青少年肾阳虚体质差异表达基因研究

目的:利用基因芯片技术筛选、分析青少年肾阳虚体质者外周血白细胞的差异表达基因,从基因水平初步探究青少年肾阳虚体质的机理。方法:利用体外转录方法,将青少年肾阳虚体质组与同年龄段的正常体质组外周血白细胞mRNA合成为标记有不同荧光的cDNA探针,运用杂交互补原理筛选差异表达基因。结果:共筛选出127条符合标准的差异表达基因,63条呈上调表达,64条呈下调表达。提示:与青少年肾阳虚体质相关的基因表达涉及到免疫相关、发育相关、细胞生长、细胞受体、细胞信号和传递蛋白、蛋白翻译合成等。其中,PSMB7基因及CXCR4基因的表达差异均较明显,提示这两条基因可能与青少年肾阳虚体质密切相关。     

青少年肾阳虚体质差异表达基因的筛选研究探析

目的:利用基因芯片技术筛选、分析青少年肾阳虚体质者外周血白细胞的差异表达基因,从基因水平初步探究青少年肾阳虚体质的形成机理.方法:利用体外转录方法,将青少年肾阳虚体质组与同年龄段的正常体质组外周血白细胞mRNA合成为标记有不同荧光的cDNA探针,运用杂交互补原理筛选差异表达基因.结果:共筛选出127条符合标准的差异表达基因,其中63条呈上调表达,64条呈下调表达.结论:与青少年肾阳虚体质相关的基因表达涉及到免疫相关、发育相关、细胞生长、细胞受体、细胞信号和传递蛋白、蛋白翻译合成等.其中,CCNH基因与PSMB7基因的表达差异最大,提示这两条基因可能与青少年肾阳虚体质密切相关.     

青少年肾阳虚体质差异表达基因的筛选研究

目的利用基因芯片技术筛选、分析青少年肾阳虚体质者外周血白细胞的差异表达基因,从基因水平探究青少年肾阳虚体质的内在机理。方法通过针对性调查,对154例16~24岁青少年进行问卷调查,筛选典型的青少年肾阳虚体质者。利用体外转录方法,将青少年肾阳虚体质组与同年龄段正常体质组外周血白细胞mRNA,合成为标记有不同荧光的cDNA探针,运用杂交互补原理筛选差异表达基因。结果共筛选出127条符合筛选标准的差异表达基因,其中63条呈上调表达,64条呈下调表达。结论与青少年肾阳虚体质相关的基因表达涉及到免疫相关、细胞周期蛋白、原癌基因和抑癌基因、代谢、离子通道和运输蛋白、细胞骨架和运动、DNA结合、转录和转录因子、细胞受体、细胞信号和传递蛋白、蛋白翻译合成等。其中CCNH基因与PSMB7基因的表达差异最大,提示这两条基因可能与青少年肾阳虚体质密切相关。     

少长壮老不同年龄段肾阳虚体质辨识差异的探讨

文章依据《中医体质分类判定标准》中对阳虚体质的辨识原则,探讨肾阳虚体质的辨识与保健,认为少、长、壮、老不同年龄段肾阳虚体质存在生理特点、表现、体病相关、保健原则与方法的差异,并从诊断、临床、保健、生物学基础研究4个方面前瞻深入研究不同年龄段肾阳虚体质辨识差异的方法。     

骨关节炎肾阳虚证信号转导差异表达基因分析

目的:以基因芯片技术从差异基因表达角度分析骨关节炎肾阳虚证与信号转导相关差异表达基因。方法:先后筛选出符合西医膝骨关节炎和中医肾阳虚证诊断标准的患者两组,每组8例,与8例正常对照组比较。两组病人均取血、提取mRNA,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程,分别混合与对照组杂交作两张基因芯片,最后对数据进行信息挖掘。结果:两张芯片各获得162和75条差异表达基因,其中与信号转导相关的分别为26条和11条;两张芯片共同差异表达基因6条,与信号相关的有3条,占总数的1/2。提示:信号转导是生命活动的一种最基本和最重要的方式。细胞间信号转导异常可能在肾阳虚证骨关节炎的发生、发展过程中起着重要作用。     

用基因芯片寻找差异表达基因

基因芯片技术也称 DNA微阵列技术 ,可以平行性、高通量地观察全基因组水平的基因表达模式 ,主要用于基因突变、表达等研究。基因芯片固相载体上可以固定 c DNA或寡核苷酸。其制造工艺可大致分成原位合成法和点样法两种。制造工艺有原位光刻合成法、光敏抗蚀层并行合成法、微流体通道在片合成法、喷印合成法以及分子印章在片合成法。直接点样法是将合成好的探针、c DNA或基因组 DNA通过特定的高速点样机器人直接接触式或非接触式喷点在载体上。点样法所用载体多为玻璃片 ,点样前需对载体表面进行化学修饰。其与多孔尼龙膜相比具有杂交体…     

老龄冠心病心肾阳虚证的差异表达基因谱分析

目的:采用双通道基因表达谱芯片技术,分析老龄冠心病心肾阳虚证基因表达水平的异常。方法:采用病证结合的诊断标准,筛选老龄冠心病心肾阳虚证患者6名和同龄健康对照者6名,采血,分离白细胞,提取总RNA,做基因芯片检测。结果:经Microsoft excel和Microsoft office Access软件筛选,老龄冠心病心肾阳虚证与健康对照者比较,获得44条差异表达基因,主要涉及脂代谢、免疫、心血管病变的基因。结论:老龄冠心病心肾阳虚证的发生涉及一系列免疫和脂代谢紊乱的复杂的过程,与动脉硬化存在密切关联。     

应用基因表达谱芯片技术筛选老龄肾阳虚证特征功能类基因

目的:利用基因芯片技术探讨肾阳虚证发生的特征功能基因集。方法:在老龄肾阳虚证流行病学调查过程中,筛选出典型肾阳虚证患者2例和正常对照2例,采用美国Affymetrix公司的HG-u133Plus2.0基因表达谱芯片,按一步法抽提总RNA,分离纯化两种样品的mRNA,经逆转录合成掺入生物素标记的cDNA合成探针,与芯片杂交和严格洗片后,用荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,获得肾阳虚患者差异表达基因。结果:两例患者和正常人比较获得680和503条差异表达基因,通过g:GOSt基因芯片数据分析平台进行基因功能分类,发现免疫反应功能类基因出现显著性。结论:肾阳虚证的发生与免疫反应功能类基因的异常表达密切相关。     

差异表达基因筛选技术及其在缺血性心脏病中的应用

在后基因组时代,人类基因组计划的工作重点转移到对功能基因的研究,疾病基因组的研究将成为现代医学研究的热点。随着差异基因筛选技术的不断完善,对疾病的发生机制的研究也不断深入。本文以缺血性心脏病为例,概述差异基因筛选技术的发展及其在该病病理机制研究中的应用状况。     

差异表达基因筛选技术及其在缺血性心脏病中的应用

在后基因组时代,人类基因组计划的工作重点转移到对功能基因的研究,疾病基因组的研究将成为现代医学研究的热点。随着差异基因筛选技术的不断完善,对疾病的发生机制的研究也不断深入。本文以缺血性心脏病为例,概述差异基因筛选技术的发展及其在该病病理机制研究中的应用状况。     

气郁体质相关差异基因研究

目的 探讨气郁体质者与非气郁体质者的相关差异基因,从而运用分子生物学的手段揭示气郁体质的遗传本质。     

荷瘤小鼠虚证、实证垂体基因表达的差异

目的:揭示荷瘤小鼠实证与虚证垂体基因表达的差异.方法:采用四诊计量检测方法及计量辨证方法,运用GeneChipMouseExon1.0 STArray等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候垂体基因表迭的差异,重点关注那些表达量大、差异显著的基因.筛选出邪毒壅盛证较其他三个证候一致上调或下调的基Igl.结果:筛选出邪毒壅盛较其他三证一致上调的基因121个.介绍了邪毒壅盛证芯片读数大于1500的9个基因:Gabra6、DOH4S114、Ales2、Pvalb、Plpl、Itprl、Narg2、LOC627016、Gpm6b;一致下调的基因340个.介绍了正常小鼠芯片读数大于1500的21个基因:Abpg、Pip、Dlkl、Car6、Eif3s5、Gnb2、Pcskln、Aplpl、S1c22a17、Dnpep、Rnfl87、IOC639100、Rablb、Aldh2、Pten、Tapbp、2310044H10Rik、Cxxc5、Gamdl、Renl、Lrpll.结论:H22荷瘤小鼠的实证与虚证.其垂体基因存在大量的表达差异.其中部分可能是实证与虚证的标志基因.     

慢性无症状HBV携带者阴虚体质与人类白细胞抗原-DRB1、DQA1基因多态性的联系

目的 探讨慢性无症状HBV携带者(chronic asymptomatic HBV carrier,ASC)阴虚体质与人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-DRB1、HLA-DQA1基因多态性的内在联系。方法 将105例ASC患者进行中医体质分型及分组：阴虚质组47例和非阴虚质组58例。采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术测定HLA-DRB1、HLA-DQA1等位基因型。结果 阴虚质组HLA-DRB1*09、HLA-DQA1*0301的基因频率明显低于非阴虚质组(分别为12.1% vs 27.8%,19.1% vs 39.7%),差异有统计学意义(P<0.01);HLA-DRB1*11、HLA-DQA1*0501的基因频率明显高于非阴虚质组(分别为12.1% vs 4.3%,28.7% vs 9.5%),差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 HLA-DRB1*09和HLA-DQA1*0301可能是ASC非阴虚体质患者的分子基础;HLA-DRB1*11和HLA-DQA1*0501可能是ASC阴虚体质患者的分子基础。     

金匮肾气丸对劳倦过度 房室不节肾阳虚小鼠模型影响的脑基因芯片研究

目的:本研究旨在应用基因芯片探讨金匮肾气丸对"劳倦过度、房室不节"肾阳虚小鼠模型脑基因改变,以期从基因水平上研究其药物作用机理。方法:对照组、造模组和治疗组(给予金匮肾气丸)雄性小鼠各为10只、15只和10只。3组均予正常喂养,对照组和造模组每天灌胃蒸馏水0.5mL/只,治疗组每天灌胃金匮肾气丸混悬液0.5mL/只,造模组和治疗组采用雄雌鼠比例1:6同笼喂养和雄鼠每日游泳30～40min达4周,以诱导产生"劳倦过度、房室不节"肾阳虚证。用36Kmousegenomearray鼠脑芯片检测正常对照组和肾阳虚模型组鼠脑基因,并以二者荧光信号相对强度比值≥2和≤0.5筛选差异显著基因,并进一步查阅北京博奥生物分子注释系统,进行基因功能归类。结果:造模组诱导成功"劳倦过度、房室不节"肾阳虚鼠模型,同时通过基因芯片检测,分别绘制了造模组/对照组与治疗组/造模组基因表达谱的散点图。造模组/对照组共筛选出186个差异表达基因,其中上调基因150个,下调基因36个。治疗组/造模组筛选出299个差异表达基因,其中上调基因114个,下调基因185个。造模组/对照组上调基因而治疗组/造模组基因下调的有58个基因,其主要是与炎症/免疫、神经传递/信号转导、转录/翻译、代谢以及影响多巴胺生成限速酶有关的基因。造模组/对照组下调基因而治疗组/造模组基因上调的基因9个,其主要与生长激素、黑色素、细胞周期/细胞结构、神经传递/信号转导和代谢相关的基因。结论:金匮肾气丸可使肾阳虚小鼠模型显著下调的生长激素、黑色素显著上调并促进细胞增殖,从而在基因水平上探讨了金匮肾气丸的药物作用机理。     

肾阳虚肺纤维化和肺纤维化大鼠肺组织糖皮质激素受体的表达

目的探讨糖皮质激素受体(GR)mRNA在肾阳虚肺纤维化和肺纤维化大鼠肺组织的表达及其意义。方法60只健康SD大鼠,随机分为生理盐水组(NS)、肺纤维化组(BLM)及肾阳虚肺纤维化组(RYA),每组再分成两亚组,每亚组10只,用博莱霉素气管内滴入及腺嘌呤灌胃复制肺纤维化及肾阳虚肺纤维化大鼠模型,于14 d及28 d取大鼠肺组织,运用组织芯片,通过HE及胶原纤维染色以判断肺炎症及纤维化程度和对肺内胶原蛋白定量,通过原位杂交(ISH)对肺组织GRmRNA表达进行定位定量分析。结果14 d时,肾阳虚组及肺纤维化组GRmRNA表达皆呈上调趋势,但无统计学意义(P>0.05);28 d时,BLM组GRmRNA表达明显上调,与BLM组比较,RYA组GRmRNA表达则明显下调(P<0.05)。结论肺组织GRmRNA表达的上调是糖皮质激素防治肺纤维化之所以有效的机理之一,而肾阳虚状态下肺纤维化肺组织GRmRNA表达下调是临床上许多肺纤维化病人对糖皮质激素不敏感的原因之一,同时,温阳药也极可能具有防治肺纤维化的作用。     

阳虚质膝骨性关节炎软骨组织Sox9、Col2al基因表达的研究

目的:通过检测关节软骨Sox9、Col2al基因在阳虚质与平和质两者之间的表达水平,探讨膝骨性关节炎中Sox9、Col2al与中医体质的内在联系和规律。方法:2012年10月20日至2014年12月27日,对甘肃省中医院关节骨科门诊及住院部确诊为膝骨性关节炎的患者进行中医体质问卷调查,同时调查、收集非膝骨性关节炎正常人群的一般资料。在显微镜下观察不同体质KOA患者软骨的病理改变,采取免疫组化及Real-Time RT-PCR的方法检测Sox9基因、Col2al在阳虚质膝骨性关节炎患者膝关节软骨细胞m RNA及蛋白水平中的表达。结果:在对实验结果进行分析后发现在不同体质的KOA患者中,阳虚质KOA患者中软骨内细胞排列紊乱,细胞聚集成团或者局部退化消失,Sox9在软骨细胞核中表达,Col2al在细胞外基质中表达,在阳虚质KOA、阳虚质非KOA患者软骨细胞内呈现高表达状态,在平和质KOA相对阳虚体质表达比较低,两者的表达比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:膝骨性关节炎发病的体质危险因素主要为阳虚质。在分子表达水平Sox9及Col2al均呈现高表达,其与中医体质存在一定的内在相关性,说明体质因素是诱发膝骨性关节炎的高危因素,因人的体质是相对恒定的,某一疾病的诱发是具有时间性的,故阳虚质是膝骨性关节炎中诱导Sox9及Col2al高表达的主要因素之一。     

基于双向凝胶电泳技术的中医寒、热体大鼠蛋白质组表达谱研究

目的：利用双向凝胶电泳技术对中医寒、热体大鼠进行蛋白质组表达谱研究,以期寻找与寒热体相关的蛋白质,并探讨中医寒、热体形成的生物学基础。方法：提取大鼠肝脏细胞的总蛋白,采用双向凝胶电泳（2-DE）及MALDI-TOF-MS质谱技术筛选并鉴定寒热体表达差异的蛋白质群。结果：经过筛选和质谱技术共获得10个具有统计学意义的蛋白表达差异点：氨甲酰磷酸合成酶、二硫键异构酶、过氧化氢酶、过氧化氢异构酶、细胞质氨肽酶、谷氨酸脱氢酶、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶、热休克蛋白前体、同型半胱氨酸、葡萄糖调节蛋白前体。结论：中医寒热体大鼠在蛋白质组表达方面存在一定的差异性,酶类蛋白代谢异常可能是寒热体形成的物质基础之一。     

一个寒证家系中发现15个差异表达基因的报告

目的：精选家系切人证候研究，深层次地探讨寒证的分子生物学基础。方法：应用基因芯片技术对同一家系中的4例虚寒证患者与6名正常人进行基因表达谱检测。结果：发现此寒证家系中的虚寒证患者与能量等代谢相关的差异表达基因达15个，占此实验中已知功能基因的52％。结论：利用家系进行证候的基因组研究，可排除大量干扰因素，对于复杂的寒证可有效、集中地筛选目标基因，提示寒证家系患者机体能量异常、代谢减慢有相应的分子生物学基础。     

肺癌脾虚痰湿型肿瘤相关证候差异表达基因的筛选与鉴定

目的：构建脾虚痰湿型肺癌肿瘤相关消减cDNA文库,以寻找脾虚痰湿型肺癌证候特异基因。方法：以原发性肺癌脾虚痰湿型的患者肿瘤组织及瘤旁正常组织为材料,分离Poly（A）RNA,反转录合成单链及双链cDNA,经Rsa I酶切,将肿瘤组织cDNA分成两组,分别与两种不同的接头连接,再与正常肺组织cDNA进行两次消减杂交和两次抑制性PCR扩增,将第两次PCR产物与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞进行文库扩增,构建了消减cDNA文库,同法建立反向消减cDNA文库。对经反向斑点杂交验证,从cDNA文库中随机挑选的200个含差异片段的克隆,碱裂解法提取DNA,从克隆5’端进行单向测序。EST测序序列行生物信息学分析,所有基因聚类用BLASTX（E values〈10-5）和BLASTN（E values〈10-10）搜索GenBank的非冗余核酸序列数据库及蛋白质库予以注释。结果：经文库扩增,随机挑选克隆进行PCR鉴定,插入片段主要分布在250～1000bp之间,并以反向斑点杂交法进一步验证其阳性克隆,最终获得251个阳性克隆,其中正向消减文库获得165个阳性克隆,反向消减文库获得86个阳性克隆。测序发现了正向消减文库差异基因22个,反向消减文库差异基因6个。结论：成功构建脾虚痰湿型肺癌肿瘤相关消减cDNA文库,发现了那些有明确生物学功能的证候相关基因,其基因表达及分布特征初步反映了肺癌脾虚痰湿型在分子层面的证候特点。