喉癌组织中IGFBP-rP1基因的甲基化及表达

目的：探讨喉癌中胰岛素样生长因子结合蛋白一相关蛋白1（IGFBP—rP1）基因启动子区甲基化与蛋白表达之间的关系。方法：采用甲基化特异性PCR方法和免疫组织化学的方法分别检测45例喉癌组织及18例癌旁组织中IGFBP-rP1基因的甲基化状态和蛋白表达情况。结果：喉癌组织IGFBP—rP1启动子区甲基化率为33．3％（15／45）,相应癌旁组织甲基化率为5．6％（1／18）,喉癌组织中IGFBP—rP1基因甲基化率明显高于癌旁组织（P〈0．05）。喉癌组织中IGFBP—rP1蛋白表达显著低于癌旁正常组织（P％0．05）,且与其启动子区甲基化状态呈负相关。结论：IGFBP—rP1基因启动子区甲基化导致基因沉默可能是喉癌发生的机制之一。     

声门上型喉癌组织中的BRMS1蛋白表达及甲基化的研究

目的:探讨声门上型喉鳞状细胞癌组织中乳腺癌转移抑制基因(BRMS1)的蛋白表达以及BRMS1基因启动子区域甲基化情况及其临床意义。方法:采用Western blotting法检测70例声门上型喉癌组织原发灶、60例癌旁正常喉黏膜组织和44例颈部淋巴结转移灶中BRMS1蛋白的表达情况;甲基化特异聚合酶链反应(MSP)法检测上述组织中的BRMS1基因启动子区域甲基化情况,探讨BRMS1基因启动子甲基化与其基因表达的相关性;分析BRMS1蛋白表达及BRMS1基因启动子甲基化情况与患者的临床分期、病理分级、颈部淋巴结转移等方面的相关分析。结果:Western blotting检测发现声门上型喉癌原发灶、癌旁正常喉黏膜组织和颈部淋巴结转移灶均有BRMS1蛋白表达,在癌组织及转移淋巴结中BRMS1蛋白表达下调(P<0.05)。MSP法检测发现BRMS1基因启动子区甲基化,在BRMS1蛋白低表达患者的原发灶中检测到34例BRMS1基因启动子区甲基化,44例BRMS1蛋白低表达的颈部淋巴结转移灶中检测到32例BRMS1基因启动子区甲基化,60例癌旁正常喉黏膜组织中均未检测到BRMS1基因启动子区甲基化,统计学分析结果表明在声门上型喉癌中BRMS1基因启动子甲基化与其基因表达下调密切相关(rs=0.66,P<0.05)。结论:声门上型喉癌组织中BRMS1蛋白表达下调。BRMS1蛋白表达下调与声门上型喉癌的P-TNM分期、病理分化程度和颈部淋巴结转移密切相关。BRMS1基因启动子甲基化与声门上型喉癌组织中BRMS1基因表达下调相关,也可能是声门上型喉癌组织中BRMS1基因表达下调的原因之一。     

喉癌细胞系中抑癌基因MGMT表达与DNA甲基化及组蛋白H3-K9甲基化的关系

目的:探讨喉癌Hep-2细胞中组蛋白H3-K9甲基化与DNA甲基化及抑癌基因MGMT表达的关系。方法:应用去甲基化制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理体外培养的Hep-2细胞。应用染色质免疫沉淀技术、甲基化特异性聚合酶链反应和实时定量逆转录聚合酶链反应分析药物作用前后MGMT基因启动子区组蛋白H3-K9甲基化、DNA甲基化和MGMT表达情况。结果:①在Hep-2细胞未经药物干预前,MGMT表现为DNA甲基化,组蛋白H3-K9高甲基化,MGMT低表达。②在5-Aza-dC的作用下,Hep-2细胞中MGMT的组蛋白H3-K9甲基化状态被降低;MGMT的DNA甲基化状态得到了逆转;原来低表达的MGMT表达上调。结论:喉癌细胞系中MGMT启动子区甲基化可能是导致其基因失活的主要原因。DNA甲基化可能导致组蛋白H3-K9高甲基化。应用5-Aza-dC能够通过逆转MGMT的DNA甲基化水平从而降低MGMT组蛋白H3-K9甲基化水平来使抑癌基因表达上调,从而抑制肿瘤的发生和发展。     

喉癌及癌前病变中细胞周期调控基因甲基化的研究

目的探讨细胞周期调控基因P14,P15及P16在喉癌发生发展中的作用。方法选取20例喉癌癌前病变（包括喉角化8例、白斑4例和成人复发性喉乳头状瘤8例）、30例喉鳞状细胞癌（声门型）及10例癌旁组织。采用甲基特异性聚合酶链反应（methylationspecific PCR,MSP）检测P14,P15及P16基因启动子区过甲基化。结果P14,P15及P16基因启动子过甲基化发生率在癌前病变中分别为10％（2／20）、15％（3／20）、20％（4／20）;在喉癌中分别为30．0％（9／30）、40．0％（12／30）、36．7％（11／30）;在癌旁组织中未检测到过甲基化事件。结论细胞周期调控基因p14,p15及p16启动子区过甲基化发生于喉癌早期病变中,可作为喉癌前病变及早期喉癌筛查的指标之一。     

RASSF1A基因启动子甲基化状态与喉癌关系的实验研究

目的检测喉癌组织的抑制基因RAS相关区域家族1A(Ras associationdomain family 1,isoform A,RASSF1A)甲基化状态,并探讨RASSF1A启动子甲基化与喉癌的关系。方法应用甲基化特异性PCR技术技术检测52例喉癌组织,52例相应癌旁组织及24例对照组织中RASSFIA基因启动子甲基化状态。按年龄、性别、肿瘤分化程度、肿瘤分期进行分组,分析RASSF1A基因启动子区甲基化情况与各组临床病理特征的关系。结果 1喉癌组织、癌旁组织及对照组织中RASSFIA基因启动子区甲基化的例数分别65.4%、7.7%、0%。喉癌组甲基化发生率显著高于癌旁组和对照组,差异有显著统计学意义(P0.05),而癌旁组甲基化发生率与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。2RASSF1A基因启动子甲基化情况与喉癌患者的年龄、性别及肿瘤的分化程度、及分期情况关系不明显,按上述临床病理特征分组,各组内比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 1喉癌组织中RASSF1A基因启动子区的甲基化,提示其与喉癌发生关系密切,可能喉癌发生过程中一个重要的分子机制。2不同肿瘤的分化及分期间甲基化程度无明显差异,提示RASSF1A基因发生甲基化可能是喉癌发生中的早期事件。3RASSF1A启动子甲基化有望成为早期诊断喉癌的一个分子标志。甲基化特异性PCR方法是一种快而灵敏的基因甲基化检测方法,有望应用于临床。     

喉癌组织RKIP基因甲基化表达调控研究

摘要：目的检测喉癌组织中Raf 1激酶抑制蛋白（ Raf 1 kinase inhibitor protein, RKIP ）基因启动子区域的甲基化状态及其蛋白表达情况,并探讨其临床意义。方法采用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP ）技术及免疫组化方法检测53例喉癌组织及34例癌旁组织中RKIP基因启动子区域的甲基化状态及蛋白表达情况。结果喉癌及癌旁组织中RKIP基因启动子甲基化发生率分别为17%、3%,两者比较差异具有统计学意义（P=0.045）。结论RKIP基因启动子区高甲基化状态可能是造成喉癌组织中RKIP表达缺失的分子机制之一,RKIP蛋白表达缺失与喉癌的发生发展及转移有关。     

Stathmin基因在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的 观察stathmin基因和蛋白质在喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)中的表达情况,探讨stathmin基因与喉鳞癌生物学行为的关系及临床意义,进一步认识喉鳞癌发生和发展的分子机制.方法选取2005年3月至2006年4月的38例喉鳞癌患者,术中从肿瘤中心部位取癌组织(实验组),在肿瘤边缘外1.0cm部位取癌旁正常组织(对照组).应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析38例患者的喉鳞癌组织和癌旁正常组织中stathmin基因mRNA的表达水平,冰冻切片免疫组织化学方法检测喉鳞癌组织和癌旁正常组织中stathmin蛋白的表达情况.结果 RT-PCR结果显示,stathmin基因mRNA在38例喉癌患者的喉癌组织和癌旁正常组织均呈阳性表达;经半定量分析,stathmin mRNA在喉癌组织中的表达水平明显高于在癌旁正常组织的表达水平(t=9.655,P＜0.05).免疫组织化学发现,stathmin蛋白在26例(26/38,68.4%)患者的喉癌组织呈阳性表达,在13例(13/38,34.2%)患者的癌旁正常组织呈弱阳性表达;stathmin蛋白在喉癌组织中的阳性表达率明显高于在癌旁正常组织的阳性表达率(x2=8.901,P＜0.05).同时发现,stathmin mRNA的表达水平和stathmin蛋白的阳性表达率在Ⅲ期和Ⅳ期喉癌组明显高于Ⅰ期和Ⅱ期病例组(t=6.284,x2=5.810,P＜0.05),有颈部淋巴转移组明显高于无转移组(t=9.350,x2=6.923,P＜0.05).结论 stathmin基因和蛋白在喉鳞癌中的表达明显高于癌旁正常组织,在中晚期喉鳞癌中的表达明显高于早期喉鳞癌,并且与颈淋巴转移有关.stathmin基因与喉鳞癌的发生和发展均有密切关系,并可能与喉癌的预后有关.     

RASSF2A基因甲基化在喉癌组织中的表达及意义

目的 探讨抑癌基因RASSF2A表达水平及其基因异常甲基化与喉癌的关系及意义。 方法 采用RT-PCR及甲基化特异性PCR(MSP)检测50例喉癌组织(实验组)和10例癌旁正常黏膜组织(对照组)中RASSF2A基因mRNA的表达水平及其启动子甲基化状态。 结果 喉癌组织中有54%(27/50)存在RASSF2A基因启动子,而对照组正常黏膜组织中未发现RASSF2A基因甲基化现象,差异有统计学意义(χ2=9.818, P=0.002)。RASSF2A甲基化水平程度与喉癌患者临床病理特征无明显相关性。喉癌组织中RASSF2A基因mRNA的表达水平明显低于正常黏膜组织(χ2=9.818, P=0.002)。RASSF2A基因甲基化的喉癌组织中其mRNA的表达减少,反之亦然。 结论 喉癌组织中RASSF2A基因CpG岛甲基化与其基因表达缺失有关,可能参与了喉癌的发生发展过程。     

甲状腺乳头状癌中PTEN基因启动子甲基化及其蛋白表达的相关性

目的 探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中PTEN基因启动子区域甲基化状态及其蛋白表达的相关性.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应及免疫组化SP技术,检测80例PTC及其相对应的癌旁组织中PTEN基因启动子甲基化状态及其蛋白表达.结果 在癌旁组织中,无一例出现PTEN基因启动子甲基化,而在PTC中,有25%(20/80)出现甲基化,且其甲基化状态与TNM分期、病理分级及淋巴转移有关(P值均<0.05);癌旁组织和PTC组织中,PTEN蛋白表达的阳性率分别为100.0%(80/80)和41.3%(33/80),P<0.01.在PTC组中,在病理分级Ⅰ级和Ⅱ级组,PTEN蛋白阳性率分别为54.0%(27/50)和20.0%(6/30),在淋巴转移阳性和阴性组分别为20.6%(7/34)和56.5%(26/46),以上两组比较差异有统计学意义(χ~2值分别为8.944和10.046,P值均<0.01);PTEN基因启动子甲基化与其蛋白表达有明显的相关性(χ~2=9.095,P<0.01).结论 PTEN基因启动子区域甲基化是该基因失活的重要机制之一,在PTC的发生、发展中起着重要的作用.     

喉癌组织中CHFR基因mRNA表达水平及启动子区甲基化的研究

目的:探讨CHFR基因表达水平及启动子区CpG岛过甲基化与喉癌发生发展的关系.方法:采用荧光定量PCR技术和甲基化特异性PCR技术检测50例喉癌组织(喉癌组)和15例正常喉组织(对照组)CHFR基因mRNA表达情况及启动子区CpG岛过甲基化情况.结果:①CHFR基因在对照组mRNA全部表达,在喉癌组mRNA有2例(4%)表达缺失,48例表达量明显下调(相对表达量为0.50±0.12),其中Ⅰ和Ⅱ期相对表达量(0.30±0.04),Ⅲ期和Ⅳ期相对表达量(0.70±0.21),与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).②在对照组中未发现CHFR基因启动子区甲基化,在喉癌组中CHFR基因启动子区甲基化率为22%(11/50),其中Ⅰ期和Ⅱ期患者共10例,Ⅲ期1例,Ⅳ期未发现甲基化,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).③甲基化的喉癌标本mRNA相对表达量为0.11±0.05,2例mRNA表达缺失.未甲基化的喉癌标本mRNA相对表达量为0.75±0.13.甲基化和mRNA表达相关,γ=0.387(P<0.05).结论:喉癌组织中CHFR基因mRNA表达缺失或下调,CHFR基因启动子区CpG岛过甲基化在喉癌组织中是频发事件,二者密切相关,可能与喉癌的发生发展有关,有望能成为喉癌的早期诊断及治疗靶点基因之一.     

中耳胆脂瘤上皮细胞DNA的特征

目的 :采用流式细胞术分析胆脂瘤上皮细胞的 DNA特征 ,探讨胆脂瘤的病理学属性。方法 :利用机械捣碎法将新鲜的胆脂瘤和外耳道上皮制成单细胞悬液 ;采用 PI法 ,对 2 5例胆脂瘤上皮和 10例正常外耳道细胞上皮的 DNA进行流式细胞术分析。结果 :胆脂瘤上皮细胞和外耳道上皮细胞的核型均为二倍体 ,未见异倍体。胆脂瘤上皮细胞 S期细胞数 (10 .9± 2 .32 ) %明显高于外耳道上皮 (7.31± 2 .82 ) %。结论 :虽然胆脂瘤破坏力强 ,易复发 ,但从染色体水平看来 ,仍提示为一种炎性病变 ,未见有恶变倾向。     

DNA repair and synthetic lethality

Tumors often have DNA repair defects, suggesting additional inhibition of other DNA repair pathways in tumors may lead to synthetic lethality. Accumulating data demonstrate that DNA repair-defective tumors, in particular homologous recombination (HR), are highly sensitive to DNA-damaging agents. Thus, HR-defective tumors exhibit potential vulnerability to the synthetic lethality approach, which may lead to new therapeutic strategies. It is well known that poly (adenosine diphosphate (ADP)-ribose) polymerase (PARP) inhibitors show the synthetically lethal effect in tumors defective in BRCA1 or BRCA2 genes encoded proteins that are required for efficient HR. In this review, we summarize the strategies of targeting DNA repair pathways and other DNA metabolic functions to cause synthetic lethality in HR-defective tumor cells.     

DNA content in nasopharyngeal carcinoma

DNA analysis by flow cytometry was performed on tissue blocks from 41 patients with nasopharyngeal carcinoma. The histologic slides were reviewed by a pathologist and blindly classified according to the World Health Organization classification. The paraffin-embedded blocks were processed to obtain individual nuclei, which were then stained with propidium iodide. The nuclei were analyzed on a flow cytometer. Excluding 10 uninterpretable histograms, the remainder were interpreted blindly and classified as diploid or aneuploid. The Cox proportional hazards survival model was used to analyze stage, histology, radiation dose, and ploidy. We observed more diploids (23 of 31; 74%) than aneuploids (eight of 31; 26%). The 2-year survival rate of diploids was 55%, compared with 25% of aneuploids (P less than .05). We conclude that ploidy status is an independent prognostic factor in nasopharyngeal carcinoma.     

DNA pattern of human pituitary tumors

The tumor tissue from 62 consecutive patients with pituitary adenomas was analyzed with regard to ploidy and percentage of cells in different phases of the cell cycle by use of flow-cytofluorometry. In six of 62 cases, two tumor-cell populations were identified; therefore the study material comprised 68 cell lines. Approximately half of the cell lines were diploid (33 of 68, or 49 per cent); five of 68 (7 per cent) were hypodiploid, and 30 of 68 (44 per cent) were hyperdiploid-aneuploid. A low occurrence of aneuploid cell lines appeared in hormonally nonsecreting tumors (22 per cent). An aneuploid DNA pattern was predominantly found in prolactinomas (70 per cent). In acromegaly, tumors secreting growth hormone had only an aneuploid DNA pattern in 41 per cent of the cases, whereas 67 per cent of the tumors with concomitant secretion of growth hormone and prolactin were aneuploid. The latter group also comprised the largest number of adenomas with two cell lines and all but one hypodiploid tumor. Most tumors with an aggressive clinical course were either aneuploid or diploid but with a high percentage of proliferating cells.     

无综合征耳聋与线粒体DNA1555A→G突变

目的 :分析 4个无综合征耳聋家系是否存在线粒体 DNA15 5 5 A→ G的突变。方法 :以 PCR- RFL P方法进行线粒体 DNA15 5 5 A→ G突变筛查。结果 :仅 1个无综合征耳聋家系中的 5个成员有 4个存在该突变。结论 :线粒体DNA15 5 5 A→ G点突变与部分无综合征耳聋有一定关系。     

DNA flow cytometry of thyroid neoplasms

Mechanically dispersed cell suspensions from 23 thyroid lesions were studied by acridine orange flow cytometry. Eight of 14 carcinomas (three papillary, two medullary, two Hürthle cell, and one follicular) manifested abnormal DNA indices ranging from 0.6 to 2.0. Six carcinomas (four papillary and two medullary) were diploid. Four patients having papillary carcinomas with diploid DNA content were young women whose clinical course of disease was indolent. Three papillary carcinomas with abnormal DNA content were found in older men with clinically aggressive disease. One benign adenomatoid nodule displayed a small population with a low-degree hyperdiploid stemline (DNA index = 1.1) with low proliferative activity. Differentiation between clinically indolent and aggressive carcinomas may be possible by nuclear DNA determination, but further work is needed to determine the importance of proliferative activity in thyroid carcinoma.     

线粒体DNA突变与遗传性耳聋

耳聋是耳鼻咽喉科的常见病．严重影响人们的健康和生活质量．其中相当一部分由遗传因素引起。关于遗传性耳聋的总发病率在我国还没有可靠的统计资料。在发达国家，60％的耳聋因遗传缺陷引起。新生儿中听力障碍群体发病率约为1/1000．其中一半是遗传因素所致。随着分子生物学技术在耳聋研究中的应用．发现线粒体DNA(mitochondrial DNA．mtDNA)突变与遗传性耳聋有密切关系。