芬太尼调控LINC00184抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭

目的:研究芬太尼对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡和侵袭等生物学行为的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,采用CCK-8实验、克隆形成实验检测芬太尼对SKOV3细胞体外增殖的影响;分别采用流式细胞术和Transwell实验检测芬太尼对SKOV3细胞凋亡和侵袭能力的影响;Western blot检测细胞增殖、凋亡及侵袭相关蛋白表达。qRT-PCR检测LINC00184在卵巢癌细胞系和正常卵巢上皮细胞株的表达;构建LINC00184过表达质粒并转染SKOV3细胞,观察上调LINC00184表达对芬太尼处理的SKOV3细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。结果:芬太尼在体外呈时间和浓度依赖性抑制SKOV3细胞存活,而不明显影响正常卵巢上皮细胞HOSE的存活率。相比对照组,使用5 ng/mL和10 ng/mL芬太尼处理SKOV3细胞,显著下调LINC00184表达水平,降低体外克隆形成率,抑制Ki67、PCNA蛋白表达（均P＜0.01）;显著增加SKOV3细胞凋亡率,上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达（均P＜0.01）;显著降低侵袭细胞数,上调E-cadherin蛋白表达,下调N-cadherin、MMP9蛋白表达（均P＜0.01）。而使用LINC00184过表达质粒上调LINC00184表达则明显削弱芬太尼对SKOV3细胞的上述作用（P＜0.01）。结论:LINC00184在卵巢癌细胞表达上调,并与卵巢癌细胞的增殖、凋亡和侵袭等生物学特性相关;芬太尼通过下调LINC00184表达抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭,并诱导其凋亡。     

LncRNA ITGA9-AS1在卵巢癌中的表达及与顺铂化疗敏感性的关系

目的:观察长链非编码RNA（LncRNA） ITGA9-AS1在卵巢癌中的表达水平,探究其与顺铂化疗敏感性的关系。方法:选取2017年01月至2019年01月本院收治的64例卵巢癌患者,卵巢摘除手术中采集卵巢癌组织,另收集因卵巢囊肿需作手术切除但已证实无瘤细胞的正常卵巢组织标本,采用实时定量PCR（RT-qPCR）检测卵巢癌及正常卵巢组织、顺铂（DDP）耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP、卵巢癌细胞（OVCAR5、OVCAR8、SKOV3）及永生化卵巢上皮细胞（IOSE29、IOSE80）中LncRNA ITGA9-AS1表达水平。采用慢病毒介导LncRNA ITGA9-AS1转染并筛选稳定细胞株,MTT法检测过表达LncRNA ITGA9-AS1对SKOV3、SKOV3/DDP增殖的影响及对不同浓度（0、1、2、4、8、16 mg/L）DDP的敏感性。结果:与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织中LncRNA ITGA9-AS1表达水平降低（P＜0.05）。与IOSE29、IOSE80细胞比较,OVCAR5、OVCAR8、SKOV3及SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平显著降低（P＜0.05）;与SKOV3细胞比较,SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平显著降低（P＜0.05）。与空白对照组及慢病毒对照组比较,慢病毒过表达组SKOV3、SKOV3/DDP细胞中LncRNA ITGA9-AS1表达水平升高（P＜0.05）,增殖率降低（P＜0.05）,细胞存活率呈DDP浓度依赖降低（P＜0.05）。结论:LncRNA ITGA9-AS1在卵巢癌组织及癌细胞中低表达,过表达LncRNA ITGA9-AS1可增加卵巢癌SKOV3及卵巢癌顺铂耐药细胞SKOV3/DDP的顺铂化疗敏感性。     

IL-12转染对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及其机制

背景与目的:卵巢恶性肿瘤发病率、复发率、转移率均较高,有研究表明IL-12具有明显的抗肿瘤作用.本研究探讨白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)对人卵巢癌SKOV3细胞生长抑制作用机制及其对裸鼠皮下种植瘤成瘤能力的影响.方法:应用脂质体转染技术将含有小鼠IL-12全长基因的质粒转染到SKOV3细胞(SKOV3/IL-12组),同时以空白质粒载体转染SKOV3细胞(SKOV3/neo组)和未转染SKOV3细胞作为对照.ELISA法检测3组细胞上清中IL-12表达.MTT法检测3组SKOV3细胞的抑制率和细胞倍增时间.建立裸鼠皮下卵巢癌种植模型,分别接种SKOV3/IL-12、SKOV3/neo、SKOV3细胞,观察肿瘤生长情况.ELISA法检测裸鼠血清中IL-12及γ-干扰素(gamma interferon,IFN-γ)的表达,免疫组化法检测裸鼠种植瘤中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、微血管密度(microvessel density,MVD)及干扰素诱生蛋白-10(IFN-gamma-inducible protein 10,IP-10)的表达.结果:转染48、60 h后细胞上清中IL-12蛋白表达量,SKOV3/IL-12组[(473.0±38.0)pg/ml、(522.0±32.0)pg/ml]高于SKOV3/neo组[(16.0±1.3)pg/ml、(18.0±1.6)pg/ml]及SKOV3组[(16.0±1.2)pg/ml、(17.0±1.4)pg/ml](P＜0.01).SKOV3/IL-12组细胞增殖抑制率为63.7%,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),SKVO3/IL-12组细胞倍增时间(45.8±2.7)h明显长于SKOV3/neo细胞组(27.6±2.2)h和SKOV3组(28.2±2.1)h(P＜0.01).裸鼠皮下卵巢癌种植模型中,SKOV3/IL-12组裸鼠成瘤率(5/8)低于对照组(8/8)(P＜0.01);平均成瘤时间[(15.0±5.0)天]长于SKOV3/neo组[(7.9±3.2)天]和SKOV3组[(7.8±2.4)天](P＜0.01);SKOV3/IL-12组种植瘤体积、重量和裸鼠体重低于SKOV3/neo组和SKOV3组(P＜0.01),种植瘤生长速度缓慢,抑瘤率达61.3%.SKOV3/IL-12组裸鼠血清中IL-12、IFN-γ表达量高于SKOV3/neo组和SKOV3组(P＜0.01).SKOV3/IL-12组裸鼠种植瘤中IP-10阳性率(100%)高于对照组(P＜0.01),VEGF阳性率(62.5%)及MVD低于对照组(P＜0.01).结论:转染IL-12能有效地抑制SKOV3细胞生长;转染IL-12的SKOV3/IL-12细胞在裸鼠皮下的成瘤能力降低;IL-12可通过诱导IFN-γ诱生IP-10抑制肿瘤血管形成而实现其抗卵巢癌的作用.     

乙酰肝素酶基因转染SKOV3细胞对细胞增殖、黏附、侵袭能力的影响

背景与目的：乙酰肝素酶（heparanase，HPA）是能降解细胞外基质和基底膜的β-D-葡萄糖醛酸内切酶。HPA在人类正常组织局限于胎盘和免疫器官有表达，但在许多恶性肿瘤中有高水平的表达，促进了肿瘤的侵袭和转移。本文探讨乙酰肝素酶基因转染卵巢癌SKOV3细胞后对细胞生长、黏附、侵袭能力的影响。方法：以携带HPA基因的质粒（pCDNA3．0-HPA）经脂质体介导转染SKOV3细胞。RT—PCR法检测转染后HPAmRNA表达水平；MTT法检测SKOV3细胞生长曲线及细胞与细胞外基质的黏附；同质黏附试验和细胞分离试验检测细胞间的黏附和分离能力；利用transwell小室检测卵巢癌细胞SKOV3细胞的侵袭能力；流式细胞仪测细胞周期；免疫组化法检测卵巢癌细胞中HPA蛋白表达。结果：与对照组和空载组比较，转染组HPA mRNA水平上调，差异有显著性（t=-128．726，-96．959，P〈0．01）；细胞周期中S期指数明显增多；细胞生长曲线显示细胞生长速度增快；对细胞外基质的黏附率明显升高（t=11．824，11．234，P〈0．01）；同质黏附率降低（t=-14．455，-18．348，P〈0．01）；细胞分离率增强（x^2=869．847^b，796．068^b，P〈0．01）；穿透重组基底膜的细胞数目显著增高（t=11．964。12．263，P〈0．01）；细胞浆中的HPA蛋白表达显著上升。结论：转染HPA基因可以促进卵巢癌细胞的生长增值，增强卵巢癌细胞的侵袭转移能力。     

卵巢癌组织中VEGF及MVD表达及其临床意义

目的 分析微血管密度(MVD)以及卵巢上皮性肿瘤血管内皮生长因子(VEGF)的表达与卵巢癌临床病理因素的关系及两者的相关性.方法 选取手术切除的卵巢上皮性肿瘤标本88例以及正常卵巢组织标本35例,采用免疫组化染色方法检测所有标本中VEGF及MVD的表达情况,分析两者相关性及与卵巢上皮性肿瘤临床病理因素的关系.结果 VEGF在卵巢癌组织中的表达阳性率为92.0％及MVD平均值为(30.26±8.69),显著高于良性卵巢上皮性肿瘤组织VEGF的阳性表达率[52.6％,(11.52±3.46)] (P ＜0.05);而良性卵巢上皮性肿瘤组织中VEGF阳性表达率及MVD平均值均高于正常对照组(P＜0.05).VEGF阳性表逸的卵巢癌组织中MVD平均值显著高于VEGF阴性表达者,VEGF阳性表达与MVD平均值呈正相关(P＜0.05).卵巢癌组织中VEGF阳性表达与肿瘤临床分期及细胞分化程度存在明显相关性(P＜0.05),而与肿瘤直径、组织学类型以及患者年龄无明显相关性(P＞0.05).MVD与肿瘤临床病理特征无明显相关性(P＞0.05).结论 VEGF及MVD均能反映卵巢上皮性肿瘤的良恶性和恶性进展程度,并可能成为卵巢癌临床生物学治疗的参考指标.     

自噬基因Beclin1与上皮性卵巢癌发生、发展的相关性研究

背景与目的:有研究表明自噬的抑制与肿瘤的发生有关,沉默自噬基因Beclin1可导致多种恶性肿瘤的发生.本研究探讨Beclin1基因在上皮性卵巢癌发生、发展中的作用,并分析其过表达对人卵巢癌细胞株SKOV3体外生长的影响.方法:用免疫组化检测25例正常卵巢组织、25例良性上皮性卵巢肿瘤、19例交界性上皮性卵巢肿瘤及69例上皮性卵巢癌组织的Beclin1表达;构建真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,脂质体法分别将质粒pcDNA3.1/Beclin1、pcDNA3.1转染人卵巢癌细胞株SKOV3,用MTT法分析外源性Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,并用流式细胞仪检测凋亡情况.结果:正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤组织中Beclin1表达的积分光密度(integrated optical density,IOD)值均较高,两者之间的差异无显著性(P＞0.05);交界性卵巢肿瘤组织中Beclin1的表达降低,而在上皮性卵巢癌中Beclin1表达的IOD值最低,与正常卵巢组织比较差异有显著性(P＜0.05).ocDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后细胞生长抑制率为(68.75±5.10)%,而pcDNA3.1转染组为(10.91±4.20)%,两者之间差异有显著性(P＜0.05).pcDNA3.1/Beclin1转染后72 h SKOV3细胞的凋亡率为19.07%,高于pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有显著性(P＜0.05).结论:Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达下调,可能与上皮性卵巢癌的发生、发展有关;自噬基因Beclin1的过表达可抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖,并诱导其凋亡.     

RIN1蛋白在卵巢癌细胞和组织中的表达及其临床病理意义

目的 探讨ras及rab作用因子1（RIN1）蛋白在卵巢癌细胞的表达水平及定位,并探讨其在卵巢肿瘤组织中的表达水平及临床意义。方法 采用免疫印迹（Western blotting）法检测RIN1蛋白在人正常卵巢上皮细胞及卵巢癌细胞株OVCAR3、SKOV3和HO8910中的表达水平及定位;检测其在17例卵巢正常组织和91例卵巢肿瘤组织中的表达并分析其与卵巢癌分期和组织分化程度的关系。结果RIN1蛋白在卵巢癌细胞 OVCAR3、SKOV3和HO8910中的相对表达量（0.3641±0.0614、0.6454±0.0835和0.7925±0.1491）高于人正常卵巢上皮细胞（0.0679±0.0269）,差异有统计学意义（P＜0.05）,且主要分布于卵巢癌细胞胞浆中。RIN1蛋白在37例良性卵巢肿瘤、10例交界性卵巢肿瘤及44例恶性卵巢肿瘤组织中相对表达量分别为0.3456±0.1870、0.5587±0.2138和0.7236±0.2232,均高于其在17例卵巢正常组织中的表达水平（0.1284±0.0982）,差异有统计学意义（P＜0.01）,且RIN1蛋白的表达随卵巢病变程度的加重而升高;RIN1蛋白表达随卵巢癌手术、病理分期及组织分化程度的演进而增加。结论 RIN1蛋白在卵巢癌细胞中高表达且定位于胞浆中;RIN1蛋白高表达与卵巢癌发生发展密切相关,其可作为卵巢癌早期诊断的一个新的肿瘤标志物,并有望成为卵巢癌治疗的新靶点。     

双基因shRNA干扰乙酰肝素酶在卵巢癌细胞中表达的实验研究

目的：采用编码2条短发卡式RNA(shRNA)的抗乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)特异性载体干扰卵巢癌细胞中Hpa的表达,观察其对肿瘤生长转移的抑制作用。方法：以脂质体介导的方法将自行设计和构建的抗Hpa短发卡式RNA (Hpa-shRNA)基因真核表达载体稳定转染人卵巢癌细胞SKOV3；流武细胞仪鉴定转染效率,免疫组化和实时定量RT-PCR检测转染前后卵巢癌细胞中Hpa蛋白和mRNA表达,Boyden小室观测细胞增殖和侵袭能力的变化,透射电镜观察卵巢癌细胞超微结构改变。结果：Hpa mRNA表达在SKOV_3-Hpa(转染Hpa)明显升高(P＜0．01),SKOV3-Hpa-shRNA(转染Hpa- sh RNA)显著降低(P＜0．01),SKOV3-DZ-shRNA(转染非特异性sh RNA片段)和SKOV3无显著性差异(P＞0．05)。电镜下,SKOV3-Hpa组Hpa蛋白表达最为明显,SKOV3-Hpa-shRNA Hpa蛋白则最低,各组间比较差别有显著性意义(P＜0．01)。SKOV3-Hpa细胞器发达,细胞表面绒毛丰富,细胞间连接稀少。SKOV3-Hpa-shRNA以变形为主,细胞表面绒毛少,细胞器不发达,部分见线粒体皱缩,肿胀和空泡样改变。SKOV3-Hpa、SKOV3-DZ-shRNA和SKOV3-Hpa-shRNA 3种细胞穿过人工基底膜的细胞数分别为82．3±9．16,36．1±8．73和18．6±10．5,各组间比较有显著性差异(P＜0．01)。结论：双基因Hpa特异性shRNA可显著抑制卵巢癌细胞Hpa表达,降低细胞侵袭能力。     

卵巢癌中COX-2与VEGF-C的表达及对微淋巴管生成的影响

[目的]探讨环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)与血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth facfor C,VEGF-C)在卵巢癌中的表达及其对微淋巴管生成的影响.[方法]应用免疫组化的方法检测正常卵巢、卵巢良性肿瘤、卵巢癌中COX-2、VEGF-C及微淋巴管密度(microlymphatic density,MLD).[结果]COX-2在卵巢癌中高表达,阳性率为71.1%,而在正常卵巢和良性卵巢肿瘤中未见表达.VEGF-C在卵巢癌中表达较正常卵巢和良性卵巢肿瘤中明显增加(P＜0.01).COX-2、VEGF-C在卵巢癌中表达与临床分期、组织学类型、细胞分级无关(P＞0.05),而与淋巴结转移有关(P＜0.05).COX-2表达和VEGF-C呈等级相关(rs=0.415 P＜0.01)、COX-2和VEGF-C均阳性者MLD数量较均阴性者增加(P＜0.01).[结论]卵巢癌组织中存在COX-2、VEGF-C表达,COX-2可能通过VEGF-C促进肿瘤微淋巴管生成.     

Rac1蛋白在人卵巢浆液性腺癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3迁移能力的影响

目的探讨Rac 1蛋白在人卵巢浆液性腺癌组织中的表达情况及其对卵巢癌细胞SKOV3迁移能力的影响。方法采用蛋白质印迹法(Western blot)检测59例卵巢浆液性腺癌组织、31例卵巢良性浆液性囊腺瘤组织和3 5例卵巢正常组织中Rac 1蛋白的相对表达量。筛选出抑制Rac 1蛋白表达效果最佳的载体,构建稳定转染细胞株SKOV3-Racli;采用细胞划痕实验检测SKOV3-Racli细胞的迁移能力。结果卵巢浆液性腺癌组织中Racl蛋白的相对表达量高于卵巢良性浆液性囊腺瘤组织和卵巢正常组织(P<0.05)。与阴性质粒比较,1号片段质粒的抑制率为12.59%,2号片段质粒的抑制率为56.48%,3号片段质粒的抑制率为73.68%。与野生型SKOV3组相比,SKOV3-Racli细胞组SKOV3-Racli细胞的迁移能力下降(P <0.05)。结论 Rac1蛋白对卵巢浆液性腺癌细胞迁移能力的影响可能与下调卵巢浆液性腺癌组织中Rac 1蛋白的表达有关。     

miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 采用荧光定量RT-PCR和Western blot法检测卵巢癌组织、癌旁正常上皮结缔组织和HO-8910细胞、正常卵巢上皮细胞的miRNA-27a和SPRY2表达水平;MTT法检测转染细胞的增殖情况;Transwell实验检测细胞侵袭情况;荧光素酶分析验证miRNA-27a对SPRY2的靶向调控能力;免疫荧光染色检测miRNA-27a与SPRY2对Wnt/β-catenin信号通路的调控能力.结果 卵巢癌组织、HO-8910细胞中miRNA-27a的表达水平分别高于癌旁正常上皮结缔组织、卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05),而SPRY2的mRNA和蛋白表达水平均低于癌旁正常组织及卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05).与B组相比,C组和E组HO-8910细胞增殖及侵袭能力均下调(P﹤0.05).F组的荧光素酶活性明显高于G组(P﹤0.01).C组的HO-8910细胞中,β-catenin表达上升,且进入细胞核.结论 miR-NA-27a通过靶向抑制SPRY2激活Wnt/β-catenin信号通路,从而促进人卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力.     

RNA干扰沉默基质金属蛋白酶2基因对卵巢癌OVCAR-3细胞诱导体外血管形成能力的影响

 目的　探讨沉默基质金属蛋白酶2（MMP-2）基因对卵巢癌OVCAR-3细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,以及对细胞诱导的体外血管形成能力的影响。方法　合成特异性靶向基因的小干扰RNA （siRNA）并转染卵巢癌OVCAR-3细胞（MMP-2沉默组）,以非特异性序列转染细胞作为阴性对照组,以培养液代替转染siRNA的试剂作为空白对照组;采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测转染后48 h MMP-2及VEGF的mRNA和蛋白表达水平,通过体外血管形成实验检测卵巢癌OVCAR-3细胞诱导的体外血管形成能力。结果　与阴性对照组相比,MMP-2沉默组转染48 h,OVCAR-3细胞MMP-2和VEGF mRNA表达量分别下降了78.8 %和75.5 %（P＜0.05）,蛋白表达量分别下降了81.2 %和78.3 % （P＜0.05）;体外血管形成实验显示,沉默MMP-2基因后卵巢癌OVCAR-3细胞诱导的体外血管形成能力明显降低（P＜0.05）。结论　沉默MMP-2基因可抑制卵巢癌细胞VEGF表达,并能够抑制卵巢癌细胞诱导的体外血管形成能力,抑制MMP-2基因有助于抗血管形成,可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点。     

上皮性卵巢癌Survivin蛋白的表达及拓扑替康对其表达的影响

目的研究上皮性卵巢癌组织中Survivin蛋白表达的差异和不同浓度拓扑替康(TPT)对卵巢癌细胞株SKOV3 Survivin蛋白表达的影响。方法应用免疫组化法检测54例上皮性卵巢癌、25例良性卵巢肿瘤及20例正常卵巢组织中Survivin蛋白的表达,分析其表达与卵巢癌恶性程度及临床病理特征的关系,用不同浓度的TPT作用于对数生长期的SKOV3细胞,检测Sur- vivin蛋白的表达。结果Survivin蛋白在上皮性卵巢癌与良性上皮性卵巢肿瘤及正常卵巢组织中的表达差异具有显著意义(P＜0．01)。Survivin蛋白的表达与临床病理特征有关,Ⅲ～Ⅳ期的表达率(78．4%)明显高于Ⅰ～Ⅱ期(41．2%)(P=0．007),且肿瘤的分化程度越低。Survivin蛋白表达越强(P=0．027)．伴有淋巴结转移者(96．7%)明显高于无淋巴结转移者(29．2%)(P＜0．01)．伴有腹水转移者(94．7%)明显高于无腹水转移者(51．4%)(P＜0．001),但是与卵巢的组织学类型无关(P=0．977)。随着TPT浓度的增加,SKOV3中Survivin蛋白表达减少(P＜0．001),各组Survivin蛋白表达差异具有统计学意义。结论Survivin蛋白的表达与卵巢癌的恶性程度有关,恶性程度越高Survivin蛋白的表达越多,而TPT作用于SKOV3细胞可以抑制其Sur- vivin蛋白的表达。     

ING4与VEGF在卵巢肿瘤中的表达及其临床意义

目的:研究ING4与VEGF在卵巢癌中的表达及其与卵巢癌发生发展的关系。方法:采用免疫组化SP法检测104例卵巢组织中ING4与VEGF的表达情况,并用CD43标记血管内皮计数MVD。结果:ING4蛋白在正常卵巢组织、卵巢交界性肿瘤组织和卵巢癌组织中表达呈阶梯性降低,三组间差异有统计学意义(P＜0.01),VEGF蛋白在正常卵巢组织、卵巢交界性肿瘤组织和卵巢癌组织中表达呈阶梯形增高,三组间差异有统计学意义(P＜0.01)。ING4的表达随着FIGO分期升高和病理分级的降低表达减弱,各组间有显著差异(P＜0.01)。VEGF的表达随着FIGO分期升高和病理分级的降低表达增强,各组间有显著差异(P＜0.05）。ING4和VEGF在卵巢癌组织中的表达呈负相关（r=-0.29,P＜0.05）。ING4表达阴性者MVD高于ING4阳性者(P＜0.01),VEGF表达阳性者MVD高于VEGF阴性者(P＜0.05)。联合分析表明ING4阴性VEGF阳性组预后比其它蛋白表达组明显较差(P＜0.05)。结论:ING4和VEGF表达与卵巢癌的发生发展和血管生成、转移、预后密切相关。     

化学合成siRNA对卵巢癌SKOV3细胞中STAT3基因表达的抑制作用

目的:观察小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对卵巢癌SKOV3细胞STAT3表达的抑制作用及其诱导凋亡作用的机制。方法:将STAT3 siRNA经LipofectamineTM2000脂质体介导的方法将其转染到卵巢癌细胞株SKOV3。实验分为以下3组:空白对照组(未经转染的人卵巢癌SKOV3细胞)、阴性对照转染组(阴性干扰STAT3)及特异性转染组(干扰STAT3)。用MTT法检测siRNA转染后SKOV3细胞增殖活性;流式细胞仪检测其对细胞凋亡的影响,免疫荧光法检测STAT3蛋白水平的变化,qRT-PCR和Western blot方法分别检测STAT3 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:成功转染STAT3干扰片段,转染率达90%。siRNA干扰STAT3组明显抑制卵巢癌细胞增殖活性,细胞凋亡率33.7%,并且下调STAT3蛋白在SKOV3细胞中的表达。RT-PCR和Western blot结果显示:siRNA STAT3组明显抑制人卵巢癌细胞SKOV3中STAT3 mRNA和蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:特异性转染组48h后能有效地抑制SK-OV3细胞内STAT3的表达、抑制细胞增殖,其抑制卵巢癌细胞的机制可能与抑制了STAT3信号通路,促进细胞凋亡有关,为卵巢癌的生物治疗提供了一定的依据。     

RIP1蛋白在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌细胞增殖和化疗敏感性的影响

目的:探讨RIP1对卵巢癌细胞增殖和化疗敏感性的影响。方法:通过实时定量PCR法检测RIP1在卵巢癌组织和癌旁组织中的表达;免疫组化方法分析卵巢癌组织和癌旁组织中RIP1蛋白的表达;实时定量PCR法以及Western blot法检测卵巢上皮细胞及卵巢癌细胞中RIP1的表达;通过在SKOV3卵巢癌细胞中敲除RIP1蛋白及在A2780卵巢癌细胞中过表达RIP1蛋白,采用MTT法检测其增殖能力的改变,并联合克隆形成法考察细胞对顺铂敏感性的变化。结果:相比于癌旁组织以及卵巢上皮细胞,RIP1在人卵巢癌组织和卵巢癌细胞中表达有不同程度升高,其中在SKOV3细胞中升高最为显著（P＜0.01）,在A2780细胞中不显著（P＞0.05）;在SKOV3细胞中敲除RIP1,96 h后细胞增殖能力明显降低（P＜0.01）;同时,在A2780细胞株中过表达RIP1,72 h后细胞增殖能力明显升高（P＜0.05）。RIP1敲除后,顺铂对SKOV3细胞的杀伤作用明显升高（P＜0.05）,同时顺铂的IC50降低;RIP1过表达后,顺铂对A2780细胞的杀伤作用明显降低（P＜0.05）,同时顺铂的IC50升高。结论:RIP1作为一种癌基因,能够促进肿瘤细胞的增殖,并降低肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

CD44v6在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其对卵巢癌细胞株侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨CD44v6(CD44 variant domain 6,CD44v6)在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其对卵巢癌细胞株SKOV3侵袭和迁移能力的影响.方法:收集东莞市人民医院妇产科2002年至2010年间手术切除的卵巢上皮性肿瘤标本185例,采用RT-PCR和EnVision-免疫组化染色技术检测卵巢上皮性肿瘤组织中CD44v6的表达.构建CD44v6表达质粒转染SKOV3细胞,分别加入不同浓度anti-CD44v6中和抗体,应用Transwell小室实验检测各组SKOV3细胞侵袭和迁移能力的变化.结果:CD44v6 mRNA和蛋白在卵巢上皮性癌组织中的表达高于卵巢良性上皮性肿瘤组织和正常卵巢组织(P＜0.05).CD44v6的表达与卵巢上皮性癌的病理组织学分级、预后相关(P＜0.05).体外实验显示,上调CD44v6的表达可以促进SKOV3细胞的迁移能力,而加入anti-CD44v6中和抗体后,可消除CD44v6对SKOV3细胞迁移的促进作用.结论:CD44v6表达上调参与卵巢上皮性肿瘤的发生、发展.     

miR-144-3p靶向zeb1调控卵巢癌细胞SKOV3的增殖和凋亡

目的:探讨miR-144-3p是否通过靶向E盒锌指结合蛋白1（zeb1）调控卵巢癌细胞SKOV3的增殖和凋亡。方法:qRT-PCR检测miR-144-3p在卵巢癌细胞和正常人卵巢上皮细胞中的表达差异。在卵巢癌细胞SKOV3中转染miR-144-3p mimics,MTT法测定细胞增殖,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中cyclinD1、p27、C-caspase-3蛋白表达。生物信息学软件预测miR-144-3p的靶基因可能为zeb1,荧光素酶报告系统鉴定其靶向关系。在卵巢癌细胞SKOV3中共转染miR-144-3p mimics、pcDNA3.1-zeb1,利用上述方法测定细胞增殖、周期和凋亡变化。结果:miR-144-3p在卵巢癌细胞中的表达水平低于正常人卵巢上皮细胞。转染miR-144-3p mimics后的卵巢癌细胞SKOV3增殖能力下降,细胞周期被阻滞在G1期,细胞凋亡增多,细胞中cyclinD1蛋白表达减少,p27、C-caspase-3蛋白表达增加。miR-144-3p靶向调控zeb1表达。pcDNA3.1-zeb1可以逆转miR-144-3p mimics对卵巢癌细胞增殖抑制、周期阻滞和凋亡促进作用。结论:miR-144-3p靶向zeb1抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖并诱导细胞凋亡。     

C17orf76-AS1在卵巢上皮癌中的表达及其对卵巢上皮癌细胞SKOV3生物学功能的影响

目的 检测C17orf76-AS1在正常卵巢上皮细胞与卵巢上皮癌细胞系中的表达情况并探讨C17orf76-AS1过表达对卵巢上皮癌细胞系SKOV3生物学功能的影响。方法 通过定量PCR（QPCR）方法检测C17orf76-AS1在在卵巢上皮细胞IOSE80及不同卵巢上皮癌细胞系（A2780、SKOV3、OVCAR3、HO-8910和HO-8910PM）中的表达。在pcDNA3.1基础上构建C17orf76-AS1过表达质粒并采用Lipo2000瞬时转染SKOV3细胞,QPCR检测SKOV3细胞中C17orf76-AS1的过表达效率;CCK-8实验检测C17orf76-AS1过表达对SKOV3细胞增殖的影响;Transwell法和划痕实验检测C17orf76-AS1过表达对SKOV3细胞侵袭迁移能力的影响。结果 与正常卵巢上皮细胞IOSE80比较,C17orf76-AS1在A2780、SKOV3、 OVCAR3、HO-8910及HO-8910PM细胞中均呈低表达,分别下降了0.36、0.30、0.46、0.32、0.31倍（P＜0.05）。在SKOV3细胞中过表达C17orf76-AS1,CCK-8结果显示C17orf76-AS1过表达48 h后,SKOV3的增殖能力显著下降了约1.5倍;Transwell结果显示SKOV3细胞迁移能力下降约1.3倍,划痕实验也同样证实过表达C17orf76-AS1后,SKOV3细胞愈合能力显著低于对照组（P＜0.05）。结论 C17orf76-AS1在卵巢上皮癌细胞中异常低表达,其过表达显著降低了卵巢癌细胞增殖和迁移能力。     

MiR-126、血管内皮生长因子的表达与微血管密度在上皮性卵巢癌组织中的变化

目的 探讨miR-126、血管内皮生长因子(VEGF)的表达与微血管密度(MVD)在上皮性卵巢癌组织中的变化及意义.方法 采用qRT-PCR检测21例正常卵巢组织、23例良性卵巢肿瘤组织及45例上皮性卵巢癌组织中miR-126表达水平,采用免疫组化法检测VEGF蛋白表达及MVD.结果 MiR-126在上皮性卵巢癌组织中的表达明显低于正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤组织(P<0.05);VEGF阳性率和MVD在上皮性卵巢癌组织中明显高于正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤组织(P<0.05).上皮性卵巢癌组织中miR-126、VEGF及MVD与FIGO分期、淋巴结转移有关(P<0.05).结论 MiR-126、VEGF可能与上皮性卵巢癌的发生、发展、肿瘤异常血管营养及侵袭转移有关.