不同剂量中药单体复方对~(60)Co-γ致雄性小鼠生精功能障碍的治疗作用

目的 观察不同剂量中药单体复方(由白藜芦醇、枸杞多糖和槲皮素3种中药单体及L-肉碱组成)促进~(60)Co-γ致小鼠睾丸生精功能障碍的恢复作用,并探讨其最佳剂量.方法 72只雄性昆明小鼠随机分为5组,A组(n=12)正常喂饲,B、C、D、E组(各15只)小鼠均采用~(60)Co-γ 60y全身均匀照射I次,构造小鼠睾丸生精障碍模型,1周后C、D、E组分别用40、80、160mg/kg·d~(-1)浓度的中药单体复方混悬液灌胃35d,A组和B组小鼠用等量生理盐水灌胃.记录小鼠的一般状况、体征及体重变化,于灌胃结束24h后处死,测量小鼠体重、睾丸重量及睾丸指数;酶联免疫法测定血清FSH、LH、T和E_2水平并计算T/E_2比值;并对睾丸组织进行组织学观察.结果 D组(80mg/kg·d~(-1))小鼠体重、睾丸重量及睾丸指数均较B组有明显改善(p<0.05),接近A组(p>0.05),C组和E组虽有所改善但仍低于A组(P<0.05).C、D、E组小鼠血清生殖激素水平均有一定程度的恢复,但D组各生殖激素指标均接近A组(P>0.05).组织学观察见各给药组睾丸生精小管生精细胞层数、精子数目及c.kit阳性表达均高于B组,尤以D组(80mg/kg·d~(-1))恢复最为明显.结论 由白藜芦醇、枸杞多糖、槲皮素和L.肉碱组成的中药单体复方制剂能够促进~(60)Co-γ致小鼠睾丸生精功能障碍后生精功能的恢复,且最佳剂量为80mg/kg·d~(-1) .     

中药生精冲剂对生精障碍小鼠治疗作用的实验研究

目的:研究生精冲剂对环磷酰胺所致生精障碍小鼠的治疗作用。方法:46只雄性昆明小鼠随机分为正常组(n=10)、模型组(n=12)、对照组(n=12)和中药组(n=12),后3组腹腔注射环磷酰胺,建立生精障碍模型。造模完成后,中药组和对照组分别灌胃中药生精冲剂[16 g/(kg.d)]和克罗米芬[21.6 mg/(kg.d)],正常组与模型组每天灌胃等量生理盐水,连续15 d。次日,测量睾丸重量,并计算睾丸指数;放射免疫法测定血清FSH、LH、T水平;对睾丸组织进行组织学观察。结果:中药组小鼠血清T[(7.046±0.291)nmol/L]、FSH[(2.947±0.587)mIU/ml]、LH[(3.254±0.492)mIU/ml]、睾丸指数[(3.958±0.342)g/kg]与模型组各检测值相比[(6.231±0.317)nmol/L、(5.428±0.719)mIU/ml、(5.155±0.460)mIU/ml、(3.525±0.462)g/kg]差异有显著性(P<0.05)。组织学观察中药组睾丸生精小管生精细胞层数及管腔内精子数明显高于模型组。结论:生精冲剂治疗小鼠生精障碍有效。     

蛋白酶体REGγ对雄性小鼠生精功能的影响

目的研究蛋白酶体REGγ对雄性小鼠生精功能的影响。方法利用免疫蛋白印迹检测小鼠睾丸中REGγ的表达;通过组合酶消化法分离精原干细胞,流式细胞仪检测精原干细胞中c-kit及α6-integrin的表达;通过小鼠精子分析仪检测REGγ基因敲除雄鼠的精子浓度和精子活力;进行小鼠合笼实验检测正常雌鼠和REGγ基因敲除雄鼠合笼后的生育力。结果 REGγ在小鼠睾丸中高表达;应用组合酶消化法得到了纯度70%的精原干细胞;REGγ基因敲除雄鼠精原干细胞的c-kit及α6-integrin表达量均显著低于野生型组(P0.05);REGγ基因敲除型雄鼠的平均精子浓度(37.1×106/ml)和精子活力(54%)均显著低于野生型雄鼠(75.4×106/ml、74%)(P0.05);REGγ基因敲除型雄鼠与野生型雌鼠合笼后的产仔数均低于野生型雄鼠(P0.05)。结论蛋白酶体REGγ参与调节雄鼠的生精功能。     

JQ1对脂多糖所致小鼠生精功能障碍的影响

目的 探讨JQ1对脂多糖(LPS)所致小鼠生精功能障碍的影响及相关机制。方法 40只8周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为溶媒对照组(DMSO+NS)、模型组(DMSO+LPS)和药物干预组(JQ1+LPS),每组小鼠的数量分别为n=13、n=15和n=12,单次腹腔注射LPS诱导炎症动物模型。取材后,称量睾丸、附睾尾的重量,采用精子计数法检测小鼠精子数量,伊红染色检测精子的畸形率,苏木精-伊红(HE)染色检测睾丸形态变化;TUNEL试剂盒检测睾丸生殖细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡基因(Bax和Bcl2)的表达情况;生化试剂盒检测睾丸丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)表达情况。结果 LPS导致小鼠附睾尾重量显著下降(P<0.05),精子数量显著下降(P<0.001);精子畸形率显著升高(P<0.01);睾丸形态结构破坏,生精小管萎缩,管腔直径变小,各级生精细胞排列紊乱,管腔内精子数量减少;睾丸中凋亡细胞数量显著上调(P<0.01);Bax/Bcl2的比值显著上升(P<0.01);MDA含量显著增加(P<...     

60Co-γ辐射灭菌对石膏模型尺寸精度影响的对比研究

目的:探讨60Co-γ辐射灭菌石膏模型的可行性.方法:制作三单位固定桥金属模具翻制普通和超硬石膏模型,采用60Co-γ辐射、紫外线照射、髙压蒸汽、微波、甲醛熏蒸、戊二醛浸泡对其消毒后测量各组模型的尺寸精度.结果:60Co-γ辐射灭菌后普通和超硬石膏模型的尺寸精度与对照组及其他消毒组比较无显著性差异(P＞0.05).结论:60Co-γ辐射灭菌对石膏模型尺寸精度无显著影响.     

中药生精冲剂对精索静脉曲张大鼠的治疗

目的：研究中药生精冲剂对大鼠精索静脉曲张的影响及疗效。方法：从80只SD雄性大鼠中随机抽出20只作为假手术组，余60只均建立精索静脉曲张病理模型后随机均分为模型组、生精冲剂组和克罗米芬组。造模后15d生精冲剂组和克罗米酚组分别给予生精冲剂4g/（kg·d）和克罗米芬20mg/（kg·d）灌胃，模型组和假手术组正常喂食。造模后45d放免法测定血清性激素（FSH、LH和T）及观察各组大鼠睾丸组织结构。结果：生精冲剂组大鼠光镜下睾丸组织结构优于模型组和克罗米芬组；血清FSH、LH生精冲剂组显著低于模型组和克罗米芬组（P〈0.05），而克罗米芬组显著高于其他3组。T在生精冲剂组、克罗米芬组和假手术组之间无显著差异，但均显著高于模型组（P〈0.05）。结论：中药生精冲剂对精索静脉曲张引起的睾丸损害有保护及修复作用，且可能优于克罗米芬。     

生精合剂对雄性大鼠性激素水平及生殖功能的影响

目的 观察生精合剂对去除一侧睾丸雄性大鼠性激素水平及生殖功能的影响.方法 给去除一侧睾丸雄性大鼠灌胃生精合剂10d、30d后,分别测定血浆睾酮,促卵泡激素(FSH),促黄体生成素(LH)及精子计数和活力.结果 实验组能明显提高去除一侧睾丸雄性大鼠的血浆性激素水平,改善精子数量及质量.讨论生精合剂是通过直接补充外源性睾酮和调节下丘脑.垂体.性腺轴功能来提高去除一侧睾丸雄性大鼠的雄激素水平,同时通过多重因素的作用来提高精子数量及活力.     

生精固本丸对小鼠免疫功能的影响

Ｐ＜０．０１结果如表２所示，生精固本丸在２．５ｇ／ｋｇ、５ｇ／ｋｇ、１０ｇ／ｋｇ的剂量体内用药，对ＣｏｎＡ诱导的小鼠的Ｔ细胞的增殖反应有增强作用，而对ＬＰＳ诱导的小鼠Ｂ细胞的增殖反应效果不显著。香菇多糖是已知的免疫增强剂，生精固本丸与之相比作用相似。２．３生精固本丸对小鼠游泳耗竭的影响结果见表３。表３生精固本丸对小氧游泳耗竭的影响注：与对照组相比＊Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．００１结果表明，动物给药５ｇ／ｋｇ、１０ｇ／ｋｇ，连用４ｄ，游泳耗竭时间分别为１５．１±３．５及３５．０±５．３ｍｉｎ，与对照组相比均有显著性差异，表明本品具有较强的抗疲劳作用。而给药２．５ｇ／ｋｇ时，与对照组相比则无明显差异，提示本品具有明显的量效关系。     

雷公藤T_4、T_7单体对大鼠生精细胞染色体和微核的影响

本文采用体内给药的方法，研究了雷公藤中抗生育有效化合物Ｔ４、Ｔ７在抗生育剂量下，对ＳＤ雄性大鼠生殖细胞染色体畸变率和微核形成的影响。大鼠口服Ｔ４抗生育剂量为每日８０μｇ／ｋｇ，Ｔ７为３１７μｇ／ｋｇ，１０周后制片分析，并与对照组比较，发现染色体畸变平均值各组之间的差异没有统计学意义（Ｐ＞０．０５），各组之间的生精细胞微核出现率也无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结果表明，雷公藤中抗生育有效成分Ｔ４、Ｔ７单体对大鼠精原细胞染色体的细胞遗传学效应和生精细胞微核发生率的影响结果是一致的，也提示抗生育剂量的Ｔ４和Ｔ７无明显的诱变作用。由于Ｔ７的各项指标更接近对照组，我们认为Ｔ７优于Ｔ４。     

PRPS2在不同生精功能障碍睾丸组织中的表达以及对生精细胞凋亡和增殖的影响

目的探讨磷酸核糖焦磷酸合成酶2(RRPS2)在生精功能不同的睾丸组织中的表达情况以及可能的生物学机制。方法收集2015年7至2017年6月期间在我院病理科存档的石蜡包埋睾丸组织标本63例,其中45例标本来自无精子症或严重少精子症患者,18例组织标本取自生精功能正常者,采用免疫组化法检测生精功能不同的睾丸组织中PRPS2表达情况。采用流式细胞术和MTT方法分析PRPS2基因沉默或过表达对GC1精原细胞、GC2精母细胞和TM4支持细胞凋亡和增殖活性的影响。采用qRT-PCR和Western blot法检测PRPS2对E2F1转录因子表达的影响。结果重度生精功能不良的睾丸组织(35.71%)以及唯支持细胞综合征睾丸组织(21.43%)中PRPS2高表达,显著低于生精功能正常的睾丸组织(72.22%)(P0.05);GC1细胞株中PRPS2表达量显著高于GC2和TM4细胞株(P0.05);shPRPS2基因沉默后,GC1细胞、GC2细胞和TM4细胞凋亡率较空白对照组显著增加,而增殖活性显著降低(P0.05)。PRPS2基因表达上调后,细胞凋亡率较空白对照组和shPRPS2细胞组显著降低,增殖活性显著升高(P0.05);shPRPS2基因沉默后,E2F1mRNA和蛋白表达量较空白对照组显著降低(P0.05)。而PRPS2基因表达上调后,E2F1mRNA和蛋白表达量较空白对照组和shPRPS2细胞组显著上调(P0.05)。结论 PRPS2参与生精细胞凋亡和增殖过程,其可能的作用机制与下调E2F1转录因子的表达有关。     

“生精散”对大鼠睾丸扭转复位后生精功能的影响及其机制研究

目的:研究"生精散"对大鼠睾丸扭转复位后生精功能的影响及其机制。方法:40只雄性SD大鼠随机分为假手术组(A组),对照组(B组),生精散组小(C组)、中(D组)、大剂量组(E组),每组8只。建立左侧睾丸扭转模型,B组自扭转前1 h开始给予每日灌胃生理盐水1 ml/d,C组(0.01 g/kg.d)、D组(0.02 g/kg.d)、E组(0.03 g/kg.d)分别按体重给予灌服生精散,连续35 d后处死大鼠,对大鼠进行精液常规分析,用RT-PCR检测大鼠精子CatSper1的表达。结果:a+b级精子百分率、精子存活率、精子浓度,CatSper1基因表达,与A组[(51.30±6.60)%、(69.01±7.20)%、(40.53±7.01)×106/ml、2.04±0.77]相比,B组[(15.30±6.30)%、(44.42±6.36)%、(21.00±6.14)×106/ml、1.12±0.50),均显著降低(P<0.01);与B组相比,D组[(51.63±3.20)%、(72.09±2.20)%、(55.30±5.90)×106/ml、2.11±0.20]、E组[(55.93±3.17)%、(73.01±2.11)%、(58.33±4.90)×106/ml、2.31±0.17]均显著升高(P<0.01),而C组[(18.02±0.23)%、(48.04±7.01)%、(22.87±2.10)106/ml、1.19±0.51]升高不明显(P>0.05)。结论:生精散可以促进睾丸扭转复位后精子质量的恢复,其机制可能与调节生精功能,提高精子细胞CatSper1基因的表达有关。     

“生精宝”对小鼠少精子症模型的作用及其机制探讨

目的:研究"生精宝"对小鼠少精子症模型生精功能的作用并探讨其机制。方法:昆明种雄性小鼠60只随机分4组:"生精宝"组17只(组1),维生素E组17只(组2),空白造模对照组16只(组3),正常空白对照组10只(组4);前3组予腹腔内连续5d注射环磷酰胺造模,前两组于造模次日给药灌胃,组1每只小鼠给予"生精宝"药汤2g/(kg.d),组2给予维生素E75mg/(kg.d),第36d处死各组全部小鼠。用放免法测血清睾酮水平;取一侧附睾制备悬液作精子分析,另一侧睾丸切片行HE染色,计数生精上皮层次和间质细胞,TUNEL法检测生精细胞凋亡。结果:组1血清睾酮,生精上皮层次以及间质细胞计数方面相对于组3有明显改善且高于组2,组1生精细胞凋亡阳性率低于组2和组3,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05),组1各项检测指标与组4比较无显著差异(P>0.05)。结论:"生精宝"可明显增加间质细胞数量,从而分泌高水平睾酮作用于睾丸生精上皮层次,增强生精功能;"生精宝"作用机制可能为抑制生精细胞凋亡,增加上皮层次,促进精子发生;睾酮可能为生精细胞凋亡抑制的诱导因素。     

益肾生精胶囊对邻苯二甲酸二丁酯致生殖功能损伤大鼠精子质量及生殖激素水平的影响

目的:探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)所致不育症的可能病理机制,观察益肾生精胶囊对DBP所致Wistar雄性大鼠生殖功能受损的干预调节,以揭示其治疗DBP所致不育症的可能作用机制。方法:将100只Wistar雄性大鼠随机分为空白组20只和DBP造模组80只。于造模4周后,行模型评价。模型验证成功后,随机分为模型组、益肾生精胶囊高、中、低剂量组和空白组共5组。药物干预4周后,处死各组大鼠,检测精子活力、浓度、畸形率,放射免疫法检测血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平;光镜观察睾丸组织形态结构。结果:与空白组相比,模型组大鼠睾丸组织结构有明显的病理学改变,精子活力、浓度、畸形率,血清T、LH、FSH水平有统计学差异(P0.01);与模型组相比,益肾生精胶囊高、中剂量组大鼠睾丸组织损伤有不同程度的恢复,精子活力、浓度、畸形率及血清T、LH、FSH水平有统计学差异(P0.01);与益肾生精胶囊高剂量组相比,中、低剂量组大鼠精子活力、浓度、畸形率及血清T、LH、FSH水平差异有统计学意义(P0.01)。结论:DBP可致大鼠精子活力、浓度降低,精子畸形率增高;可致大鼠睾丸形态结构损伤;DBP可致血清T、LH水平降低,FSH水平增高。益肾生精胶囊可不同程度地提高DBP所致生殖功能受损大鼠精子活力、浓度,降低精子畸形率,提高血清T、LH水平,降低血清FSH水平;改善睾丸形态结构,并可能通过此途径提高大鼠生殖功能。     

有氧运动对雄性大鼠生精功能的影响及其睾丸iTRAQ定量蛋白组学分析

目的:探讨有氧运动对雄性大鼠生精功能的影响,并通过蛋白组学筛选睾丸中有生精调控作用的差异表达蛋白,为进一步研究其分子机制奠定基础。方法:24只SD雄性大鼠随机分为对照组和运动组,对照组不进行运动训练。运动组分为无负荷运动组和3%体重负荷运动组,每天连续游泳60 min,无负荷运动组为无负重游泳,3%体重负荷运动组大鼠负荷3%体重重物游泳,每周6次,运动共9周。大鼠末次运动24 h后进行精子计数、生殖激素测定和睾丸组织学分析,并将3%体重负荷运动组和对照组睾丸组织进行同重同位素相对与绝对定量(iTRAQ)蛋白组学分析。结果:3%体重负荷运动组大鼠精子浓度[(3.54±0.52)×10~6/ml]明显高于对照组[(2.12±0.43)×10~6/ml],P0.01;血清LH[(38.96±1.34)IU/L]和T[(21.36±0.53)nmol/L]也显著高于对照组[LH:(35.99±2.90)IU/L,T:(19.99±0.25)nmol/L,P均0.01];GnRH和FSH两组无显著差异[GnRH:(641.82±42.78)ng/L vs(623.95±41.44)ng/L,FSH:(22.29±2.31)IU/L vs(20.49±2.44)IU/ml,P均0.05]。无负荷运动组精子浓度、生殖激素水平与对照组相比均无显著变化。组织学分析显示3%体重负荷运动组大鼠生精上皮内细胞层数较对照组明显增多,成熟精子数增加。蛋白组学分析筛查到差异蛋白47个,其中上调蛋白37个,下调蛋白10个。经过生物信息学分析筛选出与生殖功能密切相关的显著差异表达蛋白5个,其中Anx A1、GPX3、Rimbp3、Dpy19l2表达上调,CYP17表达下调。KEGG通路富集分析显示,差异蛋白主要参与了细胞外基质-受体相互作用通路、蛋白质消化与吸收通路、黏着斑信号通路等。结论:有氧运动可能主要通过改变精子发生与分化相关的蛋白表达来提高机体的生精功能。     

氟桂利嗪对小鼠生精细胞T型Ca~(2+)通道的作用

目的:研究二苯烷基氨类衍生物氟桂利嗪(F lu)对小鼠生精细胞T型钙电流(ICaT)的影响。方法:采用急性机械分离的小鼠生精细胞,应用膜片钳全细胞记录技术,观察F lu对ICaT的影响。结果:钳制电位为-90 mV、刺激电压为-30 mV时,F lu(0.1、1、10、100μmol/L)可抑制小鼠生精细胞Ca2+电流,抑制率分别为(23.34±2.76)%、(46.04±3.52)%、(62.52±3.70)%、(73.52±3.12)%(P<0.05);F lu对T型Ca2+通道的半数最大抑制浓度为0.29μmol/L。结论:F lu对生精细胞T型Ca2+通道有阻断作用,呈浓度依赖性;Cav3.2是生精细胞T型Ca2+电流的主要贡献者。     

17β-雌二醇对小鼠生精细胞T型Ca~(2+)通道的作用

目的:研究17β-雌二醇(E2)对小鼠生精细胞T型钙电流(ICaT)的影响。方法:采用膜片钳全细胞记录技术观察E2对急性机械分离的小鼠生精细胞ICaT的影响。结果:E2(1、10、100μmol/L)呈浓度、电压依赖性抑制小鼠生精细胞钙电流,抑制率分别为(13.48±1.86)%、(28.98±2.70)%和(52.93±3.42)%(n=6,P<0.05)。E2对T型钙通道的半数最大抑制浓度(K50)为8.89μmol/L。100μmol/LE2显著改变T型钙通道的激活和失活特性:半数激活电压(Va1/2)和激活斜率因子(κa)分别从(-48.94±0.22)mV、(5.19±0.19)mV变为(-54.34±1.02)mV和(6.02±0.84)mV(n=5,P<0.05);而半数失活电压(Vi1/2)和失活斜率因子(κi)分别从(-56.51±0.13)mV、(3.36±0.11)mV变为(-61.78±0.50)mV、(4.25±0.37)mV(n=5,P<0.05)。结论:E2对生精细胞T型钙通道有抑制作用,呈浓度依赖性。     

白藜芦醇对2,5-己二酮导致SD大鼠睾丸生精障碍治疗作用的实验研究

目的:观察白藜芦醇促进2,5-己二酮(2,5-HD)所致睾丸生精障碍后的生精功能恢复作用。方法:40只雄性SD大鼠随机分为5组(每组8只),A组正常喂饲,B、C、D、E组均饮用含1%2,5-HD的水溶液5周,然后C、D、E组用不同浓度的白藜芦醇[分别为20、40、80 mg/(kg.d)]治疗9周。比较各组外表体征、体重增加值、睾丸重量的变化,及各组生精小管数目、直径以及生精细胞膜c-kit蛋白表达水平。结果:与A组相比,B、C、D、E组大鼠体质瘦弱、皮肤松弛、毛色暗淡、体重增长减慢、睾丸萎缩;睾丸组织HE染色及免疫组化染色显示生精上皮萎缩,生精细胞发育停滞,c-kit蛋白表达受到抑制。经过白藜芦醇治疗后,C、D、E组大鼠外表体征得到恢复,接近A组,体重和睾丸重量均较B组有所恢复(P<0.01);睾丸生精功能部分恢复,但生精小管数目、直径低于A组水平(P<0.001),同时c-kit蛋白重新获得表达,但低于A组水平(P<0.01)。随着白藜芦醇用量增加,C、D、E组大鼠睾丸生精小管数目、直径显著恢复(P<0.01),生精细胞膜c-kit蛋白表达量增加更为明显(P<0.01)。结论:白藜芦醇可以促进2,5-HD所致大鼠睾丸生精障碍的生精功能恢复。     

~(60)Co照射后小鼠表皮Langerhans细胞的变化及对异体植皮的影响

为研究￣（６０）钴（￣（６０）Ｃｏ）照射对异体植皮存活期的影响，用￣（６０）Ｃｏ照射Ｂｌａｂ／ｃ小鼠，照射后１天与３天取背部皮肤，（１）经ＡＴＰ酶染色，显示表皮Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞（ＬＣ），观察其ＡＴＰ酶含量的变化、形态变化及其在表皮的密度改变；（２）免疫组化染色，观察Ｉａ阳性ＬＣ的密度改变及形态变化；（３）电镜观察其超微结构的变化；（４）同时进行异体皮肤移植，观察皮片存活期的变化。结果发现：经￣（６０）Ｃｏ照射后，小鼠表皮ＬＣ形态功能受到不同程度的损害，其密度减少，ＡＴＰ酶含量降低，表达Ｉａ抗原功能下降。结论：Ｉａ抗原功能下降是异体植皮后移植物存活期延长的主要原因。