中国人群中Wilson病家系和正常人D13S4区限制性片段长度多态性分析

用Southern blot技术,以13q22-31上的plE8探针对中国人群中4个Wilson病(WD)家系和10例正常人D13S4区见MspⅠ酶切片段长度多态性(RFL)分析。结果表明:A、B两杂交片段出现的频率分别为46.9％和53.1％,这和国外报道的频率0.49/0.51是一致的,同时对WD家系成员A、B两杂交片段出现频率和正常人相比较,经统计学处理,x~2=0.026<3.8,P>0.05。无显著性差异。并对中国人群中WD遗传异质性、连锁不平衡以及WD家系成员的临床前诊断做了探讨,为WD基因的研究和基因水平的诊断提供了科学依据。     

中国人Wilson病ATP7B基因启动子区的研究

目的研究中国人Wilson病（WD）ATP7B基因启动子区的序列和结构,发现存在的多态和突变情况。方法检测60例无亲缘关系的WD患者和20例正常人的基因组DNA序列并进行分析。结果（1）在正常对照和WD患者的启动子区-190位和-78位（转录起始点为＋1）均发现存在单个碱基的不同;（2）60例WD患者中,3例发现存在-504位G→C的突变,其中2例为纯合突变,1例为杂合突变,在正常对照中未发现此改变。（3）60例WD患者中,2例发现存在-782位A→G的突变,其中1例为纯合突变,另1例为杂合突变,在正常对照中未发现此改变。结论WD基因的转录直接受铜或其他重金属的调节。中国人WD基因启动子区序列存在的2个多态位点均位于已知的转录调控元件结构之外,提示核苷酸多态对启动子调控基因的表达不会产生影响。启动子区的突变也是WD的分子发病机制之一。提示WD基因的分子发病机制是多样又复杂。     

The molecular cloning and restriction enzyme mapping of retinitis pigmentosa 3 (RP3) locus

X-linkedretinitispigmentosa(XI-RP)isagroupofseriousgeneticdiseaseswithunknownpathogenesis.AlotofllnkageanalysesforRPfamiliesshowedthattherewereatleasttwogenelociexistingintheXchromosomeshortarm.Thefirstlocus(RPZ)waslocatedinXpll,closetoDXS7;thesecondlocus(RP3)waslocatedinXp21,1cMdistaltoOTCLlj.TherecentresearchdatashowedthatRP3locuswasfinelymappedwithinabout270kbrange,betweenOTCandDXSlll0markersLZj.ThismakestheRP3thefirstchoicetargetofpositionalcloningL'].Inthiswork,wesucceededi…     

人染色体8p11.2亚带ANK1位点附近区域表达序列的分离与克隆

目的分离人染色体８ｐ１１．２亚带ＡＮＫ１位点附近区域基因的表达序列。方法采用ｃＤＮＡ选择法从定位于该区域的人工酵母染色体（ＹＡＣ）中分离基因的表达序列，并从分离的表达序列中选取１个序列用于筛选人胎脑ｃＤＮＡ文库。结果获得７个表达序列，其中５个可与目的ＹＡＣ反杂交。所得的表达序列ＢＨＬＣ１５２与鼠的ＣＡｒＧ盒结合因子基因高度同源，ＢＨＬＣ７４与编码心室肌肌球蛋白的碱性轻链１（ＭＬＣ１）基因高度同源，表明ＢＨＬＣ７４可能编码一种ＭＬＣ１的同工蛋白。分离的其它表达序列与数据库内一些位置和功能尚不清楚的表达序列标签（ｅｘｐｒｅｓｅｄｓｅ－ｑｕｅｎｃｅｔａｇ，ＥＳＴ）仅有部分同源性。用表达序列ＢＨＬＣ１１９筛选人胎脑ｃＤＮＡ文库，获得１个插入片段长１９５１ｂｐ的克隆，序列分析表明它编码１７４个氨基酸，该序列与所有已知的蛋白质序列无同源性。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析结果显示，在人胎脑总ＲＮＡ中呈现１条约３．５ｋｂ带；组织表达分析表明，此系一广泛表达的基因。结论ＢＨＬＣ７４可能作为与８ｐ相关的心脏病候选基因，其它序列至少可以作为定位在ＡＮＫ１位点附近区域的肿瘤抑制基因的初筛基因。     

Carrier detection and presymptomatic identification of Wilson disease in Chinese by non-isotopic linkage analysis with four short tandem repeat polymorphisms

Ｗｉｌｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ（ＷＤ）ｉｓａｎａｕｔｏｓｏｍａｌｒｅｃｅｓｓｉｖｅｄｉｓｏｒｄｅｒｏｆｃｏｐｐｅｒｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｗｉｔｈａｗｏｒｌｄｗｉｄｅｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆｂｅｔｗｅｅｎ１／５０００ａｎｄ１／３００００ｉｎｌｉｖｅｂｉｒｔｈｓ...     

Currently Clinical Views on Genetics of Wilson's Disease

Objective:

The objective of this study was to review the research on clinical genetics of Wilson''s disease (WD).

Data Sources:

We searched documents from PubMed and Wanfang databases both in English and Chinese up to 2014 using the keywords WD in combination with genetic, ATP7B gene, gene mutation, genotype, phenotype.

Study Selection:

Publications about the ATP7B gene and protein function associated with clinical features were selected.

Results:

Wilson''s disease, also named hepatolenticular degeneration, is an autosomal recessive genetic disorder characterized by abnormal copper metabolism caused by mutations to the copper-transporting gene ATP7B. Decreased biliary copper excretion and reduced incorporation of copper into apoceruloplasmin caused by defunctionalization of ATP7B protein lead to accumulation of copper in many tissues and organs, including liver, brain, and cornea, finally resulting in liver disease and extrapyramidal symptoms. It is the most common genetic neurological disorder in the onset of adolescents, second to muscular dystrophy in China. Early diagnosis and medical therapy are of great significance for improving the prognosis of WD patients. However, diagnosis of this disease is usually difficult because of its complicated phenotypes. In the last 10 years, an increasing number of clinical studies have used molecular genetics techniques. Improved diagnosis and prediction of the progression of this disease at the molecular level will aid in the development of more individualized and effective interventions, which is a key to transition from molecular genetic research to the clinical study.

Conclusions:

Clinical genetics studies are necessary to understand the mechanism underlying WD at the molecular level from the genotype to the phenotype. Clinical genetics research benefits newly emerging medical treatments including stem cell transplantation and gene therapy for WD patients.     

D13S133位点CA重复序列在正常中国人群的多态性分布

目的研究Ｄ１３Ｓ１３３位点ＣＡ重复序列在正常中国人群的多态性分布。方法：应用ＰＣＲ扩增该位点的ＣＡ重复序列，通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增产物，测定６０个正常中国人的等位片段。结果：共检测到１５种不同长度的等位片段，多态信息含量（ＰＩＣ值）为０．８８１。结论：该位点在中国人群中具有长度多态性，且其多态性分布与西方人群存在明显差异。     

肝豆状核变性分子生物学研究

【目的】探讨中国人肝豆状核变性(WD)的分子发病机制和基因诊断的方法。【方法】应用基因工程技术对WD进行了10年的分子生物学研究。【结果】①WD的基因定位研究通过RFLP及微卫星多态性分析,应用两位点及多位点连锁软件,建立了中国人WD基因在D     

磁共振小肠造影多序列联合成像在小肠疾病诊断中的应用

目的 探讨小肠MRI造影多序列应用方法及MRI造影对小肠病变的影像诊断.方法 使用Philips Achieva 3.0T MR对临床疑诊小肠病变的34例患者进行MR小肠造影 (MRE) 多序列联合成像.扫描序列包括横断位、冠状位屏气单次激发快速自旋回波T2WI-TSE-BH序列, 冠状位平衡稳态自由进动序列 (BTFE) 、横断位扩散加权成像 (DWI) 序列及横断位、冠状位3D-THRIVE序列增强扫描.以不同等级评估小肠MRI扫描图像质量.判断各序列的应用价值.结果 平扫COR-SSTSE-BH序列压脂图像显示最佳, 评估炎症性肠病的活动性弥散序列应用价值较高, 联合3D-THRIVE序列增强图像能为临床提供定性诊断.结论 MRE多序列联合扫描图像信息量大, 敏感度高, 对诊断小肠疾病有重要价值.     

血清铜及血清游离铜对肝豆状核变性患者及携带者的诊断及治疗监测意义

目的 研究血清铜和血清游离铜在肝豆状核变性(WD)、WD携带者、病毒性肝炎等疾病中的诊断价值.探讨监测血清铜对于WD患者排铜治疗过程中的指导意义.方法 选取2007年7月至2011年1月住院治疗的WD初诊患者80例(脑型60例,肝型20例)、WD携带者30例,病毒性肝炎20例进行血清铜等铜代谢指标检查.WD患者接受二巯基丙磺钠治疗8个疗程,每疗程用改良Young量表进行神经症状评分,进行肝功能、出凝血功能、血清铜、尿铜等检查.患者出院后用锌剂维持治疗.结果进行Logistic回归分析、t检验和方差检验等统计学分析.结果 WD患者、WD携带者、重型病毒性肝炎血清游离铜分别为0.17 mg/L±0.04 mg/L、0.13 mg/L±0.03 mg/L和0.12mg/L,高于正常.血清游离铜与肝功能等级相关,但与神经症状严重程度无关.排铜治疗过程中,神经症状改善不明显或加重者,血清铜升高;神经症状改善者,血清铜降低.长期排铜过程中,血清铜将稳定在0.2 mg/L左右.结论 血清铜和血清游离铜对WD有辅助诊断意义.肝型WD患者肝功能将影响血清铜水平.而脑型WD血清铜并不能直接反映神经症状严重程度.排铜治疗过程中,血清铜升高,提示预后不佳.在排铜治疗过程中,血清铜可作为监测治疗是否有效的指标,可作为排铜治疗目标.     

PCR技术对Wilson病基因进行定点突变的研究

【目的】利用聚合酶链反应 (PCR)技术对Wilson病 (WD)基因进行体外定点突变的研究。【方法】采用PCR定点突变技术 ,首先设计两对引物 ,将突变位点设计在引物上 ,通过重叠延伸法两次PCR扩增 ,扩增片段上含有所需要的突变位点 ,最后将扩增片段克隆入pRc/CMV载体中。【结果】DNA测序表明在预期位点已经发生突变 ,WD基因第 778位密码子由精氨酸 (Arg)残基突变为亮氨酸残基 (Leu) ,用PCR定点突变技术成功构建Wilson病基因突变体。【结论】PCR技术诱导定点突变准确、高效。Wilson病基因突变体的构建成功 ,为进一步研究该突变位点导致Wilson病的发病机制和Wilson病蛋白的结构和功能的关系奠定了基础。     

用差异显示杂交技术筛选与造血相关的新基因

目的 建立4月龄人胎肝组织差异表达基因EST库，并分离未知功能基因以寻找造血相关的新基因。方法 表达性差异显示技术（RDA）、核芏酸序列分析、竞争PCR及Northern杂交。结果 建立了4月龄人胎肝组织差异表达基因EST库。该文库富集了造血及肝生长调控相关基因，部分克隆序列测定及分析表明该库含有重要的未知功能新基因，具有一株新基因可能与红细胞增殖、分化有关。结论 RDA技术为寻找新的基因提供了有效的手段。该EST库内富含了与造血相关基因包括一株新基因。     

肝豆状核变性患者离体皮肤成纤维细胞系的建立和生物学鉴定

肝豆状核变性(WD)的离体培养皮肤成纤维细胞模型可用于WD铜代谢的进一步研究,并有可能提供WD患者早期诊断的有效方法。作者建立了WD患者和对照组各5例的离体培养皮肤成纤维细胞系,并进行了各细胞系在不同代数培养时胞浆内铜含量的测定,为进一步研究该模型打下基础。     

肝豆状核变性的诊断及治疗

肝豆状核变性(WD)是一种与铜代谢障碍有关的常染色体隐性遗传病,儿童及青少年发病者较常见。WD的致病基因(ATP7B)位于染色体13q14.3,突变致使铜转运体功能缺陷,使得胆系排铜障碍致使铜在体内的各个器官堆积,从而出现一系列的酮中毒的表现,主要体现在肝脏和大脑。WD是少有的可用药物治疗的遗传病,但未经合理的治疗后果往往是致命性的。由于该病的临床表现多种多样,最终可能使患者错过了最好的治疗时机以及最适宜的治疗方法,故在此总结国内及国外的相关研究进展。     

First trimester prenatal diagnosis and detection of carriers of haemophilia A using the linked DNA probe DX13

Although the use of a gene specific deoxyribonucleic acid (DNA) probe is the method of choice for detecting carriers of genes for rare genetic disorders, there will always be families in which such probes cannot be used because key subjects are not informative for restriction fragment length polymorphisms in or around the gene. In these cases closely linked DNA markers have to be used. An X chromosome specific DNA probe, DX13, which is closely linked to the haemophilia A locus on the X chromosome, was used for early prenatal diagnosis in two cases and to detect carriers in a series of nine possible heterozygote women. The first reported crossover between DX13 and the factor VIII:C locus was observed in this study. There are complexities inherent in using any linked DNA probe for assignment of genes, but such techniques are clinically important.     

Wilson's Disease: Update on Integrated Chinese and Western Medicine

Wilson’s disease (WD), or hepatolenticular degeneration, is an autosomal recessive inheritance disorder of copper metabolism caused by ATP7B gene mutation. As WD is an inherited disease of the nervous system that is not curable; early diagnosis with early and life-long treatment leads to better prognoses. Currently, the recommended treatment for WD is integrated Chinese and Western medicine. A number of studies indicate that treatment of integrative medicine can not only enforce the de-copper effect but also improve liver function, intelligence, and other factors. This article reviewed in detail the advantages of WD treated with Chinese and Western medicine together.     

良性家族性婴儿惊厥家系候选基因的突变检测

目的检测良性家族性婴儿惊厥—家系的致病基因。方法通过生物信息学查询选择HCRTR1、STX12、HPCA为候选基因,应用Primer 3引物设计、PCR扩增、直接测序的方法进行候选基因的突变检测。序列分析采用DNAStar软件。结果未发现与疾病表型共分离的致病突变,但其中发现1个已知的多态。结论排除HCRTR1、STX12、HPCA为该BFIS家系致病基因的可能。     

血清铜蓝蛋白检测在肝豆状核变性及其携带者中的临床意义

目的肝豆状核变性(hepatolenticular degeneration)又称为Wilson病(Wilson’s disease,WD)。目前对于铜蓝蛋白在WD、WD携带者及病毒性肝炎的诊断价值尚不一致。文中探讨检测血清铜蓝蛋白在WD、WD携带者和病毒性肝炎中的临床意义,研究WD携带者的临床表现和铜代谢规律。方法确诊的WD患者60例,WD携带者30例,合并病毒性肝炎的WD携带者2例,病毒性肝炎患者20例,健康对照者20例。对所有入组者进行病史采集、临床神经系统检查,检测血清铜蓝蛋白水平以及铜代谢指标检查,包括脑脊液铜、血清铜、青霉胺排铜试验前后24 h尿铜。同时进行神经影像学、腹部B超、肝功能、肝炎标志物检查。结果 WD患者铜蓝蛋白水平低于健康人,排铜试验后尿铜显著高于健康人。WD携带者铜蓝蛋白异常者高达73%,其铜蓝蛋白水平介于健康人和WD患者之间。合并病毒性肝炎的WD携带者铜蓝蛋白水平低于0.1 g/L且随肝功能波动,其尿铜略高于健康人,排铜试验后尿铜高于健康人。单纯病毒性肝炎患者铜蓝蛋白水平仅轻度降低。结论血清铜蓝蛋白水平有助于鉴别WD、WD携带者和其他肝病。病毒性肝炎多导致铜蓝蛋白水平轻度异常;WD携带者合并病毒性肝炎时,铜蓝蛋白水平显著下降。WD携带者的铜蓝蛋白水平常介于健康人和WD患者之间,可作为WD携带者的诊断依据。WD携带者存在轻微铜代谢异常,但无临床症状,不需进行排铜治疗。     

HMGB1相关基因多态性对中国汉族乳腺癌患者无病生存期和总生存期的影响

目的研究中国汉族女性乳腺癌患者高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)相关基因遗传变异与无病生存期(DFS)和总生存期(OS)之间的关系。方法回顾性分析2010年5月~2015年10月期间我院收治的420例乳腺癌患者的临床资料,分析8个基因的166个单核苷酸多态性(SNPs),并采用多变量Cox比例风险模型来估计SNPs的风险比和95%置信区间(CI),在多基因风险评分的累积水平评估SNPs对乳腺癌预后的影响。结果与DFS显著相关的SNPs是MMP2基因的单核苷酸多态性,分别为rs243867位点(HR为1.28,95%CI为1.02~1.52,P0.05)和rs243842位点(HR为1.25,95%CI为1.04~1.55,P0.05)。而与OS相关的SNPs为MMP2基因的rs243842位点(HR为1.35,95%CI=1.01~1.74,P0.05)、HMGB1基因的rs4145277位点(HR为1.31,95%CI=1.01~1.68,P0.05)、TLR2基因的rs7656411位点(HR为0.78,95%CI,0.58~0.99,P0.05)和TLR4基因的rs7045953位点(HR为0.51,95%CI=0.27~0.88,P0.05)。DFS和OS患者的多基因风险评分结果显示,其第三个三分位数风险比率分别为1.79(95%CI=1.29~2.41)和2.84(95%CI=1.84~4.51)。结论 HMGB1相关基因的遗传多态性与乳腺癌患者的预后有关。     

肝豆状核变性基因连锁图谱的研究

为寻找适于中国人Ｗｉｌｓｏｎ氏病（ＷＤ）基因连锁分析的遗传标记及制定ＷＤ基因所在区域的遗传图谱，我们应用Ｄ１３ｑ１４－２１区域４个ＤＮＡ标记对７５名无亲缘关系个体及９个ＷＤ家系成品进行连锁分析。结果发现４个ＤＮＡ标记中３个标记等位片段与白种人相同而杂合率相异，其中２个ＤＮＡ标记Ｄ１３Ｓ３１，Ｐ１２３Ｍ１．８与ＷＤ基因存在紧密连锁关系。其遗传顺序为：着丝点－Ｒｂ－Ｄ１３Ｓ３１－ＷＮＤ。