NF-κB decoy寡核苷酸转染对结肠癌细胞NF-κB DNA结合活性的影响

目的观察核转录子κB(NF-κB)decoy寡核苷酸(ODNs)转染对结肠癌细胞NF-κB DNA结合活性的影响。方法将体外培养的人结肠癌SW480细胞随机分为5组。对照组:不作处理;脂多糖(LPS)组:LPS刺激3 h;NODN组:LPS刺激3 h后转染NF-κB decoy ODNs 6 h;SODN组:LPS刺激3 h后转染Scrambled ODNs 6 h;Lipo-fectamine2000组:LPS刺激3 h后加入同等剂量Lipofectamine2000 6 h。之后提取各组细胞核蛋白,用Western blot法检测NF-κB p65,用TransAMTM法检测细胞核NF-κB p65的DNA结合活性(用吸光度值,即A值表示)。结果细胞核中NF-κB p65的相对含量在对照组为10.1%±3.2%、LPS组为91.3%±17.8%、NODN组为86.5%±13.4%、SODN组为90.2%±14.9%、Lipofectamine2000组为89.7%±15.1%;LPS组、NODN组、SODN组、Lipo-fectamine2000组与对照组相比,P均<0.01。细胞核NF-κB p65的DNA结合活性(A值)在对照组为0.124±0.210、LPS组为1.547±0.110、NODN组为0.327±0.053、SODN组为1.509±0.172、Lipofectamine2000组为1.497±0.167;LPS组、NODN组、SODN组、Lipofectamine2000组与对照组相比,P均<0.01;NODN组与LPS组、SODN组、Lipofectamine2000组相比,P均<0.01;SODN组与Lipofectamine2000组相比,P>0.05。结论用NF-κB decoy寡核苷酸干预,可以明显抑制结肠癌细胞NF-κB p65的DNA结合活性。     

NF-κB"诱骗"寡核苷酸对结肠癌SW480细胞IL-8表达的影响

目的 探讨核转录因子κB (NF-κB)"诱骗(decoy)"寡核苷酸(ODNs)对结肠癌SW480细胞IL-8表达的影响.方法 体外培养SW480细胞,LPS(10 μg/L )刺激3 h后,用脂质体lipofectin2000介导NF-κB decoy ODNs转染 6 h,ELISA法检测上清液中IL-8,RT-PCR检测细胞IL-8 mRNA,并设对照组、LPS组、SODN组、lipofectin2000组.结果 转染NF-κB decoy ODNs细胞的 IL-8 mRNA和IL-8的表达高于对照组(P<0.01),但明显低于其他组(P<0.01). 结论 NF-κB decoy ODNs明显抑制SW480细胞IL-8的表达.     

NF-κB decoy寡核苷酸对人结肠癌细胞株SW480/ADM耐药性的逆转作用

目的探讨核转录因子κB（NF-κB）decoy寡核苷酸对人结肠癌细胞株SW480/阿霉素（ADM）耐药的逆转作用。方法应用脂质体转染方法将NF-κB decoy寡核苷酸质粒转入SW480及SW480/ADM细胞株并证实基因转入成功,MTT法检测SW480及SW480/ADM对ADM的药物敏感度并观察NF-κB decoy寡核苷酸对耐药的逆转程度。结果构建NF-κB decoy寡核苷酸有效,能降低核内NF-κB表达;核内NF-κB表达可以导致SW480耐药细胞株药物敏感度增高,并与剂量和时间相关。结论 NF-κB decoy寡核苷酸对人结肠癌细胞株SW480/ADM耐药有明显的逆转作用。     

芥菜籽提取物对人结肠癌细胞系SW480凋亡的影响

目的观察芥菜籽提取物（MSE）对人结肠癌细胞系SW480细胞凋亡的影响并初步探讨其可能的机制。方法采用体外细胞培养技术,用CCK-8法观察MSE对人大肠癌SW480细胞生长的影响;Hoechest3325荧光染色显微镜下观察凋亡细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡;Caspase-3活性检测试剂盒分析其凋亡机制。结果在浓度0．2—1．0mg／ml作用24—72h范围内,MSE对SW480细胞增殖具有明显抑制作用（P〈0．01）。24h内其凋亡率随着药物浓度的增加而增加,且逐渐从早期凋亡走向晚期凋亡,呈浓度依赖性;24h内Caspase-3活性较对照组显著提高（P〈0．05）。结论MSE能有效抑制体外培养的人结肠癌细胞SW480的生长,这种抑制作用与MSE促进肿瘤细胞凋亡、激活凋亡蛋白酶Caspase-3的活性有关。     

内毒素急性肺损伤TLR4-LPS信号传导对NF-κB活性的影响

目的本文旨通过检测肺组织TLR4、NF-κB表达及支气管肺泡灌洗液炎症因子含量,探讨TLR4/NF-Kb信号在ALI发病中的作用。方法 30只大鼠随机分为对照组、ALI组和干预组。静脉注射LPS构建肺损伤模型,实时定量PCR及western blot检测肺组织TLR4、NF-κB表达,ELISA法检测TNF-α、IL-1β浓度。结果肺损伤评分:ALI组TLR4拮抗剂干预组对照组,肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β浓度较对照组分别增加了7倍和3.5倍。ALI组肺组织中TLR4和NF-κB表达明显增加,TLR4拮抗剂能抑制二者表达。结论 TLR4/NF-κB信号通路在脂多糖大鼠急性肺损伤模型的发展过程中起重要作用,TLR-4受体过表达诱导NF-κB活化及其下游炎症因子释放,加重急性肺损伤。     

动脉粥样硬化易损斑块与TLR4/NF-κB信号通路关系的研究进展

Toll受体4（TLR4）能识别多种病原相关分子模式,并能促进白细胞浸润、脂质核心的形成、纤维帽变薄、血管新生等病理过程,在动脉粥样硬化易损斑块的发生发展中的作用极其重要。TLR4能激活核转录因子（NF-κB）和促炎性蛋白,进一步促进炎症反应的发生和动脉粥样斑块的不稳定性增加。本文总结近年有关动脉粥样硬化易损斑块与TLR4/NF-κB信号通路关系的研究进展。     

新霉素抑制促胃液素促人结肠癌细胞株SW480增殖的研究

目的观察新霉素（ＮＭ）对五肽促胃液素（ＰＧ）促人结肠癌细胞株ＳＷ４８０增殖的影响,探讨肌醇脂质信号通路可能参与的作用及临床意义．方法ＭＴＴ比色分析法检测活细胞数（ＶＣＣ）;［３Ｈ］肌醇标记细胞进行三磷酸肌醇（ＩＰ３）分析;Ｃａ２＋荧光测定技术检测细胞内Ｃａ２＋浓度;［γ３２Ｐ］ＡＴＰ掺入法测定蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性．结果ＰＧ＋ＮＭ组的ＳＷ４８０细胞活细胞数降低,与对照组相比Ｐ＜００１,与ＰＧ组相比Ｐ＜００１;ＰＧ＋ＮＭ组细胞内ＩＰ３,Ｃａ２＋浓度降低,与ＰＧ组相比Ｐ＜００１,与对照组相比Ｐ＞００５;ＰＧ＋ＮＭ组膜ＰＫＣ活性降低,与ＰＧ组相比Ｐ＜００５,与对照组相比Ｐ＞００５．结论ＮＭ可能通过肌醇质脂信号通路而抑制ＰＧ促人结肠癌细胞株ＳＷ４８０的增殖,这将为结肠癌的抗信息传导治疗提供实验依据．     

RNAi对结肠癌SW480细胞Nucleostemin基因表达的影响

目的:探求RNA技术干扰人结肠癌SW480细胞Nucleostemin(NS)基因后,结肠癌SW480细胞NucleosteminmRNA和蛋白水平的表达,及细胞增殖情况变化.方法:构建Nucleostemin特异性真核表达载体,和脂质体共同转染SW480细胞后,采用Real-timePCR和Westernblot方法检测NS基因mRNA和蛋白变化,MTT法检测细胞的增殖情况.结果:与对照组相比较,RNAi干扰细胞后NSmRNA表达明显下降;NS蛋白表达亦明显下降(1.069±0.368,1.003±0.313,1.901±0.817,P<0.05;1.069±0.368,1.003±0.313,2.035±0.665,P<0.05),空白对照组(仅加入脂质体)和阴性对照组(RNAi错义序列)间无显著差异(2.035±0.665,1.9001±0.817,P>0.05).MTT显示RNA干扰后细胞增殖明显受到抑制.结论:通过特异性RNA干扰NS基因后,结肠癌SW480细胞增殖受到抑制.     

SEA对人结肠癌SW480细胞周期进程及凋亡的影响

目的 体外观察葡萄球菌肠毒素A(SEA)对人结肠癌细胞株SW480的增殖抑制作用.方法 应用MTr比色法检测不同浓度的SEA对SW480细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期进程的变化及凋亡率,电子显微镜检测亚细胞水平变化.结果 不同浓度的SEA对SW480细胞增殖抑制率分别为18.5％、37.6％和41.5％,与对照组相比差异显著.流式细胞仪结果显示Go/G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高.电子显微镜可见,细胞线粒体肿胀、胞膜破裂、细胞核染色质趋边、凝集,可见凋亡小体.结论 SEA能显著抑制SW480细胞增殖,抑制SW480细胞周期G1期向S期转化进程,从而使G2/M期细胞相对增高,诱导SW480细胞凋亡及亚细胞结构改变.     

内毒素急性肺损伤 TLR4-LPS 信号传导对 NF-κB 活性的影响黄继义简

目的 本文旨通过检测肺组织TLR4、NF-κB表达及支气管肺泡灌洗液炎症因子含量,探讨TLR4/NF-Kb信号在ALI发病中的作用.方法 30只大鼠随机分为对照组、ALI组和干预组.静脉注射LPS构建肺损伤模型,实时定量PCR及western blot检测肺组织TLR4、NF-κB表达,ELISA法检测TNF-α、IL-1β浓度.结果 肺损伤评分：ALI组〉TLR4拮抗剂干预组〉对照组,肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β浓度较对照组分别增加了7倍和3.5倍.ALI组肺组织中TLR4和NF-κB表达明显增加,TLR4拮抗剂能抑制二者表达.结论 TLR4/NF-κB信号通路在脂多糖大鼠急性肺损伤模型的发展过程中起重要作用,TLR-4受体过表达诱导NF-κB活化及其下游炎症因子释放,加重急性肺损伤.     

片仔癀对人结肠癌SW480细胞株的抑制作用研究

目的探究片仔癀对人结肠癌SW480细胞株的抑制效果。 方法通过对人结肠癌SW480细胞株常规体外培养,随机设定空白组、5-氟尿嘧啶（5-FU）组和不同浓度片仔癀组,分别采用对应药物干预24 h、48 h、72 h,并通过细胞增殖活力检测法（MTT法）和荧光显微镜观察其抑制效果。采用人结肠癌SW480细胞株建立结肠癌小鼠模型,把造模成功的150只小鼠随机分为模型组,5-FU组和片仔癀低、中、高剂量组,每组30只;分别以不同剂量药物外敷3 d,通过抑瘤率和原位凋亡检测（TUNEL法）解释抑制效果。 结果1 mg/mL、2 mg/mL、3 mg/mL浓度片仔癀对人结肠癌SW480细胞体外抑制率最高,为70.05%、71.39%、70.12%,与5-FU组比较差异具有统计学意义（χ²=4.49,4.97,4.52;均P<0.05）。4 mg/mL片仔癀抑制率为67.39%,与5-FU组比较差异无统计学意义（χ²=3.57,P>0.05）;荧光显微镜显示5-FU组与片仔癀各组人结肠癌SW480细胞株数量均显示不同程度的减少、体积变小、折光性差、细胞悬浮及脱落死亡。片仔癀高、中、低剂量组对人结肠癌SW480细胞的体内抑瘤率分别为51%、39%、23%,其中高、中剂量组与5-FU组比较差异无统计学意义（χ²=0.05,0.49;均P>0.05）,低剂量组与之比较差异有统计学意义（χ²=4.09,P<0.05）;荧光显微镜显示片仔癀各剂量组和5-FU组对人结肠癌SW480细胞均有不同程度的凋亡反应。 结论片仔癀外用对人结肠癌SW480细胞生长有明显的抑制作用,高、中剂量体内抑制作用与5-Fu相近,优于低剂量,临床可考虑采用高剂量可能取得更佳效果,体外抑制作用上显示则优于5-Fu,但剂量差异影响不大。     

异硫氰酸苯乙酯对结肠癌SW480细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的探讨异硫氰酸苯乙酯(PEITC)对结肠癌SW480细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法选择6~8周龄的SPF级BALB/c(nu/nu)雄性裸鼠24只,将其随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,各6只。体外培养结肠癌细胞系SW480,对照组加入等体积的二甲基亚砜(DMSO),低剂量组、中剂量组和高剂量组分别给予10、30和50μmol/L PEITC作用24 h,Western blot检测PI3K和PTEN的表达和Akt、mTOR磷酸化情况。最后,建立裸鼠异种移植瘤动物模型,观察PEITC对异种移植瘤生长的抑制作用。结果 PEITC能抑制PI3K的表达以及Akt和mTOR磷酸化。肿瘤质量:高剂量组中剂量组低剂量组对照组,抑瘤率:高剂量组中剂量组低剂量组(P0.05)。结论 PEITC可能通过影响PI3K/Akt/mTOR通路发挥抗肿瘤作用。     

miR-93靶向TLR4/NF-κB信号通路对动脉粥样硬化大鼠血管内皮炎症反应的影响

目的 探究微小核RNA(miR)-93对Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB的调控作用及对动脉粥样硬化(AS)大鼠血管内皮炎症反应的影响。方法 大鼠经高脂饲料喂养+腹腔注射维生素D3复制AS模型,随机分为正常对照组、模型组、miR-93模拟物(miR-93 agomir)组、agomir-NC组、RS09(TLR4激活剂)组、miR-93 agomir+RS09组,每组15只,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血脂[三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]和炎症因子[白细胞介素(IL)-6、C反应蛋白(CRP)]水平;流式细胞术检测循环内皮细胞比例以评价血管内皮损伤状况;Movat染色观察动脉血管泡沫细胞聚集状况;油红O染色检测斑块面积;免疫组化法检测M1型巨噬细胞标记抗体(CD11)阳性表达水平;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miR-93表达;Western印迹法检测TLR4/核因子(NF)-κB通路蛋白、脂质沉积相关蛋白如三磷酸腺苷(ATP)结合盒转运体(ABC)A1、载脂蛋白(Ap...     

白藜芦醇调控TLR4/NF-κB信号通路对溃疡性结肠炎大鼠炎症反应的影响

目的 探讨白藜芦醇调控Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB信号通路对溃疡性结肠炎大鼠炎症反应的影响。方法 选取50只SD大鼠,随机分为对照组、模型组、白藜芦醇低、中、高剂量组。观察大鼠结肠组织病理学变化;观察大鼠结肠黏膜大体评分和病理组织学;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-10表达;采用Western印迹和PCR检测大鼠结肠组织TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白及基因表达,并利用分子对接技术对白藜芦醇与TLR4/NF-κB信号通路的结合进行验证。结果 与空白组相比,模型组病理评分、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、TLR4和NF-κB蛋白及mRNA水平较高,IL-10水平较低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,白藜芦醇各剂量组TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4和NF-κB蛋白及mRNA水平较低,IL-10水平较高,差异有统计学意义(P<0.05);分子对接验证白藜芦醇与TLR4、NF-κB分子的结合能分别为-6.37、-5.31。结论 白藜芦醇可以...     

TLR2、TLR4和TLR9在慢性重型肝炎患者及肝衰竭大鼠中的表达

目的:观察重型肝炎患者及肝衰竭大鼠中TLR2、TLR4和TLR9的表达,为重型肝炎肝衰竭发病机制的研究提供思路.方法:免疫组织化学法检测慢性重型肝炎患者肝组织及外周血单个核细胞(PBMC)中TLR2、TLR4和TLR9表达,同时平行设立慢性乙型肝炎、肝硬化患者和正常人作为对照.免疫组织化学法检测急性肝衰竭、慢加急性肝衰竭及正常大鼠肝组织中TLR2、TLR4和TLR9表达.阳性对照为大鼠结肠组织.结果:正常人、慢性乙型肝炎和肝硬化患者肝组织中TLR2和TLR9未见表达;慢性重型肝炎患者肝组织中TLR2和TLR9有表达;正常人及慢性乙型肝炎患者PBMC中TLR2、TLR9未见表达,慢性重型肝炎患者PBMC中TLR2和TLR9有表达;正常大鼠肝组织TLR2、TLR9未见表达,急性肝衰竭和慢加急性肝衰竭大鼠肝组织中TLR2、TLR9有表达;TLR4在所有标本中均未见表达,但在阳性对照中有表达;TLR2、TLR9的表达多见于炎性细胞中,在肝实质细胞上表达很少.结论:TLR2、TLR9的高表达与机体的免疫状态密切相关,可能参与了重型肝炎和肝衰竭的发病过程.     

过氧化氢酶对SW480细胞内细胞因子和NF-κB激活的影响

目的观察过氧化氢酶(catalase,CAT)对脂多糖(Liposaccharide,LPS)诱导肠癌细胞株SW4430细胞内TNF-α、IL-1β、IL-8的表达和NF-κB激活的影响。方法LPS刺激SW480细胞后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测细胞内TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的表达水平;应用免疫电泳迁移率变动分析(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)法检测细胞内NF-κB的激活。结果CAT 预孵后,TNF-α(正常对照组0.00±0.01,LPS组1.33±0.94,CAT预孵组0.65±0.59,CAT处理组1.31±0.07)、IL-1β(正常对照组0.00±0.05,LPS组0.83±0.05,CAT预孵组0.32±0.06,CAT处理组0.82±0.04)、IL-8(正常对照组0.00±0.01,LPS组1.03±0.20,CAT预孵组0.62±0.25,CAT处理组0.98±0.23)的表达较LPS组和CAT处理组明显降低(P<0.05)。NF-κB的核结合活性也减弱,但较正常对照组仍明显增强。结论CAT能降低SW480细胞对应激的反应,这一作用可能是通过抑制NF-κB的核结合活性,进而降低致炎细胞因子的表达完成的。     

有氧运动对CAP大鼠前列腺组织miR-155表达、TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨有氧运动对慢性非细菌性前列腺炎(CAP)大鼠前列腺组织miR-155表达、Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB信号通路的影响。方法 雄性健康SD大鼠随机分为正常对照组(正常组)、CAP模型对照组(模型组)、游泳运动观察组(运动组),每组10只,注射消痔灵进行大鼠造模,模型形成期7 d,后运动组进行50 min/(次·d)的游泳运动,每周运动6 d,持续28 d,正常组和模型组不进行任何运动,自由活动取食;末次运动结束后2 h处死大鼠,采用ELISA检测前列腺组织白细胞介素(IL)-8、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达,Western印迹检测TLR4、NF-κB P65蛋白相对表达,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-155表达,观察各组前列腺组织病理学改变。结果 28 d游泳运动结束后,与正常组比较,模型组和运动组前列腺组织内IL-8、IL-6、TNF-α、TLR4、NF-κB P65和miR-155表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,运动组上述各项观察指标均显著降低(P<0.05);相关分析显示,TLR4、NF...     

槐耳清膏对缺氧结肠癌SW480细胞VEGF及HIF-1α表达的影响

目的: 观察槐耳清膏对体外培养人结肠癌SW480细胞系VEGF和HIF-1α表达的影响.方法: 体外培养人结肠癌SW480细胞48 h, 随机分为常氧对照组(NC组)、低氧对照组(HC组)和低氧槐耳组(HH组), HH组RPMI 1640培养基含槐耳清膏(终浓度1 g/L). 半定量RT-PCR检测SW480细胞VEGF和HIF-1α mRNA表达水平, Western blot检测两者蛋白表达水平.结果: HH组和HC组VEGF、HIF-1α mRNA表达水平均显著高于NC组(4.71±0.07, 4.54±0.02 vs 1.19±0.03;5.68±0.07, 5.58±0.05 vs1.21±0.05, 均P<0.05), 但HH组与HC组比较无统计学差异. HC组VEGF、HIF-1α蛋白表达均显著显著高于NC组(0.66±0.03 vs 0.38±0.02;0.58±0.04 vs 0.31±0.03, 均P<0.05), 与HC组比较, HH组VEGF和HIF-1α蛋白表达均显著下降(0.37±0.03, 0.30±0.05, 均P<0.05).结论: 槐耳清膏通过下调人结肠癌SW480细胞内HIF-1α和VEGF蛋白表达抑制肿瘤生成.     

益生菌对实验性结肠炎大鼠肠黏膜TLR2、TLR4表达及NF-κB活性的影响

目的通过检测益生菌对实验性结肠炎大鼠肠黏膜上皮细胞(IECs)Toll样受体(Toll Like recefor,TLR)、TLR4表达及肠黏膜核因子,kappa B活化的影响,探讨益生菌预防与辅助治疗溃疡性结肠炎的作用机制。方法将30只雄性SD大鼠随机分为3组,即正常对照组(N)、模型组(M)、益生菌组(P)。正常对照组正常饲养,不予任何处理;模型组给予含5%葡聚糖硫酸钠dextransulfate sodium的饮用水10 d建立亚急性结肠炎模型,第11 d开始常规饲养观察2周;益生菌组则在建立模型后给予双歧三联活菌500 mg.kg-1.d-1灌胃,1次/d,共2周;2周后处死所有大鼠,观察疾病活动指数(DAI),进行组织学评分(HPS)和分离ICEs并提取ICE中的总RNA,用RT-PCR法检测TLR2、TLR4的表达;采用免疫组织化学方法检测NF-κB的活性情况。结果益生菌组的症状、组织损害程度均较模型组明显减轻;模型组和益生菌组TLR2和TLR4的表达均明显高于正常对照组(P<0.001);与模型组比较,益生菌组TLR2的表达增加(P<0.05),而TLR4的表达则明显下降(P<0.001);模型组NF-κB活性明显高于益生菌组和正常对照组(P<0.001),益生菌组与正常对照组NF-κB活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论益生菌通过促使TLR2表达进一步增加,并可抑制TLR4的表达,进而控制NF-κB的活性,并在缓解肠道炎症中发挥作用。