虫草菌液对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞转化生长因子β_1和纤维连接蛋白表达的影响

目的：研究虫草菌液（HS）对高糖作用下体外培养的大鼠腹膜间皮细胞（RPMCs）转化生长因子β1（TGF-β1）和纤维连接蛋白（FN）表达的影响。方法：将原代培养的第3代RPMCs随机分为6组：对照组、1.5%葡萄糖组、2.5%葡萄糖组、单纯虫草组（10mg/ml）、1.5%葡萄糖＋10mg/ml虫草组、2.5%葡萄糖＋10mg/ml虫草组。同步培养72h后,以RTPCR法检测各组细胞TGF-β1和FN mRNA表达情况;ELISA法检测细胞上清液中TGF-β1和FN的蛋白质水平。结果：高糖作用下RPMC的TGF-β1、FN mRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组（P〈0.05）,且增高的程度与葡萄糖浓度呈依赖关系。与相应浓度的高糖组相比,经虫草菌液干预后RPMC的TGF-β1、FN mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P〈0.05）。结论：虫草菌液可下调高糖作用下RPMCs的TGF-β1和FN的表达,具有抗腹膜纤维化的作用。     

辛伐他汀对高糖致人腹膜间皮细胞转化生长因子β1和碱性成纤维细胞生长因子分泌与表达的影响

腹膜纤维化是腹膜透析治疗的主要并发症,最终导致透析效率降低甚至超滤失败.研究表明,高糖透析液能上调腹膜间皮细胞(HPMC)转化细胞生长因子β1(TGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达[1],而后两者是参与腹膜纤维化的重要细胞因子[2].本研究采用RT-PCR和ELISA的方法观察辛伐他汀对高糖刺激下HPMC TGF-β1和bFGF mRNA表达和蛋白分泌的影响,探讨辛伐他汀在腹膜纤维化防治中的作用及其机制.     

高糖及洛沙坦对人腹膜间皮细胞Smad表达的影响

目的 探讨腹膜纤维化机制以及可能的防治措施。方法从网膜获取腹膜间皮细胞,分别用不同浓度葡萄糖或甘露醇的培养液或同时加入4.25％,葡萄糖和含洛沙坦(losartan)的培养液刺激,检测转化生长因子β1(TGF-β1)及Smad的表达。结果 (1)高糖上调人腹膜间皮细胞Smad 2和Smad 4基因表达;Smad 3表达无变化;(2)高渗对Smad家族和TGF-β1的表达没有影响;(3)洛沙坦抑制Smad 2基因的表达,但对蛋白质无抑制作用;(4)高糖刺激问皮细胞TGF-β1的表达,其表达量在加入洛沙坦后明显下降。结论高糖刺激了TGF-β1和Smad 2、Smad 4的表达,这可能是细胞外基质堆积、腹膜纤维化的机制之一。洛沙坦可通过下调TGF-β1,抑制Smad 2基因表达。     

川芎嗪抗腹膜间皮细胞损伤的实验研究

目的：观察含川芎嗪腹透液体外对腹膜间皮细胞活力,细胞增殖的影响。方法：分离,培养大鼠腹膜间皮细胞,用细胞计数法,四唑氨蓝（MTT）法,乳酸脱氢酶（LDH）法检测腹膜间皮细胞活力,细胞增殖能力。结果：培养的腹膜间皮细胞暴露于常规使用的4．25％高糖透析液30min后,间皮细胞数量显降低,MTT法示OD值显低于正常对照组,LDH释放增加,提示间皮细胞活力降低,增殖受到显抑制,加入低剂量川芎嗪后,间皮细胞数,MTTOD值较之单纯高糖透析液组均显增高,LDH显降低,但随着剂量的加大,川芎嗪的上述作用减低乃至消失,结论：适当剂量的川芎嗪能对抗常规腹透液引起的间皮细胞抑制和损伤,从而具有保护间皮细胞的作用。     

锌离子对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞凋亡的影响

目的：研究锌离子（Zn）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）凋亡的影响,从而为锌离子在腹透相关腹膜炎中的应用提供理论基础.方法：胰蛋白酶消化法培养原代大鼠腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组：（1）对照组; （2） LPS组; （3） ZnSO4组; （4） ZnSO4/LPS组.应用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测RPMC凋亡率,并采用Westen Blot方法检测P-Akt,天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶3（caspase3）,天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶8（caspase8）蛋白表达;酶联免疫吸附方法（ELISA）检测上清液TNFα,TGF-β1,sFas和d sFasL的表达.结果：与对照组相比,LPS组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白（caspase3,caspase8）表达升高.与LPS组相比,ZnSO4作用组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白（caspase3,caspase8）表达明显降低.LPS组上清液中TNFα,TGF-β1,sFas和d sFasL浓度显著高于对照组;ZnSO4作用组上清液中TNFα,TGF-β1,sFas和sFasL浓度显著低于LPS组.与LPS组相比,ZnSO4作用组P-Akt的表达明显升高.结论：ZnSO4可能可以逆转LPS所致的RPMC凋亡,对腹膜透析相关腹膜炎过程中所导致的RPMC损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过PI3K/Akt通路而发挥作用.     

上调Smad7表达对腹膜纤维化大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响

目的探讨上调TGF-β抑制性信号蛋白Smad7表达对大鼠腹膜纤维化模型腹膜间皮细胞转分化的影响。方法30只160～170 g SD雄性大鼠.随机分为4组：正常对照组（n=6）;腹膜纤维化模型组（n=12）：予腹腔注射4.25%腹膜透析液与脂多糖;空载体组（n=6）：模型成功后转染pTRE与pEFpurop-Tet-on质粒;Smad7治疗组（n=6）：模型成功后转染pTRE- m2 Smad7与pEFpurop-Tet-on质粒。第14、28天杀检大鼠,取脏层腹膜组织,用RT-PCR方法检测TGF-B1、α-SMA、E-钙黏蛋白（E-cadherin）基因的表达;用Western杂交或间接免疫荧光的方法检测TGF-β1、Smad7、磷酸化（p）-Smad2/3、α-SMA、E-cadherin的表达。结果与正常对照组比较,模型组TGF-β1、p-Smad2/3及α-SMA的表达显著上调（p〈0.01）;E-cadherin的表达显著下调（P〈0.01）。与模型组、空载体组比较,Smad7治疗组p-Smad2/3及α-SMA表达水平显著下调（P〈0.01）;E-cadherin的表达显著上调,但仍低于正常对照组（P〈0.05）。结论Smad7可通过抑制受体调控信号蛋白Smad2/3的活化,阻止高糖透析液及脂多糖介导的腹膜间皮细胞转分化,从而防止腹膜纤维化的发生和发展。     

采用蛋白质组分析高浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞的影响

目的研究腹透液中葡萄糖对人腹膜间皮细胞（HPMCs）分泌蛋白质影响，并采用蛋白质组学方法分析其对腹膜纤维化和腹膜功能的影响。方法采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离HPMCs，第3代用于实验。实验分组：对照组（F12培养基）和高糖组（F12培养基＋4％葡萄糖），分别观察24h和48h。经二维凝胶电泳（2-DE）分离人腹膜间皮细胞总蛋白，每组重复3次，PDQuest图象分析软件比较对照组和高糖组平均凝胶，求差异蛋白质。采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定部分差异蛋白质。结果获得12块经2-DE分离的分离胶，每组3块。通过PDQuest图象分析软件发现24h高糖组与对照组比较有27种蛋白质表达有差异（P〈0．05）；48h高糖组与对照组比较有50种蛋白质的表达有差异（P〈0．05），表达上调有22个蛋白质斑点，表达下调有55个蛋白质斑点；对其中23个差异蛋白质斑点进行了肽质指纹图分析，鉴定出23种蛋白质，其中有2个点为同一蛋白质。这些蛋白质涉及到高糖对HPMCs的细胞骨架、糖代谢、黏附、细胞因子、抗氧化剂、表面活性剂等物质的调节。结论高糖导致腹膜纤维化是多因素、多途径，要防止腹膜透析腹膜纤维化保护腹膜透析效能．最好避免过多使用高糖透析液。     

姜黄素通过调节小凹蛋白1改善高糖透析液诱导的腹膜间皮细胞转分化

目的:通过观察姜黄素对腹膜间皮细胞小凹蛋白1(caveolin-1,cav-1)表达及腹膜间皮细胞间充质转分化(epithelial-to-mesenchymal transition, EMT)的影响,探讨姜黄素防治腹膜透析相关腹膜纤维化的作用及机制。方法:体外培养人腹膜间皮细胞株(HMrSV5细胞),将细胞随机分为：对照组(control组)、模型组(PDS组)、干预组(PDS+姜黄素组),采用Western-blot、Real time-qPCR、免疫荧光法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子β₁(TGF-β₁)、及cav-1的表达。然后通过基因siRNA基因沉默的方法构建cav-1低表达的人腹膜间皮细胞系,采用Western-blot、Real time-qPCR法检测α-SMA、E-cadherin、TGF-β₁及p-smad2的表达。结果:高糖腹膜透析液诱导可导致α-SMA及TGF-β₁表达的上调同时导致E-cadherin、cav-1表达...     

腹膜透析患者肾素血管紧张素Ⅱ水平变化及其在腹膜纤维化中的意义

目的 探讨持续性非卧床腹膜透析（CAPD）患者血浆及腹腔局部肾素血管紧张素系统（RAS）的变化及其在腹膜纤维化中的意义。 方法 选取腹透感染组和非感染组CAPD患者25例，非感染患者根据透析龄分为≥6月组和＜6月组。应用放射免疫法检测CAPD患者腹透透出液和血浆中肾素及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的浓度。以不同浓度D-葡萄糖（0.3%、1.5%、2.5%）、甘露醇（1.5%、2.5%）及AngⅡ（0、1、10、100、1000 nmol/L）刺激大鼠腹膜间皮细胞（RPMC），放射免疫法检测细胞上清液AngⅡ浓度变化；实时定量PCR方法观察AngⅡ 1型受体（AT1）、血管紧张素转化酶（ACE）、转化生长因子β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）mRNA的表达； Western印迹法检测TGF-β1及CTGF蛋白的表达；ELISA法检测上清液中TGF-β1的变化。 结果 CAPD患者腹透透出液中未检测到肾素。感染及≥6月组的CAPD患者透出液中AngⅡ的浓度分别为（151.99±114） pmol/L和（14.17±41.5） pmol/L，分别为非感染[（7.98±12.69） pmol/L]及＜6月组[（2.18±5.62） pmol/L]的19倍及6.5倍（P < 0.01或P < 0.05）。高糖腹透液（2.5％）注入4 h后，CAPD患者循环中肾素及AngⅡ浓度分别为[（4.30±8.48）和（54.19±34.43） pmol/L]，是基础水平的4.06倍和1.21倍（P < 0.01）。高糖组（2.5％）RPMC AT1、ACE mRNA和上清液AngⅡ浓度分别为低糖组（0.3％）的2.61、2.62和2.01倍（P <0.05）。AngⅡ可在mRNA和蛋白水平上调RPMC表达TGF-β1与CTGF，呈剂量依赖性，100 nmol/L组TGF-β1 mRNA及蛋白水平分别为对照组的2.8和2.19倍（P < 0.05）；1000 nmol/L组CTGF mRNA及蛋白水平分别为对照组的4.48倍和2.82倍（P < 0.05）。AngⅡ促进RPMC分泌TGF-β1，呈时间依赖性，刺激24 h组TGF-β1的表达量为基础值的3.65倍（P < 0.05）。 结论 CAPD尤其是腹透感染或长期腹透患者存在RAS活化状态。RAS的主要效应因子AngⅡ可通过上调间皮细胞表达和分泌致纤维化细胞因子参与腹膜纤维化。阻断RAS可能成为预防和治疗腹膜纤维化的新靶点。     

RhoA-Rock信号通路在转化生长因子β1诱导大鼠腹膜间皮细胞转分化中的作用

目的　探讨RhoA-Rock信号通路在转化生长因子β1（TGF-β1）诱导大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）转分化中的作用。 方法　体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞,静止24 h后,采用随机数字表法随机分为以下4组：正常对照组、TGF-β1（10 μg/L）刺激组、TGF-β1（10 μg/L）＋Y-27632（Rock特异性抑制剂,10 μmol/L）组（Y-27632预处理2 h）、Y-27632（10 μmol/L）组。用TGF-β1（10 μg/L）刺激RPMC不同时间,观察α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,E钙黏素（E-cadherin）、Ⅰ型胶原（ColⅠ）的表达。RT-PCR法检测E-cadherin、α-SMA 和ColⅠmRNA表达。Western印迹法检测RhoA（包括总RhoA及活化的RhoA）、E-cadherin、α-SMA、ColⅠ和波形蛋白（vimentin）表达。活化的RhoA由膜蛋白提取试剂盒提取。 结果 （1）TGF-β1（10 μg/L）刺激RPMC能诱导RhoA活化,于10 min开始出现活性升高,为对照组的（2.57±0.52）倍（P < 0.05）;1 h达高峰,为对照组的（4.35±0.41）倍（P < 0.05）。（2）TGF-β1（10 μg/L）刺激RPMC能导致E-cadherin mRNA和蛋白表达下调,α-SMA、ColⅠmRNA和蛋白表达上调,呈时间依赖性。（3）Rock特异性抑制剂Y-27632能显著下调α-SMA、ColⅠmRNA的表达,较TGF-β1刺激组各降低了53.8%和55.7%（均P < 0.05）,并且能下调α-SMA、ColⅠ和vimentin蛋白的表达,较TGF-β1刺激组分别降低了42.6%、60.1%和58.1%（均P < 0.05）,但不能上调E-cadherin mRNA和蛋白的表达。 结论　TGF-β1可通过RhoA-Rock信号通路介导大鼠腹膜间皮细胞转分化,抑制该通路可作为防治腹膜纤维化的潜在靶点。     

间充质干细胞外泌体对腹膜间皮细胞高糖损伤的作用研究

目的 探讨间充质干细胞来源外泌体（MSCs-Exo）对高糖致腹膜间皮损伤的影响。方法 将MET-5A细胞分成3组：正常对照组（不予处理）、高糖组（高糖处理）、共培养组（高糖和MSCs-Exo共培养）,通过CCK-8法选用效果最明显的高糖浓度和MSCs-Exo浓度,各组分别处理24 h后收集细胞和上清液。CCK-8法测定各组细胞增殖活力,流式细胞技术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测细胞因子IL-6、TNF-α的表达,ELISA检测培养上清液中IL-6的水平。结果高糖组细胞的增殖能力明显低于正常对照组（P<0.001）,细胞凋亡率、IL-6和TNF-α的表达显著高于正常对照组（P<0.001）;与高糖组相比,共培养组细胞增殖能力提高（P<0.001）,细胞凋亡率、IL-6和TNF-α的表达则明显下调（P<0.05）。结论 高糖对腹膜间皮细胞有明显的促凋亡和促炎作用,MSCs-Exo可以促进腹膜间皮细胞的增殖,抑制高糖刺激下细胞凋亡的发生和炎症因子的表达。     

丝裂素活化蛋白激酶信号通路在人腹膜纤维化的作用

目的 探讨丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对转化生长因子(TGF)β1致人腹膜间皮细胞(HPMC)高表达纤连蛋白(FN)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)1的调控作用。方法 采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型。用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)评估TGF-β1和细胞外信号调节激素(ERK)及p38阻断剂对HPMC的增殖作用。采用酶联免疫双抗夹心法检测HPMC培养液中FN、PAI-1的蛋白质水平。采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测HPMC细胞内FN、PAI-1mRNA的表达。结果 (1)TGF-β1能刺激HPMC增殖(P<0.05),且呈剂量时间依赖性,加ERK阻断剂组或p38阻断剂组较TGF-β1组有明显抑制作用(P<0.01)。(2)TGF-β1能引起HPMC FN、PAI-1蛋白水平显著增高(P<0.01);加ERK阻断剂组或p38阻断剂组能使上述高表达受到抑制(P<0.01)。(3)TGF-β1能使HPMC FN、PAI-1mRNA表达上调,加ERK阻断剂组或p38阻断剂组能使上调水平受到抑制。结论 MAPK对TGF-β1致人腹膜间皮细胞高表达FN和PAI-1起调控作用,为临床防治腹膜纤维化提供新的思路。     

P38MAPK 信号通路在高糖导致人腹膜间皮细胞 PARP -1激活、细胞外基质聚集及转分化的作用

目的：探讨人腹膜间皮细胞株 HMrSV5在高糖刺激下,P38MAPK 信号通路的活化情况及 PARP -1的蛋白表达情况。探讨 P38MAPK 抑制剂对腹膜间皮细胞外基质聚集及细胞转分化的作用及对 PARP -1的活性变化。方法：无血清培养 HMrSV5细胞株16~24 h 后,分别用高糖（终浓度138 mmol/ L 葡萄糖）刺激0 m、5 m、30 m、1 h、2 h、8 h、24 h,并选择等渗的甘露醇作为对照用。Western Blot 分别检测不同时间总的 P38MAPK 及磷酸化的 P38MAPK 的蛋白表达水平。同时用Western blot 检测在不同时间点 PARP -1的蛋白表达情况。无血清培养 HPMCs16~24 h 后,分为4各组：（1）低糖组（5．6 mmol/ L 葡萄糖）;（2）刺激组（138 mmol/ L 葡萄糖）;（3）抑制剂组（138 mmol/ L 葡萄糖＋ SB203580P38抑制剂,浓度为10μmol/ L）;（4）DMSO 对照组。在24 h 收取细胞用 Western blot 检测 P38MAPK、PARP -1、FN、PAI -1、E - cadherin 及α-SMA 的蛋白水平变化。结果：高糖以时间依赖的方式刺激 HPMCs 后,磷酸化的 P38MAPK 表达增加。PARP -1的表达在高糖刺激下也呈时间依赖性增高,24 h 已很明显。用 P38MAPK 抑制剂 SB203580后,PARP -1及 FN、PAI -1及α- SMA 也下调,E - cadherin 表达上调,差异有统计学意义（P 〈0．05）。结论：高糖可使得人腹膜间皮细胞 P38MAPK 通路的活化。运用P38的抑制剂,均能使得 PARP -1活性下调,同时逆转腹膜间皮细胞外基质聚集及 HPMCs 转分化。这提示在高糖刺激腹膜间皮细胞时,P38MAPK 参与了 PARP -1的活化,并参与腹膜间皮细胞外基质聚集及人腹间皮细胞转分化。     

PTEN编码蛋白对TGF-β1刺激大鼠肾成纤维细胞增殖和ColⅣ与FN分泌的抑制作用

目的：观察张力蛋白同源物基因（PTEN）编码蛋白对转化生长因子-β1（TGF-β1）刺激所致大鼠肾成纤维细胞增殖和Ⅳ型胶原（ColⅣ）、纤连蛋白（FN）分泌的影响。方法：用重组PTEN腺病毒转染体外培养大鼠肾成纤维细胞,倒置荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达,RT-PCR检测PTEN mRNA表达。转染36h后TGF-β1体外刺激,TGF-β1刺激24h后MTT法检测细胞增殖活力,免疫细胞化学法检测PCNA表达,ELISA法检测细胞上清中ColⅣ、FN水平。结果：PTEN腺病毒转染36h后可见明显绿色荧光蛋白表达,PTEN mRNA表达明显增多（P〈0.01）。PTEN腺病毒转染后给予TGF-β1刺激组较单纯TGF-β1刺激组平均光密度值（OD）显著降低（P〈0.01）,PCNA表达显著减少（P〈0.01）,且ColⅣ、FN的分泌水平明显下降（P〈0.05）。结论：PTEN基因编码蛋白能抑制TGF-β1刺激所致大鼠肾成纤维细胞增殖、PCNA表达及ColⅣ、FN分泌,可能具有抑制残肾纤维化、延缓残肾毁损速度的作用。     

百令胶囊对大鼠肾小球系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原及TGF-β1 mRNA表达的影响

目的：观察百令胶囊对高糖刺激后系膜细胞增殖、Ⅳ型胶原（typeⅣCollagen,ⅣC）、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA表达的影响。方法：培养正常SD大鼠系膜细胞,高浓度葡萄糖刺激系膜细胞,加入百令胶囊、苯那普利含药血清后,用四甲基偶氮唑盐（MTT）光吸收法观察肾小球系膜细胞增殖;酶联免疫吸附法（ELISA）测量培养细胞上清液中ⅣC的含量;实时荧光逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）测定TGF-β1mRNA的表达。结果：百令胶囊、苯那普利含药血清在24 h可抑制高糖对大鼠肾小球系膜细胞的促增殖作用,72 h最为明显（P〈0.01）;高糖刺激后ⅣC、TGF-β1mRNA在肾小球系膜细胞内表达增多（P〈0.01）,百令胶囊、苯那普利含药血清能明显抑制肾小球系膜细胞增殖（P〈0.01）、ⅣC分泌及TGF-β1mRNA的高表达（P〈0.05）。百令胶囊与苯那普利组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：百令胶囊可降低高糖致系膜细胞增殖,抑制高糖所致ⅣC分泌,抑制高糖引起的TGF-β1mRNA过度表达,这可能是其防治糖尿病肾病的作用机制。     

糖肾宁对高糖培养肾近端小管上皮细胞FN分泌及TGF-β1 mRNA表达作用

目的研究中药复方糖肾宁对高糖诱导的肾近端小管上皮细胞转化生长因子β1（TGF-β1）表达和分泌纤维连接蛋白（FN）的影响,探讨其治疗糖尿病肾病（DN）的机制。方法分别采用RT-PCR和ELISA方法检测不同时间下高糖对肾近端小管上皮细胞TGF-β1 mRNA表达和分泌FN的作用,及糖肾宁药物血清对上述指标的影响。结果高糖呈时间依赖性增加肾小管上皮细胞TGF-β1 mRNA表达,高糖培养24h后细胞分泌FN也明显增多,加入糖肾宁药物血清后上述指标均有下降（P〈0．05）。结论糖肾宁抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1和FN表达可能是其治疗DN的分子机制之一。     

乌司他丁对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞白细胞介素15、结缔组织生长因子及丙二醛表达的影响

目的 研究乌司他丁（UTI）对高糖作用下大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）白细胞介素15（IL-15）、结缔组织生长因子（CTGF）及丙二醛（MDA）表达的影响。 方法 胰蛋白酶消化法原代和传代培养RPMC,经鉴定后第3代用于实验。按数字随机表法分为 (1)正常对照组;(2)高糖组：不同浓度高糖（1.5%、2.5%、4.25%）作用6 h、12 h;2.5%高糖分别作用于RPMC 3、6、12、24 h;(3)UTI组：不同浓度的UTI（160、320、640 U/ml）作用30 min后分别加2.5%高糖作用12 h。实时定量PCR法测IL-15 mRNA的表达。ELISA法检测细胞培养上清液中IL-15和CTGF的含量。硫代巴比妥法测上清液中MDA的蛋白含量。 结果 与正常对照组相比,高糖可刺激RPMC IL-15 mRNA及蛋白的表达增高,且在12 h内呈时间、剂量依赖性（P < 0.05）;高糖诱导RPMC CTGF蛋白的表达增高,在12 h内呈时间、剂量依赖性（P < 0.05）;高糖诱导MDA的蛋白含量升高,且呈剂量依赖性（P < 0.05）。与高糖组相比,UTI能显著降低高糖所致的腹膜间皮细胞IL-15、CTGF和MDA的表达（均P < 0.05）。 结论 高糖可上调RPMC IL-15、CTGF及MDA的表达;UTI可抑制高糖所致的IL-15、CTGF和MDA的过度表达。     

线粒体呼吸链在高糖腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞层高通透性中的作用

目的 研究线粒体呼吸链在高糖腹膜透析液（PDS）诱导人腹膜间皮细胞（HPMC）通透性升高中的作用,探讨高糖PDS导致腹膜高通透状态的分子机制。 方法 体外培养HPMC,用不同浓度葡萄糖PDS加或不加抗氧化剂谷胱甘肽,培养24 h。采用跨细胞电阻（TER）技术测定HPMC通透性的变化;免疫荧光及Western印迹观察claudin-1的表达;线粒体活性氧（ROS）荧光探针检测细胞线粒体ROS的生成;线粒体呼吸链酶复合物活性检测试剂盒检测复合物Ⅰ~Ⅳ的活性变化。 结果 各组细胞的TER值均随时间的延长而下降,4.25% PDS组TER值24 h内从（34.7±1.5） Ω&#8226;cm2下降至（4.3±1.4） Ω&#8226;cm2;高糖PDS使细胞间连接蛋白claudin-1的表达显著下调,葡萄糖浓度越高作用越明显;同时高糖PDS导致线粒体呼吸链酶复合物Ⅲ活性较对照组下降89.2%（P < 0.01）,进而使线粒体ROS产生增加。谷胱甘肽可逆转上述指标的变化。 结论 高浓度葡萄糖PDS通过抑制线粒体呼吸链酶复合物Ⅲ的活性,引起HPMC的氧化损伤,进而导致腹膜间皮细胞层的高通透性增高。     

胃癌细胞培养上清液及转化生长因子-β1促进腹膜间皮细胞βig-h3蛋白的表达

目的研究胃癌细胞SGC-7901培养上清液及转化生长因子-β1(TGF-β1)是否可促进人类腹膜间皮细胞表达βig-h3蛋白。方法培养胃癌细胞SGC-7901,取第3天培养液上清与DMEM培养液的混合液(1∶4)以及0、1.0、10.0和50.0 ng/ml的TGF-β1分别刺激人类腹膜间皮细胞HMrSV5 0、3、6、12及24 h,ELISA方法检测上清液中βig-h3蛋白浓度,Western blot法检测细胞内βig-h3蛋白浓度。结果对照组有基础量的βig-h3蛋白表达;胃癌细胞SGC-7901培养上清液及TGF-β1均可明显增加HMrSV5细胞上清液及细胞内的βig-h3蛋白浓度(P<0.05),且TGF-β1的刺激作用呈时间及浓度依赖性。结论胃癌细胞SGC-7901培养上清液及TGF-β1可明显刺激HMrSV5细胞表达和分泌βig-h3蛋白。     

高糖对人腹膜间皮细胞整合素表达的影响

目的:研究高糖对人腹膜间皮细胞(HPMC)整合素表达的影响,探讨腹膜透析中腹膜间皮细胞层完整性损伤的机制.方法:采用人腹膜间皮细胞株HMrSV5为研究对象.观察高浓度葡萄糖对HPMC细胞膜表面整合素表达及基质黏附性的改变,并采用免疫荧光技术观察高糖对细胞Actin微丝骨架的影响.结果:(1)高糖致细胞脱落呈时间依赖效应;(2)高糖引起细胞膜上β1整合素的表达明显减低;(3)高糖使Actin微丝骨架解体;(4)高渗透压组未见上述效应.结论:高糖使β1整合素表达下降,微丝骨架解体,从而损害细胞-基质间黏附的形成,造成腹膜间皮完整性的损害.