鲑鱼降钙素对体外培养鼠成骨细胞增殖及IGF-Ⅰ表达的影响

目的 观察鲑鱼降钙素(calcitonin,CT)对离体培养数成骨细胞(osteoblast,OB)的作用,初步探讨CT对OB增殖以及胰岛素样生长因子Ⅰ(Insulin-like Growth Factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)表达的影响,为促进骨修复和再生的临床治疗提供一定的理论依据.方法 取新生24hSD乳鼠颅盖骨.采用酶消化法培养OB,经酶解消化后得到原代OB,进行体外培养并鉴定.将体外培养的OB用不同浓度(1×10<'-12>～1×10<'-8>Smol/L)的CT处理,采用MTT法(噻唑蓝染色法)观察OB的增殖;Gomori钙-钻法检测碱性磷酸酶(ALP)的表达;RT-PCR方法 观察胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)mRNA的表达.结果 经细胞鉴定后证实其系OB;MTT法检测表明.CT浓度为1×10<'-12>mol/L时就可以刺激OB增殖,且随CT浓度升高其增殖能力增加,呈剂量依赖关系;Gomori钙一钻法检测结果 表明随着CT浓度的升高OB分化能力增强;经RT-PCR法检测表明,IGF-Ⅰ mRNA可在乳鼠OB内稳定表达,半定量分析表明.随着CT浓度的升高,IGF-ImRNA的表迭量逐渐增加.结论适当浓度的CT可以促进体外培养OB的增殖;部分机制可能与CT促进IGF-ImRNA表达的增加有关.     

降钙素对小鼠成骨细胞增殖及OPG/RANKL表达的影响

目的探讨降钙素对小鼠成骨细胞增殖及骨保护素（OPG）／细胞核因子KB受体活化因子配体（RANKL）表达的影响。方法取出生24h内的小鼠30只,无菌的条件下取出颅骨,应用酶消化法进行成骨细胞的培养,在培养成骨细胞的培养液中加入不同浓度的降钙素,首先应用MTT法检测这种药物对成骨细胞增殖的影响,然后应用RT-PCR法检测其对OPG／RANKL mRNA的表达及ELISA法检测OPG蛋白分泌的影响。结果降钙素能促进成骨细胞的增殖。降钙素能增强成骨细胞中OPG mRNA的表达同时抑制成骨细胞中RANKL mRNA的表达,并能促进OPG蛋白的分泌。结论降钙素能促进成骨细胞的增殖及成骨细胞中OPG mRNA的表达,同时抑制RANKL的mRNA的表达。     

冲击波对体外培养的鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的：探讨冲击波对体外培养的鼠成骨细胞的增殖及分化能力的影响。方法：将原代培养的成骨细胞随机分成冲击波组和对照组,用不同能量（5、10、15、20 kV）冲击波处理后接种于96孔培养板,根据细胞存活率和增殖情况确定最佳的冲击波能量值。将传4代成骨细胞用冲击波处理后,用CCK-8法、细胞分泌碱性磷酸酶试剂盒、茜素红染色对两组细胞增殖及分化进行测定。结果：冲击波处理体外原代培养成骨细胞的最佳能量值为10 kV（500次）,CCK-8法检测显示,冲击波组细胞增殖速度快于对照组（P〈0.001）,细胞分泌碱性磷酸酶高于对照组（P〈0.001）,茜素红染色显示,冲击波组矿化结节面积明显大于对照组（P〈0.001）。结论：最佳能量冲击波可促进成骨细胞的增殖与分化。     

不同浓度瘦素对乳鼠成骨细胞增殖及VEGF mRNA表达的影响

目的通过观察不同浓度瘦素对离体培养乳鼠颅骨成骨细胞的作用,探讨瘦素（Leptin）对成骨细胞增殖以及成骨细胞上血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growthfactor,VEGF）表达的影响,为促进骨愈合过程中骨修复、再生的临床治疗提供一定的理论依据。方法取新生24h乳鼠颅盖骨,经酶解消化后得到原代成骨细胞,进行体外培养并鉴定。采用MTr法（噻唑蓝染色法）测定各组的OD值,观察瘦素对成骨细胞增殖能力的影响;采用RT—PCR法测定瘦素作用成骨细胞后VEGFmRNA的表达情况。结果经细胞鉴定后证实其系成骨细胞;经MTF法检测表明,瘦素作用24h后,各实验组OD值随瘦素浓度升高而增加;经RT—PCR法检测表明,VEGFmRNA可在乳鼠成骨细胞内稳定表达;半定量分析表明,不同瘦素剂量组间VEGFmRNA的表达量呈现一定规律,随着瘦素浓度的升高,VEGFmRNA的表达量逐渐增加。结论瘦素可促进成骨细胞增值;VEGFmRNA在成骨细胞内稳定表达;瘦素可上调成骨细胞上VEGFmRNA的表达,并存在一定的剂量依赖关系。     

肾上腺髓质素对鼠成骨细胞IGF-Ⅰ及IGF-ⅠR mRNA表达的影响

目的探讨肾上腺髓质素(ADM)对成骨细胞胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)和胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-ⅠR)基因表达的影响。方法将体外培养的鼠成骨细胞用不同浓度的ADM分别处理12h和24h,通过半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)来观察成骨细胞两种目的基因(IGF-Ⅰ,IGF-ⅠR)的mRNA表达。结果 ADM可以刺激成骨细胞IGF-ⅠmRNA表达,以10-11 mol/L作用12h最明显。ADM亦可上调成骨细胞IGF-ⅠR mRNA表达,可维持24h。结论 ADM可以通过增强IGF-Ⅰ的表达调节成骨细胞活性。     

胰岛素样生长因子-1对成骨细胞增殖影响的实验研究

目的：研究不同浓度胰岛素样生长因子－1（IGF－1）对兔成骨细胞增殖的影响。方法：采用组织块细胞培养技术进行兔成骨细胞分离培养,取第2代成骨细胞分别与0．1ng/ml,1ng/ml,10ng/ml,20ng/mlIGF-1培养,培养24、36小时后行四唑盐比色法检测细胞增殖情况。结果：IGF－1与成骨细胞培养24、36小时,经MTT法检测,不同浓度IGF－1与对照组比较,有显著性差异（P＜0．01）。IGF－1浓度为0．1、1、10ng/ml,各组之间相比存在显著性差异（P＜0．05）,结论：IGF－1对成骨细胞有明显促进增殖作用,在0．1－10ng/ml范围,存在浓度的依赖性。     

重组人胰岛素样生长因子Ⅰ(rhIGF-Ⅰ)对大鼠成骨细胞增殖和功能的影响

目的观察胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶(ALP)的合成和钙化结节形成的影响.方法不同浓度IGF-Ⅰ分别刺激培养的大鼠成骨细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力;采用对硝基酚磷酸盐法测定细胞裂解液中ALP活性;Von Kossa染色测定钙化结节数目.结果一定浓度IGF-Ⅰ能明显增加大鼠成骨细胞数量(P＜0.05),在0.1～100.0 ng/ml这种作用与IGF-Ⅰ的浓度呈正相关;经IGF-Ⅰ刺激,大鼠成骨细胞ALP合成明显高于对照组(P＜0.05);经IGF-Ⅰ刺激,大鼠成骨细胞钙化结节数目明显高于对照组(P＜0.001).结论IGF-Ⅰ能增加体外培养的大鼠成骨细胞数量,促进成骨细胞ALP合成和钙化,提示IGF-Ⅰ可能直接促进骨形成.     

益骨胶囊含药血清对体外培养成骨细胞分泌IGF-Ⅰ的影响

目的 :观察益骨胶囊对体外培养成骨细胞增殖和分泌胰岛素样生长因子Ⅰ (IGF Ⅰ )的影响 ,探讨该方的作用机制。方法 :分离、培养新生大鼠的原代成骨细胞 ,采用MTT法测定含药血清作用后的成骨细胞增殖和分泌IGF Ⅰ的量。结果 :益骨胶囊含药血清中、高剂量组成骨细胞增殖和分泌IGF Ⅰ的量均明显高于对照血清组 (P <0 .0 1)。结论 :益骨胶囊具有促成骨细胞增殖和分泌IGF Ⅰ的作用 ,可能是该方防治骨质疏松的机制之一     

降钙素基因相关肽对兔成骨细胞增殖和TGF-β1表达的影响

目的 检测外源性降钙素基因相关肽(calcitonin gene-ralated peptide,CGRP)对体外培养兔成骨细胞转化生长因子-β1(transformation growth factor-β1,TGF-β1)表达的调控作用,探讨其对成骨细胞增殖的影响.方法 将出生5d以内新西兰大白兔头骨成骨细胞进行原...     

低频正弦交变磁场磁力线方向对体外培养成骨细胞增殖与分化的影响

目的研究磁场强度1.8mT、频率50Hz,正弦交变磁场磁力线方向对体外培养大鼠成骨细胞(ratsosteoblasts,ROB)的影响。方法原代培养大鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分为3组,对照组、平行组和垂直组,平行组和垂直组分别暴露在磁场中,磁场强度1.8mT、频率50Hz、磁力线方向分别与培养皿平行和垂直,30min/次/d。倒置相差显微镜下观察细胞形态;MTT法测定细胞增殖;第3d、6d、9d、12d测定碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性和钙盐沉积量;第10d进行ALP组织化学染色,第12d进行茜素红钙化结节染色;在正弦交变磁场(sinusoidal electromagnetic fields,SEMFs)处理0h、24h、48h和96h后,Real-time RT-PCR检测ALP、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)和Osterix(OSX)mRNA表达平行变化。结果成骨细胞于磁场暴露处理3～4d后呈漩涡样分布;与对照组相比,磁场组均抑制细胞增殖(P<0.01或P<0.05),其中与垂直组比较平行组显著抑制细胞增殖;与对照组比较,磁场组均促进细胞分化成熟,表现为提高细胞的ALP活性,促进钙盐沉积量,增加钙化结节数量,提高ALP、BMP-2和OSX mRNA表达水平,尤以平行组最为明显。结论 1.8mT、50Hz,磁力线方向与培养皿平行和垂直放置的正弦交变磁场均抑制体外培养成骨细胞的增殖,但能促进其分化成熟,此作用与磁力线方向有关,尤以平行组促分化效果最为明显。     

唑来膦酸对成骨细胞增殖及IGF-1表达的影响

目的：观察唑来膦酸对体外大鼠成骨细胞增殖及IGF-1表达的影响,进而分析其对成骨质量的影响。方法：采用体外培养的大鼠颅盖骨成骨细胞,用不同浓度的唑来膦酸（10^-4～10^-9 mol/L）处理后,观察其对成骨细胞增殖率以及其分泌IGF-1的影响。结果：唑来膦酸在较高浓度时（≥10^-5 mol/L）明显抑制细胞增殖;唑来膦酸在≤10^-6 mol/L的浓度时并不影响IGF-1的分泌。结论：唑来膦酸在低浓度时不影响成骨质量,考虑到其在体的作用时间更久,所以使用低浓度的唑来膦酸治疗骨质疏松是更明智的选择。     

降钙素对成骨细胞作用机制的体外实验研究

目的　观察降钙素 (calcitonin ,CT)对体外培养成骨细胞功能及其细胞因子表达的影响 ,初步探讨其作用机制。方法　采用酶消化法培养新生SD大鼠的成骨细胞 (osteoblast,OB) ,加入不同浓度 (1× 10 -12 ～ 1× 10 -8mol/L)的CT ,观察OB的增殖、分化功能和矿化功能。采用RT PCR方法观察胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF Ⅰ )、碱性磷酸酶 (ALP)的表达。结果　增殖率测定CT组自 1× 10 -12 mol/L起 ,吸光度 (A值 )均较对照组增加 ,且呈剂量依赖关系 ,CT≥ 1× 10 -9mol/L时差异有显著性 (P =0 .0 39) ;ALP活性自 1× 10 -12 mol/L起均较对照组增加 ,也呈剂量依赖关系。CT≥ 1× 10 -10 mol/L时差异有显著性 (P =0 .0 32 ) ;矿化结节面积 /孔 :CT=1× 10 -12 mol/L组为对照组的 1.6 72倍 (P =0 .0 2 4 ) ,1× 10 -8mol/L组为对照组的 2 .92 4倍 (P =0 .0 0 6 )。CT组细胞因子IGF Ⅰ、ALPmRNA表达较对照组显著升高 (P <0 .0 5 )。结论　适当浓度的CT对体外培养的OB增殖、分化、矿化均具有促进作用。部分机制与CT可以刺激IGF Ⅰ表达增加有关。     

注射型唑来膦酸盐与鲑鱼降钙素治疗绝经后骨质疏松症的临床比较

目的:比较注射型唑来膦酸盐与鲑鱼降钙素治疗绝经后骨质疏松疗效的临床疗效。方法:将71名绝经后骨质疏松患者给予补充钙剂及维生素D的常规治疗,随机分为唑来膦酸组(34例)及鲑鱼降钙素组(37例)。分别给予唑来膦酸注射液(密固达)5 mg/100 mL共一次,或鲑鱼降钙素隔日肌内注射50 U,连续使用1月后改为,50 U 1次/周,连续使用6个月,对比其疗效。结果:唑来膦酸在缓解骨痛,增加骨密度,减少骨折发生率方面都有一定效果,在半年的观测骨痛缓解及骨密度增加和降钙素组相似,12个月后的观测,缓解骨痛更加明显(P<0.05)。结论:唑来膦酸注射液对绝经后骨质疏松症患者具有缓解骨痛增加骨密度提高生活质量减少骨折发生的作用,是一种有效安全的药物。     

降钙素受体在骨转移瘤中的表达水平及意义

目的：通过检测CTR在18例骨转移瘤中的表达情况,初步探讨CTR与骨转移瘤之间的关系。方法：选取骨转移瘤患者18例,根据X线表现成骨表现组4例与溶骨表现组14例。应用免疫组织化学染色法检测CTR表达,并作出统计学分析。结果：18例骨转移瘤患者中,CTR阳性表达15例,阳性率为83.0%;10例正常骨组织中,CTR阳性表达3例,阳性率为30.0%,二者之间有非常显著性差异（P〈0.01）。成骨表现组6例,CTR阳性表达3例,阳性率为50.0%;溶骨表现组19例,CTR阳性表达18例,阳性率为92.8%,二者之间有显著性差异（P〈0.05）。结论：CTR在骨转移瘤中的表达水平高于正常骨组织,而且在溶骨型骨转移瘤中的表达水平高于成骨型骨转移瘤。     

不同浓度降钙素基因相关肽对大鼠成骨细胞OPG mRNA表达的影响

目的 观察不同浓度降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)对大鼠成骨细胞OPG mRNA的表达影响.方法 采用新生大鼠颅盖骨组织块培养成骨细胞,加入不同浓度CGRP干预体外培养成骨细胞,观察成骨细胞增殖和ALP活性,检测OPG mRNA及RANKL mRNA的表达水平.结果 CGRP在浓度为1×10-8mol/L时对成骨细胞增殖的促进作用最强,在1×10-9mol/L时对成骨细胞ALP活性的促进作用最强;CGRP不仅能明显增强OPG mRNA的表达水平(P＜0.05),还能明显抑制RANKL mRNA的表达水平(P＜0.05),以10-8和l0-7浓度时表达最为明显,均呈剂量依赖性;且CGRP可明显上调OPG/RANKL的比值(P＜0.05).结论 CGRP对成骨细胞增殖和活性均有促进作用,可能通过上调成骨细胞OPG/RANKL,最终发挥抑制骨吸收的作用.     

Linc01135对过氧化氢作用的成骨细胞增殖分化及氧化应激损伤的影响

目的 探讨Linc01135对过氧化氢作用的成骨细胞增殖分化及氧化应激损伤的影响及机制。方法 人成骨细胞hFOB 1.19分为Con组、H2O2组、H2O2+pcDNA组、H2O2+pcDNA-Linc01135组及H2O2+pcDNA-Linc01135+SB203580组。四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;蛋白质印迹（Western blot）法检测Runt相关基因2（Runx2）、骨钙素（OCN）、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cleaved-caspase3）、caspase3前体（Pro-caspase3）、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）蛋白表达;试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）活性、总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）含量;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测Linc01135表达水平。结果 过氧化氢作用的成骨细胞中细胞OD值降低,G0-G1期细胞所占比例升高,S期细胞所占比例降低,Runx2、OCN蛋白表达水平降低,细胞凋亡率升高,Cleaved-caspase3表达水平升高,Pro-caspase3表达水平降低,T-AOC及SOD活性降低,MDA含量升高,Linc01135表达水平降低,p-p38MAPK蛋白表达水平降低（均P＜0.05）。过表达Linc01135后,成骨细胞中细胞OD值升高,G0-G1期细胞所占比例降低,S期细胞所占比例升高,Runx2、OCN蛋白表达水平升高,细胞凋亡率降低,Cleaved-caspase3表达水平降低,Pro-caspase3表达水平升高,T-AOC及SOD活性升高,MDA含量降低,p-p38MAPK蛋白表达水平升高（均P＜0.05）。p38MAPK信号通路阻断剂可减弱Linc01135对过氧化氢作用的成骨细胞增殖分化及氧化应激损伤的影响。结论 过表达Linc01135可能通过激活p38MAPK信号通路促进成骨细胞增殖、分化,抑制过氧化氢作用的成骨细胞凋亡及氧化应激损伤。     

成骨生长肽10～14及其结构类似物G48A对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的探讨成骨生长肽10～14(G36G)及其结构类似物G48A对大鼠成骨细胞增殖与分化功能的影响。方法采用无血清培养条件,G36G和G48A各9组:浓度依次为1×10~(-7)、1×10~(-8)、1×10~(-9)、1×10~(-10)、1×10~(-11)、1×10~(-12)、1×10~(-13)、1×10~(-14)和1×10~(-15)mol/L。甲状旁腺激素(PTH)组:培养结束前6 h培养液中的PTH浓度为1×10~(-8)mol/L。对照组:培养液中含1%牛血清白蛋白。分别观察不同浓度G36G及其类似物G48A对大鼠成骨细胞增殖及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,免疫组织化学法检测不同处理因素对成骨细胞胰岛素样生长因子(IGF)-1蛋白表达水平的变化。结果透射电子显微镜下,G36G、G48A和PTH组的成骨细胞形状丰满,核膜清晰,粗面内质网丰富,高尔基器发育良好,胞质内分泌颗粒增多,可见细胞核分裂相;对照组的成骨细胞胞体扁平,胞质内部分细胞器丧失,细胞核分裂相比例降低。G36G、G48A组分别在1×10~(-11)’、1×10~(-13)mol/L时促进成骨细胞增殖的效应最强。PTH组的ALP活性显著高于对照组(P<0.05)。G36G组在1×10~(-13)mol/L时促进ALP活性作用最强,显著高于对照组(P<0.01)。G48A组在1×10~(-15)mol/L时促进ALP活性作用最强,显著高于对照组(P<0.01)。4组间IGF-1蛋白表达水平的差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论G36G及其类似物G48A在体外能够促进大鼠成骨细胞的增殖及分化。