞过度增殖、分化异常有关；VEGF过度表达，提示VEGF与银屑病的真皮乳头毛细血管增生扩张，炎症细胞浸润有关。     

血管内皮生长因子对皮肤血管生成影响的研究进展

血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）是促进血管内皮细胞生长的最有效的有丝分裂原,它通过与其相应的受体结合而发挥生物学作用。它在正常皮肤组织中有少量的表达,而在皮肤创伤、瘢痕组织形成以及皮肤肿瘤等病理过程中发挥着重要的作用。目前,无细胞真皮基质（acellular dermal matrix,ADM）已被广泛用作真皮替代物,但其血管化机制并不清楚。而VEGF在ADM血管化过程中起到非常重要的作用。     

雷公藤内酯醇抑制血管内皮细胞生长因子的表达与合成

目的 探讨雷公藤内酯醇对血管内皮细胞生长因子（VEGF）mRNA表达及VEGF合成与分泌的影响,进一步探讨雷公藤内酯醇降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制。方法 以人内皮细胞系ECV－304为研究对象,利用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）、流式细胞仪、酶联免疫吸附法（ELISA）检测不同剂量雷公藤内酯醇对佛波脂（PMA）诱导的内皮细胞VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌的影响,并采用RT－PCR检测雷公藤内酯醇对内皮细胞c-jun/c-fos mRNA表达的影响。结果 雷公藤内酯醇可以抑制PMA诱导的内皮细胞VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌,并呈剂量依赖性。同样,雷公藤内酯醇剂量依赖性抑制PMA诱导的内皮细胞c-jun/c-fos mRNA的表达。结论 雷公藤内酯醇抑制内皮细胞VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌可能是其雷公藤内酯醇降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制之一。雷公藤内酯醇可能通过影响转录因子AP－1的形成而影响内皮细胞VEGF的表达与合成。     

大鼠细菌性角膜炎角膜组织ICAM-1的表达

为探讨细胞间粘附分子-1（ICAM-1）在细菌性角膜炎发病机制中的作用，将SD大鼠22只随机分为细菌性角膜炎组和对照组，研究ICAM-1在角膜组织的表达及分布。应用抗ICAM－1单克隆抗体及免疫组化染色技术观察角膜上皮细胞、基质层角膜细胞及内皮细胞的特异性染色。结果表明，对照组角膜上皮细胞染色程度为－～＋，基质层角膜细胞染色为＋均呈低度表达。角膜炎组角膜上皮细胞、基质层角膜细胞及内皮细胞均强烈表达ICAM－1，染色程度。角膜炎组角膜上皮细胞、基质层角膜细胞及内皮细胞ICAM－1的表达校对照组明显增强（P＜0．01），提示ICAM－1在细菌性角膜炎的炎细胞游走、浸润等病理改变中发挥重要的作用。     

大鼠皮脸移植后ICAM—1和LFA—1与排异反应的关系

目的 探讨细胞粘附分子和皮肤移植后排异反应之间的关系。方法 用HE及免疫组化方法观察20例大鼠Ⅲ度烫伤异体－自体皮肤混合移植和15例同种大鼠大张异体皮肤移植组织在移植后4－5，7，14，21和28d时细胞粘附分子ICAM－1和LFA－1的表达情况。结果 大鼠Ⅲ度烫伤后异体－自体皮肤混合移植组织中LFA－1^ 淋巴细胞和ICAM－1^ 细胞的表达均低于同种大张异体皮肤移植组织，与排异程度相一致，分别在移植后7和14d时差异显著（P＜0.05）。结论 ICAM－1／LFA－1不是主要促使皮肤混合移植排异反应中T细胞活化的共刺激信号，但ICAM－1^ 细胞和LFA－1^ 淋巴细胞在介导同种大张异体皮移植排异反应中起主要作用。     

瘢痕疙瘩和增殖性瘢痕角朊细胞VEGF的表达

目的：探讨瘢痕疙瘩和增殖性瘢痕中血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的表达及其意义。方法；应用免疫组织化学染色技术，以正常皮肤和正常瘢痕疙瘩和增殖性瘢痕中ＶＥＧＦ的表达。结果：瘢痕疙瘩和增殖性瘢痕角朊细胞均有大量ＶＥＧＦ表达，阳性细胞主要位于基底层，染色颗粒在细胞质内，真皮层少见阳性细胞。而正常皮肤和正常瘢痕中ＶＥＧＦ的表达均较弱，与颜痕疙瘩或增殖性瘢痕比较均有显著差异。结论：瘢痕疙和增殖性颜痕基义 的角     

增殖性疤痕中表皮细胞增殖、血管新生与VEGF的表达

目的：研究增殖性疤痕中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达，及其与疤痕表皮细胞增殖和血管新生的关系。方法：应用免疫组化和RT-PCR法，以正常皮肤、正常疤痕为对照，检测增殖性疤痕中VEGF表达，并研究VEGF与表皮细胞增殖、血管新生的相关关系。结果：增殖性疤痕内VEGF蛋白及VEGF mRNA表达明显升高，与正常疤痕、正常皮肤有显著差别。VEGF主要由疤痕表皮角朊细胞分泌，且VEGF蛋白和VEGF mRNA的表达与疤痕组织表皮细胞增殖、血管新生高度相关。结论：增殖性疤痕中VEGF蛋白和VEGF mRNA的表达与疤痕增殖密切相关。     

转化生长因子-β及其受体在不同时期增生性瘢痕组织中的表达

目的:检测转化生长因子-β(TGFβ1、TGFβ2)和受体(TGFβRⅠ、TGFβRⅡ)在增生性瘢痕组织中的表达特征,探讨其对增生性瘢痕形成的作用。方法:采用免疫组化染色方法检测TGFβ1、TGFβ2、TGFβRⅠ、TGFβRⅡ在人正常皮肤组织及增生性瘢痕中的表达水平与定位。结果:在正常对照皮肤组织中,TGFβ1在基底细胞层呈弱阳性表达,在真皮成纤维细胞表达为阴性;TGFβ2在基底细胞层、棘细胞层下方、真皮层血管内皮细胞表达为阳性;TGFβRⅠ、TGFβRⅡ在表皮、毛囊上皮细胞、真皮层血管内皮细胞表达阳性,真皮成纤维细胞基本不表达。增生性瘢痕真皮组织中大量成纤维细胞的TGFβ1、TGFβ2、TGFβRⅠ、TGFβRⅡ表达均为强阳性;而部分瘢痕病史超过1年的患者瘢痕真皮层中主要为胶原组织,成纤维细胞较少,成纤维细胞TGFβ1、TGFβ2表达为阴性,但TGFβRⅠ、TGFβRⅡ的表达则为强阳性。结论:转化生长因子-β和受体在增生性瘢痕组织早期形成中发挥重要的促进作用。     

细胞间粘附分子—1反义DNA体外对内皮细胞细胞间粘附分子—1？…

目的：研究细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）的 ＤＮＡ对内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的抑制作用。方法：构建ＩＣＡＭ－１反义ＤＮＡ载体,用脂质体转染内皮细胞,ＴＮＦα刺激后,流式细胞术检测转染细胞表面ＩＣＡＭ－１蛋白的表达。结果：酶切鉴定证明,１．４ｋｂ的ＩＣＡＭ－１ＤＮＡ片段后向连接到ｐｃＤＮＡ３表达载体,;流式细胞术检测显示,正常细胞加ＴＮＦα刺激后,表面ＩＣＡＭ－１表达明显升高,转洒细胞加ＴＮＦα     

增生性瘢痕与萎缩性瘢痕中c—fos mRNA、c-jun mRNA及MMP1、TIMP1表达的研究

目的 探讨增生性瘢痕与萎缩性瘢痕中c-fos mRNA、c-jun mRNA及基质金属蛋白酶MMP1、基质金属蛋白酶抑制剂TIMP1与瘢痕增生之间的关系.方法 临床上收集32例深度烧伤后瘢痕标本,其中烧伤后4～10个月增生性瘢痕标本18例,烧伤后2～4年内萎缩性瘢痕标本14例.采用RT-PCR方法对上述瘢痕组织中c-fos mRNA、c-jun mRNA进行半定量检测;采用免疫组化方法检测基质金属蛋白酶1（MMP1）、基质金属蛋白酶1抑制剂（TIMP1）表达情况,并利用图象分析方法进行结果分析.结果 增生性瘢痕中c-fos mRNA表达增高,与萎缩性瘢痕中c-fos mRNA表达有差异（P＜0.01）;c-jun mRNA表达在两组中表达无差异（P＞0.05）.基质金属蛋白酶1抑制剂（TIMP1）在增生性瘢痕中TIMP1表达减少,统计学上低于萎缩性瘢痕TIMP1表达（P＜0.01）;基质金属蛋白酶1（MMP1）在增生性瘢痕与萎缩性瘢痕中表达无差异（P＞0.05）.结论 增生性瘢痕中c-fos基因mRNA表达增高,有利于刺激MMP1对细胞外基质（ECM）的降解,对减轻瘢痕的增生有一定作用;增生性瘢痕中TIMP1表达降低,通过减少对MMP1的拮抗作用而达到减轻瘢痕增生的作用.     

Expression of oncoproteins c-fos and c-jun in hypertrophic scars and chronic dermal ulcers and their regulation of basic fibroblast growth factor

目的　探讨c fos与c jun两种原癌基因产物在溃疡与增生性瘢痕创面表达的特征与规律以及与不同组织修复结局发生的关系。方法　 16例标本均取自于外科手术患者 ,其中增生性瘢痕 8例 ,溃疡创面 8例 ,另有正常对照皮肤 5例取自增生性瘢痕患者作为对照。用免疫组化法 (ABC法 )检测c fos与c jun两种癌蛋白以及bFGF在三种组织切片的分布特征。结果　在正常皮肤c fos与c jun的阳性表达主要见于表皮基底细胞和少量皮下成纤维细胞 ,但在相应部位c jun的表达较c fos为弱。在增生性瘢痕 ,c fos与c jun均出现强阳性表达 ,主要见于成纤维细胞。在溃疡组织 ,c fos与c jun的联合表达多见于毛细血管内皮细胞、部分炎症细胞以及成纤维细胞胞浆。结论　增生性瘢痕与溃疡创面c fos与c jun表达量与部位同正常皮肤存在显著差异 ,提示这两种原癌基因产物在影响和调控组织修复中有重要作用。     

病理性瘢痕中c-myc原癌基因的表达

目的探讨原癌基因ｃ－ｍｙｃ的表达与病理性瘢痕形成的相关性。方法应用免疫组化ＳＰ法检测ｃ－ｍｙｃ蛋白在增生 性瘢痕、瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中的表达和分布,并用图像定量分析比较其差异。结果在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的 成纤维细胞中ｃ－ｍｙｃ蛋白呈强阳性表达,与正常皮肤对照组均有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。结论增生性瘢痕与瘢痕疙瘩中 ｃ－ｍｙｃ蛋白表达升高提示存在ｃ－ｍｙｃ原癌基因的激活,ｃ－ｍｙｃ原癌基因可能参与了成纤维细胞的分化增殖、胶原合成与 降解以及对细胞因子的调控,并导致瘢痕增生。     

确炎舒松对增生性瘢痕PCNA、bcl-2表达的影响

目的观察局部注射确炎舒松后增生性瘢痕(HS)中增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl-2的表达水平变化,探讨糖皮质激素治疗瘢痕的机制.方法用免疫组织化学SP法检测比较42例HS激素注射前后PCNA、bcl-2表达水平变化.结果HS中PCNA、bcl-2阳性细胞均较正常皮肤显著增多,注药组PCNA及bcl-2阳性细胞率均较对照组明显减少,两者差异有显著性(P＜0.05).结论成纤维细胞增殖过度、凋亡不足是HS形成的重要原因,激素可通过抑制PCNA基因的表达来抑制HS成纤维细胞增殖;激素可能通过抑制bcl-2基因的表达而诱导成纤维细胞凋亡.     

Expression of epidermal growth factor receptor and related phosphorylation proteins in hypertrophic scars and normal skin

目的：为研究增生性瘢痕的形成机制,我们对增生性瘢痕与正常皮肤表皮细胞生长因子受体（EGFR）及其相关的信号通路进行观察,包括EGFR表达、酪氨酸蛋白的磷酸化以及Stat3表达和磷酸化情况。方法：所有的皮肤标本均来自烧伤后6-28个月患的瘢痕组织以及同一病人的供皮区全层皮肤。运用免疫组化技术光镜下观察皮肤中表皮细胞生长因子受体、、磷酸酪氨酸蛋白、Stat3磷酸化与非磷酸化的情况。结果：增生性瘢痕与正常皮肤中的角质形成细胞表皮细胞生长因子受体和磷酸酪氨酸蛋白的表达明显不同。瘢痕组织中的表达远远高于正常组织中的表达。瘢痕组织中Stat3阳性表达明显高于正常皮肤,但其磷酸化的情况无显差别。结论：增生性瘢痕与正常组织间显示出不同的酪氨酸激酶活性,造成的信号通路差异可能是病理性瘢痕形成的机制之一。早期不同的配体刺激造成EGFR表达差异,随后导致酪氨酸蛋白磷酸化的不同,在正常的皮肤中Stat3磷酸化继续引起下游信号的表达,而瘢痕组织中Stat3磷酸化与正常情况无显差别,造成信号不匹配。EGFR在瘢痕形成过程中扮演重要的角色。