肠源性内毒素血症与肝星形细胞在肝纤维化中的作用

目的 研究IETM与α-SMA在肝纤维化中的作用,以进一步了解二者的关系.方法 21只Wistar大鼠随机分为对照组(n=6)和肝纤维化组(n=15).正常对照组饲以正常饮食,肝纤维化组采用复合因子方法 饲养大鼠建立肝纤维化模型.饲养4周后,透射电镜下观察肝星形细胞的活化,免疫组化方法 观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并测定血浆中的内毒素含量,同时也测定了丙氨酸转氨酶(ALT)、透明质酸(HA)、丙二醛(MDA)的水平.结果 4周末透射电镜下肝纤维化组观察到了HSC的活化,免疫组化法观察到了肝纤维化组α-SMA表达明显高于对照组,血浆中ET、ALT、HA、MDA的含量肝纤维化组明显高于对照组.结论 肝纤维化发生时有肠源性内毒素血症的发生和肝星形细胞的活化,二者之间可能存在一定关联.     

内毒素与肝纤维化的研究进展

肝纤维化是慢性肝脏疾病进展为晚期肝功能衰竭过程中一个重要的阶段。关于肝纤维化机制及对其防治的研究,近年来已经成为国内外医学研究的热点之一,其中内毒素在肝纤维化中的作用越来越受到关注。本文综述了近些年国内外学者对内毒素与肝纤维化的研究,并对其机制进行探讨。     

活血化瘀方对大鼠肝星形细胞活化的影响

活血化瘀方有较好的抗肝纤维化作用 ,为探讨活血化瘀方影响肝纤维化发生、发展的作用机制 ,我们采用MTT法检测活血化瘀方药物血清对HSC增殖的影响 ,免疫细胞化学法研究活血化瘀方药理血清对HSC表达α SMA的影响。结果表明 ,药物血清组MTT法OD值、α SMA阳性染色吸光度分别为对照组的 58 8%、51 2 % (P <0 0 1)。活血化瘀方药物血清与γ IFN有相似作用 ,能够通过抑制HSC增殖、α SMA的表达抑制体外培养的HSC的激活。     

以星形细胞为靶向治疗肝纤维化的研究进展

肝纤维化与其他组织的纤维化反应一样 ,可视为一种创伤愈合反应 ,病毒、乙醇、自身免疫等病因均可引起肝细胞的坏死、再生和持续纤维增生 ,当这种创伤愈合反应长时间存在 ,肝脏中多种细胞外基质 (ＥＣＭ)异常积聚 ,逐渐发展为肝硬变。早期肝纤维化是可逆的 ,而肝硬变则为不可逆性 ,因此 ,早期肝纤维化的防治研究具有特别重要的意义。目前的研究证实 ,在肝纤维化形成过程中星形细胞 (ＨＳＣ)的激活和增生在肝纤维化的发生过程中起主要作用。其中ＨＳＣ表型的激活是肝纤维化形成过程的关键 ,激活的ＨＳＣ是肝纤维化时ＥＣＭ成分的主要来源 ,同…     

肝纤维化大鼠血浆脯肽酶变化及其与肠源性内毒素血症的关系

参照Ｂｒｏｓｓｅｔ及Ｍｙａｒａ法测定大鼠肝纤维化过程中脯氨酸肽酶的动态并探讨肠源性内毒素血症与其相互关系及其变化的临床意义。结果表明：肝纤维化发生发展过程中ＰＬＤ早期增高显著，并与内毒素水平变化相关，提示ＰＬＤ释放增多与内毒血症引起的肝损害有关，ＰＬＤ可作为肝纤维化标志物。     

肠源性内毒素血症影响肝再生

肝细胞肝癌以其高发病率和高恶性行为而著称。尽管流行病学资料已强烈提示乙肝病毒等多种致病因素的作用与肝细胞癌的发生具有相关性，但这种相关关系是如何建立起来的仍未阐明。大量实验证实，多种肝病尤其是慢性肝病不同程度伴随肠源性内毒素血症（intestinal endotoxemia，IETM）。因此需要引起注意的是：在慢性肝病转变为肝细胞肝癌的过程中，这种长期持续存在的IETM是否有可能干扰肝再生的微环境，诱导肝干细胞的再生不良乃至癌变？     

肝纤维化大鼠血浆脯肽酶变化及其与肠源性内毒素血症的关系

参照Ｂｒｏｓｅｔ及Ｍｙａｒａ法测定大鼠肝纤维化过程中脯氨酸肽酶（ＰＬＤ）的动态变化，并探讨肠源性内毒素血症与其相互关系及其变化的临床意义。结果表明：肝纤维化发生发展过程中ＰＬＤ早期增高显著，并与内毒素水平变化相关。提示ＰＬＤ释放增多与内毒血症引起的肝损害有关，ＰＬＤ可作为肝纤维化标志物。     

硫化氢对氧应激大鼠肝星形细胞的影响

目的探讨硫化氢（H2S）对大鼠肝星形细胞（HSC）增殖和氧应激的影响。方法用铁超载的方法复制肝纤维化的氧应激模型,给予外源性H2S供体硫氢化钠（NaHS）和炔丙基甘氨酸（PPG,H：S合成关键酶胱硫醚-γ-裂解酶CSE抑制剂）,通过绘制生长曲线法和用CCK-8细胞计数法测定不同浓度H2S和PPG分别作用于500μmol／L次氮基三乙酸铁（FeNTA）培养下的HSC6、12、24h细胞上清液和裂解液中H2S浓度、超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量,通过检测HSC的增殖情况、CSEmRNA表达水平、H2s浓度和氧化抗氧化指标（MDA、SOD）来探讨H2S对HSC氧应激的影响。结果FeNTA所致的增殖HSC氧应激损伤明显增加,抗氧化能力减弱。同时,CSEmRNA表达水平低下,H2S产生减少。给予PPG后,HSC增殖显著且CSEmRNA表达受到抑制。内源性H2S随着严重的氧应激损伤进一步减少。给予NaHS后,HSC增殖减少,CSEmRNA表达和H2S产生显著增加以缓解氧应激损害和增强抗氧化能力。结论H2S对HSC增殖具有一定的抑制作用,对FeNTA诱导的氧应激具有保护作用。     

肝星形细胞凋亡机制的最新进展

慢性肝病是全球重要死因之一,各种致病因素所致慢性肝损伤均可引起肝纤维化。近年来临床和实验数据均显示肝纤维化甚至肝硬化均可通过肝星形细胞(HSC)的凋亡而得以逆转,因此,阐明肝星形细胞凋亡的分子机制成为发展抗纤维化药物的重要途径之一。肝星形细胞的凋亡受多种因素调控,包括生长因子及其受体、自然杀伤细胞、细胞外基质组分、神经内分泌通路、药物制剂以及翻译后修饰均可影响肝星形细胞的凋亡。在此就各相关因素进行综述。     

肝星形细胞中细胞凋亡和存活的信号调控

肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)在肝脏纤维化发生过程中起着关键作用.当正常肝脏受到损伤时,HSCs由静息状态转分化为类肌成纤维细胞,并保持这种处于激活状态的表型,它们接收到的凋亡和存活的生物信号将决定激活态HSCs的最终细胞寿命.HSCs凋亡的发生与一系列复杂而又相互关联的生物信号传导和调控有关,HSCs凋亡信号来自于细胞膜受体,如死亡受体、神经生长因子受体和外周型苯甲二氮卓受体(peripheral-type benzodiazepine receptor);以及胞浆蛋白,如Bcl-2家族蛋白和细胞周期蛋白等.HSCs存活信号受到多种激酶和细胞因子的诱导,如金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue jnhibitors of metalloproteinase-1)、Rho/Rho激酶、血小板源生长因子(platelet-derived growth factor)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1)和胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor-1)等.特异性地诱导HSCs发生凋亡是治疗肝脏纤维化的直接和有效手段,虽然目前对HSCs由激活态到静息状态的转归尚需进一步研究,但诱导HSCs凋亡将是治疗肝脏纤维化和肝硬化的研究热点和主要发展方向.     

木黄酮对培养肝星状细胞增殖及脂质过氧化的影响

目的 以培养的大鼠肝星状细胞(HSC)为模型,测定植物雌激素木黄酮对HSC增殖及培养液中脂质过氧化产物的影响.以明确木黄酮抑制肝纤维化形成的作用.方法 采用培养的SD大鼠肝星状细胞(HSC-T6)为模型,培养后加入H2O3诱导氧化应激,分为3组,用不同浓度的木黄酮温育48 h,收集细胞培养基的上清液,每个浓度设6个重复组,用MTT法检测HSC增殖;收集细胞培养基上清液,采用试剂盒方法测定脂质过氧化产物超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱苷肽(GSH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX).结果 木黄酮各剂量组不同程度降低HSC的增殖.呈剂量-效应关系.给予木黄酮后,MDA和GSH水平明显降低,SOD和GSH-PX活力明显升高.也呈剂量-效应关系.结论 植物雌激素木黄酮具有抑制肝纤维化形成的作用,其作用机制可能与抑制HSC的增殖及抗HSC氧化应激、抗脂质过氧化作用有关.     

骨化三醇对胆管结扎所致小鼠肝纤维化的保护作用及其机制

目的:探讨骨化三醇对胆总管结扎(BDL)诱导的小鼠肝纤维化的保护作用,并阐述其可能的作用机制.方法:选用45只8～10周雄性C57BL/6小鼠,随机分为假手术组、肝纤维化模型组(模型组)和骨化三醇治疗组(治疗组),每组15只.假手术组小鼠绕胆总管穿过手术线,不结扎.模型组小鼠双重结扎胆总管并离断.治疗组小鼠术后2.5μ...     

盐酸小檗碱对肝星状细胞自噬和凋亡的影响*

目的 研究盐酸小檗碱对肝星状细胞（HSCs）自噬和凋亡的影响。方法 取指数生长期HSC-LX2细胞,实验分组：溶剂对照组（1‰ DMSO）、盐酸小檗碱5?μg/ml组、盐酸小檗碱10?μg/ml组和盐酸小檗碱20?μg/ml组。盐酸小檗碱干预24?h。流式细胞术检测细胞凋亡、半胱天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3） 阳性细胞荧光强度。通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测Caspase-3、与Bcl-2相互作用的肌球蛋白样卷曲螺旋蛋白1（Beclin1）、自噬相关基因5（Atg5）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt）和c-Jun氨基末端激酶（JNK）mRNA的表达,Western blotting检测Beclin1、Atg5、Akt、p-Akt、JNK及p-JNK蛋白的表达。结果 与溶剂对照组比较,不同盐酸小檗碱浓度干预组HSC-LX2凋亡增加（P?<0.05）,Caspase-3 mRNA表达增加（P?<0.05）,Caspase-3阳性细胞荧光强度及蛋白活性升高（P?<0.05）;Beclin1、Atg5 mRNA及蛋白水平下降（P?<0.05）;Akt、JNK mRNA水平下降（P?<0.05）,Akt、p-Akt、JNK、p-JNK蛋白水平下降（P?<0.05）。结论 盐酸小檗碱可能通过抑制Akt信号通路促进凋亡,通过抑制JNK信号传导途径抑制自噬。     

川芎嗪对肝星状细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究川芎嗪对大鼠肝星状细胞(HSC)凋亡的影响及可能机制,为肝纤维化的治疗提供新的方法.方法 以血小板衍生生长因子(PDGF-BB)刺激大鼠肝星状细胞系HSC-T6,建立体外肝纤维化细胞模型,在此基础上,给予川芎嗪30μmol/L刺激HSC-T6,作用24 h后,Western blot法检测相关蛋白的表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Hoechst 33258染色法观察各组HSC的凋亡形态.结果 Western blot法结果表明,与PDGF组比较,川芎嗪组ERS标志性蛋白GRP78表达增多,并且ERS特异性凋亡蛋白CHOP及C-Caspase12表达增强,Bcl-2/Bax比例明显下调,p-ERK/ERK水平降低.流式细胞仪检测结果表明川芎嗪组较PDGF组HSC凋亡率增强,同时Hoechst 33258染色结果表明川芎嗪组HSC呈现典型的核固缩等凋亡形态变化.结论 川芎嗪可以诱导PDGF活化的HSC发生凋亡,其可能与ERS特异性凋亡蛋白CHOP及C-Caspase12的表达上调、ERK1/2磷酸化水平降低,进而下调Bcl-2/Bax比例,发生相关凋亡.     

绞股蓝总皂苷对免疫性肝纤维化大鼠肝功能和肝纤维化的影响

目的:研究绞股蓝总皂苷(GPs)对免疫性肝纤维化大鼠肝功能和肝纤维化的影响。方法:36只大鼠随机分为正常对照组、肝纤维化组和GPs组3组,每阻各12只。采用人血清白蛋白攻击注射大鼠建立免疫性肝纤维化模型,GPs治疗组大鼠则在连续30 d给予白蛋白攻击注射的同时给予0.5 mg GPs。采用全自动生化仪检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)水平以评价肝功能,应用放射免疫法(RIA)检测血清中透明质酸(HA)、Ⅲ型胶原(PCⅢ)和层粘蛋白(LN)含量以评价肝纤维化程度,并以大鼠肝组织切片病理变化验证。结果:白蛋白攻击注射可显著升高肝纤维化大鼠血清中ALT、TBIL、TBA水平和HA、PCⅢ、LN水平(P<0.01,P<0.05)。GPs治疗可显著降低大鼠血清中 ALT、TBIL、TBA水平和HA、PCⅢ和LN水平(P<0.01,P<0.05)。GPs还可显著减少白蛋白攻击所致的胶原纤维生成,并改善大鼠肝纤维化病理损伤。结论:GPs可保护大鼠肝功能,抑制大鼠肝纤维化形成。     

肝星状细胞的免疫学特性

 活化的肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）可合成大量细胞外基质（extracellular matrix,ECM）,并可分泌转化生长因子β（transforming growth factor-β,TGF-β）、血小板源性生长因子（platelet derived growth factor,PDGF）等促纤维化因子,在肝纤维化的发生发展中起着关键作用。近来研究发现活化的肝星状细胞具有多种免疫细胞的特性,可直接参与肝脏局部免疫调控,而免疫因素在肝纤维化发病机制中占据着重要地位,因此深刻认识肝星状细胞的免疫学特征有助于进一步阐明肝纤维化的发病机制。     

黄芩甙对肝星状细胞凋亡的影响

目的 研究黄芩甙对大鼠肝星状细胞(HSC)凋亡的影响,探讨黄芩甙抗肝纤维化的机制.方法 采用胶原酶循环灌流法分离肝星状细胞.以不同浓度黄芩甙作用后,通过相差显微镜观察细胞形态变化,用MTT法、溴乙锭/吖啶橙荧光染色法、流式细胞术检测黄芩甙对活化的HSC凋亡的影响.结果 黄芩甙显著促进活化的HSC凋亡,此作用随黄芩甙浓度增加而增强,呈药物浓度依赖关系.结论 黄芩甙可以促进HSC凋亡,减少活化HSC的总量,发挥其抗肝纤维化作用.     

荔枝核总黄酮预防大鼠肝纤维化的初步研究

目的观察荔枝核总黄酮(total flavone from Litchi chinensis Sonn,TFL)预防大鼠肝纤维化作用及活化肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)凋亡的变化,从细胞凋亡角度研究二者之间的关系。方法以二甲基亚硝胺腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型,同时以秋水仙碱为阳性对照,TFL[100、200 mg/(kg.d)]灌胃给药,6周后处死大鼠,放射免疫法(RIA)检测大鼠血清中透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)蛋白水平,取肝脏同一部位行HE、Masson染色观察大鼠肝纤维化程度,采用α-SMA及TUNEL免疫组化双重染色标记活化HSC凋亡。结果 TFL高剂量组和秋水仙碱组血清肝纤维化指标(HA、LN、PCⅢ)均明显低于模型组(P<0.05)。与模型组比较,TFL高剂量组可明显增加活化的HSC凋亡指数,改善大鼠肝纤维化程度(P<0.05)。结论荔枝核总黄酮可抑制肝纤维化大鼠HA、LN、PCⅢ表达,诱导HSC凋亡并改善二甲基亚硝胺所致肝纤维化程度,且具有一定量效关系。