1-磷酸鞘氨醇对血小板活化的影响

目的研究磷脂类代谢产物1-磷酸鞘氨醇(S1P)对血小板活化的影响。方法利用酶联免疫法检测血小板中S1P的含量,利用流式细胞仪检测血小板凋亡、活化状况。结果随着保存时间的延长,血小板悬液中的S1P含量(μmol/L)持续增加,从第1天至第5天分别为:1.38±0.17、2.07±0.25、2.78±0.31、3.53±0.28、4.56±0.46。加入不同浓度的外源性S1P,对保存5d期间的血小板生理指标进行动态监测。不同处理组间,血小板的活化率随加入的S1P浓度的增加而升高,凋亡程度增加,血小板结构发生改变。上述实验结果的差异均有统计学意义(P<0.01)。结论随着血小板保存时间的延长,血小板血浆中S1P含量逐渐增加,血小板功能逐渐降低。提示血小板释放的有生物活性的磷脂代谢产物可能对血小板的功能施加某种影响,可能是引起血小板输注无效的一个重要原因。     

1-磷酸鞘氨醇对葡萄糖代谢的调节及其机制

1-磷酸鞘氨醇(S1P)是一种有活性的脂质分子,作用广泛,在多种疾病中发挥作用,如肿瘤、心血管疾病、骨代谢、糖尿病等。研究报道,S1P可以促进胰岛素分泌从而降低血糖,本研究将从S1P促进胰岛素分泌的机制、S1P对胰岛素靶器官的调节以及糖尿病并发症影响方面阐述S1P的作用。     

1-磷酸鞘氨醇对血小板贮存损伤的影响

目的探讨1-磷酸鞘氨醇对手工浓缩血小板的贮存损伤(活化率、凋亡率和细胞内游离Ca2+)的影响。方法向手工浓缩血小板中分别加入0.1、0.5和1.0μmol/L 3个浓度的S1P,采用流式细胞术检测血小板22℃保存2、3、5、7 d的活化率、凋亡率和细胞内游离Ca2+。结果 0.5和1.0μmol/L的外源性S1P可以降低血小板内游离Ca2+的浓度,降低其活化率和凋亡率。结论 1-磷酸鞘氨醇对血小板的贮存损伤起到一定的抑制作用。     

鞘氨醇-1-磷酸对人耐受型树突状细胞功能影响的初步研究

目的探讨鞘氨醇-1-磷酸(S1P)对外周血单核细胞诱生的人耐受型树突状细胞(tDC)免疫学功能的调控作用。方法 RT-PCR和流式检测细胞表型以及S1P受体(S1PR s)的表达;加入S1P处理tDC,检测其对tDC表型、细胞因子表达以及信号蛋白细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化的影响。结果 tDC高表达DC标志CD209、共刺激分子CD80、CD86和成熟标志CD83;炎性细胞因子mRNA的表达低于未成熟DC,而抑炎性细胞因子、Fas-L和IDOmRNA的表达均高于iDC;tDC表达S1P的受体,S1P与受体相互作用后可引起信号蛋白ERK的磷酸化,上调tDC抑炎性细胞因子以及Fas-L mRNA的表达,对炎性细胞因子的表达无影响。结论 tDC表达S1P受体1、2、5,S1P信号活化后可上调抑炎性细胞因子mRNA的表达,而其表型和炎性细胞因子的分泌无明显变化,有利于tDC免疫耐受功能的发挥。     

血小板产生1-磷酸鞘氨醇与溶血磷脂酸的研究进展

1-磷酸鞘氨醇（sphingosine-1-phosphate,S1P）和溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）是由血小板合成并释放的两种非常重要的磷脂酸分子。S1P和LPA的分子结构非常相似,因此两者在生物体内发挥的功能也有很多相似之处,在血小板参与的心血管疾病、免疫调节、肺组织纤维化形成和癌症形成等多种病理生理进程中都扮演非常重要的角色。研究S1P和LPA影响血小板功能发挥作用的分子机制,可以为人们在血小板相关的疾病治疗和预防方面提供新的思路和方法。     

鞘氨醇-1-磷酸在脓毒症中调节作用的研究进展

鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)是具有多种生物活性的鞘磷脂代谢产物,通过激活细胞膜表面的G蛋白偶联受体即S1P受体(sphingosine-1-phosphate receptors,S1PRs),参与细胞生长和凋亡、免疫与凝血系统调节等多种生理功能。脓毒症是由于感染引起免疫反应失调所致的严重危及生命的疾病,常导致多器官功能障碍甚至衰竭。脓毒症导致的器官衰竭主要与内皮细胞和免疫细胞在炎症环境中的病理生理变化有关,包括血管通透性增加、血栓形成、炎症及免疫反应失调。S1P可参与调节脓毒症的多种病理生理过程,有望成为预测脓毒症患者病情严重程度的重要标志物,也是治疗脓毒症的潜在靶点。本文通过对S1P在脓毒症发生发展过程中的调节作用及相关临床研究进行总结,旨在为该领域的后续研究提供参考。     

高密度脂蛋白中的1-磷酸鞘氨醇对心肌细胞生存信号通路的影响

目的:观察高密度脂蛋白(HDL)不同组分中1-磷酸鞘氨醇(S1P)的含量对心肌细胞AKT和ERK1/2信号转导通路的影响,探讨HDL对心肌细胞的保护作用。方法:应用超速离心法和层析法,分离不同组分HDL;应用地高辛核素标记法检测各组分中S1P含量。给予小鼠心肌细胞不同S1P含量的HDL组分和S1P1、S1P3受体抑制剂VPC23019刺激后,用蛋白印迹法检测AKT和ERK1/2转导通路磷酸化水平的变化。结果 :与对照组比较,受不同HDL组分刺激后,成年小鼠心肌细胞AKT和ERK1/2磷酸化水平升高,且随着各组分中S1P含量升高,磷酸化水平呈上升趋势,而S1P1及S1P 3受体抑制剂VPC23019能明显阻断此种作用。结论:不同HDL组分通过细胞膜上的S1P受体,激活PI3K-AKT和MEK-ERK1/2信号通路,该作用通过S1P1和S1P3受体介导;HDL可能通过S1P发挥心肌保护作用。     

脓毒症中凝血酶-蛋白酶活化受体1-1-磷酸鞘氨醇信号通路的研究进展

脓毒症是重症监护病房患者最常见的致死原因,其特征表现为促炎、抗炎和凝血反应的失控.尽管应用了新的更有效的抗生素和血管活性药物进行治疗,脓毒症的病死率仍然保持在一个很高的水平上[1].     

载脂蛋白M-1-磷酸鞘氨醇轴与炎症相关疾病

载脂蛋白M-1-磷酸鞘氨醇轴(apo M-S1P轴)是一条由apo M、S1P和S1P受体信号通路构成的信号轴。apo M不仅是血浆S1P的主要载体,而且可通过调节血浆S1P水平而影响S1P受体相关信号通路。S1P受体信号通路对炎症反应的调节作用已较明确,近期研究表明,apo M与炎症相关疾病也密切相关。因此,apo M-S1P轴被认为对炎症相关疾病具有潜在的重要影响。     

1磷酸鞘氨醇及其G蛋白偶联受体的免疫调节功能研究进展

1磷酸鞘氨醇（sphingosine—l—phosphate，S1P）是一种具有重要生物学活性的溶血磷脂，它作为第一信使与各种免疫细胞膜上相应的G蛋白偶联受体相互作用发挥不同的免疫调节功能。S1P可抑制T细胞的增殖，并抑制活化的CD4^＋ T细胞分泌IFN-γ和IL-4。SIP对T细胞、B细胞、树突状细胞和NK细胞都具有趋化性，其主要效应是通过其受体SIP1介导调节淋巴细胞再循环和组织分布。S1P对调节性T细胞趋化性弱，是调节性T细胞发挥最佳活性所必需的。新型免疫抑制剂FFY720进入人体后快速磷酸化，形成具有生物学活性的FFY720-P，与SIP相似，是其受体S1P1、S1P3、S1P。和S1P，的真正激动剂，可影响成熟T细胞、B细胞、树突状细胞及调节性T细胞的组织分布与功能活性，具有低毒高效可逆的免疫抑制效应，能够预防异体移植物排斥及治疗自身免疫病。本文就S1P的合成、代谢及其G蛋白偶联受体在免疫细胞的表达、对各种免疫细胞的影响、以S1PGPCRs为靶点的药物及其临床意义进行综述。     

胸腺输出功能的评价手段-T细胞受体重排删除环的定量分析

多年来，因缺乏合适的检测胸腺输出naiveT细胞的技术，未能明确胸腺输出功能。由于胸腺T细胞的分化始于T细胞受体(TCR)基因的重排，在TCRα基因重排时，通过δRec和ψJα基因片段重组形成染色体外DNA环而删除TCRδ基因，该删除环称为信号结合T细胞受体重排删除环(sjTRECS)或TRECs。TRECs十分稳定，不扩增且随着细胞增殖而稀释，故近期研究认为对TRECs的定量检测可以直接地估计胸腺的输出功能。本综述了TRECs定量分析在评价正常人和造血干细胞移植，血液肿瘤、HIV感染和自身免疫性疾病等等的胸腺输出功能中的作用。     

rhG-CSF动员对异基因造血干细胞移植供者外周血CD4~+ T细胞S1P_1表达的影响

CD4+ T细胞主要通过其表面的S1P1受体与外界的第一信使1磷酸鞘氨醇(S1P)相互作用调节免疫功能。本研究旨在探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员对异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)供者外周血CD4+ T细胞S1P1表达的影响。17例allo-HSCT供者于rhG-CSF动员前及动员后第4天采集外周血,使用磁珠分选法纯化CD4+ T细胞,提取微量RNA,用实时定量PCR法检测S1P1的表达。结果显示,rhG-CSF动员前后CD4+ T细胞均表达S1P1,且动员后S1P1在CD4+ T细胞中的表达明显低于动员前。结论:rhG-CSF动员使allo-HSCT供者外周血CD4+ T细胞S1P1的表达明显下调。     

人骨髓间充质干细胞体外对异基因T淋巴细胞表型的影响

为了研究间充质干细胞 (mesenchymalstemcell,MSC)的免疫调节作用 ,探讨防治异基因骨髓移植中移植物抗宿主病 (GVHD)和移植排斥反应 (HVGR)的可能途径 ,从人骨髓中分离培养间充质干细胞 ,并通过其形态的均一性及流式细胞术检测表面标志以鉴定其纯度 ,将MSC分别以 8× 10 4 (A组 )、4× 10 4 (B组 )和 2× 10 4 (C组 )个细胞 孔分别接种于 6孔板 ,并与经分离的外周血T淋巴细胞共培养 7天 ,以单独培养的外周血T淋巴细胞为对照组 ,用流式细胞仪分别在培养 0、2 4、72小时和 7天测定各组T细胞上CD3、CD4、CD8、CD2 5表达的变化。结果表明 :T细胞和MSC共培养组与T细胞单独培养组相比 ,A组和B组CD4 CD2 5 免疫调节性T细胞和CD8 T细胞明显增多 ,A组和B组之间无明显差别。实验组和对照组相比CD3、CD4、CD2 5表达无明显差别。结论 :骨髓MSCs在体外可使外周血T细胞表型发生改变 ,CD4 CD2 5 免疫调节性T细胞和CD8 T细胞明显增多 ,本研究结果为临床异基因造血干细胞移植预防GVHD时MSCs的输注数量提供了参考。     

白细胞去除对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定的影响

目的探讨全血标本中wBC对RBC的葡萄糖一6一磷酸脱氢酶（G6PD）活性检测的影响,规范G6PD测定标本的前处理过程。方法选择2010年9月8日至10月27日因高胆红素血症于四川大学华西第二医院门诊及住院治疗的新生儿49例为研究对象。采集其全血样本4mL,平均分为2份,分别按照是否洗涤WBC分为洗涤组（n=49）和未洗涤组（n=49）。采用7600—010全自动生化分析仪分别测定两组血样的RBCG6PD活性,wBCG6PD活性以及RBC溶血液中的WBC含量,并根据检测结果考察血样中wBCG6PD活性对RBCG6PD活性测定的影响（本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该伦理会批准,征得受试对象本人的知情同意,并与之签订临床研究知情同意书）。结果未洗涤组血样的RBCG6PD活性中位数[1096U／L,（137～2512）U／L]明显高于洗涤组为[861U／L,（94～2357）U／L],且差异有统计学意义（Z=-6．093,P〈0．01）;两组RBCG6PD活性呈正相关关系性（r=0．963,P〈O．01）。将RBCG6PD纳入回归方程：y=0．895z-83．365,y为洗涤组RBCG6PD的原始结果,z为未洗涤组RBCG6PD的原始结果,进行线性回归分析的结果显示,洗涤WBC前、后,RBCG6PD活性的偏回归值（6）分别为0．895与-83．365,相关关系密切（r2=0．927,df=47,F=592．797;P〈0．01）。结论全血标本中WBC的存在,使RBCG6PD活性检测值偏高,可能造成处于临界值的G6PD缺乏症漏检。临床进行血液标本RBCG6PD活性测定时,应尽可能清除WBC,为临床诊断提供可靠数据。     

Effects of chemotherapy agents on Sphingosine-1-Phosphate receptors expression in MCF-7 mammary cancer cells

Sphingosine-1-phosphate (S1P) is a potent bioactive sphingolipid involved in the regulation of cell proliferation and cancer progression. Increased expression of S1P receptors has been detected in advanced breast tumours with poor prognosis suggesting that S1P receptors might control tumour response to chemotherapy. However, it remains unclear how the levels of S1P receptor expression are influenced by chemotherapy agents. Western immunoblotting, PCR analysis and fluorescent microscopy techniques were used in this study to analyze expression patterns of S1P receptors 2 and 3 (S1P2/S1P3) in MCF-7 breast adenocarcinoma cells treated by Tamoxifen (TAM) and/or Medroxyprogesterone acetate (MPA). We found that TAM/MPA induce downregulation of S1P3 receptors, but stimulate expression of S1P2. According to cell viability and caspase activity analyses, as expected, TAM activated apoptosis. We also detected TAM/MPA-induced autophagy marked by formation of macroautophagosomes and increased level of Beclin 1. Combined application of TAM and MPA resulted in synergistic apoptosis- and autophagy-stimulating effects. Assessed by fluorescent microscopy with autophagosome marker LAMP-2, changes in S1P receptor expression coincided with activation of autophagy, suggestively, directing breast cancer cells towards death. Further studies are warranted to explore the utility of manipulation of S1P2 and S1P3 receptor expression as a novel treatment approach.     

Resting Respiratory Tract Dendritic Cells Preferentially Stimulate T Helper Cell Type 2 (Th2) Responses and Require Obligatory Cytokine Signals for Induction of ?Th1 Immunity

Consistent with their role in host defense, mature dendritic cells (DCs) from central lymphoid organs preferentially prime for T helper cell type 1 (Th1)-polarized immunity. However, the “default” T helper response at mucosal surfaces demonstrates Th2 polarity, which is reflected in the cytokine profiles of activated T cells from mucosal lymph nodes. This study on rat respiratory tract DCs (RTDCs) provides an explanation for this paradox. We demonstrate that freshly isolated RTDCs are functionally immature as defined in vitro, being surface major histocompatibility complex (MHC) II ^lo, endocytosis^hi, and mixed lymphocyte reaction^lo, and these cells produce mRNA encoding interleukin (IL)-10. After ovalbumin (OVA)-pulsing and adoptive transfer, freshly isolated RTDCs preferentially stimulated Th2-dependent OVA-specific immunoglobulin (Ig)G₁ responses, and antigen-stimulated splenocytes from recipient animals produced IL-4 in vitro. However, preculture with granulocyte/macrophage colony stimulating factor increased their in vivo IgG priming capacity by 2–3 logs, inducing production of both Th1- and Th2-dependent IgG subclasses and high levels of IFN-γ by antigen-stimulated splenocytes. Associated phenotypic changes included upregulation of surface MHC II and B7 expression and IL-12 p35 mRNA, and downregulation of endocytosis, MHC II processing– associated genes, and IL-10 mRNA expression. Full expression of IL-12 p40 required additional signals, such as tumor necrosis factor α or CD40 ligand. These results suggest that the observed Th2 polarity of the resting mucosal immune system may be an inherent property of the resident DC population, and furthermore that mobilization of Th1 immunity relies absolutely on the provision of appropriate microenvironmental costimuli.     

rhG-CSF动员对供者血浆S1P浓度的影响

1-磷酸鞘氨醇（SIP）是具有广泛生物学效应的磷脂代谢产物，多种生长因子均能通过影响细胞鞘氨醇激酶（SphK）活性而调节SIP的生成，重组人粒细胞集落刺激因子（dIG—CSF）是一种广泛用于外周血造血干细胞动员的一种细胞因子。本研究主要了解rhG—CSF动员对供者血浆SIP含量的影响。分离供者rhG—CSF动员前和动员第5天外周血单个核细胞和血浆，用RT—PCR检测动员前后单个核细胞SphK mRNA表达情况，并应用γ-^32P-ATP掺入法和SphK酶促反应检测动员前后血浆SIP变化。结果表明，供者动员前后外周血单个核细胞均表达SphK mRNA；在rhG—CSF动员前后供者血浆中均含有SIP，且SIP浓度在rhG—CSF动员前和动员后第5天无明显变化（P〉0．05）。结论：rhG—CSF动员对供者血浆SIP含量无明显影响。     

rhG-CSF在动员外周血造血干/祖细胞过程中对T细胞的影响及机制

重组人粒细胞集落刺激因子(rhG—CSF)对人体具有广泛的免疫调节作用．．在动员外周血造血干／祖细胞过程中给予的rhG—CSF可以使外周血T淋巴细胞数量和功能发生改变，并影响移植后GVHD的发生。rhG—CSF主要通过对单核细胞和树突状细胞的作用而间接影响T细胞，其中单核细胞分泌的大量IL—10对调节T细胞的细胞因子分泌、增殖和细胞毒效应具有重要作用IL—10作用于T细胞后引起的SOCS3表达显著增高可能在相关的信号转导机制中具有重要作用、本综述重点阐述rhG—CSF在动员过程中对T细胞的影响及相关机制     

Interleukin 12 and Interleukin 4 Control T Cell Adhesion to Endothelial Selectins through Opposite Effects on α1,3-fucosyltransferase VII Gene Expression

The α1,3-fucosyltransferase, FucT-VII, is crucial for the formation of ligands for all three selectins, and its expression regulates the synthesis of these ligands. Short-term polarized T helper (Th)1, but not Th2 or naive CD4⁺ T cells, can home to sites of inflammation, but the molecular basis for this difference has remained unclear. Here we show that naive CD4⁺ T cells do not express FucT-VII and fail to bind vascular selectins. We also show that when CD4⁺ T cells are activated in the presence of the Th1 polarizing cytokine interleukin (IL)-12, levels of FucT-VII mRNA and binding to E- and P-selectin are significantly augmented. In contrast, activation of CD4⁺ T cells in the presence of IL-4, a Th2 polarizing cytokine, inhibited FucT-VII expression and binding to vascular selectins. T cell activation upregulated expression of the Core2 transferase, C2GnT, equivalently regardless of the presence or absence of polarizing cytokines. These data indicate that the selective ability of Th1 cells, as opposed to Th2 cells or naive CD4⁺ T cells, to recognize vascular selectins and home to sites of inflammation is controlled principally by the expression of a single gene, FucT-VII.     

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤12例临床分析

为了探讨血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)的临床、病理特征及预后情况,回顾性分析了经病理检查证实的12例AITL患者的临床特点、病理形态及免疫表型、治疗和生存情况。结果表明:12例患者主要症状为全身淋巴结肿大,9例伴有发热等全身症状。确诊依据淋巴结活检,病理组织学呈现淋巴结结构破坏,免疫母细胞增生,树枝状血管增生的特点,免疫表型全部为成熟外周T细胞性。12例患者均用CVP为主的化疗方案,总有效率58%。3年生存率为25%,全组中位生存25个月。结论:AITL临床过程呈侵袭性,进展快,中位生存期短,预后差,应探索更为有效的治疗方案。