辐射诱导溶瘤腺病毒联合放疗对宫颈癌细胞HeLa S3的作用效果

目的:构建受辐射诱导的EGR-1启动子调控的携带人TRAIL基因的新型溶瘤腺病毒Ad-EGR-TRAIL,研究其联合放疗对宫颈癌细胞株HeLa S3的杀伤效果.方法:构建重组腺病毒Ad-EGR-TRAIL,用腺病毒Ad-GFP检测对HeLa S3细胞的感染效率.CCK-8法检测Ad-EGR-TRAIL组、单纯放疗组以及...     

三种瘤细胞对重离子和γ射线的辐射敏感性

目的：比较体外培养的瘤细胞对重离子和γ射线的辐射敏感性，方法：以人肝癌SMMC－7721，宫颈癌HeLa和小鼠黑色素瘤B16细胞为材料，用集落形成法研究了细胞经γ射线和重离子处理后的存活情况，结果：细胞经γ射线处理后均表现为有肩区的存活曲线，属多靶击中模型，细胞经重离子处理后表现为无肩区的存活曲线，属单靶击中模型，在细胞存活分数为50％和10％时得到SMMC－7721，HeLa,B16细胞的RBE值分别为3．40，2．76，4．67和1．88，1．53，2．22，结论：在相同剂量下，重离子能更有效地杀灭瘤细胞。γγ     

RNAi沉默人端粒酶逆转录酶对HeLa细胞生长及药物敏感性影响的研究

目的:探讨利用短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)抑制人端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达后对人宫颈癌HeLa细胞生长及药物敏感性的影响.方法:将构建的hTERT-shRNA真核表达载体用脂质体转染入HeLa细胞中,经G418筛选得到稳定转染的细胞株,并绘制细胞生长曲线.RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测hTERT、c-myc mRNA和蛋白表达.镜下观察干扰组细胞与对照组细胞对化疗药物的反应,并在紫杉醇给药后采用流式细胞术和细胞免疫化学的方法分别检测两组细胞的死亡率和细胞内微管组织状态.结果:干扰组细胞在6代以后hTERT的mRNA和蛋白表达水平均显著低于对照组,P<0.05,n=3,而c-myc的表达以及细胞的生长速度与对照组差异无统计学意义,P>0.05, n=3.干扰组细胞对化疗药物紫杉醇的反应明显不同于对照组,紫杉醇给药后干扰组细胞的死亡率(9.7%)高于对照组细胞(6.4%),但给药前后两组细胞内微管的分布差异无统计学意义,P>0.05, n=3.结论:单独下调HeLa细胞中hTERT的表达不能降低肿瘤细胞的生长速度,也不能显著改变c-myc的表达,却可以增加细胞对紫杉醇的敏感性,而hTERT是否参与微管的调节有待进一步探讨.     

MST-312对人肝癌HepG2细胞辐射敏感性影响研究

目的研究端粒酶抑制剂MST-312对人肝癌细胞HepG2辐射敏感性影响。方法 MTT实验检测0、2、4、6、8和10μmol/L的MST-312对HepG2细胞的增殖抑制作用;采用克隆形成实验检测HepG2细胞存活率,观察MST-312对细胞辐射增敏性的影响;流式细胞术分析细胞周期及凋亡率;Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡的形态变化;蛋白质印迹法检测γ-H2AX蛋白表达水平,衡量DNA损伤的程度。结果 MTT法检测结果显示,MST-312对HepG2细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性,4μmol/L MST-312对HepG2细胞的增殖抑制率<10%,而且对细胞的周期分布没有明显影响。克隆形成实验结果显示,MST-312预处理2h后再给予X射线辐照的联合组克隆形成率为(17.68±4.01)%,较辐照组(62.60±7.91)%明显降低,F=9.773,P=0.014。流式细胞术分析结果表明,随着时间的延长,联合组G2/M期的比例由(20.56±0.75)%下降至(5.82±0.45)%,而Sub-G1峰值由(6.13±0.43)%上升至(15.78±0.89)%,即随着G2/M期阻滞比例下降的同时Sub-G1峰值比例在上升。Hoechst 33258荧光染色结果表明,在X射线处理后12h,联合组比辐照组出现了更加明显的细胞凋亡形态变化。蛋白质印迹法检测结果显示,在辐照后24h,联合组γ-H2AX蛋白表达量(614.20±21.13)%,高于辐照组(421.78±19.11)%,F=14.513,P=0.005。提示DNA损伤严重,未完全修复。结论端粒酶抑制剂MST-312促进了辐射诱导的细胞凋亡,对HepG2细胞具有辐射增敏作用,其机制可能与加剧辐射诱导的端粒损伤和抑制辐射后DNA损伤修复有关。     

胆固醇酯转运蛋白对人宫颈癌HeLa细胞辐射增敏性的影响

目的:研究胆固醇酯转运蛋白(cholesteryl ester transfer protein,CETP)高表达对宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的影响。方法:采用脂质体介导法将构建插入全长CETP基因的pcDNA3载体转染人宫颈癌HeLa细胞,获得稳定高表达CETP的HeLa细胞,同时转染pcDNA3空质粒为对照;克隆形成实验检测细胞的存活率;FCM法检测细胞的凋亡率;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的表达。结果:X-射线照射后,CETP高表达的HeLa-CETP细胞的放射增敏比SERD0和SERDq分别为1.42和2.09,而未转染细胞与转染空质粒的细胞照射后,细胞存活率差异无统计学意义。FCM结果显示,在X-射线照射后,HeLa-CETP细胞的凋亡率明显高于未转染细胞与转染空质粒的细胞(P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,提高CETP的表达可以降低抗细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和NF-кB的表达,而增加促细胞凋亡Bax蛋白的表达。结论:导入外源性CETP基因,提高HeLa细胞中CETP表达水平可明显增加HeLa细胞的放射敏感性,其作用机制可能与增加辐射诱导细胞凋亡和改变凋亡相关蛋白的表达有关。     

Wortmannin增强人恶性胶质瘤细胞辐射敏感性的实验研究

目的：研究渥曼青霉素（Wortmannin,WT）对人恶性胶质瘤U251细胞的辐射增敏作用。方法：采用集落形成实验、流式细胞术、核增殖性抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）免疫荧光染色,以及透射电镜技术检测WT联合X线对U251细胞克隆形成及凋亡的影响。结果：WT预处理后的U251细胞接受X线照射后,集落形成率和PCNA的表达明显低于仅接受射线照射组,并且凋亡和坏死细胞数目明显增多,在透射电镜下,可见典型的凋亡和坏死细胞的形态。结论：WT作用后,明显增强了X线对U251细胞增殖的抑制作用,促进了X线引起的U251细胞凋亡和坏死的发生,增加了U251细胞的辐射敏感性。     

Wortmannin增强人恶性胶质瘤细胞辐射敏感性的实验研究

目的:研究渥曼青霉素(Wortmannin,WT)对人恶性胶质瘤U251细胞的辐射增敏作用.方法:采用集落形成实验、流式细胞术、核增殖性抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)免疫荧光染色,以及透射电镜技术检测WT联合X线对U251细胞克隆形成及凋亡的影响.结果:WT预处理后的U251细胞接受X线照射后,集落形成率和PCNA的表达明显低于仅接受射线照射组,并且凋亡和坏死细胞数目明显增多,在透射电镜下,可见典型的凋亡和坏死细胞的形态.结论:WT作用后,明显增强了X线对U251细胞增殖的抑制作用,促进了X线引起的U251细胞凋亡和坏死的发生,增加了U251细胞的辐射敏感性.     

硝基苯胺酸类化合物的合成及其对HeLa—S_3细胞的辐射增敏作用

为寻找有效的乏氧细胞放射增敏剂,我们设计和合成出了七个新型化合物,其中五个是2,2'-(芳亚胺基)二乙基硫代硫酸钠的系列化合物,两个是苯丙氨酸类衍生物,并试验了它们对离体HeLa-S_3细胞的放射增敏作用。在化学合成中,分别以前体物N,N-双(β氯乙基)取代苯胺与硫化硫酸钠反应,即得L01-L04及     

大肠癌细胞辐射敏感性的蛋白组学研究

背景与目的: 大肠癌细胞系SW480与LoVo具有不同的辐射敏感性,我们运用蛋白组学技术筛选大肠癌细胞辐射敏感相关的蛋白.方法: 采用SELDI-TOF蛋白芯片技术分别对经0 Gy、2 Gy、4 Gy和6 Gy照射后24 h的SW480与LoVo细胞进行蛋白质谱分析.结果: LoVo细胞在平均质荷比分别为2 478.24、4 521.30、5 383.82和8 454.03的蛋白质峰值随辐射剂量增加而逐渐下降;SW480细胞在平均质荷比分别为5 655.29、7259.53的蛋白质峰值随辐射剂量增加逐渐升高,在平均质荷比分别为15 829.02,17 859.47的蛋白质峰值随辐射剂量增加呈梯度下降.结论: 大肠癌细胞辐射敏感性的预测可以通过蛋白质水平来体现.     

靶向抑制miR-19a提高人宫颈癌HeLa细胞对顺铂敏感性的机制研究

目的:研究miR-19a反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)对人宫颈癌HeLa细胞对顺铂耐药性的影响,并进一步探讨其机制。方法:利用Lipofectamine 2000将 miR-19a-ASO瞬时转染HeLa细胞,实时定量PCR法检测miR-19a表达水平。MTT法检测顺铂对HeLa细胞存活率的影响。Western blot检测PTEN、AKT和p-AKT（Ser473）蛋白表达的变化。结果:miR-19a-ASO明显抑制HeLa细胞miR-19a的表达。MTT结果表明靶向抑制miR-19a能明显促进HeLa细胞对顺铂的敏感性。Western blot结果提示,与对照组比较,干扰miR-19a的HeLa细胞,PTEN表达水平升高,p-AKT（Ser473）表达水平降低。结论:沉默miR-19a可能通过抑制AKT通路提高宫颈癌细胞对顺铂的敏感性,从而为宫颈癌的治疗提供新靶点。     

人胃癌细胞株SGC—7901对肿瘤化疗剂敏感性初步研究

本文研究人胃癌细胞株SGC-7901对临床常用的15种抗癌剂的敏感性。结果表明本瘤细胞株对抗生素、生物碱、烷化剂等细胞毒素类药物呈高度敏感。实验确定了各类抗癌剂对本株细胞最佳疗效的培养时间及相应的剂量。提示SGC-7901细胞是快速筛选新抗癌药物和开展肿瘤实验的有用工具。     

靶向Survivin基因siRNA对HeLa细胞放射敏感性的影响

目的:探讨si RNA抑制Survivin表达对宫颈癌HeLa细胞γ射线敏感性的影响。方法:设计并合成si RNA,构建si R-NA真核表达载体的。将测序正确的pSU-PER/Survivin载体转染HeLa细胞,应用RT-PCR和流式细胞仪检测HeLa细胞中Survivin基因在mRNA和蛋白表达水平的改变。流式细胞仪检测各组HeLa细胞的凋亡率差异。结果:成功构建了pSUPER/Survivin载体。转染pSUPER/Survivin的HeLa细胞其Survivin基因表达水平明显低于未转染及转染空载体pSUPER的HeLa细胞。γ射线照射后,转染pSUPER/Sur-vivin的HeLa细胞凋亡细胞率显著高于其他两种细胞。应用χ2检验比较3种细胞的早期凋亡细胞率:转染pSUPER/Survivin与未转染(χ2=14.88,P=0.00);转染pSU-PER/Survivin与转染空载体pSUPER(χ2=13.10,P=0.00);未转染与转染空载体pSUPER(χ2=0.082,P=1.00)。结论:在HeLa细胞中抑制Survivin基因的表达能够提高其对γ射线的敏感性,增加细胞凋亡。     

BNIP3基因增强人宫颈癌HeLa裸鼠移植瘤放射敏感性的实验研究

目的:探讨BNIP3基因对人宫颈癌的放射增敏效应的影响.方法:将6×106HeLa细胞皮下接种到裸鼠的背部,并通过尾静脉将质粒DNA注射到裸鼠体内,建立动物肿瘤模型.肿瘤体积按A×B2×0.5计算.用免疫组化的方法来检测肿瘤组织中Bnip3蛋白的表达,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡.结果:免疫组化测得,pDsRed-BNIP3处理组的肿瘤细胞中Bnip3蛋白的表达明显较其他组高.这个凋亡调节因子在体内能明显地增加肿瘤细胞的凋亡数(P＜0.01).肿瘤生长曲线也显示BNIP3基因可以增强放射治疗的抗肿瘤效应.结论:重组质粒pDsRed-BNIP3在体内对宫颈癌HeLa细胞移植瘤有放射增敏效应.     

线粒体DNA缺失对人乳腺癌MDA-MB-231细胞药物敏感性的影响

目的 探讨线粒体DNA缺失对人乳腺癌细胞药物敏感性的影响。方法 采用溴化乙锭（EB）处理获得人乳腺癌细胞MDA—MB-231的线粒体DNA缺失（rho^0 MDA—MB-231）细胞，电镜下观察细胞形态改变，胶原凝胶包埋三维立体培养法（CD—DST）对比分析细胞的药物敏感性，免疫组织化学方法检测P-糖蛋白（P—gP）、乳腺癌耐药蛋白（BCRP）的表达。结果 与MDA—MB-231细胞比较，rho^0 MDA—MB-231细胞线粒体数量增多，嵴消失呈空泡样改变，对化疗药物相对抵抗，P—gP、BCRP的表达明显增加。结论 线粒体的损伤可能参与了乳腺癌细胞耐药表型的形成。     

ATM对辐射后AT细胞端粒酶活性的影响

目的:探讨ATM对电离辐射照射的毛细血管扩张共济失调症(ataxia telangiectasia,AT)患者皮肤的成纤维细胞系AT细胞(ATSBIVA)端粒酶活性的影响。方法:以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM细胞(GM0639)为对照,应用基于PCR的端粒重复扩增技术(telomeric repeat amplification protocal,TRAP)与高效液相色谱(HPLC)技术,定量分析细胞分别经0、1、3、5 Gy 60Coγ射线照射后以及经3 Gy 60Coγ射线照射后继续培养2、24、48、72 h,AT、空载体AT、ATM -AT和GM细胞的端粒酶活性的变化。结果:未照射时,除GM细胞外,AT、空载体AT、ATM -AT细胞均呈现较高的端粒酶活性表达,但ATM -AT细胞的端粒酶活性明显低于AT和空载体AT细胞的端粒酶活性(P<0．01),而后二者无明显差异(P> 0．05);电离辐射照射后,AT、空载体AT、ATM -AT和GM细胞的端粒酶活性均呈剂量依赖性和时间依赖性增强,且在相同剂量点与时间点,ATM -AT细胞的端粒酶活性高于GM细胞(P<0．01)(除5 Gy计量点外),但低于AT和空载体AT细胞(P<0．01),而后二者无明显差异(P>0．05)。结论:电离辐射可诱导细胞端粒酶活性表达;并且细胞端粒酶活性水平随剂量与时间的增加而增加;ATM可下调AT细胞端粒酶活性水平。推测端粒酶参与电离辐射诱导DNA损伤的修复。     

γ-hGH对乳腺癌细胞MCF-7的放射敏感性研究

目的探讨重组人生长激素（γ-hGH）对乳腺癌细胞株MCF-7的放射敏感性。方法本实验分对照组、照射组、γ-hGH作用组及联合作用组,利用流式细胞仪测定细胞凋亡率,活细胞计数测定细胞存活率,利用克隆形成法测定细胞抑制率。结果流式细胞仪检测显示,照射组、作用组及联合作用组的凋亡率分别为：1.06%±0.48%、0.96%±0.38%,10.8%±3.46%,联合作用组高于任何1个单因素处理组（P〈0.05）;照射组、作用组及联合作用组的细胞存活率分别为51.7%±1.10%、57.7%±1.20%和11.0%±1.00%,联合作用组下降最为显著（P〈0.01）,细胞克隆形成抑制率分别为20.9%±0.65%、26.0%±1.10%和67.9%±0.93%,联合作用组高于任何1个单因素处理组（P〈0.01）。结论γ-hGH可以有效提高射线对乳腺癌细胞的放射敏感性。     

8—羟基虎刺素—ω—乙基醚对HeLa细胞生长及DNA合成的抑制作用

8—羟基虎刺素—ω—乙基醚对体外培养的人宫颈癌细胞(Hela细胞)生长及DNA合成均有抑制作用,并随着药物浓度增加及作用时间的延长而升高。     

抗癌药物对培养细胞DNA断裂的初步研究

本文描述简化微孔沪膜硷洗脱法，并提出药物对肿瘤细胞ＤＮＡ破裂选择性指数（Ｉｓ）作为评价及筛选此类抗癌药物的指标。