亚麻子水提液对DPP-4及α-葡萄糖苷酶活性抑制实验研究

目的通过观察亚麻子水提液对二肽基肽酶-4（DPP-4）、α-葡萄糖苷酶抑制作用,为该药防治糖尿病提供实验依据。方法①以DPP-4酶、缓冲液、底物建立DPP-4抑制剂的体外筛选体系,对亚麻子水提液进行抑制实验,采用发色底物法测定吸光度（OD）,计算DPP-4抑制率及IC50值;②以蔗糖为底物建立α-葡萄糖苷酶活性抑制模型,采用葡萄糖氧化酶法测定亚麻子水提液对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,计算其抑制率和IC50值。结果①亚麻子具有轻度DPP-4抑制作用,其IC50值738.20mg/L;②亚麻子具有α-葡萄糖苷酶抑制作用,其IC50值为365.9mg/mL。结论亚麻子水提液可一定程度地抑制DPP-4及α-葡萄糖苷酶活性。     

亳菊花中β-葡萄糖苷酶的提取和酶学性质研究

目的 测定亳菊花中β-葡萄糖苷酶的活性,研究亳菊花中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质。方法 采用对硝基苯酚-β-D葡萄糖苷（4-nitrophenyl-β-D-glucopyranoside,pNPG）法考察亳菊花中β-葡萄糖苷酶活性测定的最佳条件及其酶学性质。结果 当0.2 mL酶液、20 mmol/L pNPG 0.2 mL、0.6 mL pH值为4.0的柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液在温度为50 ℃的水浴中反应45 min时,酶活性最高。在此条件下对亳菊花的粗酶液中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质进行初步研究,结果表明该酶在30～50 ℃时,随着温度升高,酶活力有上升趋势,其热稳定性较好;pH值在3.2～5.4之间时,相对酶活性均在80%以上;酶在4 ℃下的保存稳定性较好。结论 本研究所测定的亳菊花中β-葡萄糖苷酶活性的最佳条件及酶学性质可为亳菊花炮制原理研究奠定基础。     

中药提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

目的:研究2种中药提取物对α-葡萄糖苷酶活性的影响。方法:以4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)为底物,用分光光度法测定反应体系的吸光度值,判定对α-葡萄糖苷酶活性的影响作用。结果:天麻素和川芎嗪对α-葡萄糖苷酶活性的最大抑制率分别为89.1%和84.0%,IC50值分别为2.4μg/mL和3.0μg/mL,天麻素抑制机制为混合性而川芎嗪抑制机制为竞争性。结论:天麻素和川芎嗪对α-葡萄糖苷酶均具有较强的抑制作用。     

血浆弹性蛋白酶的微量测定和临床应用

目的　拟建立一种血浆弹性蛋白酶的快捷、微量测定方法。方法　以琥珀酰甘氨酰对硝基苯胺 (succinyl-L -trianalinyl-p -nitroanilide ,SLAPN)作为弹性蛋白酶的作用底物 ,根据单位时间内 4-硝基苯胺释放量 (A450nm)的变化 ,反应弹性蛋白酶的活性。结果　线性范围为 0～ 5 0 0 μg/L,批内和批间误差分别为 5 .0 2 %和 8.3 2 % ,血浆用量仅为 2 0～ 40 μl。正常健康人 (n =12 )血浆弹性蛋白酶含量 (3 7.5 0± 15 .5 6)μg/L。肠瘘合并感染患者 (n =6)为 (4 8.40± 2 7.82 )μg/L,明显高于正常人 (P <0 .0 1)。猪急性出血坏死性胰腺炎 (5 %牛磺胆酸钠 + 80 0 0～ 10 0 0 0u/ml胰蛋白酶 )诱导12h后为 (2 3 9.0 6± 180 .2 4) μg/L明显高于诱导前水平〔(3 6.15± 9.40 ) μg/L,P <0 .0 1〕。结论　该方法操作简便、快捷、灵敏度高、特异性好 ,易推广普及     

马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的提取及酶学性质的研究

目的 建立pNPG法测定马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的活性，研究马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质，为进一步阐明青黛炮制原理提供依据。方法 采用pNPG法考察马蓝叶中β-葡萄糖苷酶活性测定的最佳条件。结果 最适反应条件为总反应体积1 mL，反应时间45 min，底物pNPG体积0.2 mL，浓度25 mmol/L，缓冲液pH值6，反应温度55 ℃。在此条件下研究马蓝叶的粗酶液中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质，结果表明该酶在30～60 ℃热稳定性较差。该酶在pH 5.0～ 7.0比较稳定，而在酸性条件下酶活下降较快，酶的pH值稳定性范围较窄。酶在4 ℃下的保存稳定性较好。结论 确定了测定马蓝叶中β-葡萄糖苷酶活性的最佳条件，探索了马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的酶学性质，该酶的热稳定性、pH值稳定性和保存稳定性的研究为青黛炮制原理的研究奠定了理论依据。     

HPLC法测定大鼠肝微粒体中UGT酶的底物

目的 建立测定大鼠肝微粒中UGT酶底物的HPLC方法.方法 选择对硝基酚、对乙酰氨基酚作为UGT的特异性底物.采用高效液相色谱法,分别以非那西丁、咖啡因作为内标,色谱柱为Welchrom C18,体积流量为1 mL/min,柱温为30℃.对硝基酚和对乙酰氨基酚的流动相分别为乙腈-0.01 mol/L的醋酸铵缓冲液（pH5.00）=35∶65和乙腈-水=14∶86,对应的检测波长分别为316 nm和244 nm.结果 对硝基酚和对乙酰氨基酚在0.5～100 μmol/L范围内,线性关系良好.对硝基酚的日内精密度和日间精密度RSD％＜14.7％,方法回收率为89.9％～111.0％,提取回收率＞86.5％.对乙酰氨基酚的日内精密度和日间精密度RSD％＜13.0％,方法回收率105.6％～114.2％,提取回收率＞78.3％.结论 两组方法灵敏、简便、准确,可用于大鼠肝微粒体中UGT酶活性的测定.     

突发性耳聋患者血浆同型半胱氨酸血症与凝血-纤溶系统的变化

目的观察突发性耳聋(SSHL,突聋)患者血浆同型半胱氨酸(Hcy)与凝血-纤溶系统的变化关系,并探索其临床意义。方法收集突聋患者110例为病例组,另选110名性别、年龄和种族等与其相匹配的无突聋者作为对照组,采用荧光偏振免疫检测技术为基础的自动化免疫检测方法测定血浆同型半胱氨酸总量(t Hcy)。用发色底物法测定血浆中溶酶原激活剂抑剂因子-1(PAI-1)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)活性;用PT-Der法测定纤维蛋白原的含量。结果突聋组血浆t Hcy水平(17.82±4.21)μmol/L显著高于对照组(13.71±3.59)μmol/L,P<0.01。病例组血浆PAI-1和t-PA活性分别为(23.4±2.5)U/mL和(0.8±0.2)U/mL;血浆纤维蛋白原(Fg)的平均浓度是(5.6±1.1)g/L。对照组血浆PAI-1和t-PA活性分别为(12.8±1.9)U/mL和(6.5±2.5)U/mL;血浆Fg的平均浓度是(2.8±0.6)g/L。结论在突聋患者中血浆t Hcy和凝血-纤溶系统的变化有密切相关性。血浆t Hcy、t-PA和Fg的检测有可能作为突聋患者治疗观察和愈后评价的参考指标。     

用4-硝基-1-萘基磷酸酯为底物测定碱性磷酸酶活性

目的：合成4-硝基-1-萘基磷酸酯 (4-nitro-1-naphthyl phosphate,NNPP)为显色底物测定牛小肠粘膜碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase, ALP)。方法：4-硝基-1-萘酚(4-nitronaphthol, 4-NNP)与三氯氧磷反应,经硅胶柱纯化制得NNPP;检测产物吸收跟踪水解过程测定初速度,双倒数法测定米氏常数(Michaelis-Menten constant, Km)。结果：ALP水解NNPP产物最大差吸收峰接近460 nm,等吸收波长接近405 nm。与p-硝基苯酚相比,在pH 6.0~7.0间4-NNP消光系数为其3倍以上,在pH 7.0以上为其2倍以上。ALP对NNPP的Km约12?mol/L而p-硝基苯基磷酸酯的Km约35?mol/L,产物磷酸相对NNPP的竞争性抑制常数接近20?mol/L。ALP催化NNPP水解效率接近水解p-硝基苯基磷酸酯的40％。结论：NNPP可用于测定ALP活性, 且有望与作用于p-硝基苯酚类显色底物的其它酶联用实现单通道两种酶同步测定。     

正常人唾液中γ-谷氨酰转肽酶的初步探讨

本文应用γ-谷氨酰对硝基苯胺作底物,测定了116名健康青少年和成人的唾液中γ-GT活力,平均为92.69±44.18×10~(-3)nmol/S(5.56±2.65×10~(-3)u/m1)(x+S.下同),其活力大小不受年龄、民族和性别的影响.浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条γ-GT活性带,分子量为55万.等电聚焦电泳在pH5.0处出现一条γ-GT活性带,个别人的唾液在pH6.3处还有一条酶活性带.     

尿毒症患者外周血超氧岐化酶测定及临床意义

目的 探讨SOD活性对尿毒症患者治疗观测的影响作用.方法 用化学发光法测定SOD活性以比较血透前后SOD含量.结果 健康对照组与慢性肾功能不全病人血浆SOD浓度分别为(285.31±68.41)u/mL与(196.53±45.42)u/mL(P＜0.05),尿毒症病人血透前后血浆SOD浓度分别为(196.53±45.42)u/mL与(293.76±72.61)u/mL(P＜0.05).结论 SOD活性是观察尿毒症患者疗效的有效指标,为临床治疗提供指导作用.     

棘托竹荪菌盖胞外β-葡萄糖苷酶酶学特性研究

目的 研究棘托竹荪菌盖胞外β-葡萄糖苷酶酶学特性. 方法 将棘托竹荪菌盖胞外酶冻干粉以缓冲液进行溶解,经透析、离心后,以DNS为显色剂,以水杨苷为底物,采用分光光度法,对β-葡萄糖苷酶的主要酶学特性和不同抑制剂、激活剂对酶活性的影响进行研究. 结果 β-葡萄糖苷酶的最适反应pH为4.0,最适反应温度为65℃;Hg2＋、Cu2＋对酶起抑制作用,Fe2＋、Zn2对酶具有激活作用;棘托竹荪菌盖胞外β-葡萄糖苷酶对水杨苷的米氏常数（Km）为1.320×10-2 mol/L,最大反应速度Vmax为0.143 7μmol/min,比活力为2.874 U/mg. 结论棘托竹荪菌盖胞外β-葡萄糖苷酶偏好酸性环境,其温度适应范围较宽,温度升高可提升酶催化活性,但影响酶的稳定性.     

十种中药提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

目的:观察10种中药提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用.方法:以麦芽糖为底物,观察10种中药提取物(500 g/L)对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,设阿卡波糖为阳性对照.取反应液0.01 mL,用氧化酶法测定生成葡萄糖的浓度;另取反应液,采片j酶标仪测定吸光度,计算小同中药提取物对α-葡萄糖苷酶活性的抑制率.取3种对α-葡萄...     

血清白细胞弹性蛋白酶的检测及其在急性胰腺炎病情观察中的应用

为建立酶动力学方法检测血清白细胞弹性蛋白酶(Human leukocyte elas-tase,HLE),选择高敏感底物琥珀酰-(L-丙氨酸)2-缬氨酸-对硝基苯胺。该底物在HLE催化下释放出对硝基苯胺。通过在405nm处测定产物吸光度的变化,推算出HLE的活性。结果显示,该实验的米氏常数为0.086mmol/L,最适底物浓度为2.0mmol/L,最适PH为8.0,线性范围O～300U/L;精密度试验高、中、低值分别为批内CV(％)1.25、2.60、4.80,批间CV(％)1.77、3.50、5.15;正常参考值为8～20U/L;轻、重两型胰腺炎患者血清HLE与正常对照组均有显著性差异。提示该法简捷、快速、准确、灵敏,可用于手工操作及自动化分析。     

芳香酯酶测定底物探讨及临床应用评价

目的该科合成芳香酯酶(ArylesterhydrolaseEC3.1.1.2,ArE)底物4-已酰氧基-3-甲氧基-ω-硝基乙烯;建立手工的和自动生化仪检测方法;评价在常见肝病中的应用。方法底物合成:香草醛加冰乙酸、乙酸铵。在乙醇溶液中用硝基四烷进行硝基化,滤取结晶。用乙酸酐进行酯化,滤取结晶,重结晶。方法建立。程序:取pH8.6Tris-HCL缓冲液2.5ml,加血清30ul,再加3mmol/l底物液0.4ml,37℃10min,加5ml/dl正丁醇3ml。混匀,在520nm,读取吸光度。摩尔消光系数(20345±280)A。计算:ArEU/L=971.3×A。结果反应条件:底物溶剂以甲醇13.65%为最佳。产物光吸收峰498nm,选用520nm,吸光度达93.20%。择取pH8.6缓冲液,加0.51mmol/LCa2 和68.3mmol/LNa 可提酶活力14.00%。批间CV为3.21%~4.52%。溶血、黄疸和脂血标本对ArE结果无干扰。临床应用:90例健康人ArE(470.6±49.7)U/L,参考值:<421U/L。肝硬化、肝癌、肝炎3组ArE结果x±S,U/L分别是(266±77),(35±84)和(366±111);ROC曲线下面积分别是0.979,0.910和0.807。面积愈大诊断价值愈高,ArE愈低,肝功能愈差。尤其对肝硬化、肝癌。肝硬化组<421U/L阳性率为92.30%;肝癌ArE(Y)与脂碱脂酶CHE相关系数为0.909,Y=0.045X 190.53。结论ArE简便可靠。在肝硬化、肝癌、肝炎中阳性率性高,特异性好。有望     

以DCAP—P为底物的酸性磷酸酶连续监测法的建立

目的建立以2,6-二氯-4-乙酰基苯基磷酸盐(DCAP-P)为底物的一种新的酸性磷酸酶(ACP)的测定方法.方法在BTS-310半自动生化分析仪上研究连续监测法,建立实验参数.结果本法测定DCAP吸收峰为326nm;ACP的Km=0.139mmol/L;340nm时DCAP的摩尔消光系数为14440L/(mol×cm);缓冲液浓度0.1mol/L,最适pH5.4,底物浓度2.0mmol/L,延滞期60s,线性反应期15min;线性范围为0～1188u/L;血红蛋白(Hb)＜115.62mg/L对测定结果无影响;黄疸对测定结果无影响;本法总ACP与PAP(前列腺酸磷酶)的参考值范围分别为12.58～19.42u/L、2.52～9.04u/L.结论此方法重复性好,线性反应期长,线性范围广,干扰因素少,适用于自动生化分析.     

肝纤维化时血清胆碱酯酶的诊断及意义

目的评价血清胆碱酯酶的检测对慢性肝炎导致肝纤维化的诊断意义。方法对35例健康成人及130例慢性活动性肝炎病人(包括乙肝、丙肝)及病理学上有肝纤维化和肝硬化的病人的血清胆碱酯酶进行测定,同时测定了谷丙转氨酶、谷草转氨酶和白蛋白等其他血清学指标。结果正常健康成人血清胆碱酯酶活性为8120±2620 u/L,慢性活动性肝炎病人血清胆碱酯酶活性(Ⅰ)为7234±2108 u/L,肝纤维化病人血清胆碱酯酶活性(Ⅱ)为3526±1174 u/L,肝硬化病人血清胆碱酯酶活性(Ⅲ)为2291±1053 u/L。结论在所检测的血清酶中,胆碱酯酶是唯一一个在肝纤维化时活性明显改变的酶。胆碱酯酶活性高低与病理分级程度有一定相关性。因此,胆碱酯酶是诊断早期肝纤维化及肝组织损伤程度的特异性指标。     

苍术提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

目的：研究苍术不同提取物对α-葡萄糖苷酶活性的影响。方法：分别用水、60%乙醇、乙酸乙酯为溶剂提取苍术的活性成分,以PNPG（4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷）为底物,测定各提取物对α-葡萄糖苷酶活性的作用。结果：苍术的水、乙醇、乙酸乙酯提取物对α-葡萄糖苷酶活性的最大抑制率分别为62.23%、100%和55.6%,IC50值分别为0.25mg.mL、0.38mg.mL和0.41mg.mL-1。结论：苍术提取物对α-葡萄糖苷酶具有抑制作用,其中乙醇提取物抑制作用最强。     

2-氯-4-硝基苯-麦芽三糖苷作为α-淀粉酶底物的实验研究

目的：研究α-淀粉酶及其底物2-氯-4-硝基苯-麦芽三糖苷（CNP-G3）酶促反应过程中的激动剂，抑制剂，最适pH、米氏常数等。方法：以测定酶促反应速度的方式分别进行综合。结果：阳离子中仅钙离子和氨离子对α-淀粉酶有轻度的激活作用，阴离子中的氯离子对α-淀粉酶有强大的激活作用，约是迭氮钠的4倍，醋酸离子也有弱激活作用。硫酸，磷酸氢，碳酸离子无激活作用；乙二胺四乙酸是酶的强抑制剂；酶的最适pH为5.9-6.1；酶以CNP-G3为底物时的Km值约为0.22mmol/L;麦芽糖对α-淀粉酶有显著的抑制作用；EGTA为钙离子螯合剂，可调节反应速度，结论：α-淀粉/CNP-G3酶促反应系统研究可用于酶活性和激动剂测定。     

ELISA酶底物邻苯二胺-过氧化氢系统最适浓度的选择

用棋盘滴定法对ELISA中酶底物邻苯二胺-过氧化氢的最适浓度进行了研究。发现邻苯二胺的最适浓度为14.8 mmol/L;过氧化氢的最适浓度为1.7mmol/L。使用最适底物浓度可明显提高FLISA的敏感性。     

口腔肿瘤恶变与唾液蔗糖酶活性的相关性研究

目的 :探讨唾液蔗糖酶活性与口腔肿瘤恶变之间的相互关系。方法 :采用邻甲苯胺测糖法 ,测定单位时间内唾液蔗糖酶水解蔗糖生成的葡萄糖量 ;在PH6 ,37℃条件下进行酶反应用双倒数作图法测出表观Km和表观Vm值 ;检测蔗糖酶活性。结果 :正常人唾液蔗糖酶活性为 1 32 2± 0 434mU/mgpro ,口腔鳞癌患者唾液蔗糖酶活性为 1 5 48± 0 6 5 7mU/mgpro ,二者之间比较无显著差异 (P >0 0 5 ) ;正常人唾液蔗糖酶的表观Km =(1 1 2± 2 4)× 1 0 -2 mol/L ,表观Vm =1 1 38± 0 35 2 (每分钟光密度值 ) ,口腔鳞癌患者唾液蔗糖酶的表观Km =(9 5±2 2 )× 1 0 -2 mol/L ,表观Vm =(1 0 89± 0 6 32 ) (每分钟光密度值 )。结论 :口腔良性肿瘤、涎腺腺瘤、口腔鳞癌患者与正常人比 ,唾液蔗糖酶活性无显著差异。