人参皂苷Rb1抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大

目的观察人参皂苷Rb1(ginsenoside Rb1,Rb1)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)所致心肌细胞肥大的影响。方法利用培养的新生大鼠心肌细胞,以细胞直径、蛋白含量为心肌肥大标志,观察药物的抗心肌肥大效应。ANFmRNA的表达用Real-timePCR检测;用Fura-2/AM负载的培养心肌细胞检测细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)以探讨Rb1可能的作用机制。结果AngⅡ1×10-7mol.L-1使心肌细胞细胞直径明显增大,蛋白含量明显增加,心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)mRNA表达明显上调,并使细胞[Ca2+]i明显升高。Rb150、100和200μg/ml使经AngⅡ处理的心肌细胞直径分别缩短18.4%,32.7%和43.8%;心肌细胞蛋白含量分别减少8.4%、13.6%和17.2%;降低ANFmRNA的表达;Rb150、100和200μg/ml呈剂量依赖地抑制AngⅡ所致的[Ca2+]i升高,NO前体L-精氨酸L-arg10-3molμL-1具有相似的作用,NO合酶抑制剂L-NAME对Rb1的效应无明显影响。结论Rb1可抑制Ang...     

Angiotensin Ⅱ induced upregulation of Gαq/11, phospholipase Cβ3 and extracellular signal-regulated kinase 1/2 via angiotensin Ⅱtype 1 receptor

Background The role of the Gαq/11-mediated signal transduction pathway in angiotensin Ⅱ (Ang Ⅱ) induced cardiac hypertrophy remains unclear. This study was to investigate the role of the Gαq/11 signal transduction pathway in the development of cardiac hypertrophy in 2K1C hypertensive rats and in cultured neonatal rat ventricular myocytes (NRVMs) and to elucidate the effects of the pathway on Ang Ⅱ induced cardiac hypertrophy.Methods Renal hypertension was induced in 2K1C hypertensive rats by placing a silver clip around the left renal artery. At 8 weeks after operation, the systolic blood pressure, the ratio of left ventricular weight to body weight (LV/BW), and the concentration of AngⅡ in the heart were measured. The protein levels of Gαq/11 and extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) were assayed by Western blot analysis, and the activity of phospholipase C (PLC) in the myocardium was detected using ［3H］-PIP2 as a substrate. Changes in ［3H］-leucine incorporation and in the protein levels of the signal molecules Gαq/11, PLCβ3, and ERK1/2 were measured after NRVMs were stimulated with 10-7mol/L AngⅡ.Results The protein levels of Gαq/11 and ERK1/2 in the hearts of 2K1C rats increased by 35.8% and 31.9%, respectively, compared with the sham group. The PLC activity in the 2K1C group was also significantly increased (P<0.05). The levels of Gαq/11, PLCβ3, and ERK1/2 increased significantly after NRVMs were stimulated by AngⅡ. The upregulation of Gαq/11, PLCβ3 and ERK1/2 in NRVMs occurred prior to ［3H］-leucine incorporation increases, and could be inhibited with losartan. Conclusion AngⅡ can initiate cardiac hypertrophy and upregulate signal molecules in the Gαq/11-mediated signal transduction pathway, such as Gαq/11, PLCβ3 and ERK1/2, at both tissue and cellular levels.     

Variation and significance of microtubules in rat volume overload cardiac hypertrophy

Objective To investigate the function of microtubules in volume overload cardiac hypertrophy of rat.Methods The structure of microtubules was observed using an immunofluorescent microscope, while the pixel intensity and distribution of microtubule imaging was estimated from laser scanning confocal images of left ventricular cardiocytes immuno-labeled with an antibody to β-tubulin.Results The pixels of the microtubule image taken just after volume overload were not evenly distributed.At 6 hours after overload, the pixel intensity of the microtubule image was decreased to less than 150 (arbitrary units), which was the same as the pixel intensity and distribution of the colchicine depolymerized microtubule image.The changes were partially recovered to 200 (arbitrary units) after 4 more days.The pixel intensity of the control microtubule image was 250 (arbitrary units) and had an even distribution.The structuring of the microtubules was more disordered as volume overload hypertrophy developed. Conclusions There are disorders in the signal transduction pathways governing the hypertrophic response of cardiomyocytes in the hypertrophic myocardium and microtubule is one of the members of the signal transduction pathways governing the hypertrophic response of cardiomyocytes in the hypertrophic myocardium.The disordered microtubule array may be targeted during heart failure treatment.     

PI3K/Akt-NO信号通路在Ang Ⅳ诱导大鼠心肌肥大中的作用

目的研究PI3K/Akt-NO信号通路在血管紧张素Ⅳ(AngⅣ)诱导大鼠心肌细胞肥大中的作用。方法用乳鼠心肌细胞培养,以细胞表面积和心房利钠因子mRNA表达为心肌肥大指标,观察不同浓度AngⅣ对心肌细胞的作用,并观察PI3K阻断剂LY294002和NO合成酶(NOS)抑制剂L-NAME对AngⅣ作用的影响;利用Real-time PCR和Western blot方法检测mR-NA及蛋白水平的表达;硝酸还原法和ELISA法分别检测NO和内皮型NOS(eNOS)含量。结果 AngⅣ浓度依赖地(0.01、0.1及1nmol/L)诱导心肌细胞肥大;使Akt mRNA和蛋白表达明显降低,eNOS mRNA表达以及细胞培养液中eNOS的含量减少,NO的释放下降(P<0.05);LY294002和L-NAME均使AngⅣ的作用加强(P<0.05)。结论 AngⅣ诱导的心肌肥大作用至少部分地与PI3K/Akt-NO信号通路被抑制有关。     

压力超负荷大鼠心肌营养素-1表达对贝那普利干预的反应

目的 探讨心肌营养素-1(cardiotrophin-1,CT-1)在腹主动脉缩窄所致大鼠压力超负荷心肌肥大模型表达的变化及其与心肌肥大的关系,以及贝那普利(benazepril,Ben)对CT-1表达及心肌肥大的影响.方法 用腹主动脉缩窄术建立大鼠压力超负荷性心肌肥厚模型,术后随机分为左室肥厚组(n=7)和贝那普利干预组(n=7,贝那普利1 mg·kg-1·d～,灌胃3周),另设一假手术组(n=7)为对照.干预3周后测定血流动力学指标、左心室质量指数,应用放射免疫分析法测定心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心肌中CT-1 mRNA表达.结果 与假手术组比较,左室肥厚组动物的血压与左心室质量指数显著升高(P＜0.05);心肌组织AngⅡ含量和CT-1 mRNA表达水平明显增加(P＜0.01).贝那普利干预可显著降低血压和左心室质量指数(P＜0.05),同时降低肥厚心肌组织AngⅡ浓度与CT-1 mRNA表达水平(P＜0.01).结论 CT-1的过度表达参与了压力超负荷性大鼠心肌肥大的发病过程;贝那普利对CT-1的表达及心肌肥大有抑制作用.     

信号转导通路在心肌营养素-1调解心肌转录因子GATA4表达中的作用

目的探讨（CT-1）3条主要作用通路（STAT3、ERK和PI3-K）在其致心肌肥大过程中的作用及相互关系。方法应用Parthenolide（STAT3通路阻断剂）和（或）U0126（ERK通路阻断剂）及（或）LY-294002（PI3-K通路阻断剂）预处理，再加入CT-1（0．1nmol／L）作用6h后测定各组GATA4 mRNA，作用60min后测定GATA4结合活性。结果Parthenohde可抑制CT-1引起的GATA4 mRNA的表达（P〈0.01）及结合活性的增强，U0126可以增加GATA4转录表达（P〈0．01）及GATA4结合活性，LY294002对上述过程均无影响。U0126引起的GATA4的表达增加可被Parthenohde抑制。结论CT-1主要主要通过STAT3通路发挥致肥大作用，ERK通路通过负调节STAT3通路参与CT-1肥大刺激过程，而PI3-K通路则不参与此过程。STAT3与ERK通路的相互作用共同参与CT-1的致肥大过程。     

ERK1/2抑制剂对高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞的影响作用

目的：探讨体外培养中ERK1/2抑制剂对高糖高胰岛素诱导的心肌细胞的肥大是否具有抑制作用。方法：新生Wistar大鼠心肌细胞在含有10%小牛血清的DMEM中培养72h后，换用无血清培养基并分别加入高糖高胰岛素、高糖高胰岛素+ERK1/2抑制剂培养48h，未加入任何药物的心肌细胞在无血清培养基中继续培养48h作为对照。检测心肌细胞肥大指标：心肌细胞表面积、总蛋白含量的变化；并检测心肌营养素1（CT-1）mRNA的表达。结果：高糖高胰岛素可增加心肌细胞表面积、总蛋白含量以及CT-1 mRNA表达。ERK1/2抑制剂可部分抑制心肌细胞的肥大，降低心肌细胞表面积和总蛋白含量，但对CT-1 mRNA表达的影响不明显。结论：ERK1/2抑制剂对高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大具有一定的抑制作用，其作用机制可能是ERK1/2抑制剂通过作用于CT-1下游或独立于CT-1之外的信号分子而参与了高糖高胰岛素诱导心肌细胞肥大的过程。     

Effects of transforming growth factor-β1 and signal protein Smad3 on rat cardiomyocyte hypertrophy

Background SMAD proteins have recently been identified as the first family of putative transforming growth factor-β1 (TGF-β1) signal transducers. This study was to investigate the effects of TGF-β1 and signal protein Smad3 on rat cardiac hypertrophy.Methods The incorporation of [3H]-leucine was measured to determine the hypertrophy of cardiomyocyte incubated with different doses of TGF-β1 in cultured neonatal cardiomyocytes. The model of rat cardiac hypertrophy was produced with constriction of the abdominal aorta. At different times after the operation, rats were killed, and their left ventricular mass index (LVMI) determined.The mRNA expression of TGF-β1 and Smad3 of cultured cells and hypertrophic left ventricles were assessed by RT-PCR. The protein expression of Smad3 was assessed by Western blot.Results In cultured neonatal cardiomyocytes, TGF-β1 significantly promoted incorporation of [3H]-leucine. With the concentration of 3 pg/L, it increased the expression of Smad3 in mRNA and protein levels after 15 minutes, and continued for up to 8 hours of cultured cardiomyocytes. The LVMI and theexpression of TGF-β1 (mRNA) and Smad3 (mRNA and protein) of hypertrophic left ventricle were increased by day 3 after the operation and continued to the 4th week. The peak expression of these was in the second week after operation.Conclusion TGF-β1 has positive effects on could be related to the pathologic progressionrat cardiomyocyte hypertrophy. Signal protein Smad3 of rat cardiac hypertrophy.     

COX-2信号通路参与高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大研究

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)在高糖高胰岛素诱导的心肌肥大中的作用。方法用高糖高胰岛素刺激体外培养的乳鼠心肌细胞,以细胞表面积、蛋白含量和心房利钠因子(ANF)mRNA表达为心肌细胞肥大的反映指标,观察COX-2特异性抑制剂———赛来昔布对高糖高胰岛素致肥大作用的影响。利用real-time PCR检测细胞中mRNA的表达。结果高糖高胰岛素诱导细胞表面积、总蛋白含量以及ANF、COX-2 mRNA的表达增加(P<0.05);赛来昔布可以抑制高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大(P<0.05),同时抑制COX-2的表达(P<0.05)。结论赛来昔布可以通过抑制COX-2的表达,从而对抗高糖高胰岛素诱导的心肌肥大。     

L-精氨酸-一氧化氮通路对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌肥大的影响

目的 探讨L-精氨酸对心肌肥厚的影响及相关机制.方法 皮下注射异丙肾上腺素(ISO)复制大鼠心肌肥厚模型,L-精氨酸作为干预因素,检测心脏重量参数,心肌组织胶原染色,心房利钠肽(ANP)的转录水平,观察L-精氨酸对心肌肥大的影响;不同时间段,应用Westem blot结合图像分析系统,检测各组大鼠心肌组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白表达水平;检测血清NO含量和NOS活性.结果 皮下注射ISO 7d后,心脏重量参数增加,ANP mRNA表达增加;L-精氨酸抑制心肌肥大,随着L-精氨酸作用时间延长,血清NOS活性增强,NO含量增加.同时,iNOS蛋白表达下调,eNOS蛋白表达上调.结论 L-精氨酸可以抑制病理性心肌肥大,这与其调节iNOS和eNOS表达,增加NO含量有关.     

Reversing Effects of DDPH on Cardiac Hypertrophy andIncreased Collagen Content Induced by Partial Narrowing of Abdominal Aorta

Cardiachypertrophycouldbecausedbymanyphysicalandchemicalstimulation.Whencardiachypertrophydevelops,notonlythesizeofmyocardialcellsincrease,butmatrixsuchascollagenalsosufferfromhyperplasia['Jandcardiacfunctionisimpaired.Mortalityrateisveryhighbecauseofcardiacfailureandsuddendeath[2].So,itisofgreatimportancetostudythemechanismofcardiachypertrophyanddrugsthatcanreversecardiachypertrophy.IthasbeenreportedthatmanydrugssuchasACEI[3],calciumantagonists[']andalblockingagents[sjcouldreversecardiachyp…     

抑制MEK/ERK消除胃腺癌细胞对内质网应激性凋亡的耐受

目的了解内质网应激诱导胃腺癌细胞凋亡情况及其作用途径,并探讨MEK/ERK信号途径在其中发挥的作用。方法流式细胞仪PI单染法检测细胞周期DNA含量分析凋亡率,DAPI染色后荧光显微镜观察药物处理后死亡细胞形态特征及各组死亡差别,免疫印迹法(Western blot)检测衣霉素以及U0126诱导前后p-ERK、caspase-3、PARP的表达变化。结果不同浓度衣霉素(TM)诱导胃腺癌细胞48h凋亡率最高仅为15.65%,TM诱导ERK活化形式p-ERK表达增加,而在U0126处理后下调。U0126与TM共同作用于胃腺癌细胞时,凋亡率显著升高至38.3%±2.78%。荧光显微镜可观察到细胞内典型的凋亡小体,凋亡细胞比TM单独作用明显增多。U0126作用后TM诱发胃腺癌细胞caspase-3、PARP剪切、活化。结论TM可诱导胃腺癌细胞发生内质网应激反应性凋亡并且激活MEK/ERK信号通路,但对其相对不敏感。通过阻断MEK/ERK信号途径后能杀死大量胃腺癌细胞,caspase-3、PARP的活化表明胃腺癌细胞的内质网应激性凋亡依赖于caspase途径。     

西地那非对主动脉弓缩窄诱导大鼠心肌肥大的保护作用

目的 探讨西地那非对大鼠心肌肥大疾病发展过程中的保护作用及其作用机制.方法 采用主动脉弓缩窄法(TAC)建立大鼠心肌肥大模型,假手术组(Sham)、模型组(TAC)、西地那非组(SIL)各取3、6、9周3个时间点,测定大鼠血流动力学参数后分离左心室,测定胫骨长度.大鼠左心室心肌组织经HE染色和天狼星红染色后,显微镜下观察大鼠心肌细胞肥大和纤维化程度.荧光实时定量PCR(Realtime PCR)检测各组大鼠的左心室心肌组织心钠肽(ANP)的mRNA表达水平.结果 与假手术组比较,模型组3、6、9周组大鼠的左心质量/胫骨长度、心肌细胞横截面积、心肌纤维化、ANP mRNA表达水平均显著升高(P＜0.05);与模型组相比,西地那非组这些指标均显著降低(P＜0.05);ANP mRNA表达具有时间依赖性,随着3、6、9周时间的增加表达水平逐渐降低.结论 西地那非在大鼠心肌肥大发生发展过程中具有保护作用,能增强心功能,抑制心肌纤维化,并且随着时间的延长发挥作用越明显,其作用机制可能与阻止胚胎基因ANP的再激活有关.     

培哚普利对异丙肾上腺素致大鼠心肌肥厚中H2S/CSE合成途径的影响

目的：研究在异丙肾上腺素(ISO)致大鼠心肌肥厚模型中,培哚普利对大鼠心肌组织硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶(H2 S/ CSE)合成途径的影响。方法40只大鼠随机均分为模型组、培哚普利+模型组、培哚普利对照组和空白对照组,采用皮下注射 ISO 制备心肌肥厚模型。检测大鼠心脏质量指数(HMI)和左心室质量指数(LVMI),心肌组织中 H2 S 含量及其生成酶活性,心肌组织中 CSE 蛋白表达情况。结果与空白对照组比较,模型组大鼠 HMI、LVMI 升高( P <0．01),心肌肥厚明显,H2 S 含量及其生成酶活性减少(P <0．01),CSE 表达下降(P <0．05),培哚普利对照组大鼠心肌H2 S 含量及其生成酶活性升高(P <0．01),CSE 表达增加(P<0．05)。与模型组比较,培哚普利+模型组大鼠 HMI、LV-MI 下降(P <0．01),心肌中 H2 S 含量及其生成酶活性升高(P <0．01),CSE 表达增加(P <0．05)。与培哚普利对照组比较,培哚普利+模型组大鼠 HMI、LVMI 升高(P <0．01),心肌中 H2 S 含量及其生成酶活性下降(P <0．01),CSE 表达下降(P <0．05)。结论培哚普利能够提高大鼠心肌中 H2 S含量及其生成酶活性,可能与其能够提高 CSE 表达,影响H2 S/ CSE 合成途径相关,其中在治疗 ISO 所致大鼠心肌肥厚模型中作用更加明显。     

比索洛尔对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞功能及MAPK/ERK1/2信号通路的影响

目的 探讨比索洛尔对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞功能及MAPK/ERK1/2信号通路的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、比索洛尔组,每组15只。采用超声心动图检测各组大鼠心功能相关指标;实验结束后,处死大鼠,并对大鼠心肌组织进行HE染色;采用Western blotting检测大鼠心肌组织中MAPK蛋白、p-MAPK蛋白、ERK1/2蛋白、p-ERK1/2蛋白的表达水平。结果 3组大鼠心脏功能各指标比较,差异有统计学意义（P?<0.01）。模型组大鼠的左心室舒张末期内径（LVEDD）、左心室收缩末期内径（LVESD）较对照组变大（P?<0.05）,舒张末期左心室后壁厚度（LVPWD）、收缩末期左心室后壁厚度（LVPWS）、左心室射血分数（LVEF）较对照组变薄或降低（P?<0.05）。比索洛尔组LVEDD、LVESD较模型组变小（P?<0.05）,LVPWD、LVPWS、LVEF较模型组增厚或升高（P?<0.05）。3组大鼠的慢性心力衰竭生化指标比较,差异有统计学意义（P?<0.05）。模型组NT-proBNP、Mb、cTnI、CK-MB水平较比索洛尔组和对照组升高（P?<0.05）,其余相关指标较比索洛尔组和对照组降低（P?<0.05）。3组大鼠心肌组织MAPK/ERK信号通路相关蛋白的表达水平比较,差异有统计学意义（P?<0.05）。模型组ERK1/2及p-MAPK蛋白的表达水平较对照组升高（P?<0.05）;比索洛尔组的ERK1/2和p-MAPK蛋白的表达水平较模型组降低（P?<0.05）。结论 比索洛尔能通过抑制MAPK/ERK1/2信号通路激活,发挥保护心力衰竭大鼠心肌细胞的作用。     

RGDS肽对离体大鼠血小板聚集和ERK1/2磷酸化的影响

目的观察外源性精-甘-天-丝冬氨酸(RGDS)肽对离体大鼠血小板聚集及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)磷酸化的影响,探讨RGDS肽对血小板聚集的作用与ERK1/2磷酸化表达改变的关系。方法用比浊法测定血小板最大聚集率;Western-blot测定血小板ERK1/2磷酸化表达。结果RGDS肽抑制血小板聚集后伴随ERK1/2磷酸化表达减少。结论ERK1/2通路参与血小板聚集;抑制ERK1/2磷酸化表达可能是外源性RGDS肽抗血栓的机制之一。     

大鼠压力超负荷心肌糖蛋白130表达及贝那普利干预研究

目的 研究糖蛋白130(GP130)在腹主动脉缩窄所致大鼠压力超负荷性心肌肥大模型中的表达变化与心肌肥大的关系,以及贝那普利(Benazepril,Ben)对GP130蛋白表达及心肌肥大的影响.方法 用腹主动脉缩窄术建立大鼠压力超负荷性心肌肥厚模型,随机分为左室肥厚组(LVH,n=7)、贝那普利干预组(n=7,贝那普利1 mg·kg-1·d-1,灌胃3周),另设一假手术组(n=7)为对照.干预3周后测定血流动力学指标、左心室质量指数,应用放射免疫分析法测定心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平,免疫组化法检测心肌中GP130 蛋白水平表达.结果与假手术组比较,左室肥厚组动物的血压与左心室质量指数显著升高(P＜0.05);心肌组织AngⅡ含量(P＜0.01)和GP130蛋白表达水平明显增加(P＜0.05).贝那普利干预可显著降低血压和左心室质量指数(P＜0.05),同时降低肥厚心肌组织AngⅡ浓度(P＜0.01)与GP130蛋白表达水平(P＜0.05).结论 GP130蛋白的过度表达参与了压力超负荷性大鼠心肌肥大的发病过程;贝那普利对GP130蛋白表达及心肌肥大有抑制作用.     

吡格列酮对高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞中CT-1的影响

目的：观察心肌营养素 1(CT 1)在高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞中的表达，以及吡格列酮对其表达的影响。方法：体外培养乳鼠心肌细胞，分组给药后，检测心肌细胞肥大的指标：心肌细胞的表面积(图像分析法)、蛋白含量(考马斯亮蓝法)、心房利钠因子(ANF) mRNA的表达(RT PCR法)；同时用半定量RT PCR检测CT 1 mRNA的表达。结果：高糖高胰岛素组心肌细胞表面积、蛋白含量、ANF mRNA表达以及CT 1 mRNA水平均升高(P<0.01)，而吡格列酮治疗组降低(P<0.05)。结论：高糖高胰岛素诱导的肥大心肌中CT 1表达上升，而吡格列酮能抑制其表达，推测CT 1可能参与了高糖高胰岛素所引起的心肌肥大的发生，而吡格列酮抑制心肌肥大的作用可能是通过抑制CT 1介导的。     

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号转导通路在胰蛋白酶激活中性粒细胞中的作用

目的:探讨胰蛋白酶对中性粒细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号转导通路的激活作用及PI3K抑制剂对其的影响。方法:应用Western blot技术检测特定浓度胰蛋白酶(40nmol/L)作用中性粒细胞后及应用PI3K抑制剂Wortmannin和LY294002后的p-PKB活化情况;同时应用ELISA及RT-PCR技术检测细胞培养液及中性粒细胞内TNF-α、IL-1β蛋白和mRNA的变化。结果:40nmol/L胰蛋白酶作用中性粒细胞后p-PKB的水平显著高于对照组(P<0.01);TNF-α和IL-1β蛋白的表达也出现了同样的趋势;预先应用Wortmannin或LY294002后完全阻断了胰蛋白酶对中性粒细胞p-PKB的激活作用,与胰蛋白酶刺激组比较差异显著(P<0.01);TNF-α和IL-1β蛋白及mRNA也随着p-PKB活性的抑制而表达减弱。结论:胰蛋白酶能够激活中性粒细胞内PI3K/PKB信号传导通路,Wortmannin及LY294002可以抑制胰蛋白酶对此通路的激活。