Smad2蛋白在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程

观察体外原代培养的人牙乳头细胞内Ｓｍａｄ２蛋白的表达,以及Ｓｍａｄ２蛋白在转化生长因子－β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β１,ＴＧＦ－β１）信号转导中的作用。方法原代培养工牙乳头细胞,用ＴＧＦ－β１和骨形成蛋白－２（ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ,ＢＭＰ２）刺激培养的细胞,免疫化观察。结果：ＴＧＦ－β１和ＢＭＰ２刺激组均可见Ｓｍａｄ２蛋白表达,但与对照组相     

人牙乳头细胞内Smad5蛋白表达的免疫组化研究

目的：观察Smad5蛋白在体外原代培养的人牙乳头细胞内的表达及其在转化生长因子－β超家族信号转导中的作用。方法：原代培养的人牙乳头细胞,分别以骨形成蛋白－2（bone morphogenetic protein-2,BMP－2）和转化生长因子－β1（transforming growth factor－β1,TGF－β1）刺激,免疫组化检测Smad5的表达,图像分析仪半定量。结果：人牙乳头细胞（空白对照组）胞浆内可见Smad5阳性表达,胞核内未见阳性表达;BMP－2实验组胞核内Smad5强阳性表达,胞浆内为弱阳性表达;TGF－β1实验组细胞胞浆Smad5阳性,胞核未见表达。结论：人牙乳头细胞内存在Smad5的表达,Smad5能转导BMP－2信号至核内发挥作用,但不能TGF－β1信号,提示BMP－2在牙齿发育过程中信号传递可能是通过Smad5的信号途径实现的。     

人牙乳头细胞内Smad2在TGF—β1信号转导中的作用的研究

目的 观察体外原代培养的人牙乳头细胞内Sad2蛋白的表达,以及Smad2蛋白在转化生长因子-β1信号转导中的作用,探讨Smad2信号途径在TGF-β1调控牙乳头细胞向成牙本质细胞分化过程中的作用机制。方法 原代培养人牙乳头细胞,Western blot杂交方法检测内源性Smad2的表达和TGF-β1调控下的表达变化,用免疫组化方法观察Smad2细胞内定位变化。结果培养的人牙乳头细胞表达Ｓmad2蛋白,ＴＧＦ－β１能引起Ｓmad2从蛋白表达水平未见明显的改变。结论 人牙乳头细胞内存在Ｓmad2基因的表达,Ｓmad2能被ＴＧＦ－β１能引起Smad2从胞浆转位至核内聚集,而BMP-2无此功能;TGF-β或BMP-2刺激作用6h、12h24h和48h,牙乳头细胞内Smad2蛋白表达水平未见明显的改变。结论 人牙乳头细胞内存在Smad2基因的表达,Smad2能被TGF-β1活化后转位至核内发挥作用,但Smad2基因的表达无明显变化,提示TGF-β1在调控牙乳头细胞向成牙本质细胞分化的过程中,Smad2信号途径可能发挥一定的作用。     

BMP2作用下人牙乳头细胞内Smad 1 mRNA表达的变化

目的：观察人牙乳头细胞内Smad1 mRNA的表达及在BMP2作用下,细胞内Smad1 mRNA的表达变化,探讨人牙乳头细胞内Smad1信号途径在BMP2调控牙乳头细胞分化中的作用。方法：原代培养的人牙乳头细胞用BMP2处理后,提取总RNA,采用Northern blot法,从mRNA水平观察Smad1基因的表达及含量变化。结果：从mRNA水平观察到Smad1基因在人牙乳头细胞内的表达,但在BMP2作用6、12、24h后,Smad1 mRNA表达量无显著变化。结论：人牙乳头细胞内存在Smad1信号转导途径,牙乳头细胞内Smad1 mRNA表达量不受BMP2调控。     

Smad4基因在人牙乳头细胞内的表达及其意义的探讨

目的：观察转化生长因子－β超家族特异的细胞内信号转导基因Ｓｍａｄ４在人牙乳头细胞内的表达,及其在转化生长因子－β１１（ＴＧＦ－β１）的骨形成蛋白－２（ＢＭＰ－２）作用下的变化,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法：原代培养人牙乳头细胞,用ＴＧＦ－β１和ＢＭＰ－２刺激培养的细胞,分别从刺激前后的细胞中提取总ＲＮＡ和总蛋白,采用Ｎｌｒｔｈｅｒｎ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交方法     

甲状旁腺激素对人牙乳头间充质细胞骨形成蛋白3表达的影响

目的 :观察甲状旁腺激素 (parathyroidhormone ,PTH)对人牙乳头间充质细胞骨形成蛋白 3 (bonemorphogeneticprotein ,BMP)表达的影响 ,探讨PTH对人牙乳头间充质细胞的影响及途径。方法 :细胞培养及原位杂交。结果 :体外培养的人牙乳头间充质细胞BMP3mRNA阳性杂交信号较弱 ;细胞经PTH作用 5d后 ,在细胞质内 ,出现BMP3mRNA阳性杂交信号 ,提示PTH可提高细胞合成BMP3的能力。结论 :在PTH的作用下 ,BMP3基因被激活、表达 ,可能起到类似于牙胚发育早期成釉细胞的作用 ,通过自分泌和旁分泌作用参与牙乳头间充质细胞的诱导和分化 ,促进牙本质和牙本质样基质的形成     

rhBMP_2作用下人牙乳头细胞内Smad1分子的转位变化

目的:观察骨形成蛋白(bone morphogenetic protein)特异的细胞内信号转导分子Smadl在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法:原代培养人牙乳头细胞,用转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和重组人骨形成蛋白骨形成蛋白2(recombinant hu-man bone morphogenetic protein,rhBMP2)刺激培养的细胞,对照组用0.2％FCS的DMEM的培养液培养,不加任何刺激。免疫组化观察。结果: TGF-β1和rhBMP2刺激组均可见Smadl蛋白表达,但与对照组相比无明显差异;rhBMP2组可见Smadl从胞浆转位至核内聚集,TGF-β1组未见此作用。结论:首次观察到Smadl基因在人牙乳头细胞内的表达并参与信号转位过程,提示BMP2在牙乳头细胞内信号传递可能是通过Smadl转位至核内引起基因表达实现的。     

人牙乳头细胞内Smad4表达的免疫组化研究

观察转化生长因子－β超家族的细胞内信号转导分子Ｓｍａｄ４在人牙乳头细胞内的表达及信号转位过程,从细胞内信号转导水平探讨牙齿发育过程中成牙本质细胞的分化机制。方法：原代培养人牙乳头细胞,用转化生长因子－β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｎｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β１,ＴＧＦ－β１）和骨形成蛋白－２（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｎｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ,ｒｈＢＭＰ－２）刺激培养     

人牙乳头细胞内Smad2在TGF-β_1信号转导中作用的研究

目的　观察体外原代培养的人牙乳头细胞内Smad2蛋白的表达 ,以及Smad2蛋白在转化生长因子 β1信号转导中的作用 ,探讨Smad2信号途径在TGF β1调控牙乳头细胞向成牙本质细胞分化过程中的作用机制。方法　原代培养人牙乳头细胞 ,Westernblot杂交方法检测内源性Smad2的表达和TGF β1调控下的表达变化 ,用免疫组化方法观察Smad2细胞内定位变化。结果　培养的人牙乳头细胞表达Smad2蛋白 ,TGF β1能引起Smad2从胞浆转位至核内聚集 ,而BMP 2无此功能 ;TGF β1或BMP 2刺激作用 6h、12h、2 4h和 48h ,牙乳头细胞内Smad2蛋白表达水平未见明显的改变。结论　人牙乳头细胞内存在Smad2基因的表达 ,Smad2能被TGF β1活化后转位至核内发挥作用 ,但Smad2基因的表达无明显变化 ,提示TGF β1在调控牙乳头细胞向成牙本质细胞分化的过程中 ,Smad2信号途径可能发挥一定的作用。     

重组人类骨形成蛋白-2在骨内种植领域的研究进展

重组人类骨形成蛋白-2是骨形成蛋白家族的一员，它与不同的载体结合表现出不同的生物学特性。本文对重组人类骨形成蛋白-2的载体，在骨内种植领域的研究进展进行了综述。     

Mineralized nodule formation by human dental papilla cells in culture

Human dental papilla cells were enzymatically separated from deciduous tooth germs of an 8-month-old embryo legally aborted. the second passage cells were cultured up to 35 days in 3 groups. The β-gp group was cultured in the Dulbecco MEM containing ascorbic acie and β-glycerophosphate supplemented with 15% fetal bovine serum. The Dex group was in the same medium, in addition containing dexamethasone. The Control group contained none of the 3 chemicals, Mineralized nodules were formed after 15 days in the β-GP and Dex groups. Only in the presence of ascorbic acid and organic phosphate did they mineralize. The addition of dexamethasone caused a significant increase in the number of nodules. By electron microscopy, the nodules contained needle-shaped crystals associated with a network of collagen fibrils. Calcium and phosphorus were detected by energy-dispersive X-ray diffiractometry. Cells showed high levels of alkaline phosphatase activity, which was increased 2∼3 times in the presence of the 3 chemicals. These results indicated that human dental papilla cells have the ability to from dentin in culture. The formation of mineralized nodules by human dental papilla in vitro provides a useful model for studying the morphogenesis and differentiation of dental papilla cctomesenchyme.     

BMP2对人牙乳头细胞c-fos和c-jun诱导作用的研究

目的:探讨生长因子BMP2对体外培养的人牙乳头细胞c-fos和c-jun表达的诱导作用.方法:采用免疫组织化学和图像分析的方法,观察特定浓度的BMP2在不同时问点对体外培养的人牙乳头细胞c-fos和c-jun表达的影响.结果:不加刺激时人牙乳头细胞c-fos、c-jun在胞浆阴性表达,胞核不表达或弱阳性表达.200 ng/mL BMP2刺激30 min后,c-fos和c-jun在胞浆胞核均出现表达,但较稀疏;刺激lh胞核胞浆内表达明显增强,浆内表达较核内弱;2 h c-fos和c-jan在细胞核内表达最强,12 h胞核着色明显变浅,24 h基本已无阳性着色.结论:生长因子BMP2可诱导体外培养的人牙乳头细胞c-fos和c-jun表达,整个过程约持续24 h;c-fos和c-jun的表达存在核转位现象,提示c-fos和c-jun参与了BMP2的信号转导过程.     

cbfa1在人牙乳头细胞中的免疫组织化学研究

目的：构建pcDNA3-cbfal重组质粒，瞬时转染人牙乳头细胞，观察cbfal在转染前后的表达。方法：用EcoRV和XbaⅠ双酶切pcDNA3空载体和pGEM-5z-f-cbfal质粒，电泳回收后进行连接，连接产物转化DH5α，进行酶切鉴定和PCR分析。采用脂质体法瞬时转染人牙乳头细胞，制备细胞爬片。免疫组织化学染色。结果：共挑出7个阳性转化子，酶切和PCR分析结果均显示重组质粒构建成功。正常人牙乳头细胞中cbfal表达阴性，瞬时转染24h后，cbfal表达阳性。结论：成功构建了pcDNA3-cbfal真核表达载体。人牙乳头细胞无cbfal的表达，当转染正义的cbfal重组质粒后出现cbfal的表达。为进一步研究cbfal在牙乳头细胞中的作用奠定了基础。     

甲状旁腺激素对人牙乳头细胞牙本质基质蛋白1表达的影响

目的：观察甲状旁腺激素(parathyroid hormone，PTH)对体外培养的人牙乳头细胞(human dental papilla cells，HDPC)牙本质基质蛋白1(dental matrix protein，DMP1)合成分泌的影响。方法：原代方法培养出人牙乳头细胞，用不同浓度的甲状旁腺激素刺激培养的第5代人牙乳头细胞，免疫组化观察结果，并采用图像分析的方法，进行半定量分析。结果：PTH可刺激人牙乳头细胞DMP1的表达，诱导的DMP1主要表达于细胞胞浆内，呈一定的浓度依赖性，0．3μg／mL为刺激最佳浓度。结论：PTH能够刺激人牙乳头细胞产生DMP1，对牙乳头细胞向成牙本质细胞分化有一定促进作用，可能是成牙本质细胞分化的重要介质之一。     

人牙乳头细胞Smad1基因MH2结构域的cDNA的分子克隆

目的：从人牙乳头细胞内克隆骨形成蛋白（BMP）细胞内信号转导基因Smad1的功能性结构域－－MH2结构域。方法：原代培养人牙乳头细胞,从培养的细胞中提取总DNA,逆转录合成cDNA第1条链;设计上下游引物,进行RT－PCR,扩增Smad1基因MH2结构域的基因片段;将所获得的基因片段定向插入PUC19载体;转化大肠杆菌JM109,挑选阳性克隆,鉴定后进行序列测定。结果：获得的Smad1 MH2结构域的cDAN片段大小为444bp,并且成功构建PUC19／MH2重组质粒。结论：人牙乳头细胞内存在Smad1信号转导途径,BMP调控人牙乳头细胞分化可能是通过Smad1信号途径实现的。     

Smad分子在骨形成蛋白2调控成牙本质细胞Ⅰ型胶原基因表达中的作用

目的　研究Smad蛋白在骨形成蛋白 2 (bonemorphogeneticprotein 2 ,BMP 2 )调控小鼠成牙本质细胞系MDPC 2 3内Ⅰ型胶原α2链 [collagenα2 (Ⅰ ) ,COL1A2 ]表达中的作用。方法　细胞免疫组化观察MDPC 2 3细胞内BMP 2细胞内信号分子Smad1、Smad5和Smad6的表达。瞬时转染和报告基因检测观察Smad1、Smad5和Smad6在BMP 2调控COL1A2基因转录中的作用。结果　MDPC 2 3细胞表达Smad1、Smad5和Smad6。BMP 2能诱导含COL1A2基因启动子的荧光素酶报告基因活性。Smad1或Smad5过表达增强BMP 2诱导的COLIA2基因启动子活性 ,而Smad6过表达抑制BMP 2诱导的COL1A2基因启动子活性。过表达Smad1或Smad5突变型载体可以阻断BMP 2的诱导能力。结论　在MDPC 2 3细胞内 ,Smad信号途径存在并发挥功能 ,参与调控BMP 2对COL1A2基因的转录。Smad信号途径可能在BMP 2调控成牙本质细胞分化和牙本质形成过程中发挥重要作用     

尼古丁对牙胚、牙乳头间充质细胞BMP分泌影响的体外研究

目的 :探讨尼古丁对体外鼠磨牙牙胚及牙乳头间充质细胞BMP分泌的影响。方法 :分别采用器官和细胞培养的方法体外培养牙胚和牙乳头细胞 ,在培养基和培养液中加入不同浓度的尼古丁 ,将 15d胎龄的胎鼠的下颌第一磨牙牙胚置于对照组和实验组RPMI - 16 4 0半固态培养基表面培养 4d ,人牙乳头细胞置于各组培养液中培养 3d ,之后分别制作常规组织切片和细胞爬片 ,免疫组化染色。结果 :实验组与对照组相比较 ,对照组牙胚和牙乳头细胞BMP阳性染色强于实验组 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 )。结论 :尼古丁对体外培养胎鼠牙胚和人牙乳头细胞BMP的分泌存在抑制作用。