Ras／Raf／MEK／ERK通路与低氧性疾病关系的研究进展

Ras／Raf／MEK／细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal‐regulated protein kinase ,ERK ）信号通路又称 ERK 通路,该通路主要由一个三级酶联功能单位构成,其通过“瀑布式”的级联反应,将细胞外刺激信号传至细胞内,引起一系列细胞反应,从而调控细胞增殖、分化、凋亡、转移等功能。ERK通路与低氧性疾病的发生、发展及治疗存在着不可忽视的联系。现结合相关文献,对 Ras／Raf／M EK／ERK信号通路的生物学特征及与多种缺血低氧性疾病关系的研究进展综述如下。     

Ras/Raf/MEK/ERK信号传导通路在2型糖尿病大鼠局灶性脑缺血早期作用的研究

目的探讨高血糖加重脑梗死机制与Ras/Raf/丝裂原激活蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号传导通路的关系。方法通过大鼠尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)及大脑中动脉闭塞(MCAO)术造成大鼠糖尿病脑缺血模型。将大鼠分成假手术组、健康大鼠脑缺血组、2型糖尿病(T2DM)大鼠脑缺血组、PD98059组,每组12只。PD98059组于MCAO术前30min尾静脉注射PD98059(3mL/kg)。MCAO术后2h给各组大鼠做神经学评分,取脑组织标本。应用免疫组织化学、蛋白质印迹法(Western blotting)测定大鼠磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达,应用TUNEL检测神经细胞凋亡情况。结果除假手术组外,其他3组均有不同程度的神经功能缺损、神经细胞凋亡,且差异有统计学意义(P<0.01)。p-ERK1/2蛋白在假手术组偶见表达,在健康大鼠脑缺血组、T2DM大鼠脑缺血组表达明显升高(P<0.01),且T2DM大鼠脑缺血组升高更加明显(P<0.01)。PD98059组p-ERK1/2蛋白表达较少。免疫组织化学和Western blotting结果基本一致。结论 Ras/Raf/MEK/ERK信号传导通路在局灶性脑缺血早期能促进神经细胞的凋亡,糖尿病加重脑梗死与Ras/Raf/MEK/ERK信号传导通路有关。     

MEK/ERK通路参与溃疡性结肠炎发病机制的研究进展

溃疡性结肠炎是一种影响结肠的慢性、特发性、炎症性疾病。其发病原因不明,以结肠黏膜连续性、弥漫性炎症改变为特点。病程缠绵,症状多样,复发率高,易发结肠炎相关结肠癌。随着人们生活水平不断提高,生活环境、生活方式、饮食结构等发生明显改变,溃疡性结肠炎的发病率和患病率快速上升。MEK/ERK信号通路参与调控细胞增殖、分化、凋亡、氧化应激、免疫炎症等多种生理病理过程,与溃疡性结肠炎的发生关系密切。通过研究MEK/ERK信号通路参与溃疡性结肠炎发病的关键环节、关键因子可以为治疗溃疡性结肠炎提供新思路、新途径。     

miRNA-24靶向调控MEK/ERK信号通路对乳腺癌转移的作用

目的 探讨miRNA-24(miR-24)靶向调控MEK/ERK信号通路对乳腺癌转移的作用。方法 体外培养乳腺癌(BC)细胞系MCF-7、MDA-MB-231细胞以及非肿瘤性人乳房上皮细胞系H184B5F5/M10细胞,采用qPCR方法检测各细胞中miR-24的表达水平。将MCF-7细胞分为正常组、miRNA阴性对照组(miR-24-NC组)和miR-24抑制剂组,采用CCK8、伤口愈合试验和TUNEL检测细胞活力、迁移和凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白和MEK/ERK通路相关蛋白的表达水平。结果 miR-24在MCF-7和MDA-MB-231细胞中的表达水平显著高于H184B5F5/M10细胞(P<0.05)。与miR-24-NC组相比,miR-24抑制剂组抑制了细胞的活力和迁移(P<0.05),促进了细胞的凋亡(P<0.05);其凋亡蛋白Bcl-2显著降低(P<0.05),Bax、caspase-3和caspase-9显著升高(P<0.05);同时降低了MEK/ERK信号通路的表达(P<0.05)。结论 乳腺癌细胞中miR-24表达...     

M细胞对过敏性结膜炎小鼠MEK/ERK信号通路的影响

目的 探索M细胞在过敏性结膜炎小鼠中与丝裂原活化蛋白/细胞外调节蛋白激酶(MEK/ERK)信号通路的联系.方法 Barb/c小鼠随机分为空白对照组、模型组和治疗组,每组12只.空白对照组正常饲养,模型组和治疗组使用卵清蛋白(OVA)建立小鼠过敏性结膜炎模型.治疗组采用盐酸奥洛他定滴眼液治疗,每天滴加2次,每次1滴;模型...     

千里光菲灵碱诱导MEK/ERK1/2介导的宫颈癌细胞自噬效应

探讨千里光菲灵碱对人宫颈癌HeLa、Caski细胞增殖、自噬的影响及其可能的作用机制。MTT法检测千里光菲灵碱对HeLa、Caski细胞增殖的影响;免疫荧光法检测GFP-LC3/HeLa和GFP-LC3/Caski两种细胞内自噬体的形成情况;免疫印迹法检测千里光菲灵碱对自噬相关蛋白表达的影响;荧光共定位法检测自噬体与溶酶体的融合情况;建立荷宫颈癌HeLa、Caski细胞移植瘤裸鼠模型,检测千里光菲灵碱对移植瘤生长的抑制作用。结果显示,千里光菲灵碱呈时间和剂量依赖性抑制HeLa、Caski两种宫颈癌细胞的增殖;千里光菲灵碱可诱导HeLa、Caski细胞内自噬体的形成和LC3-II蛋白的增加及P62蛋白的减少,表明千里光菲灵碱可诱导HeLa、Caski细胞发生自噬;与单药千里光菲灵碱相比,千里光菲灵碱联合自噬下游抑制剂氯喹(CQ)显著增加了LC3-II及P62的蛋白表达,同时荧光共定位显示千里光菲灵碱诱导的自噬体可与溶酶体实现共定位,表明千里光菲灵碱可诱导完整自噬流;与单药千里光菲灵碱相比,千里光菲灵碱联合自噬上游抑制3-甲基腺嘌呤(3MA)剂显著增加了LC3-II的蛋白表达,显著降低了HeLa、Caski细胞的存活率,表明抑制自噬可增强千里光菲灵碱对宫颈癌细胞增殖的抑制作用;与单药千里光菲灵碱相比,千里光菲灵碱联合MEK抑制剂显著降低了P-ERK1/2的蛋白表达,减少了自噬体的形成,表明千里光菲灵碱诱导的HeLa、Caski细胞自噬依赖于MEK/ERK1/2途径;另外,千里光菲灵碱可显著抑制宫颈癌细胞裸鼠皮下移植瘤的生长。     

MEK/ERK信号通路在上皮性卵巢癌顺铂耐药中的参与作用

目的 分析MEK/ERK信号通路在上皮性卵巢癌顺铂耐药中的参与作用,为临床治疗提供参考。 方法 分析郑州大学第一附属医院2015年2月-2017年8月期间诊治的92例卵巢癌顺铂耐药患者(观察组)的临床资料,检测患者MEK/ERK(extracellular regulated protein kinases)信号转导通路相关蛋白的表达。以同期未发生顺铂耐药的卵巢癌患者(对照组)90例为对照。 结果 卵巢癌顺铂耐药患者血清中MEK/ERK信号通路蛋白Ras、Raf、MEK、ERK1、ERK2及PI3K和AKT蛋白的表达水平明显高于对照组,且差异存在统计学意义(均P<0.05);观察组患者血清中Bcl2 (B-cell lymphoma-2)蛋白的表达水平明显高于对照组,细胞凋亡蛋白Bax(Bcl-2 associated X protein,BAX)和caspase-9(cysteinyl aspartate specific proteinase 9)水平明显低于对照组,且差异存在统计学意义(均P<0.05)。 结论 卵巢癌顺铂耐药过程可能与体内MEK/ERK信号通路及PI3K和AKT蛋白的异常表达有关。      

阿托伐他汀改善老年糖尿病肾病肾功能效果分析及MEK/ERK信号通路蛋白的参与研究

目的本研究分析阿托伐他汀改善老年糖尿病肾病肾功能效果及MEK/ERK信号通路蛋白的参与作用,为临床治疗提供参考。方法分析我院2015年12月至2017年6月期间诊治的糖尿病肾病患者临床资料。160例患者随机分为两组:对照组和观察组。对照组患者进行常规糖尿病肾病治疗,观察组患者在常规治疗的基础上加阿托伐他汀治疗,分析两组患者的治疗效果及治疗后MEK/ERK信号通路蛋白的表达变化。结果与老年糖尿病肾病患者经治疗后β2-MG和UA水平明显降低,且观察组患者的下降幅度更明显,差异有统计学意义(P<0. 05);治疗前对照组和观察组患者Ras、Raf和ERK及ERK1/2蛋白差异无统计学意义(P>0. 05),而治疗后上述蛋白均明显降低,且观察组研究对象变化更明显差异有统计学意义(P<0. 05)。结论阿托伐他汀能有效改善老年糖尿病肾病肾功能,且可能与影响MEK/ERK信号通路蛋白水平有关。     

胆固醇调节自噬信号通路的研究进展

胆固醇是生物体内的一种脂质小分子,参与构成类固醇性激素、胆汁酸、维生素D等物质。此外,胆固醇也是生物膜的基本组成部分,在膜转运、物质运输、信号转导等方面发挥重要作用。自噬是真核细胞内普遍存在的一种复杂生物过程,对维持细胞生存以及内环境稳态至关重要。自噬的过程涉及了多分子、多步骤的级联反应,这也预示自噬调控通路的多样性和复杂性。随着对脂质代谢的研究,人们逐渐认识到胆固醇在自噬的发生、发展以及自噬体的运输和定位等过程中扮演重要的角色。本文对胆固醇调节自噬的信号通路进行综述,希望对相关研究者有一定的帮助。     

木犀草素对糖尿病性白内障大鼠的晶状体保护作用及对MEK/ERK信号通路的影响研究

目的:研究木犀草素对糖尿病性白内障大鼠的晶状体保护作用及对MEK/ERK信号通路的调节作用.方法:将60只大鼠随机分为正常对照组、白内障组以及木犀草素低、中、高剂量组,每组12只,采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液(60 mg/kg)方法建立糖尿病性白内障模型大鼠,木犀草素低、中、高剂量组分别按照20 mg/kg、4...     

Up-regulation of Ras/Raf/ERK1/2 signaling in the spinal cord impairs neural cell migration, neurogenesis, synapse formation and dendritic spine development

Background The Ras/Raf/ERK1/2 signaling pathway controls many cellular responses such as cell proliferation, migration, differentiation, and death. In the nervous system, emerging evidence also points to a death-promoting role for ERK1/2 in both in vitro and in vivo models of neuronal death. To further investigate how Ras/Raf/ERK1/2 up-regulation may lead to the development of spinal cord injury, we developed a cellular model of Raf/ERK up-regulation by over- expressing c-Raf in cultured spinal cord neurons （SCNs） and dorsal root ganglions （DRGs）.     

抑制 MEK／ERK 通路对孤独症模型大鼠病症行为的影响

目的：探讨抑制 MEK ／ERK 通路对孤独症模型大鼠病症行为的影响。方法大鼠怀孕12．5 d 后采用一次性腹腔注射丙戊酸钠（VPA）制备孤独症幼大鼠模型。 U0126处理组于 VPA 注射后每天给大鼠口服400μg／kg MEK ／ERK 通路抑制剂U0126直至断奶。将出生幼鼠分为4组：对照组、VPA 处理组、U0126处理组、VPA 联合 U0126处理组。在幼鼠出生后35 d 进行社会交往行为检测、神经行为学检测,并分离提取脑组织蛋白通过 Western blot 分析 MEK／ERK 通路关键蛋白 MEK 与 ERK表达情况。结果与对照组比较,VPA 处理组社会交往能力下降、在中央区活动时间增加、站立次数减少,符合孤独症行为特征;U0126处理组无明显行为学变化;但 VPA 联合 U0126处理组能明显改善 VPA 处理导致的孤独症行为症状。 Western blot 结果显示,与对照组比较,VPA 处理可增强大鼠前额叶、海马及小脑组织中 MEK 与 ERK 磷酸化水平;而 VPA 联合 U0126处理组则能抑制上述脑组织中 MEK 与 ERK 磷酸化水平。结论 U0126可改善孤独症模型大鼠的病症行为,机制可能与抑制脑组织中MEK ／ERK 通路相关。     

白藜芦醇抑制胃癌细胞株MKN45增殖的机制研究*

目的 通过研究白藜芦醇抑制胃癌MKN45细胞增殖及对丝裂原活化蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路的影响,探讨白藜芦醇抗胃癌的作用机制。方法 体外常规培养胃癌MKN45细胞,将细胞分为对照组、MEK/ERK信号通路抑制剂PD98059组（PD98059组）、白藜芦醇低剂量组（100?μmol/L）、 白藜芦醇高剂量组（400?μmol/L）。各组细胞处理1、2和4?h后,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blotting法检测Ras、Raf、MEK、ERK1/2蛋白的表达,细胞免疫化学法检测Ras、Raf、MEK、ERK1/2蛋白荧光强度的变化。结果 与对照组比较,PD98059组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组细胞在处理1、2和4?h后,细胞增殖受到抑制（P?<0.05）,且呈时间剂量依赖性;PD98059组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组细胞Ras、Raf、MEK和ERK1/2表达下降,差异有统计学意义（P?<0.05）,且白藜芦醇的作用呈剂量依赖性（P?< 0.05）;MEK和ERK1/2蛋白主要定位于细胞质中,且PD98059组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组细胞ERK1/2的荧光强度均减弱。结论 白藜芦醇呈剂量依赖性抑制胃癌细胞株MKN45的增殖,可能与抑制MEK/ERK信号通路,减弱Ras、Raf、MEK和ERK1/2的表达有关。     

PTPIP51、p-Raf-1及ERK1/2在口腔鳞状细胞癌中的表达

目的探讨PTPIP51和p-Raf-1及ERK1/2在口腔鳞状细胞癌中的表达及对口腔鳞癌侵袭、转移的影响。方法收集32例口腔鳞状细胞癌及其配对癌旁正常口腔黏膜组织。用免疫荧光组织化学染色激光共聚焦显微镜检测PTPIP51与p-Raf-1蛋白在组织切片内表达及定位;PBS冲洗后对标本进行苏木精-伊红染色,普通光镜对比观察组织结构及细胞形态,同时用免疫组织化学方法(SP法)检测PTPIP51蛋白在组织和细胞内的定位;Rea-ltime PCR检测PT-PIP51与ERK1/2基因mRNA在肿瘤组织及癌旁正常口腔黏膜组织的表达情况。结果 PTPIP51与p-Raf-1蛋白在癌巢周围增殖旺盛的肿瘤细胞、间质免疫细胞及部分脉管壁内皮细胞表达阳性且2种蛋白在细胞中共定位表达。同时发现PTPIP51与ERK1/2基因mRNA在口腔鳞癌组织表达高于配对癌旁正常口腔黏膜组织,差异具有统计学意义(P<0.05);ERK1/2及PTPIP51基因mRNA表达呈正相关(r=0.641,P<0.05);两者的表达水平与患者的性别、年龄,病理分级无关,与肿瘤的TNM分级及有无淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 PTPIP51与Raf-1可能通过Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与口腔鳞状细胞癌的发生、发展过程,且2种蛋白与肿瘤的侵袭、转移有密切关系。     

丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶信号通路与肿瘤血管新生的关系

丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路参与调控肿瘤的生长和转移,而肿瘤的生长需要新生血管的维持,肿瘤血管的生成需要血管内皮细胞的参与,包括内皮细胞的增殖、迁移、侵袭。作为Ras/Raf/MEK/ERK途径是该网络信号的核心,本文就MAPK/ERK信号通路中各环节与肿瘤血管新生的联系做一综述,进一步研究其在抑制肿瘤生长方面做出推论。     

PI3K/Akt抑制剂对内质网应激下肝癌细胞MEK/ERK途径的影响

目的:研究内质网应激介导的PI3K/Akt抑制剂对肝癌细胞MEK/ERK途径的影响。方法:采用PI3K抑制剂LY294002/激活型突变载体myr-Akt分别阻断/激活内质网应激介导的Akt和ERK活化,并利用Western blot ting技术分析内质网应激条件下PI3K/Akt和MEK/ERK途径间的关系。结果:阻断PI3K/Akt促进内质网应激介导的MEK/ERK活化,过度激活PI3K/Akt则抑制内质网应激介导的MEK/ERK活化。结论:PI3K/Akt和MEK/ERK信号途径间在内质网应激肝癌细胞中可能存在信号交流。     

平喘宁对哮喘大鼠肺组织MEK1、MEK2、Ras mRNA表达的影响

目的 观察平喘宁对寒性哮喘大鼠气道形态学及肺组织中丝裂原活化蛋白激酶的激酶（mitogen-activated protein kinase kinase,MEK）1 mRNA、MEK2 mRNA及Ras mRNA表达水平的影响。方法 将105只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,桂龙咳喘宁组,地塞米松组,平喘宁高、中、低剂量组,每组15只。以卵蛋白致敏及寒冷刺激复制大鼠哮喘模型,模型复制21 d后,分别给予地塞米松组,桂龙咳喘宁组,平喘宁高、中、低剂量组大鼠相应药物灌胃,给予正常组和模型组大鼠等容量蒸馏水灌胃。4周后取出肺组织,采用苏木精-伊红染色行病理形态学观察,采用逆转录-聚合酶链式反应半定量检测MEK1 mRNA、MEK2 mRNA及Ras mRNA表达水平。 结果 与正常组比较,模型组发生明显炎性细胞浸润,气道平滑肌增厚;MEK1 mRNA、MEK2 mRNA以及Ras mRNA表达水平显著増高（P<0.05）。与模型组比较,地塞米松组、桂龙咳喘宁组、平喘宁组大鼠肺组织病理改变减轻;各治疗组MEK1 mRNA、MEK2 mRNA以及Ras mRNA表达水平显著降低（P<0.05）。 结论 平喘宁可明显减轻哮喘大鼠的气道炎性反应,抑制哮喘大鼠肺组织中MEK1 mRNA、MEK2 mRNA以及Ras mRNA的表达,延缓气道重塑而治疗哮喘。     

欧前胡素调节ERK/MAPK信号通路对肺结核大鼠炎症反应的影响

目的 探讨欧前胡素（Imp）调节细胞外调节蛋白激酶（ERK）/有丝分裂原激活蛋白激酶（MAPK）信号通路对肺结核大鼠炎症反应的影响。方法 64只大鼠随机分为对照组12只及造模组52只,造模组大鼠通过尾部注射结核杆菌方法建立肺结核大鼠模型,之后随机分为模型组、Imp低（Imp-L,25 mg/kg）、中（Imp-M,50 mg/kg）、高剂量（Imp-H,100 mg/kg）组、Imp-H+ERK特异性激活剂（EGF,100 mg/kg Imp+25 mg/kg EGF）组。干预结束后,主动脉采血,ELISA检测各组大鼠血清中白细胞介素-6（IL-6）、γ干扰素（IFN-γ）、环氧化酶-2（COX-2）水平;分离肺组织,HE、Tunel分别检测大鼠肺组织病理学变化及细胞凋亡情况;统计肺组织中结核杆菌菌落数;Western blot检测p-ERK1/2/ERK1/2、p38 MAPK表达水平。结果 与对照组相比,模型组肺组织严重病变,IL-6、IFN-γ、COX-2、细胞凋亡率、结核杆菌菌落数、p-ERK1/2/ERK1/2、p38 MAPK表达均显著增加（P＜0.05）;与模型组相比,Imp-L组、Imp-M组、Imp-H组病理损伤得到缓解,IL-6、IFN-γ、COX-2、细胞凋亡率、结核杆菌菌落数、p-ERK1/2/ERK1/2、p38 MAPK表达显著降低,以Imp-H组变化最为显著（P＜0.05）;与Imp-H组相比,Imp-H+EGF组病理损伤进一步加重,IL-6、IFN-γ、COX-2、细胞凋亡率、结核杆菌菌落数、p-ERK1/2/ERK1/2、p38 MAPK表达显著增加（P＜0.05）。结论 Imp可降低肺结核炎症反应,与抑制ERK/MAPK信号通路的激活有关     

Raf／MEK／ERK信号通路对CXCL16诱导的CIA淋巴细胞增殖的影响

目的探讨细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路在CXCL16诱导的CIA小鼠淋巴细胞增殖中的调控作用。方法CCK8法检测CXCL16对CIA小鼠淋巴细胞增殖的影响,ELISA法检测细胞上清中TNF-α及RANKL表达,WesternBlot检测p-Raf-1、p-ERK1/2蛋白的表达,同时观察MEK抑制剂对CXCLl6诱导的上述变化的影响。结果CXCL16对正常小鼠淋巴细胞增殖的刺激作用不明显,但CIA＋CXCLl6组淋巴细胞增殖能力明显高于CIA空白组及CIA＋CXCL16＋抑制剂组（P〈0．05）。CIA＋CXCL16组TNF—α水平明显高于其他各组（P〈0．01）。RANKL水平在CIA＋CXCL16组明显高于CIA空白组（P〈0．01）,但与CIA＋CXCL16＋抑制剂组相比无明显差别。p-Raf-1／β—actin及p-ERK1/2／β—actin在CIA＋CXCL16组明显高于CIA空白组（P〈0．05）。结论CXCL16可能通过激活Raf／MEK／ERK信号通路,诱导CIA小鼠淋巴细胞增殖活化。