p27~(Kip1)与卵巢肿瘤

近年来 ,越来越多的学者注意到细胞增殖周期的失调在肿瘤的发生中所起的关键作用 ,特别是 G1期的启动和失调与肿瘤的发生、发展密切相关。p2 7K ip1 是新近发现的一种重要的细胞周期依赖性激酶抑制因子 ,即细胞周期的负性调节因子 ,具有阻止细胞通过 G1 / S期转化的“关卡”作用 ,可能是候选的抑癌基因 ,对肿瘤细胞的增殖有重要的调控作用。因此 ,p2 7Kip1的这一重要生物学功能及其表达的异常 ,成为目前肿瘤基础理论和临床研究的热点之一。1　 p2 7K ip1 基因及其蛋白结构　　p2 7Kip1是 1 994年 Polyak[1 ]和 Toyoshima[2 ]等分别发现…     

肿瘤抑制剂p27Kip1的双重功效

近期研究表明，肿瘤抑制剂p27^Kip1对肿瘤进程的影响具有双重性，它既可抑制细胞的过度增殖，阻止肿瘤进展；又能通过对Rho蛋白的调控影响细胞迁移，阻止恶性肿瘤转移。     

p27Kip1基因启动子区的生物信息学分析

目的 生物信息学的发展为通过在线软件预测基因启动子的相关信息提供了众多有重要价值的参考信息.文中利用生物信息学在线软件预测p27Kip1基因启动子功能.方法 获取细胞周期调控因子人p27Kip1启动子全长序列,利用多种在线相关软件预测出甲基化部位和转录因子结合部位. 结果该基因启动子序列全长为3568bp,核苷酸数据库(GenBank)登录号为E26053.p27Kip1启动子序列中CpG岛存在于2544～2845bp、2876～3511bp处,CpG岛的存在会抑制p27Kip1启动子的转录.p27Kip1启动子共有16个转录因子. 结论基因启动子相关生物信息学的研究,提高了针对启动子的研究效率,并为预测基因启动子的功能研究提供了重要信息.     

鼻咽癌中p27Kip1蛋白表达及其临床意义

目的 本研究旨在检测p27Kip1蛋白在鼻咽癌组织中的表达,探讨它在鼻咽癌发生发展中的作用机制,为阐明鼻咽癌发生的分子机制提供实验依据,为鼻咽癌的诊断和预后的评估提供新指标.方法 收集广州医学院第二附属医院病理科2002年～2003年存档的60例手术活检切取的鼻咽癌组织组织蜡块,与30例非肿瘤鼻咽组织石蜡标本作比较.应用免疫组织化学技术(SABC)检测鼻咽癌组织中p27Kip1蛋白的表达.结果 检测发现p27Kip1蛋白在鼻咽癌细胞核和细胞浆中均有表达.在细胞核表达阳性率为46.7%,非肿瘤鼻咽组织胞核表达为86.7%,前者明显降低,p<0.01;而在细胞浆中表达丰富,阳性率为68.3%,后者为20%,显著高于非肿瘤鼻咽组织的胞浆表达,p<0.01.鼻咽癌中p27Kip1蛋白存在不同于非肿瘤鼻咽组织的胞核和胞浆表达与定位,可见p27Kip1蛋白胞核表达与临床病理的关系更为密切.结论 与非肿瘤鼻咽组织相比,p27Kip1蛋白为细胞核低表达、细胞浆高表达.鼻咽癌中p27Kip1蛋白存在不同于非肿瘤鼻咽组织的错误的核浆定位,其在细胞核中表达的减少或丢失可能与鼻咽癌的恶性发展有关.研究提示p27Kip1蛋白的异常表达和定位可能涉及鼻咽癌的分期和转移等;p27Kip1蛋白核表达可作为预测鼻咽癌病期和转移的新指标.     

p57Kip2和p27Kip1基因mRNA在胃癌组织中的表达及意义

目的:研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p57Kip2和p27Kip1基因mRNA在胃癌组织中的表达及意义.方法:采用RT-PCR技术,分别检测p57Kip2和p27Kip1基因mRNA在108例胃癌组织及60例癌旁组织中的表达.结果:p57Kip2基因mRNA在胃癌组织中阳性表达率为28.70%,显著低于癌旁组织中的阳性表达率56.67%(P＜0.05),p57Kip2基因mRNA相对含量检测胃癌组织为0.59±0.17,显著低于癌旁组织1.63±0.21(P＜0.05);p27Kip1基因mRA在胃癌组织中阳性表达率为23.15%,低于癌旁组织中的阳性表达率31.67%(P＞0.05),p27Kip1基因mRNA相对含量检测胃癌组织为1.53±0.23,稍高于癌旁组织1.46±0.35(P＞0.05).结论:胃癌组织中p57Kip2和p27Kip1基因蛋白表达的降低与转录机制有关,并在胃癌的发生中存在不同的抑癌途径或不同的调控机制.     

右半结肠癌p27Kip1蛋白的表达及预后意义

目的:研究p27Kip1蛋白在右半结肠癌组织中的表达并探讨其预后应用价值.方法:通过免疫组化S-P方法对76例右半结肠癌组织标本进行p27Kip1蛋白表达的检测.结果:p27kip1染色阳性40例,占52.6% .p27kip1 蛋白水平与右半结肠癌临床分期、浸润深度、淋巴结转移、病理分级及复发均显著相关.结论:检测p27Kip1表达为判断右半结肠癌恶性程度及预后提供有价值的分子生物学指标.     

p27Kip1,Skp2蛋白在大肠癌表达的临床研究

目的 检测p27Kip1及Skp2在正常大肠黏膜、大肠腺瘤、大肠癌组织中的表达,探讨p27Kip1,Skp2在正常大肠黏膜、大肠腺瘤、大肠癌之间的表达差异及其表达与大肠癌临床病理特征的关系.方法 用免疫组化S-P法检测15例正常大肠黏膜、15例大肠腺瘤、50例结直肠癌组织中p27Kip1,Skp2的表达情况.结果 ①p27Kip1在大肠癌组织中的表达明显低于大肠黏膜、大肠腺瘤组(P＜0.05),在各病理分化程度的大肠癌组织中表达差异无显著性(P＞0.05),在有淋巴结转移的大肠癌组织中p27Kip1表达明显低于无淋巴结转移组(P＜0.05),DukesC,D期大肠癌组织中p27Kip1表达明显低于DukesA,B期大肠癌组织(P＜0.05).②Skp2在大肠癌组织中的表达明显高于正常大肠黏膜、大肠腺瘤组(P＜0.05),在低分化大肠癌组织中的表达明显高于高分化大肠癌组织(P＜0.05),在有无淋巴结转移大肠癌组织中表达差异无显著性(P＞0.05),在DukesA,B期及DukesC,D期大肠癌组织表达差异无显著性(P＞0.05).③在大肠癌中p27Kip1与Skp2表达呈显著负相关(r=-0.470,P＜0.01).结论 ①p27Kip1表达的降低及Skp2表达的升高与大肠癌的发生有一定关系.②p27Kip1的低表达与大肠癌淋巴结转移、Dukes分期存在相关性,p27Kip1低表达可能合并淋巴结转移或高Dukes分期.③Skp2在低分化大肠癌组织中高表达,Skp2可作为大肠癌分化程度的辅助判断指标.④在大肠癌组织中Skp2与p27Kip1的表达呈负相关.     

p27Kip1基因shRNA表达质粒的构建鉴定及功能研究

目的 构建细胞周期性激酶抑制剂p27Kip1的小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,并观察其对牛角膜内皮细胞增殖能力的影响.方法 设计有发夹状结构的3条p27Kip1-shRNA对应模板DNA序列,并构建无关序列HK-shRNA作为阴性对照.转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的pGenSil-1质粒,构建重组质粒pGenSil-1/p27Kip1-1、pGenSil-1/p27Kip1-2、pGenSil-1/p27Kip1-3、pGenSil-1/HK.转化DH5α菌株,提取质粒行酶切及测序鉴定.以脂质体法将4个重组质粒分别导入牛角膜内皮细胞.转染后48 h以Western blot法检测p27Kip1蛋白水平及MTT法检测各实验组和对照组细胞增殖情况.结果 酶切及测序证实4个重组质粒均构建成功.3个实验组p27Kip1蛋白水平分别下降了66.41%、61.51%、71.32%,shRNA可显著促进牛角膜内皮细胞增殖.结论 成功构建了针对p27Kip1的RNA干扰表达载体.     

p27~(Kip1)诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨过表达的p27Kip1对肝癌细胞的抑制作用。方法:利用脂质体介导法将真核表达载体pcDNA3.1/Myc-His(+)C-p27Kip1基因导入HHCC细胞中,用Westernblot检测p27Kip1是否导入到肝癌细胞中;用流式细胞仪检测过表达的p27Kip1对肝癌细胞HHCC的抑制作用;电子显微镜技术探讨过表达的p27Kip1抑制肝癌细胞生长的可能机制。结果:Westernblot检测表明,转染p27Kip1的HHCC细胞大部分有p27Kip1蛋白的表达;而转染空载体或未转染的HHCC细胞,均未见p27Kip1蛋白表达。经连续3次克隆化后,转染pcDNA3.1/Myc-His(+)C-p27Kip1的HHCC细胞100%表达p27Kip1蛋白。过表达的p27Kip1对HHCC细胞有明显的抑制作用,其抑制率为49.09%～56%;过表达的p27Kip1可以封闭G1期的进程和诱导肝癌细胞发生凋亡,其凋亡百分比为12.3%。结论:过表达的p27Kip1可以通过诱导肝癌细胞凋亡抑制肝癌细胞生长。     

新型候选肿瘤抑制基因p27~(Kip1)的研究进展

不可控制的细胞增殖是癌症的特征。肿瘤的恶性增殖从生物学角度看主要表现在两个方面 :一方面是肿瘤细胞的“不灭性”,即凋亡障碍 ;另一方面是细胞分裂的失控 ,即细胞周期网络调控系统的障碍。这两者都是目前肿瘤研究的热点。　　参与细胞周期调控的分子有 :细胞周期蛋白( Cyclins) ,细胞周期蛋白依赖性激酶 ( Cyclin- de-pendent kinase,CDK) ,磷酸化酶以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白 ( Cyclin- dependent kinase in-hibitor,CKI)。CKI是近年来新发现的一类重要的细胞周期调控蛋白 ,它能够和 CDKs、Cyclins以及Cyclin- CDKs复…     

卵巢癌细胞中RNF123对p27Kip1蛋白稳定性的调控作用

目的:研究卵巢癌细胞中RNF123对p27Kip1蛋白稳定性的调控作用?方法:流式细胞分析仪测定血清饥饿释放过程中SKOV3细胞的周期分布情况,利用Western blot检测该过程中干扰RNF123前后p27Kip1蛋白的表达水平?在SKOV3细胞中转染sictrl和siRNF123,Western blot检测p27Kip1的半衰期?结果:SKOV3细胞血清饥饿48 h,SKOV3细胞周期阻滞在G1/G0期,而血清释放后S期显著增加?在此过程中,p27Kip1表达下调?转染siRNF123组相较于sictrl组,p27Kip1蛋白水平增高?降低RNF123表达后,p27Kip1的半衰期延迟?结论:在卵巢癌细胞中降低RNF123的表达能抑制p27Kip1的降解?     

大肠癌组织PBR、p27Kip1、Cyclin E的表达及临床意义

目的观察大肠癌组织及正常结直肠组织标本中外周型苯二氮受体(PBR)、p27Kip1、Cyclin E的表达,探讨大肠癌可能的临床预后影响因素。方法收集85例手术治疗大肠癌组织及15例正常结直肠组织标本,进行免疫组化染色,观察p27Kip1、Cyclin E蛋白的表达;收集40例大肠癌患者的癌组织及10例正常结直肠组织新鲜冰冻标本,蛋白质印迹分析检测PBR、p27Kip1和Cyclin E蛋白表达,RT-PCR检测PBR、p27Kip1、Cyclin E mRNA的表达。结果大肠癌组织中PBR、Cyclin E高表达,p27Kip1低表达,且Cyclin E与p27Kip1蛋白表达负相关;Cyclin E阴性和p27Kip1阳性患者的5年生存率明显增加;p27Kip1和Cyclin E的表达进入Cox风险比例模型。结论大肠癌组织PBR、p27Kip1、Cyclin E异常表达。     

Cdk2及其抑制因子p27Kip1在胃癌中的表达和意义

目的：探讨细胞周期素依赖性激酶2（Cdk2)及其抑制因子p27^Kipl与胃癌生物学行为的关系。方法：采用免疫组织化学S－P法对60例胃癌组织原发灶和淋巴结转移灶进行Cdk2，p27^Kipl免疫组化染色，腹水或腹腔冲洗液先脱落细胞学检查。结果：Cdk2阳性表达率56．67％（34／60），阳性细胞定位于细胞核和细胞浆，以Ⅲ，Ⅳ期表达率较高（P＜0．01），与胃癌大体类型及浆膜分型关系密切（P＜0．01）；p27^Kipl阳性表达率为43．33％（26／60），阳性细胞定位于细胞浆，在高分化及Ⅰ、Ⅱ期胃癌高表达（P＜0．05），且与淋巴细胞转移密切相关（P＜0．01），Cdk2，p27^Kipl同时阳性表达19例，占31．67％（19／600。结论：Cdk2与胃癌浸润深度，淋巴结转移呈正相关，p27^Kipl表达与胃癌浸润深度，淋巴结转移呈负相关。     

野生型及Thr187突变型p27Kip1 蛋白对HepG2细胞周期的影响

目的p27kip1氨基端第187号位置的苏氨酸(Thr187)磷酸化位点是该蛋白分子中重要的磷酸化位点,探讨人工诱变该位点苏氨酸为丙氨酸(T187A)后对肝癌细胞株HepG2细胞周期以及细胞增殖的影响。方法应用脂质体转染法将含人野生型和突变型p27kip1基因质粒DNA转染HepG2细胞,免疫细胞荧光化学检测p27kip1蛋白的表达,并用流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果野生型和突变p27kip1基因转染HepG2细胞后均能在细胞核表达,并且可以明显抑制细胞增殖。p27kip1基因转染的HepG2细胞发生G0期阻滞,且突变型G0期阻滞作用明显强于野生型(P<0.01)。结论转染的p27kip1能够在HepG2细胞过度表达并能抑制HepG2细胞的增殖,Thr187磷酸化位点的人工诱变可能有利于p27kip1蛋白促使细胞G0期阻滞。     

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p27 Kip1在肾癌中表达的研究

目的：研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（ｃｙｃｌｉｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ, ＣＤＫＩ）ｐ２７ Ｋｉｐ１ 在肾癌中表达情况,探讨ｐ２７ Ｋｉｐ１ 在肾癌预后方面的应用价值。方法：应用免疫组织化学方法检测１０９例肾癌（肾透明细胞癌６９ 例,肾颗粒细胞癌２０例,混合细胞癌１１例,未分化癌９ 例）ｐ２７ Ｋｉｐ１ 蛋白表达情况,并探讨ｐ２７ Ｋｉｐ１表达与肾癌Ｒｏｂｓｏｎ 分期的关系。结果：肾癌ｐ２７ Ｋｉｐ１ 阳性表达率为３７．６％ ;６９ 例肾透明细胞癌ｐ２７ Ｋｉｐ１ 阳性表达与Ｒｏｂｓｏｎ 分期各期之间差异无显著性（ Ｐ＞ ０．０５）;而对另外３ 种病理类型肾癌的分析发现,ｐ２７ Ｋｉｐ１ 阳性表达随Ｒｏｂｓｏｎ 分期增加而降低（Ｐ＜ ０．０５）。结论：细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子ｐ２７ Ｋｉｐ１ 失活或低表达可能是肾透明细胞癌发生过程中的早期事件,免疫组织化学方法检测ｐ２７ Ｋｉｐ１蛋白表达在除肾透明细胞癌之外的其他病理类型肾癌预后方面具有一定的应用价值     

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p27Kip1在肾癌中表达？…

目的：研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子ｐ２７Ｋｉｐ１在肾癌中表达情况,探讨ｐ２７Ｋｉｐ１在肾癌预后方面的应用价值。方法：免疫组织化学方法检测１０９例肾癌（肾透明细胞癌６９例,肾颗粒细胞癌２０例,混合细胞癌１１例,未分化癌９例）ｐ２７Ｋｉｐ１蛋白表达情况,并探讨ｐ２７Ｋｉｐ１表达与肾癌Ｒｏｂｓｏｎ分期的关系。结果：肾癌ｐ２７Ｋｉｐ１阳性表达率为３７．６％例肾透明细胞癌ｐ２７Ｋｉｐ１阳性表达与Ｒｏｂ     

Effect of p27Kip1 Inhibition on Proliferation of Bovine Corneal Endothelial Cells by RNA Interference

Three plasmids （pGenesil-P1, pGenesil-P2, pGenesil-P3） with different p27Kip1-shRNA sequences were designed and synthesized. Their effects on the proliferation of bovine corneal endothelial cells （bCEC） were investigated. Plasmid expressing irrelevant shRNA with a random combination was used as negative control （pGenesil-HK）. The recombination of four plamids was confirmed by restrictive enzyme digestion and sequence analysis. The expression of mRNA and protein of p27Kip1 was detected by RT-PCR and Western blotting after stable transfection. The expressions of p27Kip1 mRNA and p27Kip1 protein of pGenesil-P1 group, pGenesil-P2 group and pGenesil-P3 group were all lower than those in the pGenesil-HK group and the blank group （non-transfected group）, pGenesil-P3 had the strongest inhibitory effect and was selected for the next steps. The proliferation rates of the pGenesil-P3 group, the pGenesil-HK group and the blank group were assessed by MTT. The influence of shRNA-p27Kip1 on bCEC cell cycle was detected by flow cytometry （FCM）. Compared with the control groups, the proliferation rate of the pGenesil-P3 group was increased significantly, and the ratio of S-phase also increased. It is concluded that shRNA-p27Kip1 could down-regulate the expression of p27Kip1 effectively and increase the proliferation of bCEC. RNA interference （RNAi） may be an effective means to promote the proliferation of CEC.     

卵巢肿瘤中p27和CyclinE的表达及意义

目的研究p27和CyclinE在卵巢肿瘤中的表达及与临床意义和预后的关系。方法应用免疫组化S-P法检测p27和CyclinE在55例卵巢组织(包括正常的卵巢组织、良性、恶性卵巢肿瘤)中的表达情况,分析其与临床病理参数和预后的关系及两指标间的相关性。结果与正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤比较,在卵巢癌中p27降低而CyclinE的表达明显升高(P<0.01),p27和CyclinE在卵巢癌中的表达呈明显负相关性(P<0.01)。结论p27和CyclinE的表达水平与卵巢肿瘤的发生、发展及恶性程度密切相关,可能成为卵巢癌恶性程度及预后判定的重要指标。     

p27Kip1、cyclin D1蛋白和Ki-67在口腔鳞癌中的表达及其意义

目的 研究口腔鳞癌组织中p27Kip1及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达以及与临床生物学特性和细胞增殖的关系.方法 采用免疫组化方法检测53例原发性口腔鳞癌组织及20例正常口腔黏膜组织中p27Kip1及cyclin D1蛋白的表达水平,Ki-67作为细胞增殖活性的指标也被检测.结果 p27Kip1在口腔鳞癌中阳性表达率显著低于正常口腔黏膜组织(P＜0.05),cyclin D1蛋白和Ki-67在口腔鳞癌中阳性表达率显著高于正常口腔黏膜组织(P＜0.05) ;cyclin D1蛋白过表达与临床分级及淋巴结转移有关(P＜0.05),p27Kip1缺失表达与淋巴结转移有关(P＜0.05);p27Kip1负表达和cyclin D1过度表达与细胞增殖评价因子Ki-67呈负相关(r=-0.587和-0.667,P＜0.05).结论 在鳞癌的发生发展过程中,p27Kip1的缺失表达和cyclin D1的过度表达两者可能单独或共同参与.p27Kip1的缺失可能还与口腔鳞癌细胞的分化、转移及增值和预后有关.