体外组织培养模式的构建及转化生长因子促进牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的研究

目的通过构建体外组织培养模式,观察牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的潜力及转化生长因子-β1(TGF-β1)的促进作用。方法获取人第三磨牙牙髓组织,剪碎后与牙本质陶瓷粉(CDP)及2μg/mL TGF-β1混合,将混合物以骨基质明胶(BMG)为载体构建牙髓组织培养模型,在培养3、7、14和21 d后,通过HE和组织特异性染色鉴定有无骨-牙本质基质成分形成,免疫组化检测细胞有无牙本质特异性蛋白——牙本质涎蛋白(DSP)的表达。结果牙髓组织经TGF-β1诱导培养后可进一步矿化,甲苯胺蓝和Mallory染色表明在牙髓组织的中心出现骨-牙本质样基质的沉积,免疫组化检测牙髓细胞开始出现DSP的表达。结论成功构建体外牙髓组织培养模型,该模型能维持牙髓细胞的生长和存活,可用于体外对牙髓细胞的诱导分化观察;该模型模式下TGF-β1可明显促进牙髓细胞向成牙本质细胞的分化诱导潜能。     

体外组织培养模式的构建及转化生长因子促进牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的研究

目的通过构建体外组织培养模式，观察牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化的潜力及转化生长因子-β1（TGF-β1）的促进作用。方法获取人第三磨牙牙髓组织，剪碎后与牙本质陶瓷粉（CDP）及2μg／mL TGF-β1混合，将混合物以骨基质明胶（BMG）为载体构建牙髓组织培养模型，在培养3、7、14和21d后，通过HE和组织特异性染色鉴定有无骨-牙本质基质成分形成，免疫组化检测细胞有无牙本质特异性蛋白——牙本质涎蛋白（DSP）的表达。结果牙髓组织经TGF-β1诱导培养后可进一步矿化，甲苯胺蓝和Mallory染色表明在牙髓组织的中心出现骨-牙本质样基质的沉积，免疫组化检测牙髓细胞开始出现DSP的表达。结论成功构建体外牙髓组织培养模型，该模型能维持牙髓细胞的生长和存活，可用于体外对牙髓细胞的诱导分化观察；该模型模式下TGF-β1可明显促进牙髓细胞向成牙本质细胞的分化诱导潜能。     

人牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化中细胞周期变化

目的 建立成牙本质细胞样细胞体外培养体系,观察体外培养的牙髓细胞向成牙本质细胞分化过程中细胞周期的变化.方法 利用组织块酶解法培养人牙髓细胞并进行鉴定,使用矿化诱导液诱导其向成牙本质细胞样细胞分化.对细胞增殖情况使用流式细胞仪进行细胞周期测定.结果 ①获得的牙髓细胞均为波形丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证明为中胚层来源的细胞.②诱导分化的牙髓细胞在2周左右进入复层生长期;3周左右开始有细胞结节形成,周围细胞呈放射状排列,部分细胞出现细长突起并呈极性排列;4周左右细胞团中央Von Kossa染色为阳性.③在诱导开始后1周,细胞处于活跃的增殖期,以后细胞增殖变慢,3周后多数细胞处于G0G1期.结论 实验成功建立了成牙本质细胞样细胞体外培养体系,所获得的成牙本质细胞样细胞具有成牙本质细胞的部分形态和生物学功能,诱导分化后细胞增殖变慢,是研究成牙本质细胞的较好模型.     

牙髓-牙本质复合体再生的影响因素及其生物学策略

再生性牙髓治疗利用组织工程方法修复缺损牙本质和牙髓组织,再生具有正常生理功能的牙髓-牙本质复合体,以期恢复牙髓的血管神经化和免疫功能并重建管样牙本质。显著影响再生性牙髓治疗效能的因素包括干细胞、生物信号分子和生物支架材料。根据是否来自牙源性组织,干细胞可分为牙源性干细胞（如牙髓干细胞）和非牙源性干细胞（如骨髓间充质干细胞）。鉴于干细胞具有倾向分化为其原始来源组织的特性,牙源性干细胞在再生性牙髓治疗中展现出一定优势。联合应用多种信号分子并通过激活信号转导通路如Wnt/β-catenin、BMP/Smad,对改善干细胞迁移、增殖、成牙本质细胞分化和血管神经再生潜能发挥关键作用。适用于再生性牙髓治疗的生物支架材料包括自然来源材料和人工合成材料,人工合成材料应模仿天然组织进行生物仿生修饰,以营造适宜的再生微环境并实现对信号转导通路的时空调控。牙髓-牙本质复合体再生的真正实现有赖于干细胞移植和干细胞归巢两大策略。干细胞归巢策略因可避免干细胞的体外分离和培养而在临床操作上更具优势,但如何提高干细胞归巢成功率并促进其增殖和分化以实现牙髓-牙本质复合体真正再生仍有待解决。本文介绍了诱导牙髓-牙本质复合...     

牙体机械损伤后牙本质牙髓组织MMP-2和MMP-9表达变化

目的 研究牙体机械损伤后牙本质牙髓组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的变化.方法 以离体第三磨牙(n=30)制作牙体机械损伤的牙本质牙髓复合体体外培养模型(模型组).分别于培养后第3、7、14天收集样本,免疫组化染色、Real-time PCR和Western blotting检测MMP-2和MMP-9在培养后不同时间点的表达.以无牙体损伤的牙本质牙髓复合体培养的离体第三磨牙(n=30)作为对照组.结果 免疫组化染色发现,MMP-2和MMP-9在对照组成牙本质细胞呈阳性表达,在牙髓细胞则呈阴性表达;在模型组,成牙本质细胞和牙髓细胞MMP-2和MMP-9均呈阳性表达.图像分析显示,模型组培养后各时间点MMP-2和MMP-9表达均显著高于对照组(P<0.05);且模型组培养第3天MMP-2和MMP-9表达均显著高于培养第7和第14天(P<0.05).Real-time PCR检测表明,模型组培养后第3天的MMP-2和MMP-9 mRNA表达显著高于培养后第7和第14天(P<0.05).Western blotting检测发现,模型组培养后各时间点均有MMP-2和MMP-9蛋白表达,以培养后第3天时较为明显.结论 在牙体损伤的牙本质牙髓复合体培养过程中,MMP-2和MMP-9表达呈现先增加后减弱,与基质降解和合成的时间相对应.     

牙体机械损伤后牙本质牙髓组织MMP-2和MMP-9表达变化

目的 研究牙体机械损伤后牙本质牙髓组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的变化.方法 以离体第三磨牙(n=30)制作牙体机械损伤的牙本质牙髓复合体体外培养模型(模型组).分别于培养后第3、7、14天收集样本,免疫组化染色、Real-time PCR和Western blotting检测MMP-2和MMP-9在培养后不同时间点的表达.以无牙体损伤的牙本质牙髓复合体培养的离体第三磨牙(n=30)作为对照组.结果 免疫组化染色发现,MMP-2和MMP-9在对照组成牙本质细胞呈阳性表达,在牙髓细胞则呈阴性表达;在模型组,成牙本质细胞和牙髓细胞MMP-2和MMP-9均呈阳性表达.图像分析显示,模型组培养后各时间点MMP-2和MMP-9表达均显著高于对照组(P<0.05);且模型组培养第3天MMP-2和MMP-9表达均显著高于培养第7和第14天(P<0.05).Real-time PCR检测表明,模型组培养后第3天的MMP-2和MMP-9 mRNA表达显著高于培养后第7和第14天(P<0.05).Western blotting检测发现,模型组培养后各时间点均有MMP-2和MMP-9蛋白表达,以培养后第3天时较为明显.结论 在牙体损伤的牙本质牙髓复合体培养过程中,MMP-2和MMP-9表达呈现先增加后减弱,与基质降解和合成的时间相对应.     

两种牙科材料对人胚胎干细胞来源成纤维细胞的细胞毒性研究

目的：观察口腔常用材料氢氧化钙（calcium hydroxide,CH）和复合树脂对人胚胎干细胞来源成纤维细胞（embryo body fibroblasts-H9,EBf-H9）、原代培养人牙髓细胞（human dental pulp cells,hDPCs）及小鼠成纤维细胞L929的细胞毒性,探讨使用EBf H9评价牙科材料生物安全性的可行性。方法：诱导人胚胎干细胞（H9）分化为EBf-H9,原代培养hDPCs,并经免疫细胞化学染色鉴定。用细胞计试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）检测比较梯度浓度CH和复合树脂浸提液对EBf-H9、hDPCs和L929细胞的细胞毒性。结果：CH或复合树脂分别作用24 h和48 h（或72 h）之后,L929细胞的存活率显著低于EBf-H9和hDPCs（P<0.05）,但EBf-H9和hDPCs的细胞存活率没有统计学差异（P>0.05）。结论：对于CH和复合树脂的毒性反应,L929细胞与hDPCs有较大差异,EBf-H9比L929细胞更接近hDPCs的反应,提示在牙科材料生物安全性评价中,人胚胎干细胞来源成纤维细胞具有替代现有细胞检测模型的潜力。     

两种牙科材料对人胚胎干细胞来源成纤维细胞的细胞毒性研究

目的:观察口腔常用材料氢氧化钙(calcium hydroxide,CH)和复合树脂对人胚胎干细胞来源成纤维细胞(embryo body fibroblasts-H9,EBf-H9)、原代培养人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)及小鼠成纤维细胞L929的细胞毒性,探讨使用EBf-H9评价牙科材料生物安全性的可行性。方法:诱导人胚胎干细胞(H9)分化为EBf-H9,原代培养hDPCs,并经免疫细胞化学染色鉴定。用细胞计试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测比较梯度浓度CH和复合树脂浸提液对EBf-H9、hDPCs和L929细胞的细胞毒性。结果:CH或复合树脂分别作用24 h和48 h(或72 h)之后,L929细胞的存活率显著低于EBf-H9和hDPCs(P<0.05),但EBf-H9和hDPCs的细胞存活率没有统计学差异(P>0.05)。结论:对于CH和复合树脂的毒性反应,L929细胞与hDPCs有较大差异,EBf-H9比L929细胞更接近hDPCs的反应,提示在牙科材料生物安全性评价中,人胚胎干细胞来源成纤维细胞具有替代现有细胞检测模型的潜力。     

颅神经嵴干细胞成牙本质样细胞分化诱导的体内实验研究

目的观察诱导颅神经嵴干细胞(cranial neural crest stem cell,CNCSC)后的裸鼠体内成牙本质样细胞表型分化,探讨CNCSC用于牙再生研究的可行性。方法颅神经管组织块无血清条件培养法获取CNCSC,体外经成纤维生长因子8(FGF8)、骨形态发生蛋白2(BMP2)、转化生长因子β1(TGFβ1)、牙本质基质非胶原蛋白等因子诱导后,与胶原-壳聚糖三维凝胶支架复合植入裸鼠背部皮下,免疫组织化学方法检测型胶原表达、牙本质涎磷蛋白(DSPP)表达,鉴定其成牙本质样细胞表型分化特征。结果诱导后CNCSC植入体内后1月表现为型胶原及DSPP阳性表达,2月后DSPP表达增强,局部区域可见极性栅栏状排列的细胞分布,并可见明显的细胞外基质形成。结论CNCSC在体内可向成牙本质样细胞表型分化,为进一步开展牙再生研究奠定了基础。     

颅神经嵴干细胞成牙本质样细胞分化诱导的体内实验研究

目的观察诱导颅神经嵴干细胞（cranial neural crest stem cell，CNCSC）后的裸鼠体内成牙本质样细胞表型分化，探讨CNCSC用于牙再生研究的可行性。方法颅神经管组织块无血清条件培养法获取CNCSC，体外经成纤维生长因子8（FGF8）、骨形态发生蛋白2（BMP2）、转化生长因子β1（TGFβ1）、牙本质基质非胶原蛋白等因子诱导后，与胶原-壳聚糖三维凝胶支架复合植入裸鼠背部皮下，免疫组织化学方法检测Ⅰ型胶原表达、牙本质涎磷蛋白（DSPP）表达，鉴定其成牙本质样细胞表型分化特征。结果诱导后CNCSC植入体内后1月表现为Ⅰ型胶原及DSPP阳性表达，2月后DSPP表达增强，局部区域可见极性栅栏状排列的细胞分布，并可见明显的细胞外基质形成。结论CNCSC在体内可向成牙本质样细胞表型分化，为进一步开展牙再生研究奠定了基础。     

胸腺素β4对增生性瘢痕基质金属蛋白酶-2及9表达作用的影响

目的：研究胸腺素β4对人增生性瘢痕成纤维细胞中基质金属蛋白酶‐2（MMP‐2）和MMP‐9的表达影响,探讨胸腺素β4对增生性瘢痕的作用机制。方法2013年6～9月在南昌大学第一附属医院烧伤整形科手术切取的增生性瘢痕组织（烧伤后6个月内）,体外培养成纤维细胞,分为实验组（胸腺素浓度分别为0．05、0．1、1．0、5．0μg／mL）,对照组（不添加胸腺素β4）,采用反转录‐聚合酶链反应（RT‐PCR）以及蛋白免疫印迹法（Western blot）测定实验组和对照组的MMP‐2、MMP‐9表达变化。结果胸腺素β4作用后增生性瘢痕组织内MMP‐2、MMP‐9水平增加,分别以1．0μg／mL实验组和5．0μg／mL实验组作用最明显,与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论胸腺素β4能剂量依赖性促进MMP‐2、MMP‐9表达,可能是抑制增生性瘢痕的作用因素之一。     

HPV 感染及 MMP－2、MMP－7、MMP－9的表达与子宫颈癌相关性分析

目的：探讨子宫颈癌组织中的人乳头瘤病毒（ human papilloma virus , HPV ）感染及MMP－2、MMP－7、MMP－9的表达与临床病理资料的相关性。方法选取76例子宫颈癌组织,采用组织芯片技术、免疫组织化学技术和统计学方法,对检测HPV、MMP－2、MMP－7、MMP－9的各个指标间进行比较分析。结果 HPV感染与高分化子宫颈鳞癌有关（ P＜0．01）;与有无淋巴结转移和术前有无化疗有关（ P＜0．01）。 MMP－7和MMP－9在子宫颈癌组织中的表达与有无HPV感染有明显的相关性（ P＜0．001）,而MMP－2的表达与有无HPV感染无相关性（ P＞0．05）。结论在子宫颈癌组织中HPV感染,MMP－7和MMP－9的表达,与淋巴结转移有关。子宫颈癌术前经过一段时间的化疗后再进行手术,可预防肿瘤的复发。     

苯那普利对抗Thy1.1大鼠系膜基质积聚的影响

目的 观察血管紧张素转换酶抑制剂苯那普利对系膜增殖性肾炎（MsPGN）大鼠系膜基质的影响。方法 用抗胸腺细胞血清（ATS）诱导SD大鼠产生MsPGN后，用苯那普利治疗24d，处死大鼠并用ELISA方法测定大鼠肾小球系膜中胶原Ⅳ（ColⅣ）、胶原Ⅲ（ColⅢ）、层粘连蛋白（LN）、纤维连接蛋白（FN）的含量。结果 治疗组大鼠系膜中ColⅣ、ColⅢ、LN、FN的含量明显低于对照组大鼠系膜中各相应成分的含量，各对应成分之间两两比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论 苯那普利对MsPGN大鼠系膜基质的积聚有明显的抑制作用。     

塞来昔布对体外培养软骨细胞活性及细胞外基质合成影响的实验研究

目的:通过细胞学实验来研究塞来昔布对体外培养软骨细胞活性及细胞外基质合成的影响.方法:用酶消化法分离兔关节软骨细胞,利用相差显微镜和H.E.染色软骨细胞形态学观察,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色,Western blot检测金属蛋白酶(MMP-1)、MMP-3蛋白,阿利新蓝法检测糖氨多糖(GAG)的合成.结果:随传代次数增加,细胞逐渐变大,72 h后见细胞大部分贴壁并延伸呈成纤维细胞形态.5 W时A组、B组、C组的阳性免疫染色的灰度值A、C组灰度弱于B组(P＜0.05),A、C组间差异无统计学意义(P＞0.05).在3、5 w时C组软骨细胞较B组软骨细胞的MMP-1、3蛋白表达量下降,P＜0.01,A组在各周无明显变化.3 W与5 W时A、C组糖氨多糖含量高于B组(P＜0.01).结论:塞来昔布可以抑制IL-1所产生的不良效应;可通过减少MMPs的合成,保护软骨基质的降解来维持细胞活性与细胞外基质的合成.     

舒胸巴布剂基质的研究

目的 探讨舒胸片由口服剂型改为巴布剂剂型的可行性。方法 用正交实验法筛选适合本药的最佳基质条件,实验采用L9（3^4）正交实验法对舒胸巴布剂的基质进行筛选。结果 认为A1B1C3为最佳配比,即聚丙烯酸钠：卡波姆：甘油=4：0．5：15。结论舒胸巴布剂基质处方可行。     

基质金属蛋白酶-8对角膜基质胶原的作用研究

目的 探讨基质金属蛋白酶-8(MMP-8)对角膜的作用.方法 选取健康C57BL/6J小鼠15只,右眼角膜基质内注射10μL MMP-8作为实验组,左眼给予等量生理盐水作为对照组.于0、4、8h使用双光子显微镜二次谐波成像技术对活体小鼠角膜逐层扫描,Imaris软件对所得图像三维重建,计算图像信号强度.4、8h在裂隙灯下评价角膜混浊度.8h角膜取材,测定各角膜羟脯氨酸水平.结果 0h实验组及对照组小鼠角膜基质纤维信号强度分别为89.7±11.2、85.3±7.0,4h分别为14.5± 3.4、46.6±14.0,8h分别为11.0±4.6、34.6±12.5,4h及8h,实验组较对照组角膜基质信号强度明显降低(P<0.05);4h及8h,实验组较对照组角膜明显混浊(P<0.05);8 h测得实验组与对照组角膜羟脯氨酸水平分别为(0. 433±0.090)、(0. 590± 0. 133)μg/mg,实验组明显低于对照组(F=7. 193,P=0. 014).结论 MMP-8对小鼠角膜基质胶原有明显的降解破坏作用,导致角膜透明度下降.     

脂多糖对血管平滑肌细胞表达MMP-2、9及TIMP-1、2的影响

目的 探讨脂多糖(1ipopolysaccharides，LPS)对培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)表达基质金属蛋白酶2、9(matrix metalloproteinase-2，-9；MMP-2，MMP-9)及其组织抑制因子1、2(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases-1，-2；TIMP-1，TIMP-2)的影响。方法 贴块法进行血管平滑肌细胞培养，细胞免疫化学检测基质金属蛋白酶及其抑制剂的蛋白表达，原位分子杂交分析MMP-9 mRNA表达。结果 LPS是MMP-9的强诱导物。可在蛋白及mRNA水平诱导MMP-9的表达，同时LPS可诱导TIMP-1的表达，作用较对MMP-9减弱。LPS对二者诱导作用强度与LPS的浓度及作用时间呈正相关。LPS降低TIMP-2的表达，其表达与LPS的浓度及作用时间呈负相关。LPS对MMP-2的表达没有明显作用。结论 LPS诱导平滑肌细胞MMP-9、TIMP-1表达的同时可降低TIMP-2的表达，其作用呈浓度时间依赖性，在动脉粥样硬化发病过程中可能起一定作用。     

EMMPRIN-MMPs对心室重构影响的研究进展

心室重构是心血管疾病心脏从代偿向失代偿转化的一种重要的病理过程,随着基质金属蛋白酶（MMPs）对心室重构中细胞外基质（ECM）重构重要性的确立,MMPs的合成和活性调控也日益受到重视。细胞外基质金属蛋白酶诱导物（extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN）由于其在其他组织中的独特的诱导MMPs合成、调节MMPs水平和活性的作用,引起了研究者对EMMPRIN-MMPs是否也影响心室重构的浓厚兴趣。本文就该通路对心室重构影响的研究进展进行综述。     

卡维地洛对兔心肌梗死后胞外基质重构及基质金属蛋白酶的影响

目的:探讨第三代β受体阻滞剂卡维地洛对兔心肌梗死(MI)后胞外基质重构的作用及机制. 方法:将36只新西兰大耳白兔随机分为MI组、MI 卡维地洛组、假手术组,每组12只. 采用结扎冠状动脉左室支建立MI模型,另以开胸后在相应部位挂线不结扎为假手术组. 4 wk后行血流动力学检查; 测量体质量(BW)、左、右心室质量(LVW,RVW); 苦味酸-酸性品红染色检测非梗死区的胶原容积分数(CVF); 免疫组化检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达,酶谱法测定二者的活性. 结果: MI后4 wk存活动物为MI组8只,MI 卡维地洛组9只,假手术组10只. MI组RVW, LVW/BW, 左室舒张末压(LVEDP)、非梗死区CVF均显著升高,MMP-2, MMP-9的表达及其活性亦明显升高(P均＜0.01);MI 卡维地洛组与MI组比较,RVW/BW, LVEDP, CVF显著降低(P＜0.05～0.01). MMP-2, MMP-9表达及活性显著减弱(P＜0.05～0.01). 结论:卡维地洛缓解了MI后心肌细胞外基质的重构,其机制可能与对MMPs的表达和活性调节有关.     

葛根芩连巴布剂的制备工艺研究

目的研制葛根芩连巴布剂,优化其制备工艺。方法采用正交实验设计法选择葛根芩连巴布剂制备工艺条件。确定以快黏力、剥离强度、内聚力和外观综合得分为葛根芩连巴布剂制备工艺考察指标,对结果进行直观分析和方差分析。结果最佳工艺为a2b2c2d1。即浸膏粉用量为10%,基质配比为聚乙烯醇：明胶：羧甲基纤维素钠：卡波姆：聚丙烯酸钠：甘油/丙二醇：高岭土为1：2：0.4：1：1.5：4/6：4;在50℃炼合15min,经减压脱气后涂布。结论按最佳工艺条件制备的葛根芩连巴布剂具有良好的延展性,外观平整光滑,且能满足黏弹性要求。