应用荧光多重聚合酶链反应法检测结直肠癌微卫星不稳定

目的建立一种敏感、稳定、高通量的结直肠癌微卫星不稳定(MSI)检测技术。方法105例散发性结直肠癌患者取其新鲜癌组织及正常肠黏膜,DNA提取,荧光多重聚合酶链反应(PCR)扩增5个微卫星位点,应用GeneScan方法分析PCR产物。结果105例结直肠癌患者26例(24.7%)存在微卫星不稳定,其中MSI-H 14例(13.3%),MSI-L 12例(11.4%),MSS 79例(75.3%)。D5S346、BAT26、BAT25、D17S250、D2S123突变率分别为5.6%、8.6%、10.5%、8.6%、10.5%。结论应用荧光多重PCR可以高通量检测结直肠癌微卫星不稳定,敏感性高,结果可靠,适合临床应用。     

微卫星高度不稳定结直肠癌的免疫治疗

微卫星高度不稳定（MSI-H）结直肠癌约占所有结直肠癌患者的10%~15%,而晚期患者中MSI-H人群仅占5%。既往研究显示,早中期MSI-H结直肠癌预后佳,但晚期患者预后差,对化疗不敏感。程序性死亡蛋白-1（PD-1）抗体的出现显著改变了该人群的预后和治疗格局,不仅在后线治疗获得良好疗效,而且在一线治疗中疗效也显著优...     

NGX6基因在结直肠癌中的表达及其与微卫星不稳定的关系

目的探讨NGX6基因在结直肠癌及癌旁组织中表达情况及其与临床病理和微卫星不稳定的关系。方法应用RT-PCR检测41例结直肠癌组织及配对癌旁组织NGX6表达,并对其表达和各临床病理参数的关系进行分析。结果癌组织NGX6阳性表达率21.95%(9/41),NGX6表达强度相对值为0.16±0.08;癌旁组织阳性表达率为65.85%(26/41),强度相对值为0.35±0.15;癌与癌旁组织的表达阳性率及强度比较差异有统计学意义(P<0.05);结直肠癌组织NGX6表达与TNM分期(P<0.01),但与年龄、性别、淋巴结转移、CEA状态、微卫星状态均无关(P>0.05)。结论 NGX6基因在结直肠癌发生发展中可能扮演抑癌基因的作用,作用机制与微卫星不稳定无关,需要进一步研究。     

抑癌基因甲基化检测结直肠癌患者的研究

目的 应用甲基化特异的聚合酶链反应(PCR)法(MSP)法分析抑癌基因高甲基化对诊疗结直肠癌的应用价值。方法 应用MPS法检测20例结直肠癌患者血清、术中癌旁组织及癌组织中的抑癌基因hLMH1、p15、p16甲基化的发生率。结果 20例结直肠癌患者术前血清及术中癌组织的hLMH1、p15、p16甲基化发生率为61％—97％；癌旁组织略低；术后1周血清中hLMH1、p15、p16与术前比较明显下降(P＜0．01)，而正常对照组抑癌基因甲基化发生率均为0。结论 MSP法的建立，直接检测结直肠癌患者的抑癌基因的高甲基化状态，有助于临床判断和动态观察治疗效果。     

SFRP2基因超甲基化与结直肠癌临床病理关系的研究

目的 通过对SFRP2基因在结直肠癌和癌旁组织中的超甲基化水平的测定,分析其与结直肠癌临床病理特征的关系.探讨SFRP2基因与结直肠癌浸润、转移等的关系.方法 用实时定量聚合酶链反应技术检测分析30例结直肠癌患者癌组织、癌旁组织中SFRP2基因超甲基化水平,并统计学分析其与临床病理特征的关系.结果 在癌组织和癌旁组织中均有SFRP2基因超甲基化发生;TNM分期中结直肠癌Ⅲ、Ⅳ期(7.24±1.13)组织中甲基化水平明显高于结直肠癌Ⅰ、Ⅱ期(5.92 ±0.97)组织中甲基化水平(P＜0.05);在低分化结直肠癌组织中(7.31±1.11)甲基化水平明显高于中高分化结直肠癌癌组织(6.23±1.03),差异有统计学意义(P＜0.05);与性别、年龄、肿块位置及大小差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SFRP2基因超甲基化对结直肠癌恶性程度、浸润、转移和预后判定具有重要的意义.     

多重荧光PCR方法对结直肠癌进行微卫星不稳定检测及其临床价值

目的探讨多重荧光PCR方法检测结直肠癌微卫星不稳定（MSI）及其临床意义。方法将2004-2005年间进行手术治疗的110例结直肠癌患者建立队列，以多重荧光PCR方法检测结直肠癌MSI，并对MSI和微卫星稳定（MSS）结直肠癌患者的临床病理特点进行比较。结果多重荧光PCR方法扩增出所有患者的5个微卫星序列。其中MSI．H10例（8．1％），MSI-L13例（11．8％），MSS为87例（79．1％）。共检测BAT．26变异9例（8．2％）、BAT．25变异11例（10．0％）、D2S123变异11例（10．0％）、D5S346变异6例（5．5％）和D17S250变异8例（7．3％）。MSI-L、MSI．H和MSS组结直肠癌患者年龄比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；其他临床病理特点差异无统计学意义（P〉0．05）。结论多重荧光PCR方法检测MSI结果稳定，宜于临床应用；MSI和MSS结直肠癌患者临床病理特点比较未见差异。     

E-钙黏附素基因甲基化与结直肠癌临床病理特征的关系

目的探讨E-钙黏附素（E-cadherin）基因甲基化与结直肠癌临床病理特征的关系。方法采用甲基化特异性巢式PCR技术（nMSP法）研究100例结直肠癌组织及100例癌旁组织E-eadherin基因甲基化与临床病理特征的关系。结果100例结直肠癌组织中有33例呈E-cad基因甲基化阳性（阳性率33.0％），相应的癌旁组织无甲基化。Dukes分期中C、D期组织E-cad基因甲基化阳性率（72.7％）明显高于A、B期（27.3％）（P〈0.05）；伴肝转移的结直肠癌组织甲基化阳性率（81．8％）明显高于无肝转移者（18．2％）（P〈0．01）；在肿瘤细胞分化程度、大体类型、年龄、性别和肿瘤部位等其他病理特征，E-cad基因甲基化阳性组与阴性组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论结直肠癌组织E-cad基因甲基化与淋巴结转移、肝转移和Dukes分期明显相关，E-cad基因甲基化可能是结直肠癌侵袭性增强的原因之一。     

微卫星不稳定性结直肠癌分子病理特征及hMLH1基因甲基化

结直肠癌的发生是一个涉及多基因、多途径的过程，被认为是多个控制生长和分化位点基因突变累积的结果。目前认为结直肠癌形成的主要途径有两条。     

结、直肠癌血行转移与肿瘤转移因子的关系

目的 研究结、直肠癌血行转移与肿瘤转移相关因子间的关系。方法 采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术，检测了50例结，直肠癌患者血液中CK20mRNA的表达。并用免疫组化方法检测了癌组织中CD44v6和p53的表达。结果 CK20mRNA阳性表达与癌组织中p53和CD44v6的表达之间存在着显著相关性。结论 手术前监测血液中CK20mRNA的表达并结合癌组织中p53和CD44v6表达的检测，对于预测结，直肠癌血行转移和指导术后治疗具有重要参考价值。     

hMLH1与hPMS2在大肠癌及伴发腺瘤中的表达及临床意义

目的:探讨hMLH1与hPMS2在大肠癌及伴发大肠腺瘤中的表达及临床意义。方法:收集航天中心医院2013年1月—8月16例经肠镜及病理检查诊断大肠癌伴发腺瘤的标本,其中高分化腺癌3例,中分化腺癌12例,低分化腺癌1例;伴发大肠腺瘤共计27枚。采用Elivision法检测hMLH1、hPMS2蛋白在大肠癌和腺瘤组织中的表达。结果:16例大肠癌组织中hMLH1缺失表达1例,伴发腺瘤3枚,其中hMLH1缺失表达的管状腺瘤2枚。16例大肠癌组织中hPMS2缺失表达5例,伴发腺瘤10枚,其中hPMS2缺失表达的Ⅰ级管状腺瘤4枚,Ⅱ级管状腺瘤2枚。16例大肠癌组织中,1例同时存在hMLH1与hPMS2缺失表达,其余15例hMLH1表达阳性的大肠癌患者中26.7%(4/15)hPMS2缺失表达。结论:hPMS2蛋白检测可以提高错配修复功能突变异常的检出率。大肠腺瘤中hMLH1、hPMS2蛋白功能缺失时,可能通过促使腺瘤细胞异常增生诱发癌变。     

原发性肝癌中STAT1，STAT2与hMLH1，hMSH2的表达关

目的　探讨肝细胞癌中STAT1,STAT2与hMLH1,hMSH2的表达关系及意义。方法　利用SABC免疫组织化学方法检测 3 7例原发性肝癌及癌旁组织标本中的STAT1,STAT2,hMLH1,hMSH2蛋白的表达。结果　HCC组织中STAT1,STAT2 ( 2. 3 0±1. 8 1, 2. 4 9±2. 1 3 )和hMSH1,hMSH2 ( 2. 2 4±1. 7 7, 1. 6 5±1. 7 0 )蛋白阳性率和阳性信号显著低于癌旁肝组织 ( 3. 7 3±0. 9 9, 3. 6 2±1. 8 5, 3. 3 8±1. 3 2, 3. 30±1. 3 7 ) (P < 0. 0 5 ); 4种蛋白活性在癌组织的分化程度中高分化阳性表达 ( 4. 1 5±2. 4 5, 4. 35±2. 4 5, 3. 5 2±1. 7 3, 4. 3 9±1. 5 0 )显著高于低分化者 ( 1. 8 0±2. 2 0, 2. 0 3±2. 1 4,1. 78±1. 6 2, 1. 5 8±1. 8 4 ) (P< 0. 0 5 ),癌旁组织中STAT1与hMSH2,STAT2与hMLH1,hMSH2表达呈正相关 (P< 0. 0 5, P< 0. 0 1 )。结论　STAT1,STAT2和hMLH1,hMSH2均可能在细胞早期的恶性转化中起重要作用。     

错配修复基因hMLH1,hMSH2在肝门部胆管癌中的表达和意义

目的 检测肝门部胆管癌中错配修复基因hMLH1,hMSH2失表达情况,研究其与肝门部胆管癌临床特征的关系,并探讨其与预后的相关性.方法 用免疫组织化学技术检测54例肝门部胆管癌组织、25例正常胆管中hMLH1,hMSH2表达,结合临床病理学资料及随访统计资料进行统计学处理分析.结果 (1)在54例肝门部胆管癌组织中,hMLH1蛋白阳性表达24例,其阳性率44.4%;25例正常胆管组织中,hMLH1蛋白阳性表达23例,其阳性率92.0%;hMSH2蛋白癌组织阳性表达21例,其阳性率38.9%;hMSH2蛋白在正常胆管组织阳性表达21例,其阳性率84.0%.hMLH1,hMSH2在肝门部胆管癌组织中的表达明显减少,二者比较差异具有统计学意义(P＜0.05).(2)根据统计学检验,hMLH1,hMSH2表达与肝门部胆管癌Bismuth分型(P＞0.05)、病人性别(P＞0.05)、年龄(P＞0.05)、肿瘤大小(P＞0.05)无关,但与病理分级(P＜0.05)和淋巴结转移(P＜0.05)具有显著相关性.(3)hMLH1表达阴性组术后2年生存率明显低于表达阳性组(15%VS 45.4%,P＜0.05).hMSH2表达阴性组术后2年生存率明显低于表达阳性组(23.5%VS44%,P＜0.05).结论 hMLH1,hMSH2在肝门胆管癌中的失表达在肿瘤的发生、发展及转移中起重要作用,是判断预后有价值的指标.     

胃癌、结直肠癌组织中hMLH1的表达及其临床意义

目的:探讨错配修复基因hMLH1在胃癌、结直肠癌发病中的作用及其与胃癌、结直肠癌发生、组织分化、淋巴结转移及临床分期的关系.方法:应用SP免疫组织化学法,对42例胃癌、45例结直肠癌组织病理切片进行免疫组化分析.结果:结直肠癌旁正常组织hMLH1的表达阳性率为86.7%,明显高于癌组织hMLH1的表达阳性率44.4%.高、中、低分化腺癌组织中hMLH1的表达率分别为60.0%、45.5%、21.4%,存在明显差异(P＜0.05).胃癌组织与癌旁正常组织hMLH1的表达阳性率分别为47.6%、100%,存在明显差异(P＜0.05).结论:hMLH1表达水平与结直肠癌的发生、组织分化、淋巴转移及临床分期有关,与胃癌的发生和淋巴结转移有关.     

hMLH1在直肠上皮内瘤变和早期直肠癌组织中的表达

目的探讨hMLH1在直肠上皮内瘤变与早期直肠癌组织中的表达情况及其早期诊断价值。方法采用PV-9000二步法免疫组织化学检测技术对术后确诊的28例早期浸润性直肠癌、36例直肠上皮内瘤变和30例正常直肠黏膜组织的石蜡切片进行hMLHl蛋白表达的检测。结果正常直肠黏膜组织、直肠上皮内瘤变组织和早期浸润性直肠癌组织hMLH1蛋白的阳性表达率分别为100％（30／30）、77．8％（28／36）和39．3％（11／28），3组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。直肠上皮内瘤变组织hMLH1的阳性表达与患者的年龄、性别、肿瘤最大径、异型增生、肿瘤类型和距肛缘的距离均无关（P〉0．05）；早期直肠癌组织hMLH1阳性表达与其分化程度有关（P〈0．05）。结论hMLHI基因表达缺失可能是直肠癌发生的早期事件之一,hMLH1蛋白检测对于上皮内瘤变和早期直肠癌中两种疾病的早期诊断有一定的临床价值。     

Deficient expression ofO 6-Methylguanine-DNA methyltransferase combined with mismatch-repair proteins hMLH1 and hMSH2 is related to poor prognosis in human biliary tract carcinoma

Background O ⁶-Methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT) is a DNA repair enzyme that transfers methyl groups fromO ⁶-methylguanine to itself. Alkylation of DNA at theO ⁶ position of guanine is an important step in the induction of mutations in the organism by alkylating agents. TheO ⁶-methyl G:T mismatch is recognized by the mismatch-repair (MMR) pathway. The biliary duct is highly exposed to alkylating agents because of its anatomical location. Methods We examined 39 surgically resected gallbladder carcinomas and 35 extrahepatic bile duct carcinomas and evaluated the expression of MGMT and MMR protein (hMLH1 and hMSH2) by immunohistochemical staining. Results MGMT-negative staining was detected in 59.0% of gallbladder carcinoma specimens and 60.0% of extrahepatic bile duct carcinoma specimens. In gallbladder carcinoma, hMLH1- and hMSH2-negative staining was observed in 51.3% and 59.0%, respectively, whereas in extrahepatic bile duct carcinoma, the respective values were 57.1% and 65.7%. MGMT-negative staining correlated with hepatic invasion in gallbladder carcinoma and with poor prognosis in both types of tumor. Furthermore, a combined MGMT and MMR status was shown to be a more significant prognostic biomarker in both tumor types. Conclusions Combined MGMT and MMR is a possible prognostic marker that probably reflects an accumulation of genetic mutations.     

微卫星不稳定结直肠癌hMLH1和hMSH2及hMSH6种系突变与hMLH1启动子甲基化检测

目的探究微卫星不稳定（MSI）结直肠癌患者的hMLH1、hMSH2和hMSH6种系突变特征和hMLH1启动子甲基化状态。方法对前瞻性收集的34例MSI结直肠癌患者检测其hMLH1、hMSH2和hMSH6种系突变，并研究其肿瘤的hMLH1启动子甲基化状态。结果34例MSI结直肠癌中。共检测到MLH1基因启动子的甲基化19例（55．9％）。19例MSI—H结直肠癌中检测到MLH1基因的甲基化14例（73．7％）；15例MSI—L结直肠癌检测到MLH1基因的甲基化5例（33．3％）；两组差异有统计学意义（P〈0．05）。全组共发现8个hMSH2和hMSH6基因的突变，其中hMSH6基因突变3个，hMSH2基因突变5个。结论中国人MSI结直肠癌错配修复基因突变（未测到MLH1基因突变）和MLH1基因启动子的甲基化检出率可能有别于国外MSI结直肠癌。     

A meta-analysis of the prevalence of somatic mutations in the hMLH1 and hMSH2 genes in colorectal cancer

Aim The study aimed to understand better the somatic mutations in the human MutL Homolog 1 (hMLH1) and human MutS Homolog 2 (hMSH2) genes in colorectal cancer (CRC) and to investigate the differences derived from ethnicity, family history, detection method and microsatellite instability (MSI). Method The terms ‘hMSH2’ or ‘hMLH1’and‘colorectal cancer’‘colorectal carcinoma’ or ‘colorectal tumour’ were searched in the PubMed, Springer, Lippincott, Williams & Wilkins and HighWire Press databases for the publication period December 1993 to September 2010. The Comprehensive Meta Analysis V2 software (Biostat Inc.) was used to explore the prevalence and 95% confidence intervals. Results The prevalence of somatic mutations in the hMLH1 and hMSH2 genes in CRC was 0.15 (95% CI 0.10–0.22) and 0.10 (95% CI 0.07–0.16), respectively. A higher prevalence of somatic mutations in hMSH2 was found in hereditary non‐polyposis CRC than in sporadic CRC: 0.36 (95% CI 0.14–0.67) and 0.10 (95% CI 0.07–0.13) respectively. In addition, a higher prevalence of somatic mutations in the hMLH1 gene was observed relative to hMSH2 in the European group. The prevalence was higher in the high‐level instability (MSI‐H) group than in both the low‐level instability (MSI‐L) and the microsatellite stable (MSS) groups. Conclusion Somatic mutations in the hMLH1 and hMSH2 genes play a vital role in CRC and a high prevalence was found in this meta‐analysis. Furthermore, more studies are needed which focus on somatic mutations in the American population and in patients with MSI‐L and MSS.     

膀胱移行细胞癌中DNA错配修复基因hMLH1、hMSH2和hMSH3启动子区甲基化状态研究

目的探讨DNA错配修复基因启动子区CpG岛甲基化状态及其在膀胱移行细胞癌（BTCC）中的表达。方法应用MSP技术检测膀BTCC中hMLH1、hMSH2和hMSH3基因启动子区甲基化状态,RT-PCR法检测其mRNA表达水平。结果36例BTCC组织中hMSH1、hMSH2的甲基化阳性率分别为38.9％（14／36）、52.8％（19／36）,所有标本中均未发现有hMSH3启动子甲基化。hMLH1、hMSH2、hMSH3 mRNA在BTCC中表达率分别为47.2％（17／36）、38.9％（14／36）、16.7％（6／36）,在正常组织中分别为22.2％（8／36）、63.9％（23／36）、0％（0／36）,差异均有统计学意义（P〈0.01）,并且随肿瘤病理分级的增加呈下降趋势（P〈0.05）,均与临床分期不相关（P〉0.05）。结论hMLH1、hMSH2和hMSH3基因启动子异常甲基化可能导致该基因转录表达失活,使其mRNA表达减少甚至缺失,这可能是导致BTCC发生、发展的原因之一。