全反式维甲酸对食管癌细胞系EC109作用的研究

目的 探讨不同浓度全反式维甲酸(ATRA)对食管癌细胞系EC109的生长抑制作用及其机理.方法 不同浓度ATRA作用于细胞EC109,采用MTT法检测细胞生长;通过流式细胞仪检测和DNA梯状电泳证实凋亡存在;用RT-PCR方法检测凋亡诱导过程中p53、bcl-2和bax基因表达变化.结果 ATRA呈剂量及时间依赖性抑制细胞生长;琼脂糖电泳呈现凋亡DNA梯状条带;流式细胞仪分析存在明显的凋亡峰;ATRA处理组bax和p53基因表达上调,但bcl-2基因表达下调.结论 ATRA具有抑制食管癌细胞株EC109生长作用,其机理可能是诱导细胞凋亡,其分子机制可能与bcl-2/bax和p53的表达相关.     

三氧化二砷联合抗坏血酸抑制人肾癌 786 -0 细胞增殖及相关蛋白表达的研究

目的：观察三氧化二砷（As2O3）联合抗坏血酸（AA）对786-0人肾透明细胞癌细胞增殖的影响,并通过其对bcl-2和bax蛋白表达的影响探讨相关机制.方法：将体外培养的786-0人肾透明细胞癌细胞分为对照组（N）和实验组,实验组分为AA组、As2O3组、As2O3与AA联合组.用CCK-8细胞增殖-毒性检测试剂盒检测药物对细胞增殖的影响,TUNEL试剂盒检测细胞凋亡,Western blot方法测定bcl-2基因和bax基因的蛋白表达.结果：以0μmol/L或50μmol/L AA分别联合0、1、2、4、8、16μmol/L As2O3作用786-0细胞24h,与As2O3单独应用相比,AA与不同浓度As2O3联合应用都可显著提高As2O3对786-0细胞的抑制率,其作用具有剂量依赖性（P＜0.05）.0μmol/L或8μmol/L As2O3分别联合0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L AA作用786-0细胞24h,与As2O3单独应用相比,AA与As2O3联合应用能够显著下调bcl-2表达,上调bax表达,联合组与其他组比较有明显差异,并具有剂量依赖性.结论：抗坏血酸（AA）联合三氧化二砷（As2O3）可以明显协同抑制786-0人肾透明细胞癌细胞的增殖,且具有剂量依赖性,其机制可能与下调bcl-2基因表达,上调bax蛋白表达从而诱导肾癌细胞的凋亡有关.     

白藜芦醇对胃癌细胞系SGC-7901细胞增殖和凋亡作用的实验研究

目的:研究白藜芦醇(resveratrol, Res)影响人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的机制.方法:使用不同浓度Res处理SGC-7901细胞不同时间后,采用MTT法测定肿瘤细胞生长抑制率;FCM和TUNEL法检测分析细胞周期和细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测细胞中bcl-2、bax、caspase-3和Fas蛋白的表达;RT-PCR检测Fas、bcl-2、bax、caspase-3 mRNA的表达.结果:Res对胃癌SGC-7901细胞的生长抑制作用随着Res作用时间的延长和浓度的增加而明显增强(P<0.01,P<0.05),同时能诱导其发生凋亡(P<0.01);Res(150 μmol/L)能明显上调SGC-7901细胞中bax、caspase-3、Fas mRNA及其蛋白的表达,下调bcl-2 mRNA及其蛋白的表达.结论:Res抑制SGC-7901细胞的增殖、诱导细胞凋亡呈浓度、时间依赖性;这可能与Res上调肿瘤细胞Fas、bax和caspase-3的表达及下调bcl-2的表达有关.     

Akt抑制剂MK2206对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究新型Akt抑制剂MK2206对体外培养的人乳腺癌T47D和MDA-MB-231细胞株增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:以不同浓度的MK2206作用于人乳腺癌T47D和MDA-MB-231细胞,采用MTT法检测细胞的增殖抑制率,FCM法检测细胞的凋亡率,Western印迹法检测细胞中caspase-3、多聚ADP核糖聚合酶(polyADP-ribosepolymerase,PARP)、bcl-2、bax、磷酸化Akt(phosphorate-Akt,p-Akt)和总Akt(total-Akt,T-Akt)蛋白表达水平的变化。结果:0.1、1、10和100nmol/LMK2206作用细胞24h后,可明显抑制T47D和MDA-MB-231细胞的增殖和诱导细胞凋亡,其作用随着药物浓度的增加而增强。MK2206可促进乳腺癌细胞中caspase-3和PARP蛋白剪切,上调bax蛋白表达,下调bcl-2和p-Akt蛋白的表达,且均呈剂量依赖性,但对T-Akt表达却无明显影响。结论:MK2206可抑制乳腺癌T47D和MDA-MB-231细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制Akt磷酸化从而阻断PI3K/Akt信号转导途径有关。     

三氧化二砷诱导K562／ADM细胞凋亡过程中对bcl-2、survivin、ROS表达的影响

[目的]探讨As2O3诱导白血病K562／ADM耐药细胞凋亡的分子机制。[方法]采用MTT比色法检测K562／ADM增殖活性：细胞形态学和Annexin Ⅴ／PI双染色检测细胞凋亡：RT—PCR检测bcl-2、survivin和caspase-3基因mRNA的表达水平；流式细胞法（FCM）测定bcl-2、caspase-3蛋白表达。激光共聚焦显微镜（LCSM）观察细胞内活性氧（ROS）产生情况。[结果]As2O3显著抑制K562／ADM细胞的增殖；经As2O3处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变，AnnexinⅤ／PI双染显示凋亡细胞明显增加：凋亡抑制基因bcl-2、survivin mRNA及bcl-2蛋白表达下调，caspase-3 mRNA表达和caspase-3活性显著增强，ROS活性下降。[结论]As2O3诱导K562／ADM耐药细胞凋亡，与bcl-2和survivin表达下调，caspase-3活化有关，而与活性氧的氧化损伤无关。     

别直参抑制人乳腺癌细胞MCF-7体外增殖

[目的]评价别直参对MCF-7细胞体外增殖的影响,并检测其对凋亡相关蛋白bax/bcl-2表达的影响.[方法]采用MTT比色法检测对MCF-7细胞增殖的作用;流式细胞术检测对MCF-7细胞凋亡的影响;免疫组化法检测bax/bcl-2的表达.[结果]别直参高剂量组作用MCF-7细胞24h后,MTT检测增殖率为89.83％,提示有抑制MCF-7细胞体外增殖的作用(P＜0.05);流式细胞术检测高剂量组细胞凋亡率明显升高(P＜0.05);免疫组化法检测高剂量组能上调MCF-7细胞bax的表达,并下调bcl-2的表达.[结论]别直参高剂量组具有一定的诱导MCF-7细胞凋亡效应作用,其机制可能通过上调bax的表达和下调bcl-2的表达.     

褐藻糖胶对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究褐藻糖胶（fucoidan）对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其凋亡机制。方法：应用MTT法检测细胞的增殖；Hoechst33258染色、琼脂糖凝胶电泳法观察细胞的凋亡；RT-PCR和Western印迹法分别检测细胞中bcl-2和bax的mRNA及其蛋白的表达。结果：不同浓度的褐藻糖胶均能抑制MCF-7细胞的增殖（P〈0．01），并随其浓度增加，抑制率逐渐增大；褐藻糖胶诱导MCF-7细胞凋亡数增加，且可见明显的、凋亡特有的DNA梯形条带；在褐藻糖胶存在下。bcl-2基因的mRNA和蛋白表达减少，bax基因的mRNA和蛋白表达增加，bcl-2／bax比值下降（P〈0．05）。结论：褐藻糖胶可抑制MCF-7细胞增殖，且诱导其凋亡，其凋亡机制可能与下调bcl-2和上调bax基因的表达有关。     

三氧化二砷诱导胃癌细胞凋亡及对相关基因表达的影响

目的 研究三氧化二砷（As2O3)诱导胃癌细胞的凋亡作用及对凋亡相关基因p53、c-myc、bcl-2、bcl-xl和bcl-xs表达的影响,探讨其诱导胃 癌凋亡的作用机制。方法 研究As2O3对胃癌细胞SGC－07901和MKN－45的诱导凋亡作用和对凋亡相关基因表达的影响。结果 As2O3作用于细胞可见典型的细胞凋亡。出现典型的亚二倍体“凋亡峰”。10μmol／LAs2O3的诱导胃癌细胞SGC－7901和MKN－45的凋亡率为13．8％和22．5％。细胞凋亡指数在1．42％－9．5％之间。As2O3作用后能明显下调SGC－7901细胞的bcl-2蛋白和mRNA的表达;对SGC－7901细胞的p53、c-myc、bcl-xl和bcl-xs蛋白的表达无影响。As2O3能促进MKN－45细胞的p53蛋白和mRNA的表达,对MKN－45细胞的bcl-2、c-myc、bcl-xl和bcl-xs基因表达无影响。结论 As2O3可通过不同途径诱导胃癌细胞凋亡,通过下调SGC－7901细胞的bcl-2的蛋白表达诱导其凋亡,通过上调p53表达诱导胃癌MKN－45细胞凋亡。     

选择性COX-2抑制剂尼美舒利诱导胆管癌细胞凋亡的研究

[目的]探讨选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂尼美舒利诱导人胆管癌QBC939细胞凋亡的机制。[方法]通过体外细胞培养，用流式细胞术观察尼美舒利作用后QBC939细胞周期及凋亡率变化；荧光显微镜、透射电镜观察细胞的凋亡形态变化；并用免疫组化法检测细胞bcl-2、bax蛋白的表达。[结果]通过荧光显微镜和电镜技术观察到凋亡的QBC939细胞，流式细胞仪也检测到尼美舒利诱导QBC939细胞凋亡，并随着尼美舒利浓度的增加，细胞凋亡率显著增加，蛋白水平检测表明尼美舒利促进QBC939细胞bax表达升高，bcl-2表达下调。[结论]尼美舒利可能通过调节bcl-2和bax蛋白表达诱导QBC939细胞凋亡。     

脂氧合酶抑制剂NDGA对胰腺癌细胞PCNA-1增殖和凋亡的影响

目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA对人胰腺癌细胞株PCNA-1生长抑制、诱导凋亡及其对bcl-2、bax表达的影响.方法:采用MTT法检测NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1增殖活性的影响,流式细胞术检测NDGA处理的胰腺癌细胞株PCNA-1的细胞周期及凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达.结果:NDGA抑制胰腺癌细胞株PCNA-1的增殖活性,呈剂量依赖效应关系;细胞经100μmol/L的NDGA处理后G0/G1期细胞减少(P＜0.05)、S期细胞增多(P＜0.05),G2/M期细胞无明显变化;细胞经100μmol/L的NDGA处理48h后bcl-2蛋白与对照组相比表达下调(P＜0.01)、bax蛋白与对照组相比表达上调(P＜0.01).结论:NDGA对胰腺癌细胞株PCNA-1有抑制增殖、诱导其凋亡作用,诱导细胞凋亡的机制可能与细胞凋亡相关基因bcl-2表达下调、bax表达上调有关.     

As2O3对人膀胱癌细胞株BIU-87作用的体外研究

目的　观察三氧化二砷 (As2 O3 )对人膀胱癌细胞株BIU 87的作用 ,并探讨其作用机制。方法　采用四氮唑蓝(MTT )法检测As2 O3 不同浓度、不同作用时间对BIU 87细胞株的生长抑制率 ;流式细胞术 (FCM )检测不同浓度As2 O3 作用 72h后细胞中凋亡相关蛋白Fas、bcl 2的表达及细胞周期变化。结果　As2 O3 可有效抑制BIU 87细胞株的生长 ,具有浓度、时间依赖性特点。Fas、bcl 2的表达与As2 O3 浓度增高分别呈正、负相关 (P <0 .0 5 ) ,且随As2 O3 浓度增高Fas、bcl 2的表达呈负相关 (P <0 .0 5 )。随As2 O3 浓度增高细胞周期被阻滞在G0 /G1期。结论　As2 O3 可有效抑制人膀胱癌BIU 87细胞株的生长增殖 ,阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡可能起了重要作用     

紫杉醇诱发人乳癌细胞凋亡的机制研究

探讨紫杉醇诱发人乳腺癌细胞凋亡的发生机制。方法应用细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪、活细胞视频观察和蛋白印迹免疫法进行检测和观察。结果癌细胞在紫杉醇作用下,细胞分裂阻滞在分裂期的中期,并诱导细胞发生凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩,核染色质凝聚或者断裂。细胞ＤＮＡ裂解片段呈现典型的“阶梯状”排列的条带。凋亡抑制基因Ｂｃｌ－２在细胞凋亡过程中呈低表达并发生修饰反应,而凋亡诱导基因Ｂａｘ先呈高表达然后表达降低。结论紫杉醇诱发的人乳癌细胞的凋亡与细胞分裂期阻滞密切相关,Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ在紫杉醇诱发的人乳癌细胞凋亡中可能起着重要的调控作用     

白龙灵沙汤提取物对A549人肺癌细胞凋亡的影响

 目的 探讨白龙灵沙汤提取物对A549人肺癌细胞凋亡的影响。 方法 提取白龙灵沙汤中的有效成分,使之与A549人肺癌细胞作用48、72h后,免疫细胞化学法检测 bcl-2、bax表达。 结果 白龙灵沙汤提取物与A549人肺癌细胞作用 48、72h后,下调A549人肺癌细胞 bcl-2,上调 bax的表达。 结论 白龙灵沙汤提取物可下调 bcl-2和上调bax的表达。     

三氧化二砷诱导人类B细胞性淋巴瘤细胞凋亡及机制探讨

目的研究Ａｓ２Ｏ３在体外对人类Ｂ淋巴瘤细胞株ＭＢＣ－１细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法采用细胞形态学、ＤＮＡ凝胶电泳、流式细胞术等多参数观察。结果（１）（０．５～２）ｍＭ／ＬＡｓ２Ｏ３对ＭＢＣ－１细胞有增殖抑制作用,并呈时间和剂量相关;（２）证实诱导细胞凋亡是Ａｓ２Ｏ３增殖抑制作用的主要机制之一;（３）Ａｓ２Ｏ３能够上调ＭＢＣ－１细胞ｐ５３的蛋白表达。结论Ａｓ２Ｏ３能有效地通过诱导人类Ｂ淋巴瘤细胞株ＭＢＣ－１细胞凋亡而起到增殖抑制作用,而ｐ５３基因可能参与了对该凋亡过程的调控。     

VP3诱导骨肉瘤多药耐药细胞凋亡作用机制的初步研究

目的　研究VP3 对人成骨肉瘤细胞OS 73 2多药耐药株R OS 73 2治疗作用的分子作用机制与途径。方法　VP3 基因经酶切后克隆入质粒 pIRES1,获得重组质粒pIRVP3 。脂质体法 pIRVP3 转染R OS 73 2细胞 ,RT PCR检测VP3 在细胞中的表达。提取瘤细胞基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳。流式细胞仪检测凋亡率。Western blot检测p5 3、bcl 2蛋白表达。结果　VP3 基因已在转录水平表达。电泳见转染组DNA呈梯状条带 ,对照组为单一条带。转染组凋亡率明显高于空白对照组 (P <0 .0 1)。转染组与对照组 p5 3及bcl 2蛋白显色带灰度无明显差异。 结论　VP3 可有效诱导R OS 73 2细胞凋亡 ,其分子作用机制与途径可能不依赖 p5 3及bcl 2作用。     

细胞凋亡、增殖、DNA倍体和相关基因Fas、bax和bcl-2在食管癌中的表达和临床意义

目的探讨细胞凋亡、细胞增殖、DNA倍体及相关基因Fas、bax和bcl-2蛋白在食管癌发生发展中的作用.方法应用DNA末端标记、免疫组化及流式细胞术和细胞免疫荧光技术检测70例食管鳞癌组织细胞凋亡状态、细胞增殖、DNA倍体及凋亡相关基因Fas、bax和bcl-2蛋白的表达.结果凋亡指数、凋亡指数与增殖指数比值及Fas、bax和bcl-2蛋白表达与肿瘤病理分级和淋巴结转移密切相关(P＜0.05).结论细胞凋亡和增殖失控有关及相关基因Fas、bax和bcl-2蛋白异常表达在食管癌发生发展中起重要作用.     

土贝母苷甲诱导人鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡

背景和目的：土贝母[Bolbostemma paniculatum(Maxim．)Franquet]是一种传统中药,我们以前的研究结果已证实从中药土贝母块茎中分离得到的土贝母苷甲(下称苷甲)有强抗肿瘤效果。本研究旨在探讨苷甲对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞凋亡的影响。方法：MTT法检测苷甲对肿瘤细胞生长的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期,荧光显微镜和电子显微镜观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳检测DNA电泳图谱的变化,蛋白免疫印迹法检测凋亡相关基因bcl-2和bax表达的变化。结果：苷甲抑制CNE-2Z细胞的生长,其24、48、72h的IC50分别为32．5、20．7、16.7μmol／L。苷甲诱导CNE-2Z细胞发生程序性死亡：流式细胞分析发现Sub—G1峰,50μmol／L苷甲作用CNE-2Z细胞12h,凋亡指数为72．8％;CNE-2Z细胞经苷甲作用(10μmol／L,24、48、72h;30、40、50、60μmol／L,12h)后,其DNA电泳图中出现典型的梯形条带。苷甲诱导bcl-2表达下调且磷酸化,并伴有bax高表达。结论：苷甲诱导CNE-2Z细胞发生形态学和生化学上典型的程序性死亡,其诱导的CNE-2Z细胞凋亡与bcl-2失活和bax激活有关。     

p53基因诱导胱癌细胞HTB9凋亡及相关基因的表达

目的 研究野生型p53基因诱导膀胱癌细胞凋亡的作用,及其对凋亡相关基因bcl-2、bax和ICE表达的调控。方法 将野生型p53基因重组腺病毒载体转染人膀胱癌细胞HTB9,应用RT－PCR检测bax的mRNA表达水平,应用免疫组化法检测bcl-2、bax和ICE蛋白表达水平,以DNA琼脂糖凝胶电泳、脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记技术（TUNEL）和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 野生型p53基因导入可诱导HTB9细胞凋亡,凋亡细胞百分率可达50．4％;bax mRNA和蛋白水平增高,ICE和Bcl-2蛋白水平分别增高和下降。结论 野生型p53基因很可能是通过调控凋亡相关基因ICE、Bax和Bcl-2的表达来诱导细胞凋亡。