固相膜免疫测定

固相膜免疫测定 (solid phase membrane- basedimmunoassay)与固相酶免疫测定 (ELISA)相类似 ,其特点是以微孔膜作为固相。标记物可用酶和各种有色微粒子 ,如彩色胶乳、胶体金、胶体硒等 ,以红色的胶体金最为常用。固相膜的特点在于其多孔性 ,像滤纸一样。固相膜可被液体穿过流出 ,液体也可以通过毛细管作用在膜上向前移行。利用这种性能建立了两种不同类型的快速检验方法。常用的固相膜为硝酸纤维素 (nitrocellulose,NC)膜。在固相膜免疫测定中 ,有穿流 (flow through)形式的 ,称为免疫渗滤试验 (immunofiltrationassay,IFA) ,横流 (la…     

固相膜免疫测定

固相膜免疫测定(solid phase membrane-based immunoassay)与固相酶免疫测定(ELISA)相类似,其特点是以微孔膜作为固相.标记物可用酶和各种有色微粒子,如彩色胶乳、胶体金、胶体硒等,以红色的胶体金最为常用.固相膜的特点在于其多孔性,像滤纸一样.固相膜可被液体穿过流出,液体也可以通过毛细管作用在膜上向前移行.利用这种性能建立了两种不同类型的快速检验方法.常用的固相膜为硝酸纤维素(nitrocellulose, NC)膜.     

双特异抗体在固相酶联免疫测定中的应用初探

目的 了解双特异抗体在固相酶联免疫方法中对抗原或抗体的固相化是否有优化作用。方法 通过血型糖蛋白A（GPA），将抗GPA，抗HIVp24抗原的双特异抗体间接包被到固相上，建立检测HIVp24抗原的“间接”双抗夹心ELISA方法，并把“间接”双抗夹心EISA方法对HIVp24抗原的检测结果与抗HIVP24抗原单克隆抗体直接包板的“直接”双抗夹心EISA方法进行比较。结果 用双特异抗体建立的“间接”双抗夹心ELISA方法对HIVp24抗原的检测下限为3.2ng/ml，抗HIVp24单克隆抗体直接包板的“直接”双抗夹心EISA方法对HIVp24抗原的检测下限为6.3ng/ml。结论 结果表明双特异抗体对ELISA方法的检测效果有改善作用。     

血清铁蛋白的固相酶免疫测定法

许多研究表明,血清铁蛋白浓度能正确地反映人体铁的贮存情况。本文作者介绍一种测定血清铁蛋白的酶免疫方法。方法灵敏,酶标记的制备简单,操作时间短,血清用量少。原理血清标本在用兔抗人铁蛋白抗体包被的聚苯乙烯管中孵育,除去过剩血清后,加入辣根过氧化物酶-人铁蛋白抗体结合物。经短时间孵育后,除     

血清胎盘催乳激素的酶标记免疫测定

母亲血清中胎盘催乳激素(HPL)的测定是一个很好的胚胎功能试验.血清中的HPL浓度与胚胎的重量相关,随着胎儿的生长而增加,在胎龄约为35周时达最高值.HPL的降低,反映了胎儿生长延缓、惊厥前期毒血症中的胎儿损伤、死胎或分娩时     

酶免疫测定进展

1971年瑞典斯德哥尔摩大学的Engvall和Perlmann[1]与荷兰Organon Tecknika公司的van Weemen和Schuurs[2]分别发表了首创的以酶作为标记物的免疫测定(enzyme immunoassay,EIA);瑞典学者称之为"酶联免疫吸附剂测定"(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA),因为测定中应用了固相吸附剂以便于分离"游离的"和"结合的"酶结合物.1974年Voller等在《世界卫生组织公报》上发表了以实验室中通用的8×12孔塑料微量滴定板(简称微板)为固相的ELISA方法检测血清中疟疾抗体的报告等[3],展示了ELISA在医学检验中广阔的应用前景.其后世界卫生组织在各国举办了"ELISA讲习班".1978年在上海和北京的讲习班上,Voller和Bidwell作了讲演.这一活动促进了国内开展ELISA的研究和应用.1983年用ELISA检测乙型肝炎标志物的研究报告发表[4],推动了国产ELISA试剂的大规模生产和广泛的临床应用.     

固相酶连续流动法检测血清无机磷

检测血清中无机磷大多应用磷钼酸呈色法,受pH值和蛋白浓度的显著影响,准确性不足。酶法测定已有数种方法,本文介绍连续流动(FI)系统中使用固相酶检测无机磷。该方法是根据磷对核苷磷酸化酶(Np)具有激活作用,将Np和黄嘌呤氧化酶(XOD)固定在FI系统中,检测二聚体的对羟基苯乙酸(P-HpA)发射的荧光,P-HpA最大激发光是325nm,最大发射光是425nm。其反应过程如下:     

脂质体——一种新的免疫测定固相载体微球

脂质体由于其独特的生物学特性,而成为一种不同于常规的胶乳颗粒、葡聚糖凝胶及红细胞等的新型固相载体微球,其应用于胶乳凝集试验、放射免疫试验和流式细胞仪测定等免疫测定技术中,表明了脂质体这种新型载体微球在免疫测定中有广阔的应用前景。     

唾液中睾酮直接固相酶免疫测定法

测定唾液中的睾酮目前多用放免法(RIA),这类方法绝大多数需用有机溶剂抽提睾酮;也有报道需要抽提步骤的酶免疫法(EIA)。为简化操作,作者建立了一种在微滴定板孔直接测定唾液中睾酮的竞争性固相EIA,并测定了年龄在15～48岁的65例健康男性自愿者的唾液中的睾酮含量。方法:收集研究对象禁食至少1小时后的唾液2～5ml 于聚苯乙烯试管中置-20℃备用。分析时,将标本融化后置56℃2小时,取出后3000×g 离心15分钟,上清液作测睾酮用。微滴定板每孔加入稀释2000倍的抗睾酮抗血清100μl 包被,置37℃90分     

固相免疫吸附血凝技术检测血清中HBsAg

固相免疫吸附血凝技术(SPISHA)是一种与ELISA相似的免疫检测方法,其特点是不用酶结合物而用致敏的红细胞作指示剂(国外医学生物化学与临床俭验分册,9(5):37,1988)。该技术具有操作简单,灵敏度高,特异性强,费用低廉等优点。我们利     

肾病患者血清脂蛋白（a）中纤维蛋白溶酶原位点酶免疫测定意义

为了检测脂蛋白（ａ）〔Ｌｐ（ａ）〕中的纤维蛋白溶酶原（Ｐｇ）位点，建立了用单克隆抗载脂蛋白（ａ）为包被抗体，酶标抗Ｐｇ为检测抗体的双抗体夹心酶联免疫吸附法。慢性肾衰（ＣＲＦ）患者Ｌｐ（ａ）中Ｐｇ位点、Ｐｇ／Ｌｐ（ａ）比值较对照组显著升高。提示ＣＲＦ患者体内Ｌｐ（ａ）发生氧化修饰、合成增加导致Ｌｐ（ａ）同Ｐｇ同源性增加，更具致动脉粥样硬化发生的危险性。     

固相聚丙烯试管“夹心”酶免疫法测定血清铁蛋白

作者介绍采用聚丙烯试管作固相,辣根过氧化物酶(HRP)标记铁蛋白抗体的“夹心”法,测定人体血清铁蛋白。该法简单、快速、灵敏。材料和方法:1.试管处理:每根聚丙烯试管内分别加入1ml浓度为1g/L的戊二醛,56℃保温3小时,蒸馏水清洗3次。2.抗体包被:加1ml 10mg/L兔抗人铁蛋白抗体(溶于pH9.6碳酸盐缓冲液),4℃3天。试管可保存10周,用前用洗涤液(含0.05%吐温20的生理盐水)洗3次。3.测定:每份样品(包括对照、标准)     

血浆孕酮固相酶免疫荧光测定法

本文介绍用固相酶免疫荧光法测定8例正常妇女月经周期血浆中孕酮的含量。该方法设备简单,操作方便,在灵敏度与特异性方面可与RIA法媲美。标准曲线的有用范围为0.25～15.7ng/ml。用乙醚抽提血浆中孕酮的回收率在90%以上。     

聚苯乙烯对蛋白质的吸附特征及其在固相免疫测定中的意义

固相放射免疫分析(SPRIA)及酶联免疫吸附试验(ELISA)在生物科学中的应用日益广泛。进行 SPRIA 及 ELISA 一般都以聚苯乙烯作为固相载体。以往,人们很少注意聚苯乙烯对抗原或抗体蛋白的吸附特征。由于该特征对固相免疫测定结果有较大的影响,本文拟对这方面的研究资料作一简要的回顾。聚苯乙烯对蛋白质的吸附特征蛋白质是通过疏水键来连结聚苯乙烯的。在连接过程中其净电荷(net charge)作用甚微。早先有人认为,疏水表面材料对蛋白质的吸附作用及结合稳定性取决于蛋白     

检测血清淀粉样蛋白A(SAA)的固相酶免疫试验

血清淀粉样蛋白A(SAA)和C 反应性蛋白(CRP)为主要的急性时相反应物,它们在炎症患者血清中可早期并明显增高(100～1000倍),提示这二种反应物在临床上可用以监测急性期反应。但临床上检测SAA 远没有CRP 普遍,其主要原因是     

人体甲胎蛋白的酶-免疫测定

无脑畸形和脊柱裂等神经管缺损,可通过羊水和母体血清中甲胎蛋白含量的测定进行诊断。但测定母体血清中这种低浓度的蛋白质,需要一个象酶-免疫测定法那样灵敏和特异的检测方法。该法的主要试剂是酶标记的抗原或抗体。异种双功能试剂m-顺丁烯咪唑苯甲酰-N-羟琥珀酰亚胺酯(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester)作为β-半乳糖苷酶标记抗体,与其他酶标记抗体操作相比较,能发现产生活性最高的结合物。本文目的在于评价用这种操作制备的结合物在甲胎蛋白酶-免疫测定法中的性能。对家兔的特异抗人甲胎蛋白抗血清的免疫球蛋白G组分(1mg溶于1ml缓冲液中),用m-顺丁烯咪唑     

乙型肝炎表面抗原的放大酶免疫测定

目的提高测定乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）试剂盒的敏感怀。方法 建立催化指标物沉着（ＣＡＲＤ）放大系统，将其用于酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）试剂盒测定ＨｓＡｇ，并比较放大和未放大测定的敏感性。结果ＥＬＩＳＡ试剂盒加入放大系统后，测定敏感性提高约５倍。结论ＣＡＲＤ放大系统用于ＨＢｓＡｇＥＬＩＳＡ放大测定，查明显提高测定敏感怀，具有较好的实用性。