人胎羊膜移植预防肌腱粘连的实验研究

目的 探讨红花注射液保存的人胎羊膜植入防治肌腱粘连的作用机制。方法 将30只成年鸡随机分成两组,每组15只,各30根屈肌腱予以切断,左足为实验组行断端吻合后植入红花注射液保存的胎羊膜、右足为对照组、空白组分别植入未经药液保存的胎羊膜及单纯吻合。通过肉眼、光镜观察肌腱愈合假鞘形成及粘连情况,并测定生物力学、病理组织学评分及腱组织中羟脯氨酸含量。结果 1、肉眼观察：实验组左足爪肌腱完全恢复正常,腱周无粘连,对照组无明显粘连,空白组有粘连,且粘连程度较重。2、光镜观察：实验组腱周有纤维组织形成,见腱周裂隙,断端愈合,肌腱外周无明显组织粘连。对照组大致同左足爪,断端基本愈合,腱周无明显粘连。空白组无腱周裂隙形成,有较多成纤维细胞及少量单核细胞浸润。3、生物力学测定：趾关节总屈曲角度、屈趾深肌腱滑移距离比较,实验组明显大于空白组,有极显著性差异（P＜0.01）;实验组大于对照组,有显著性差异（P＜0.05）。4、病理组织学观察：实验组纤维增生量、粘连程度及范围显著小于空白组（P＜0.01）。实验组腱内纤维增生量、肌腱粘连程度及范围少于对照组（P＜0.05）; 5、腱组织中羟脯氨酸含量测定：实验组与空白组比较,有显著性差异（P＜0.05）;实验组与对照组比较,有显著性差异（P＜0.05）。结论 红花注射液保存的胎羊膜可有效防治肌腱吻合术粘连。     

玻璃化法保存同种异体肌腱移植材料的可行性

摘要 背景：处理同种异体肌腱最主要目的是减少免疫原性和保持肌腱结构与活性。现在临床上常用的低温冷冻法操作复杂、费时，所保存的肌腱活性较低。 目的：以玻璃化法保存鸡屈趾深肌腱，探索其作为肌腱移植材料的可行性。 方法：将成年来亨鸡跖趾关节远侧屈趾深肌腱切断，以数字表法随机分为2组，分别移植同种异体玻璃化肌腱与自体肌腱。术后2，4，8，12，16周观察移植肌腱在形态结构、羟脯氨酸含量和力学性能等方面的变化。 结果与结论：玻璃化肌腱移植组早期存在轻度的免疫排斥反应，但不影响肌腱愈合与重建。两组肌腱周围产生中度粘连，移植后肌腱中段的羟脯氨酸含量先减少，8周后逐渐增高，而吻合口部羟脯氨酸含量随时间逐渐增高，两组间羟脯氨酸含量差异无显著性意义。在8周内玻璃化肌腱移植组吻合口部的破裂强度与弹性模量低于自体肌腱移植组(P < 0.05)，12周后差别无显著性意义。两组肌腱中段部生物力学性能差异无显著性意义。说明玻璃化保存的同种异体肌腱生物活性好、免疫原性低，是良好的肌腱移植材料。 关键词：玻璃化；低温冷冻；肌腱；同种异体移植；生物材料与组织工程 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.12.021     

外源性碱性成纤维细胞生长因子对鞘内肌腱愈合和粘连的影响

背景：碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF) 能促进体外腱细胞的增殖及胶原分泌，并促进鞘外肌腱的愈合，但其对鞘内肌腱的作用的资料较少。 目的：探讨外源性bFGF对鞘内肌腱愈合和粘连形成的作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2004-05/2005-02在上海市第六人民医院实验动物中心实验室完成。 材料：成年雄性来亨鸡90只制备鸡右爪第3趾趾深屈肌腱横断模型，随机均分为3组，每组30只。 方法：对照组：肌腱横行切断后原位修复。纤维蛋白封闭剂组：在肌腱断端使用纤维蛋白封闭剂0.6 μL后，原位修复肌腱。bFGF组：在断端使用bFGF和内含bFGF 500 ng的纤维蛋白封闭剂混合物0.6 μL，原位修复肌腱。 主要观察指标：术后1，2，4，8周，每组各取6只鸡进行大体、组织学检测；术后8周每组再取6只鸡进行生物力学测定。 结果：对照组与纤维蛋白封闭剂组间各项观测指标比较均无显著性差别，与对照组和纤维蛋白封闭剂组相比，bFGF组修复部位腱鞘、腱外膜及腱实质的新生血管形成、成纤维细胞增殖较好，胶原的分泌出现早，数量也较多；肌腱滑动距离较短，屈曲功和肌腱最大抗拉力较大。 结论：在肌腱断端使用外源性bFGF能促进鞘内肌腱的愈合，但也加重了肌腱的粘连。     

骨形态发生蛋白2对移植肌腱在骨隧道内愈合的影响：界面组织学特点★

目的: 前交叉韧带重建移植肌腱在骨隧道内多为间接愈合，即在肌腱与骨之间没有纤维软骨带而直接由Sharpey’s纤维固定。观察人重组骨形态发生蛋白2对移植肌腱在骨隧道内愈合的影响。 方法：实验于2004-06/09在上海市第六人民医院动物实验室完成，动物实验方法符合动物伦理学要求。①实验材料及分组：选用新西兰大白兔36只，按随机数字表法分为3组，即空白对照组、胶原海绵组及骨形态发生蛋白2组，每组12只。②实验方法：采用兔膝关节自体半腱肌重建前交叉韧带悬吊固定模型，骨形态发生蛋白2组在骨隧道内加入人重组骨形态发生蛋白2和胶原海绵，胶原海绵组仅在骨隧道内加入胶原海绵。③实验评估：术后4，8，12周在移植物周围取材进行苏木精-伊红、天狼猩红和Masson染色，观察骨隧道和肌腱移植物间的界面组织学变化，采用Yamakado分类评价界面形态愈合类型，并对Masson染色切片作肌腱周围新骨形成的形态学定量评估。 结果：空白对照组2只白兔于术后第10周脱失。①术后4周空白对照组腱骨间有腱-骨分离，骨形态发生蛋白2组腱-骨间充满结缔组织；术后8周骨形态发生蛋白2组形成Sharpey’s纤维，而空白对照组术后12周时开始出现Sharpey’s纤维。②术后4，8，12周骨形态发生蛋白2组白兔新骨形成面积均显著大于空白对照组、胶原海绵组（P < 0.01）。 结论：人重组骨形态发生蛋白2可促进移植肌腱在骨隧道内的愈合，促进腱-骨之间形成间接连接。     

可吸收表皮生长因子复合膜防止肌腱粘连的研究★

背景：采用液态分子生物材料作为屏障预防肌腱粘连发生，存在药物降解快、流失量大、屏障作用不理想等问题，因此研究者们越来越多的倾向于膜态屏障材料的研制开发。同时发现肌腱损伤后，腱细胞在多种内源性的生长因子作用下增殖分化，促进了肌腱的内源性愈合，但究竟哪一种因子是肌腱愈合的特异性因子，也是学者们研究的焦点之一。 目的：观察表皮生长因子复合胶原膜在预防鞘管区肌腱粘连、促进肌腱内源性愈合中的作用。 方法：将30只10月龄雄性leghorn公鸡随机分为3组，每组10只。将每只鸡的左足第三趾造成挤压撕脱伤模型，用改良Kessler缝合法缝接。断端分别包裹复合有表皮生长因子的胶原膜、单纯的胶原膜以及断端不加任何处理。术后4周，对标本进行大体观察、生物力学测试、光镜、电镜等观察。 结果与结论：表皮生长因子胶原膜组肌腱粘连程度较轻，腱缝合段内的胶原纤维数量多，以粗大的Ⅰ型胶原为主；成纤维细胞数量少，腱细胞成熟。单纯胶原膜组肌腱粘连较轻，但腱缝合段内的胶原纤维数量少，排列稀疏，以纤细的Ⅲ型胶原为主；空白对照组肌腱与周围组织粘连重，腱缝合段内的胶原纤维数量较多，排列紊乱，Ⅰ、Ⅲ型胶原交错排列。结果表明表皮生长因子来促进肌腱的内源性愈合，可降解胶原膜修复腱鞘可阻止肌腱的外源性愈合，从而达到防止肌腱粘连的目的。     

转化生长因子β1中和抗体对转化生长因子β诱导肌腱胶原和术后粘连的影响

背景: 研究表明,转化生长因子β1在肌腱损伤愈合过程中增加了肌腱细胞胶原的合成和术后粘连的形成。 目的：观察转化生长因子β1抗体对转化生长因子β诱导的肌腱细胞胶原产生及术后粘连形成的影响。 设计、时间及地点：随机分组观察实验,于2005-09/2006-06在同济医学院实验动物中心完成。 材料：选择2~5月龄新西兰大白兔,体质量3.5~4.5 kg。转化生长因子由美国Santa Cruz B iotechnology公司提供。 方法：取兔屈指肌腱分离肌腱成纤维细胞、腱外膜细胞和腱内膜细胞,将细胞随机分成2组,实验组加入1 µg/L 转化生长因子β后,再加入0.1,0.5,1.0 mg/L转化生长因子β1中和抗体,对照组不添加任何试剂,酶联免疫吸附实验测定Ⅰ型胶原。取84只兔行中趾屈指肌腱切断吻合术,将其中36只兔随机分成3组,腱鞘内分别注入生理盐水、1.0,2.0 mg/L转化生长因子β1中和抗体,4,8周后取出肌腱行肌腱粘连检测、生物力学测定、组织学观察和扫描电镜观察;余48只兔随机分成2组,腱鞘内分别注入生理盐水和1.0 mg/L转化生长因子β1中和抗体,1,2,4,8周后取出肌腱,原位杂交方法测定肌腱转化生长因子β1和Ⅰ型胶原mRNA的表达。 主要观察指标：各组兔肌腱细胞胶原产生及术后粘连情况。 结果：酶联免疫吸附实验显示,转化生长因子β1能明显提高肌腱细胞Ⅰ型胶原的产生;转化生长因子β1抗体能降低3种细胞Ⅰ型胶原的产生,随抗体质量浓度增加,Ⅰ型胶原水平逐渐降低,且呈剂量依赖性;术后4,8周,与1.0,2.0 mg/L 转化生长因子β1组比较,生理盐水组屈趾肌腱滑动距离较短,模拟主动屈曲度明显受限(P < 0.05),最大抗断裂载荷各组间比较差异无显著性意义(P > 0.05)。扫描电镜和组织学观察结果显示,术后4,8 周生理盐水组胶原纤维排列紊乱,1.0,2.0 mg/L 转化生长因子β1组胶原纤维排列整齐。原位杂交结果显示,术后各时间点1.0 mg/L 转化生长因子β1组转化生长因子β1 和Ⅰ型胶原mRNA表达均低于生理盐水组(P < 0.05)。 结论：转化生长因子β1抗体能有效抑制转化生长因子β1在肌腱损伤修复中的作用,减少粘连形成。     

链霉素缓释复合降解膜植入损伤肌腱局部腱周结缔组织的变化

背景：国内外学者曾用生物、非生物及药物等方法,诸如生物膜、透明质酸钠、纤维素密封胶等材料进行大量肌腱修复防粘连研究,但到目前为止尚未取得突破性进展。 目的：观察肌腱损伤局部植入链霉素复合降解膜后腱周结缔组织的增生。 方法：切断SD大鼠跟腱后,随机数字表法分为3组,分别在肌腱断端缝合处植入链霉素复合缓释降解膜、维生素C复合缓释降解膜、空白缓释降解膜。术后90 d行肌腱损伤局部组织学观察、羟脯氨酸含量和生物力学指标检测。 结果与结论：链霉素复合缓释降解膜组肌腱缝合处内部的成纤维细胞、胶原纤维均较其腱周围、维生素C复合缓释降解膜组、空白缓释降解膜组多;腱缝合处肌腱周围多为正常结构的疏松结缔组织,很少有增生的结缔组织长入肌腱内部;肌腱与周围组织分界清晰,最大抗拉强度、羟脯氨酸含量明显优于其他两组。表明链霉素复合缓释降解膜通过抑制腱周结缔组织增生,防止腱周结缔组织增生长入腱内,从而减轻或防止粘连形成。     

透明质酸钠复合重组人骨形态发生蛋白2凝胶对自体半腱肌重建兔前交叉韧带腱-骨愈合的生物力学分析

背景：在前交叉韧带重建的早期，腱-骨连接处是整个移植物-骨隧道复合体的薄弱环节，所以腱-骨愈合的情况是关系韧带移植重建成败的关键。 目的：观察透明质酸钠复合重组人骨形态发生蛋白2凝胶对自体半腱肌重建兔前交叉韧带后腱-骨愈合的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-09/2008-06在潍坊医学院动物实验中心实验室完成。 材料：将重组人骨形态发生蛋白2和透明质酸钠混合制成混悬凝胶注射剂。48只兔随机分成2组，每组24只48膝。 方法：实验组随机选取一侧于胫骨隧道入口处注入重组人骨形态发生蛋白2与透明质酸钠凝胶（透明质酸钠-重组人骨形态发生蛋白2亚组），另一侧仅做重建后骨道不予处理（未处理亚组）；对照组随机选取一侧于胫骨骨道入口处仅注入重组人骨形态发生蛋白2（重组人骨形态发生蛋白2亚组），另一侧仅注入透明质酸钠（透明质酸钠亚组）。 主要观察指标：术后2，4，8，12周大体观察肌腱移植物生长情况及在胫骨隧道内的愈合情况，生物力学拉伸试验测定其生物力学的性能。 结果：透明质酸钠-重组人骨形态发生蛋白2亚组在术后2周隧道内见稀疏软骨样组织，4~8周时隧道内见沿骨隧道排列的软骨样组织，双股肌腱之间形成稳定组织连接。l2周时出现部分骨样组织包裹肌腱。其他亚组术后2周时隧道内仅为瘢痕组织，到术后12周隧道内肌腱与骨道壁之间仍充满瘢痕组织，未见稳定组织连接形成。4，8和12周透明质酸钠-重组人骨形态发生蛋白2亚组和重组人骨形态发生蛋白2亚组肌腱移植物部分断裂和完全断裂平均载荷高于未处理亚组与透明质酸钠亚组(P < 0.05)，同时，透明质酸钠-重组人骨形态发生蛋白2亚组高于重组人骨形态发生蛋白2亚组 (P < 0.05)。 结论：注入透明质酸钠-重组人骨形态发生蛋白2的肌腱移植物有良好的生物力学特性，能促进肌腱移植物在骨隧道内的早期腱-骨愈合。     

关节镜下自体、异体骨-髌腱-骨与半腱肌腱3种重建后交叉韧带方法的比较

背景：目前重建后交叉韧带的方法很多，常涉及到不同的移植材料，但不同移植材料之间比较的研究较少见。 目的：比较分析膝关节镜下自体、异体骨-髌腱-骨与半腱肌腱3种重建后交叉韧带的疗效。 设计、时间及地点：回顾性病例分析，于2000-01/2005-09在解放军广州军区广州总医院骨科完成。 对象：选择2000-01/2005-09收治的交叉韧带损伤患者76例，其中异体骨-髌腱-骨移植27例，自体骨-髌腱-骨移植21例，自体四股半腱肌28例。 方法：回顾分析21例膝关节镜下自体骨-髌腱-骨移植、28例自体半腱肌腱移植和27例异体骨-髌腱-骨移植重建后交叉韧带的情况。采用Lysholm膝关节评分、国际膝关节文献编制委员会分级评估标准(IKDC)和KT-1000评价疗效。检测术后住院期间患者体温。 主要观察指标：①关节活动范围。②后抽屉试验及KT-1000检查关节稳定性。③Lysholm和IKDC评分检测膝关节整体功能。④不良反应。 结果：随访26~79个月。3组患者终末随访的IKDC分级、Lysholm评分、KT-1000结果和后抽屈试验阳性率之间的组间差异无显著性意义(P > 0.05)。自体骨-髌腱-骨重建组3例膝关节10°屈曲受限；同种异体骨-髌腱-骨重建组1例5°屈曲受限；半腱肌腱重建组2例屈曲受限。3组间膝关节屈曲受限比率差异无显著性意义。3组患者均无关节粘连、伤口感染、植入物断裂、螺丝钉松脱、髌骨骨折、血管神经损伤等并发症；自体骨-髌腱-骨重建组12例有不同程度的膝前痛。半腱肌腱重建组5例有不同程度的膝后痛。3组膝周痛发生率的组间差异有显著性意义(P=0)，自体骨-髌腱-骨组最高，半腱肌组次之，异体骨-髌腱-骨最低。3组术后发热时间组间比较发现，异体骨髌腱骨高于自体骨髌腱骨和自体半腱肌组(P=0)。自体骨髌腱骨与自体半腱组间的差异无显著性意义(P=0.844)。4例异体骨-髌腱-骨出现排斥反应，表现为胫骨隧道外口持续果酱样液体流出，经换药、激素或消炎痛治疗后痊愈。 结论：关节镜下自体、异体骨-髌腱-骨与半腱肌腱移植重建后交叉韧带均取得满意的结果，并且疗效相似。     

肩袖损伤模型大鼠肌腱组织中4种生长因子表达及皮质激素和 透明质酸的干预

背景：组织工程学在治疗肩袖损伤中扮演了重要的角色，调控生长因子的表达来促进损伤肩袖的愈合及预防粘连是其中的主要部分。 目的：比较皮质激素和透明质酸对肩袖损伤模型肌腱组织中表皮生长因子、血小板源性生长因子、转化生长因子β、碱性成纤维细胞生长因子表达的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-07/09在上海交通大学医学院动物实验中心完成。 材料：36只SD大鼠随机分成4组：正常组6只，肩袖损伤组6只，透明质酸治疗组12只，皮质激素治疗组12只。 方法：切除大鼠双侧岗下肌腱全厚层50%，宽约5 mm，于滑膜面建肩袖损伤模型。透明质酸治疗组肩峰下滑囊注射0.05 mL透明质酸钠；皮质激素治疗组肩峰下滑囊注射倍他米松0.05 mL。 主要观察指标：术后3周，6周取岗下肌腱标本RT-PCR检测表皮生长因子、血小板源性生长因子、转化生长因子β、碱性成纤维细胞生长因子表达水平。 结果：①皮质激素治疗肩袖损伤后6周表皮生长因子表达强度是3周时的近2倍，透明质酸治疗6周表皮生长因子表达明显减弱（P < 0.01）。②血小板源性生长因子在两种药物治疗3周后表达均增强，其中皮质激素治疗肩袖损伤3周后表达最强（P < 0.01），但6周后回复至正常水平，而透明质酸治疗6周后表达仍高（P < 0.05）。③转化生长因子β在两种药物治疗后3周表达均增强（P < 0.05），6周后回复至正常水平。④碱性成纤维细胞生长因子在皮质激素治疗后3周表达减弱（P < 0.05），6周后回复至正常水平；透明质酸治疗后3周，6周的表达均维持较高水平（P < 0.05）。 结论：皮质激素在肩袖损伤修复过程中对4种因子的调控主要在早期；透明质酸在修复早期、后期均有不同程度的作用；皮质激素的调控作用主要是促进生长因子的表达，而透明质酸存在双向调控作用。