脂质体介导p53基因对腩癌细胞生长的抑制作用

目的观察外源野生型p53基因在肝癌基因治疗方面的可行性。方法：将载有人野生型p53-cDNA的真核表达质粒pcDNA3-p53，用阳离子脂质体介导转染人肝癌细胞系HepG3B细胞，用流式细胞仪检测pcDNA3-p53对HepG3B细胞生长的影响。结果：通过观察细胞生长曲线与流式细胞仪检测细胞周期和细胞的凋亡指数发现，HepG3B细胞生长受到明显的抑制。结论：脂质体介导的p53基因可在HepG3B细胞中表达，且明显抑制该细胞的生长。     

脂质体介导p53基因对肝癌细胞生长的抑制作用

观察外源野生型p5 3基因在肝癌基因治疗方面的可行性。方法 :将载有人野生型 p5 3-cDNA的真核表达质粒pcDNA3 - p5 3,用阳离子脂质体介导转染人肝癌细胞系HepG3B细胞 ,用流式细胞仪检测pcDNA3-p5 3对HepG3B细胞生长的影响。结果 :通过观察细胞生长曲线与流式细胞仪检测细胞周期和细胞的凋亡指数发现 ,HepG3B细胞生长受到明显的抑制。结论 :脂质体介导的p5 3基因可在HepG3B细胞中表达 ,且明显抑制该细胞的生长。     

脂质体介导的p53基因转染对鼻咽癌细胞作用的研究

目的 通过转染野生型p53基因,观察其对鼻咽癌细胞CNE2生长的影响.方法 将克隆有野生型p53基因的pUHD10-3-p53质粒,用脂质体(lipofectamine)介导的方法转染人鼻咽癌CNE2细胞,以RT-PCR检测p53基因的表达,通过细胞生长曲线、AO/EB染色和流式细胞术等方法对转染细胞的生物学行为进行检测.结果 人鼻咽癌CNE2细胞转染p53基因后,基因在细胞中表达增加,细胞的生长受到抑制,在荧光显微镜下观察到凋亡细胞增多,流式细胞技术显示细胞凋亡率增高.结论 采用脂质体转染野生型p53基因的方法,可抑制人鼻咽癌CNE2细胞的生长,诱导鼻咽癌细胞凋亡.     

野生型p53基因转染前列腺癌细胞系PC-3m对细胞凋亡的不同影响

目的：观察野生型p53基因转染对前列腺癌细胞PC-3m增殖和凋亡的影响。方法：用脂质体Lipofectamine将真核表达载体pCMV—p53和pCMV—p53mt135分别转染PC-3m细胞，MTT法检测转染前后细胞生长情况，转染48h后采用流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率。结果：pCMV—p53转染后的PC-3m细胞生长明显受到抑制，FCM显示，转染48h后，细胞凋亡率为15％。结论：野生型p53基因瞬间转染PC-3m细胞可抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡。     

转染野生型p53基因对肝癌细胞生长的影响

目的：通过转染野生型p53基因致肝癌细胞株BEL-7404，研究其对肝癌细胞的生长及凋亡作用。方法：野生型p53基因通过脂质体Lipofectamine介导转染人肝癌细胞株BEL-7404。用四甲基偶氮唑（MTT）法测定细胞生长曲线，用流式细胞仪进行细胞凋亡分析。结果：肝癌细胞BEK-7404转染野生型p53基因后，其生长作用明显受到抑制．细胞生长抑制率在第4天可达50．8％。流式细胞仪分析细胞凋亡结果：阴性对照组为1．7％，转染pUHD10-3组为3．2％．转染pUHD10-3-p53组为40．7％。结论：野生型p53基因可诱导肝癌细胞BEL-7404的生长抑制及发生凋亡。     

野生型p53对胃癌细胞系的生长抑制作用

目的：观察野生型p53对胃癌细胞系的生长抑制作用。方法：以逆转录病毒为载体将野生型p53基因导入胃癌细胞系MKN28和BGC823，检测p53对肿瘤细胞的影响。结果：p53在转染细胞中表达水平提高。外源性p53的导入使肿瘤细胞增殖细胞核抗原（PCNA）水平明显降低；G0／G1期细胞数增加，S期降低。转染p53基因的MKN28细胞探鼠体内成瘤能力明显下降。结论：野生型p53基因参与调节DNA复制及细胞周期，抑制癌细胞过度增殖。     

野生型p53基因重组质粒的构建及对人卵巢癌细胞的抑制作用

目的:研究p53基因转染对卵巢癌细胞系SKOV-3生物学行为的影响.方法:用分子克隆技术构建人野生型p53基因与真核细胞表达载体PCNDA3的重组体(PCNDA-p53),并用脂质体介导的转染技术,将其导入不表达p53的人卵巢癌SKOV-3细胞中,经筛选、鉴定后,观察细胞生长速度、集落形成能力和增殖周期的变化.结果:成功地构建了人野生型p53基因与真核细胞表达载体的重组体,转染后获得稳定表达p53的转染克隆.外源性p53基因的表达明显抑制了卵巢癌细胞的生长速度及集落形成能力,使细胞阻滞于G1期.结论:外源性野生型p53基因能抑制卵巢癌细胞的增殖.     

野生型p53基因诱导人肝癌细胞系HuH-7凋亡的研究

目的 通过转染野生型p53基因作用于肝癌细胞株HUH-7,来研究其诱导肿瘤细胞的凋亡作用。方法 野生型p53基因通过脂质体Lipofectamine介导转染人肝癌细胞系HUH-7,96h后,用流式细胞仪进行细胞凋亡分析。结果 流式细胞仪分析细胞凋亡结果：阴性对照组为2．8％、转染pUHD 10-3组为4．1％、转染pUHD 10-3-p53组为39．6％。结论 野生型p53基因可诱导人肝癌细胞系HuH-7发生凋亡。     

人肺腺癌细胞系GLC-82中p21WAF1和p53基因的过表达

目的 探讨p21^WAF1和p53基因过表达对人肺腺癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法 用带有p21cDNA的真核表达载体pCEP和带有p53的腺病毒表达载体pAdCMV,分别通过基因转染和腺病毒感染,使其在人肺腺癌细胞系(GLC—82)中过表达;通过流式细胞仪、透射电镜和原位末端分析(TUNEL)观察细胞的生长和凋亡情况。结果 p21过表达的细胞系G1期细胞增加,细胞生长抑制,克隆形成率下降,电镜下未见特征性凋亡小体,原位细胞凋亡分析未见凋亡信号;p53腺病毒感染的肿瘤细胞增殖明显抑制并出现死亡,原值细胞凋亡检测到凋亡信号。结论 P21和p53基因的过表达能够抑制人肺腺癌细胞的生长,其中p53能够诱发细胞凋亡,因此这两种基因在肿瘤基因治疗上有着广泛的应用前景。     

野生型p53基因对胰腺癌细胞的抑制作用

目的：观察人类野生型p53（wtp53）基因对人胰腺癌细胞的抑制作用。方法：用逆转录病毒为载体将外源性wtp53基因导入人胰腺癌细胞系PC－2，通过体外及小鼠体内实验研究转入基因的表达及对肿瘤的抑制作用，结果：p53在转染细胞PC－2／p53中表达水平提高，外源性wtp53基因的导入和表达能使PC－2细胞的生长速率减低，软琼脂集落形成能力下降，G0＋G1期细胞比例增加，凋亡指数升高，裸鼠体内成瘤能力明显下降，结论：逆转录病毒载体介导的外源性野生型P53能抑制人胰腺癌细胞生长。     

hTERT启动子调控的野生型p53基因对膀胱癌细胞的靶向性抑制作用

目的:探讨人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)启动子调控的野生型p53基因的靶向性表达,观察对人膀胱癌细胞株T24的选择性杀伤效应及细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体转染法,将构建的含hTERT启动子调控表达人野生型p53基因和报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒,分别转染膀胱癌细胞株T24和正常人胎肺成纤维细胞,应用荧光显微镜、电镜、台盼蓝拒染法及流式细胞仪等方法,观察基因的靶向性表达及对膀胱癌细胞株T24细胞形态学、生长抑制曲线及细胞周期变化的影响。结果:转染hTERT启动子调控的目的基因可在端粒酶阳性的膀胱肿瘤细胞中靶向性表达发出绿色荧光。靶向转染野生型p53基因能抑制膀胱癌细胞生长,72h后细胞生长抑制率分别为48.5%、高于常规培养组3.6%和阴性对照组2.5%,差异有显著性意义(P<0.05)。电镜可见典型的凋亡细胞。细胞周期分析G0和G1期细胞比例明显增高,并出现凋亡峰。结论:构建的hTERT启动子调控表达的野生型p53基因能通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥靶向性抑制膀胱癌细胞生长作用。     

抑癌基因p27对肾癌细胞系GRC-1生长的抑制作用

目的：探讨p27基因对肾癌GRC－1细胞系生长的抑制作用,为肾癌发生机制的研究和基因治疗提供理论依据。方法 采用基因转染技术,将p27 cDNA转染到肾癌GRC－1细胞系中,了解其对细胞增殖能力及细胞周期的影响。结果 转染p27基因的肾癌细胞生长受到抑制,其在软琼脂上克隆形成能力降低了大约4倍。对细胞周期分析表明,处在G0－G1期的细胞由32．2％增加到66．9％,经Dot blot和Western blot杂交证实,p27 mRNA表达有明显差异（P＜0．01）,p27的蛋白表达量有明显差异（P＜0．01）,说明p27蛋白具有生长抑制功能,其作用点为G1－S。结论 提高肾癌细胞中p27的表达,能抑制肿瘤细胞的生长,导入p27基因是一种治疗肾癌的新途径。     

重组人p53腺病毒联合5-氟尿嘧啶对胃癌细胞的作用

目的 研究重组人p53腺病毒增加胃癌细胞对5-氟尿嘧啶（5-Fu）敏感性的作用。方法 重组人p53腺病毒感染胃癌细胞BGC-823，Western blot法检测p53蛋白在胃癌细胞中的表达；MTT法测定重组人p53腺病毒单独及联合5-Fu用药的不同浓度处理细胞的生长抑制率，流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡。结果 重组人p53腺病毒感染BGC-82348h，p53蛋白在BGC-823中高表达，并产生G2／M期阻滞和细胞凋亡。重组人p53腺病毒联合5-Fu用药增加5-Fu的敏感性，有剂量时间的依赖性。结论 腺病毒介导p53基因感染BGC-823细胞诱导凋亡并增加胃癌细胞对5-Fu的敏感性。本实验为p53基因治疗与胃癌化疗临床结合提供了可靠的实验依据。     

吗啡对胃癌细胞系HGC27细胞增殖的影响及其机制

目的探讨吗啡对人胃癌细胞系HGC27细胞增殖的影响及其机制。方法体外培养的HGC27细胞,用不同浓度吗啡处理24、48、72 h,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定其对HGC27细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;实验组用吗啡（浓度分别为0.05、0.1、0.2μmol/L）处理HGC27细胞48 h,对照组加入不含药物的培养基,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡、分光光度计检测细胞凋亡蛋白酶-3（Casepase-3）相对活性、western blot法检p16、bcl-2、bax基因表达情况。结果吗啡（浓度0.025～0.4μmol/L）能抑制HGC27细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;吗啡（浓度分别为0.05、0.1、0.2μmol/L）作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为9.4%、11.5%、21.4%,而对照组凋亡率仅为2.2%;Casepase-3相对活性显著增加,处理后Casepase-3相对活性分别为（1.32±0.08）、（1.85±0.06）和（2.45±0.07）,对照组为（0.92±0.07）;p16和bax蛋白表达量升高,而bcl-2蛋白表达量降低,呈剂量依赖性。结论吗啡能抑制HGC27细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与上调p16表达,进而引起bax蛋白表达量升高,而bcl-2蛋白表达量降低,并增加细胞Casepase-3活性有关。     

The Effects of Wild-type p5 3Gene Transfection on the Growth and Chemotherapeutic Sensitivity of Human Glioma Cells

In gliomas,p5 3 mutations are among the mostfrequently observed genetic findings[1] .As a tu-mor- suppressor gene,p5 3 mutations can lead touncontrolled cell proliferation[2 ] . It was reportedthat loss of wild- type p5 3 function decreased sensi-tivity of tumor cells to chemotherapy[3 ] . In thisstudy,wild- type p5 3 gene was delivered into hu-man glioma cell line U2 5 1 by using liposome- medi-ated transfection technique to observe the effects ofp5 3 gene treatment and combined treatment of …     

Effect of Wild-type p53 Gene Transfection on the Growth and Radiotherapeutic Sensitivity of Human Glioma Cells

Ingliomas,p53mutationsareamongthemostfrequentlyobservedgeneticfindings[1].Asatumorsuppressorgene,p53mutationcanleadtouncon trolledcellproliferation[2].Itwasreportedthattransfectionofwild typep53genemayenhancetheradiosensitivityoftumorcellscontainingwild typep53[3].Inthisstudy,wild typep53genewasde liveredintohumangliomacelllineU251byusingliposome mediatedtransfectiontechniquetoob servetheeffectofp53genetreatmentandcom binedtreatmentofp53andirradiationtherapyongliomacell.1MATERIALSANDMET…     

RNA干扰突变型p53基因对胃癌SGC7901细胞生物学行为的影响

目的:利用RNA干扰(RNAi)技术稳定沉默人胃癌SGC7901细胞中的突变型p53基因,观察其对细胞生物学行为的影响。方法:p53小干扰RNA(siRNA)重组质粒用脂质体介导法转染SGC7901细胞,另设未转染组和对照组。RT-PCR和Western blot分别检测p53基因mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖情况及其对奥沙利铂药物敏感性的变化,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡,平板克隆形成试验、裸鼠移植瘤成瘤实验分析细胞成瘤性变化。结果:p53 siRNA可显著下调SGC7901细胞中突变型p53基因mRNA和蛋白的表达,实验组较未转染组和对照组细胞生长曲线左移。实验组的G0/G1期细胞数较对照组和未转染组分别减少7.4%和6.7%,进入S期的细胞数增加17.2%,奥沙利铂诱导的细胞凋亡率明显降低,未转染组、对照组和实验组细胞的IC50分别为15.88μmol/L、14.32μmol/L和20.34μmol/L。与未转染组和对照组相比,实验组细胞平板克隆形成数量显著增多,裸鼠体内细胞成瘤性增加。结论:p53 siRNA可有效抑制突变型p53基因在胃癌SGC7901细胞中的表达,但利用RNA干扰技术靶向突变型p53基因在胃癌的治疗上尚存在不确定性。     

Apoptin基因诱导膀胱癌耐药细胞凋亡的研究

目的观察Apoptin基因对膀胱癌耐药细胞株EJ／MDR细胞的杀伤效果，探讨其可能的机制。方法用脂质体将Apoptin基因导人EJ／MDR细胞，通过RT-PCR法检测ApoptinmRNA的表达，同时用SABC免疫组化法分析Apoptin和p53的表达。采用细胞计数法检测细胞生长抑制率，TUNEL法标记凋亡细胞，流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果转入Apoptin基因后，EJ／MDR细胞的生长明显受抑制（P％0．05）。细胞周期分析可见凋亡峰，凋亡率35％。细胞中可见Apoptin阳性表达（P〈0．05），p53表达无显著性差异（P〉0．05）。凋亡细胞在荧光显微镜下形成凋亡小体。结论转入Apoptin基因可显著促进EJ／MDR细胞的凋亡，Apoptin诱导的凋亡不依赖功能性p53的生成。     

PCDNA3/p33ING1、wt-p53转染对胃癌细胞株SGC-7901生长抑制及凋亡的影响

目的 研究p33^ING1基因与p53基因间的协同功能对胃癌细胞生长抑制和细胞凋亡的影响。方法 构建PCD—NA3／p33^ING1真核表达质粒（正义，反义）与wt—p53质粒，将其单、共转染至胃癌细胞株SGC-7901；应用流式细胞仪检测细胞生长周期曲线比例；TUNEL法、MG-P-MY法染色观察SGC-7901的凋亡情况。结果 p33^ING1单转染和wt-p53共转染的SGC-7901胃癌细胞株较反义组和转染空载体组细胞生长速度减慢。细胞周期G0／G1期延长，S期变短（P〈0．05），细胞调亡数增加（P〈0．05）。结论 p33 ING1具有抑癌功能及生物活性．与p53基因共同抑制胃癌细胞的生长，诱导细胞的凋亡，使细胞周期阻滞。二者呈协同依赖关系。