整合素-β1在转化生长因子-β2诱导晶状体上皮细胞转化中的作用

目的探讨整合素-β1(integrinβ1)在转化生长因子-β2(TGF-β2)体外诱导晶状体上皮细胞(HLECs)向肌成纤维细胞转化中的作用。方法体外培养的HLECs,选择传3代的细胞进行实验,以TGF-β2作为诱导剂。免疫荧光方法检测HLECs integrinβ1、E-cadherin、α-SMA和F-actin的表达,RT-PCR方法检测E-cadherin和α-SMAmRNA的表达。其中部分细胞预先加入去整合素kistrin孵育1h,再加入TGF-β2刺激细胞48h。结果 TGF-β2处理晶状体上皮细胞后,integrinβ1、α-SMA和F-actin的表达明显增强,细胞E-cadherin表达明显减弱。加入去整合素kistrin后,细胞α-SMA和F-actin的表达明显减弱,细胞E-cadherin表达明显增强。结论 TGF-β2诱导了HLECs转分化,整合素-β1参与了TGF-β2诱导的HLECs向肌成纤维细胞的转化过程。     

MAPKs通路在转化生长因子β1诱导气道上皮细胞转化中的作用

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)体外诱导气道上皮细胞表型向肌成纤维细胞转化中的作用。方法TGF-β1(10μg/L)刺激气道上皮细胞株16HBE-14o,采用Westernblot方法检测刺激5min,15min,30min,1h和24h后细胞内磷酸化p38、Erk1/2和JNK的表达。分别预先加入p38MAPK、ERK1/2和JNK的特异性抑制剂孵育1h,再加入TGF-β1刺激16HBE-14o48h,免疫荧光方法检测E-cadherin、α-SMA和F-actin的表达。结果TGF-β1刺激5min后磷酸化p38、Erk1/2表达量较未予TGF-β1刺激的正常对照组明显增加,刺激15min,30min和1h后表达量稍有下降但仍较正常对照组明显增加,刺激24h后表达量恢复至基础水平。正常对照组与TGF-β1刺激组均有极微弱的磷酸化JNK表达,表达量无显著差别。加入p38MAPK和ERK1/2特异性抑制剂组,绝大多数细胞F-actin和E-cadherin仍定位在细胞边缘,表达α-SMA的阳性细胞数显著减少;加入JNK特异性抑制剂组E-cadherin、α-SMA和F-actin的表达与单纯TGF-β1刺激组相似。结论TGF-β1活化了16HBE-14o细胞内MAPKs信号通路,MAPKs(p38MAPK和ERK1/2)信号通路参与了TGF-β1诱导的16HBE-14o向肌成纤维细胞的转化过程。     

转化生长因子-β1诱导A549细胞向间充质细胞转化的作用研究

目的:观察重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对人肺上皮细胞株(A549)的转化作用。方法:将体外培养的A549用不同浓度的rhTGF-β1干预后,倒置显微镜观察细胞形态学的变化,用MTT法检测rhTGF-β1对A549增殖的影响。48 h收集蛋白用蛋白质印迹和间接免疫化学方法检测间充质细胞表型Fibronectin-EDA(Fn-EDA)表达变化。结果:rhTGF-β1诱导A549向间充质细胞形态转化,在体外对A549增殖无明显影响,上调间充质细胞表型Fn-EDA表达。结论:rhTGF-β1可诱导A549发生上皮细胞-间质转化(ephethlial-mesenchymal transition,EMT),支持肺上皮细胞发生EMT的观点。     

Smads信号通路在转化生长因子-β1诱导气道上皮细胞转分化中的作用

目的:探讨Smads信号通路在rhTGF-β1体外诱导气道上皮细胞表型向肌成纤维细胞转分化中的作用.方法:用TGF-β1(10 μg/L)处理气道上皮细胞株16HBE,Western blot法检测刺激不同时间点细胞核蛋白内磷酸化Smad 2和Smad 3(30min、24h和48 h)的表达;脂质体法瞬时转染Smad 7表达载体pCDNA 3.0/Smad 7或空载体,转染20h后,加入TGF-β1处理,RT-PCR法检测刺激不同时间E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的基因表达,免疫荧光法检测α-SMA的蛋白表达. 结果:①正常对照组核内无磷酸化-Smad 2表达,Smad 3有微弱表达,TGF-β1刺激30min时表达量明显增加,随着刺激时间的延长,表达量进一步增加;②TGF-β1刺激24h,瞬时转染Smad 7组α-SMA表达量低于相应转染空载体组,E-钙黏蛋白表达量明显高于相应转染空载体组,TGF-β1刺激36h后Smad 7组α-SMA、E-钙黏蛋白表达量与相应空载体组相似;免疫荧光显示转染Smad 7组α-SMA阳性细胞数显著低于空载体组(P<0.05). 结论:Smads信号通路参与了TGF-β1诱导的支气管上皮细胞株16HBE向肌成纤维细胞转分化过程.     

转化生长因子β-Smads通路在间充质干细胞修复软骨中的作用

骨关节炎是主要累及关节软骨的慢性疾病,软骨损伤后不能再生。间充质干细胞是软骨修复的候选材料,其向软骨分化过程中受到细胞内外多种因素的影响,其中转化生长因子Smad蛋白通路是向软骨细胞分化的主要通路。但该通路在诱导间充质干细胞软骨分化方面具有两面性,既可以向正常软骨分化,起到修复作用;也可以向肥大软骨分化,加速软骨退变。     

转化生长因子β1诱导A549细胞上皮-间充质转化的时间相关性

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导A549细胞发生上皮-间充质转化(EMT)的时间相关性。方法:将体外培养的A549细胞分为空白组(加入F-12培养基)、模型组(加入10ng/ml TGF-β1)后继续培养。采用MTT实验检测细胞的增殖能力,光学显微镜下观察细胞形态学改变,实时荧光定量PCR和Western blot法检测E-Cad、Vim、FN mRNA的蛋白表达水平。结果:模型组在48h、72h时与空白组比较,A549细胞显著增殖(均P<0.01)、细胞形态明显改变,72h时几乎所有细胞呈纺锤形;48h、72h时与空白组比较,模型组FN mRNA表达显著上调(P<0.05,P<0.01),E-Cad mRNA表达显著下调(P<0.01)。48h时与空白组比较,模型组FN蛋白表达上调(P<0.05),E-Cad蛋白表达显著下调(P<0.01)。在72h时与空白组比较,模型组FN、Vim蛋白表达明显上调(P<0.01),E-Cad mRNA表达显著下调(P<0.01)。结论:A549细胞发生EMT与TGF-β1刺激的时间长短有关。72h和48h为体外实验EMT发生的时间,72h为EMT的最佳时间点。     

白介素-1β诱导肾小管上皮细胞向间充质细胞转化的实验研究

目的通过白介素-1β(IL-1β)诱导肾小管上皮细胞转化为肾间充质细胞的研究,探讨炎症因子促进肾间质纤维化的作用机制。方法用IL-1β分别刺激小鼠肾小管上皮细胞3天、4天、5天,提取细胞中的蛋白质,采用Western-blotting测定细胞α-SMA、Vimentin蛋白水平;用IL-1β分别刺激肾小管上皮细胞12h、36h和60h,提取细胞中的总RNA,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定α-SMA、Vimentin基因表达水平。结果IL-1β能够诱导肾小管上皮细胞α-SMA、Vimentin蛋白质合成增加,并随着刺激的时间的延长,两种骨架蛋白的蛋白上皮亦增高;同时IL-1β可上调肾小管上皮细胞α-SMA、Vim-entin的基因表达,也有时间依赖性。10ng/mlIL-1β可显著抑制肾小管上皮细胞增生。结论炎症因子IL-1β可通过上调肾小管上皮细胞两种骨架蛋白的蛋白合成和基因表达,诱导肾小管上皮细胞向肾间充质细胞表型发生转化,从而在肾小管间质纤维化发生发展过程中发挥作用。     

转化生长因子-β在高血压发生中的作用

转化生长因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)首先是由Roberts等在1981年作为一个可诱发成纤维细胞增殖的因子描述的,随着对其研究的不断深入，现已知它是一个由多种细胞分泌具有多生物学效应的生长因子，新近研究发现，TGF-β基因变异与高血压及其靶器官的损害关系非常密切.现仪就TGF-β与高血压的关系，综述如下。     

转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞表达结缔组织生长因子

目的　研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对人肾小管上皮细胞 (humanproximaltubularep ithelialcells ,HTECs)表达结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor ,CTGF)的影响。方法　体外培养的HTEC被根据随机数字表分为 3组 :对照组 (C组 ) :无血清培养基 (freeserummedium ,FSM)培养 ;TGFβ1a和TGFβ1b组 (Ta 组和Tb 组 ) :分别用含不同浓度TGFβ1(Ta 组 :2 0ng/ml,Tb 组 :40ng/ml)的FSM培养 ,96h后 ,分别用RT PCR和免疫组化方法检测HTEC表达CT GFmRNA和蛋白。结果　①C组 :CTGFmRNA和蛋白表达为阴性 ;②Tb 组和Ta 组 :CTGFmRNA和蛋白表达皆呈阳性。Tb 组和Ta 组相比 ,CTGF的mRNA和蛋白表达量皆显著增加 (P <0 .0 1)。结论　TGFβ1能呈剂量依赖性地诱导HTEC合成CTGF。     

血管内皮生长因子在六价铬诱导的肺支气管上皮细胞Beas-2B恶性转化中的作用

目的: 探究在六价铬\[Cr(Ⅵ)\]诱导的人支气管上皮细胞（human bronchial epithelial cells 2B,Beas 2B）恶性转化过程中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）在迁移、侵袭及血管生成等方面的生物学作用及其可能机制。方法: 通过对VEGF高表达的恶转细胞Cr(Ⅵ) Beas 2B转染重组VEGF质粒和siRNA,分别上调和下调VEGF的表达,利用蛋白免疫印迹检测VEGF表达及迁移侵袭相关蛋白表达,划痕实验、Transwell实验、免疫荧光实验检测细胞迁移、侵袭等运动能力的改变,以及小管生成实验检测细胞血管生成能力的变化。结果： 重组质粒过表达VEGF上调了恶转细胞中VEGF、基质金属蛋白酶 9、磷酸化黏着斑激酶和磷酸化Src蛋白的表达,下调了钙黏蛋白的表达;重组质粒过表达VEGF增强迁移、侵袭及血管生成能力;siRNA干扰处理结果相反。结论： VEGF通过影响迁移、侵袭相关蛋白的表达从而调控细胞迁移、侵袭以及血管生成,参与六价铬致癌过程。     

人支气管上皮细胞表达的斯钙素⁃1在上皮间充质转化中的作用研究

目的：明确斯钙素?1（stanniocalcin?1,STC1）对支气管上皮间充质转化（epithelial?mesenchymal transition,EMT）的影响,以及香烟烟雾提取物（cigarette smoke extract,CSE）对支气管上皮细胞STC1表达调控的效应,探讨STC1在慢性阻塞性肺疾病气道EMT中的可能作用。方法：采用转化生长因子β（transforming growth factor β,TGF?β）处理人支气管上皮（16HBE）细胞72 h诱导EMT模型：外源加入STC1重组蛋白（rhSTC1）,Western blot及免疫荧光法检测EMT标志物E?钙黏蛋白（E?cadherin）和α?平滑肌动蛋白（α?SMA）表达。采用CSE刺激16HBE细胞24 h：实时定量PCR及Western blot检测STC1 mRNA和蛋白表达差异,外源加入NF?κB抑制剂JSH23,Western blot检测STC1表达差异。结果：TGF?β可诱导16HBE细胞由典型的多边铺路石样变为长梭形,上皮细胞标志物E?cadherin表达下降,间质细胞标志物α?SMA表达增加,rhSTC1可逆转上述改变。CSE可刺激16HBE细胞STC1表达增高,且呈浓度依赖性增加,外源加入NF?κB抑制剂JSH23可抑制上述效应。结论：STC1在慢性阻塞性肺疾病形成过程中,是抑制气道EMT的保护性因素。CSE局部刺激支气管上皮细胞,通过NF?κB信号导致STC1反应性增加可能是其主要来源之一。     

转化生长因子-β1体外诱导气道上皮细胞向肌纤维母细胞转分化

目的探讨TGF-β1体外诱导气道上皮细胞表型向肌纤维母细胞转分化的可能性。方法TGF-β1（10μg/L）处理气道上皮细胞株16HBE-14o，显微镜下实时观察形态学变化，免疫染色方法检测E-cadherin，α-SMA和F-actin的表达，RT-PCR方法检测E-cadherin，α-SMA mRNA的表达。结果TGF-β1 10μg／L作用3d，气道上皮细胞株16HBE-14o失去正常的立方形，变得肥大，胞体拉长；上皮细胞特征性标志E-cadherin表达减弱，胞浆中出现肌纤维母细胞表型标志物α-SMA，F-actin聚合形成张力纤维沿着细胞长轴分布。结论本研究提示，气道上皮细胞在TGF-β1的作用下经历了表型改变向肌纤维母细胞转分化，可能作为肺肌纤维母细胞的一个新的来源，从而参与哮喘气道重塑、气道高反应性的发生发展。     

转化生长因子-β与结缔组织生长因子在纤维化中的作用机制

由于多因素损伤器官实质细胞,使其发生坏死,组织内细胞外基质(ECM)异常增多和过度沉积的病理过程称为纤维化,如不及时控制,病变持续进展可导致器官结构破坏和功能减退,乃至器官衰竭,严重影响人类健康.     

结缔组织生长因子在TGF-β2诱导的视网膜色素上皮细胞纤维化中的作用

目的 探讨不同浓度2型转化生长因子-β(TGF-β2)对视网膜色素上皮细胞(RPE)生物学特性及纤维化指标结缔组织生长因子(CTGF)的调控.方法 RPE细胞分别用0,1,5,10,15 ng/ml TGF-β2处理,并用CCK-8检测细胞增殖活性确定合适的TGF-β2浓度范围.根据CCK-8结果确定后续实验分为0,1...     

转化生长因子β诱导肿瘤微环境改变促进胃癌NCI-N87细胞上皮间充质转化

目的探讨微环境因子在转化生长因子β（TGF-β）诱导胃癌上皮-间充质转化（EMT）中的作用。方法建立了TGF-β诱导胃癌细胞发生EMT模型,利用实时定量PCR、免疫荧光染色技术检测了EMT相关指标的表达情况,采用Transwell迁移实验、侵袭实验、划痕修复实验检测了胃癌细胞的转移能力;同时,利用实时定量PCR（RT-qPCR）和ELISA检测了TGF-β诱导刺激后胃癌微环境因子的改变,并通过免疫印迹检测了其下游信号分子的活性。结果 TGF-β能诱导胃癌细胞NCI-N87发生EMT改变,促进癌细胞迁移和侵袭。进一步研究发现,TGF-β能诱导表皮生长因子（ EGF）和血管内皮生长因子（VEGF）表达上调,Dickkopf-1（DKK1）和分泌型卷曲受体蛋白1（SFRP1）表达降低,进而分别诱导PI3K/AKT和Wnt/β-连环蛋白（catenin）通路的激活。结论 TGF-β通过诱导胃癌微环境因子的改变促进胃癌NCI-N87细胞发生EMT。     

曲尼司特对转化生长因子-β1诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化作用的影响及机制

目的:探讨曲尼司特对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化作用的影响及机制。方法:应用TGF-β1刺激NRK-52E,分为阴性对照组,TGF-β1诱导组和不同剂量曲尼司特干预组,用流式细胞仪观察曲尼司特干预后NRK-52E的转分化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达情况。结果:在TGF-β1诱导NRK-52E细胞转分化过程中,曲尼司特能剂量依赖性下调α-SMA表达,上调E-cadherin表达,两者表达呈负相关(r=-0.653)。结论:提示曲尼司特在TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化中发挥保护作用。     

转化生长因子-β1通过产生活性氧诱导骨髓间充质干细胞分化为肌成纤维细胞

目的：研究转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）诱导骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs）向肌成纤维细胞分化的机制。方法：采用全骨髓贴壁培养法体外培养小鼠原代BMSCs,将对数生长期的P3~P5代BMSCs作为实验细胞,使用不同浓度的TGF-β1诱导BMSCs向肌成纤维细胞分化,并在此基础上观察加入自由基清除剂N-乙酰 半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）对其分化的影响。采用实时荧光定量PCR及Western blot技术检测BMSCs分化指标α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、Ⅰ 型胶原［collagen α1(Ⅰ),Col α1(Ⅰ)］和Ⅲ 型胶原［collagen α1(Ⅲ), Col α1(Ⅲ)］的表达情况。使用2’,7’-dichlorohydrofluorescein diacetate（DCFH-DA）预孵育BMSCs 15 min,然后加入TGF-β1处理不同时间,检测TGF-β1刺激下BMSCs中活性氧（reactive oxygen species,ROS）的产生,并使用高内涵方法对BMSCs中产生的ROS进行统计分析。结果：TGF-β1可以剂量依赖地诱导BMSCs向肌成纤维细胞分化,上调α-SMA、Col α1(Ⅰ)和Col α1(Ⅲ)的表达。TGF-β1诱导BMSCs分化的作用可以被NAC阻断。TGF-β1在BMSCs中能够引起ROS的产生,且该过程迅速而短暂,当TGF-β1作用30 min时,其在BMSCs中诱发的ROS达到峰值。结论：TGF-β1通过产生ROS介导BMSCs向肌成纤维细胞分化。     

反义ERK2基因对结缔组织生长因子诱导肾小管上皮细胞向间充质转化的调控效应

目的 研究细胞外信号调节激酶2(ERK2)信号转导通路对结缔组织生长因子(CTGF)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)向间充质细胞转化的调控效应.方法 腺病毒介导的反义ERK2基因(Adanti-ERK2)按感染强度50、100、200转染HK-2细胞,确定最适感染强度.按作用因素的不同将HK-2细胞分为对照组、Ad-LacZ组、CTGF组和Adanti-ERK2组.免疫组织化学检测E-Cadherin和Vimentin的表达,Western blot法检测E-Cadherin、Vimentin及ERK2的表达变化;细胞接种Boyden小室1、3、5 d时检测各组HK-2细胞迁移数目的 变化.结果 ①Adanti-ERK2转染HK-2细胞最适感染强度为100.②HK-2细胞在CTGF刺激下E-Cadherin蛋白表达明显减少,Vimentin表达增加,同时细胞内的ERK2蛋白表达显著增加;而Adanti-ERK2组E-Cadherin和Vimentin表达变化不明显,ERK2蛋白表达较对照组明显减少.③接种5 d,HK-2细胞在CTGF刺激下细胞运动能力显著高于其他各组,而Adanti-ERK2组与对照组和Ad-LacZ组相比差异无显著性意义.结论 以反义ERK2基因治疗可以有效阻断CTGF诱导的肾小管上皮细胞向间充质转化.提示ERK2信号转导通路在该转化中发挥重要作用.     

转化生长因子-β1在哮喘血管重构中的作用

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在哮喘血管重构中的作用。方法40只小鼠随机均分为对照组、早期布地奈德治疗组(早期组)、延迟布地奈德治疗组(晚期组)和哮喘组4组。常规检测各项反映气道炎症、气道重构和血管重构的参数,采用Western印迹法测定肺组织中TGF-β1的表达水平。结果哮喘组气道血管的管壁厚度和胶原纤维面积均较对照组明显提高(P值均<0．01),且分别与气道平滑肌厚度和气道周围胶原纤维面积呈正相关(r=0．83、0．92,P值均<0．01)。早期治疗能明显降低上述指标;而晚期治疗仅能降低气道炎症反应,对气道和血管重构无明显改善。3组致敏小鼠肺组织中TGF-β1的表达均较对照组明显增多(P值均<0．01),TGF-β1的表达水平与血管厚度和血管周围胶原纤维面积呈正相关(r=0．75、0．82,P值均<0．01)。结论在哮喘的重建过程中有明显的血管重建——管壁增厚和血管旁胶原纤维增生,这一过程与TGF-β1的表达增加有关。早期糖皮质激素治疗能通过抑制TGF-β1表达水平改善哮喘的血管重构。     

转化生长因子β在胶质瘤免疫中的作用

转化生长因子β(TGF-β)是一种多功能细胞因子,在组织稳态和肿瘤进展中发挥着关键作用。TGF-β是一种强有力的免疫抑制因子,可通过抑制机体免疫系统识别和杀伤肿瘤细胞,促进肿瘤的生长、侵袭及转移,而关闭免疫细胞TGF-β信号通路可以显著地增强抗肿瘤免疫应答。该文将对TGF-β在胶质瘤尤其是胶质瘤免疫中的作用予以综述。