PCR法检测弓形虫感染家兔血液中弓形虫基因片段

目的用PCR法检测弓形虫感染家兔血液中弓形虫基因片段。方法弓形虫RH株速殖子感染雄性家兔16只,在感染前后耳缘静脉采集血液标本,-40℃保存。用普通PCR检测血液标本中虫体DNA基因片段。结果普通PCR检测感染家兔总阳性率为45％。感染后第1周检出率仅22％,高峰期维持在感染后2～4周,检出率约为60％左右。其后检出率下降为25％左右并一直维持。结论采用血液作为样品进行弓形虫PCR检测时其最佳检测时间为感染后1～4周,其后检出率逐渐下降。     

两种PCR方法检测感染家兔血液中弓形虫DNA的动态比较

目的:对比两种方法检测感染家兔血液中弓形虫基因动态检测结果。方法:用RH株弓形虫感染雄性家兔16只,在感染前后耳缘静脉采集血液标本。用荧光定量PCR(Fluorescence Quantitiative PCR,FQ-PCR)和普通PCR分别检测血液标本中虫体DNA基因片段。结果:FQ-PCR检测,其总阳性率为64.42%。感染家兔血液中虫体密度高峰期在感染后1～3 wk左右,其后长期维持在较低水平;普通PCR检测感染家兔总阳性率为45%。感染后第1wk检出率仅22%,高峰期维持在感染后2～4 wk,检出率约为60%左右。其后检出率下降为25%左右并一直维持。结论:两种PCR检测方法有相同的动态检出效果,采用血液作为样品进行弓形虫PCR检测时其最佳检测时间为感染后1～4 wk,其后检出率逐渐下降。     

检测弓形虫DNA对母儿弓形虫感染的诊断价值

采用PCR技术检测弓形虫DNA结合ELISA监测264例孕妇血清弓形虫循环抗原(CAg)、IgM、IgG抗体。结果显示:外周血弓形虫DNA的阳性率为10.22％,CAg、IgM和IgG的阳性率分别为4.54％、7.57％和9.09％。IgM和/或CAg阳性者,其外周血皆检出弓形虫DNA。同时,我们追踪监测了部分DNA阳性者的羊水、胎盘和脐血。研究认为,PCR技术与ELISA方法相结合,可早期诊断母儿的弓形虫感染。     

PCR技术检测RH株弓形虫组织内感染的实验研究

目的：建立敏感，特异的聚合酶链反应（PCR），以检测组织内弓形虫感染。方法：优化PCR反应关键步骤的条件。以相同的B1引物扩增相近的病原体判断其特异性，扩增倍比稀释的DNA检测其灵敏度，并以PCR法检测实验鼠肝，血中DNA的动态变化。结果与免疫组化法进行比较。评价其检测生物学样本的可行性。结果：实验建立的PCR技术的灵敏度能达到检测出一个虫体的DNA，且特异性强，不扩增鼠DNA，人DNA，隐孢子虫，卡氏肺孢子虫，鼠疟原虫的DNA，检测实验感染小鼠血，肝脏样本，在感染后2天，3只鼠血样本PCR结果阳性，3只小鼠肝标本2只阳性；感染后3天至濒死前后有小鼠检测结果均阳性；血样本阳性检出率100%（11/11），肝脏组织样本阳性检出率81.8%(9/11)。结论：PCR方法是一种敏感，特异快速的诊断方法，可用于诊断血和肝脏组织内的弓形虫。     

聚合酶链反应检测弓形虫感染的临床应用

本文根据ＤＮＡ复制原理，从弓形基因组保守域选择一对寡聚核苷酸引物，建立检测ＴＯＸ的聚合酶链反应。     

聚合酶链反应检测弓形虫感染的临床应用

本文根据DNA复制原理,从弓形虫(TOX)基因组保守区域选择一对寡聚核苷酸引物,建立检测TOX的聚合酶链反应(PCR)。同时采用PCR法与ELISA法对144例原因不明的低热、头痛、头晕病人进行检测,结果PCR检出率(22.2％)明显高于 ELISA检出率(17.4％),经统计学配对计数资料比较的X~2检验有显著性差异(p<0.05)。结果表明,PCR具有快速、敏感、特异等优点,是临床检测 TOX的可行方法之一。     

弓形虫感染家兔精液中果糖含量的动态变化

目的动态观察弓形虫感染家兔精液中果糖变化。方法RH株弓形虫速殖子105个/只的剂量腹腔感染雄性家兔16只。在家兔感染前和感染后的1~13周分别采集精液,-40℃冻存备用。采用间苯二酚法检测家兔精液中果糖含量,绘制感染前后精液中果糖含量动态曲线图。结果弓形虫感染家兔精液中果糖含量在感染后逐渐下降,7周左右降到最低峰值,此后果糖含量逐渐恢复并在感染后第8周至第13周维持较低水平,此值低于感染前果糖含量。结论弓形虫感染可影响家兔精囊腺功能。     

用三对引物检测血液中细胞DNA的方法学

目的：建立稳定、敏感的检测血液中肠源性细菌ＤＮＡ的方法。方法：取２３例腹部手术后体温＞３８．５℃患者的肘静脉血进行血培养,并以酚抽提法提取全血ＤＮＡ进行ＰＣＲ,靶基因分别为大肠杆菌特异性的β－半糖甘酶基因、脆弱类杆菌特异性的谷氨酰胺合成酶基因,以及大多数细菌所共有的１６ＳｒＲＮＡ基因。以标准菌株提取的ＤＮＡ为阳性对照。空白对照为阴性对照,２０例健康志愿者全血ＤＮＡ为正常对照。对２０例标本重复检测２次以确定其复现性。结果：ＰＣＲ复现率为９５％。血培养阳性率为１３．０％（３／２３）,ＰＣＲ检测阳性率为４３．５％（１０／２３）,较血培养阳性率高（Ｐ＝０．０１６）。结论：按照规范进行的ＰＣＲ检测血液中肠源性细菌方法稳定,比血培养敏感。     

聚合酶链反应检测弓形虫核酸的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，设计了一对寡核苷酸引物，对弓形虫Ｂ１基因的保守序列进行体外扩增，显示该引物只对弓形虫核酸扩增，可对４个或４个以上弓形虫扩增出明显条带，检测弓形虫核酸的最低量为２．５ｐｇ。该ＰＣＲ对急性感染弓形虫的小鼠于４８ｈ后就可从部分小鼠（２／５）的外周血中检测到弓形虫核酸，９６ｈ后全部小鼠（５／５）外周血中的均检测到弓形虫核酸，而感染２４ｈ后可从其肝、脾、肾组织中扩增互弓形虫核     

孕妇弓形虫感染及其可能导致的宫内传播

目的：探讨弓形虫感染与优生的关系，摸索早期诊断弓形虫感染的方法。方法：通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）、血清学试验及部分动物接种，对３６７名各孕期孕妇外周静脉血、脐血及死胎组织进行弓形虫检测。结果：ＰＣＲＤＮＡ阳性７例，循环抗原（ＣＡｇ）阳性２例，特异性ＩｇＭ阳性１例。总阳性率１９％。对其中１例ＰＣＲＤＮＡ、ＣＡｇ阳性的孕妇血进行动物接种，结果阳性。２８例死胎组织中，发现一死胎心、肺、肝、肾、眼、脑组织弓形虫ＤＮＡ均阳性。结论：孕妇弓形虫感染的危害在我国（省）并非少见。开展对孕妇弓形虫感染的检测，将有利于优生优育工作的开展。ＰＣＲ较其它方法更具特异性及敏感性，且操作简便、快速，适合于孕妇弓形虫感染的监测。     

弓形体感染与先天性心脏病的关系

目的：探讨弓形体感染与先天性心脏病发生的相互关系．方法：采用病例对照研究方法对６６例先心病（ＣＨＤ）组与３８例对照组心脏组织进行弓形体特异的ｐ３０表面蛋白的基因序列２８２ｂｐ片段聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测．结果：①６６例ＣＨＤ心脏组织中ＴＯＸ－ＤＮＡ阳性１０例（占１５％），而３８例对照组中ＴＯＸ－ＤＮＡ阳性公１例（３％），两组比较有显著性差异（Ｐ〈０．０５）．②在１１例新生儿ＣＨＤ中ＴＯＸ－ＤＮＡ     

弓形虫529 bp重复序列基因的PCR阳性质控质粒的构建

目的：构建含有弓形虫529 bp高度重复序列基因的重组质粒,为基于该基因的弓形虫病分子生物学诊断建立标准阳性对照品。方法：以弓形虫RH株基因组DNA为模板,对529 bp的基因片段进行扩增,将纯化后的PCR产物与pMD18-T载体连接后转入大肠埃希菌DH-5α中,提取重组质粒PCR及测序鉴定。以弓形虫529 bp基因为靶基因设计的检测引物,扩增弓形虫基因组DNA及质粒DNA。结果：PCR产物序列与GENBANK中弓形虫529 bp基因序列完全一致。以弓形虫基因组DNA和质粒DNA为模板,成功扩增出预期的249bp基因片段。结论：成功构建可作为标准阳性对照品的含有弓形虫529 bp高度重复序列基因的重组质粒pMD-18-Tox,为经济实用的弓形虫诊断试剂盒的研制奠定了基础。     

Dynamic observation of polypide in semen and blood of rabbits infected with Toxoplasma tachyzoites

Toxoplasma gondii （T. gondfi） is one of the intracellular parasitized protozoa and may cause severe medical complications in fetus or immunocompromised individuals. T. gondii existed as tachyzoite during acute stage while as bradyzoite during chronic phase in human cells. To improve understanding of the prevention, diagnosis, and treatment of the disease, it is important to explore the distribution and fluctuation and other biological features of T. gondii in host. The trophozoite had been found in the saliva, blood or urine of the host. Some studies suggested the dynamic changes of circulating antibody and toxoplasma circulating antigen （TCA） either in blood or in urine. T. gondii in tissue or blood cannot be counted exactly under the microscope because it was only several micrometers in size and thus most of the studies were performed qualitatively by mouse inoculation or immunology methods. The quantitative fluorescent polymerase chain reaction （QF-PCR） and its application raised the possibility for dynamic observation of the polypide in the host. In this study, blood and semen were collected from the male rabbit model infected with toxoplasma tachyzoites and T. gondii was detected by QF-PCR quantitatively.     

大蒜素对弓形虫感染小鼠黏膜免疫应答的影响

目的通过测定弓形虫感染小鼠大蒜素治疗后黏膜部位SIgA含量,研究大蒜素在弓形虫感染免疫中所起作用。方法将雌性小鼠分成治疗组、感染组和对照组,用5×10~4个/只RH株弓形虫速殖子经口感染小鼠后大蒜素治疗,每天1次,于治疗后第0、2、4、6、8、10、12周断颈处死,冲洗上呼吸道、下呼吸道、肠道、阴道、子宫黏膜,夹心ELISA法测定SIgA抗体含量。结果在观察的时间段内,治疗组SIgA含量高于对照组和感染组,治疗后4、6、8周差异具有显著性(P0.05)。结论大蒜素治疗经口感染弓形虫速殖子小鼠,能提高黏膜(特别是消化道黏膜)SIgA抗体含量,保护机体抵御病原体感染。     

抑制剂对弓形虫感染鼠黏膜免疫影响

目的通过对地塞米松抑制小鼠感染弓形虫后黏膜部位SIgA含量测定,研究黏膜在弓形虫感染免疫中所起作用。方法将小鼠分成正常对照组（不进行特殊处理）,感染组（经口感染5×10^4个/只RH株弓形虫速殖子小鼠）和抑制感染组（在接种前48 h开始肌肉注射地塞米松2 mg/kg/d,48 h后用5×10^4个/只RH株弓形虫速殖子经口感染小鼠）,分别在0 d、5 d、10 d、15 d、20 d、30 d、50 d处死小鼠,冲洗上呼吸道、下呼吸道、肠道黏膜,夹心ELISA法测定SIgA抗体含量。结果在观察的时间段内SIgA抑制感染组低于感染组,分别在5 d、10 d、15 d、20 d差异具有显著性（P〈0.05或0.01）。结论地塞米松抑制组小鼠感染弓形虫黏膜部位SIgA含量降低,特别是消化道黏膜减少明显,地塞米松对黏膜免疫有抑制作用。