组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素对原发性肝癌细胞周期和凋亡的影响

目的 观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素(TSA)对原发性肝癌细胞周期和凋亡的影响.方法 采用Wester blot检测经TSA处理后肝癌细胞的乙酰化水平;运用流式细胞计数(FCM)分析TSA对肝癌细胞周期和凋亡的影响.结果 TSA处理BEL-7402细胞16 h后细胞乙酰化水平到达最高峰;用TSA处理BEL-7402细胞16 h后,肝癌细胞G0/G1细胞从43.39%升高到53.82%,统计学检验,其差异有统计学意义.S细胞从26.62%降到20.85%,G2/M细胞从27.86%降到22.07%,细胞凋亡由0.93%降到0.75%,差异无统计学意义(P>0.05).结论 TSA能够阻滞HCC细胞周期C1～S期进程,抑制细胞生长,而对HCC细胞凋亡无明显影响.     

曲古菌素A对肾癌细胞增殖及对去乙酰化酶1、金属蛋白酶9表达的影响

目的 观察曲古菌素A(TSA)对肾癌细胞7860增殖抑制作用及对组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)、基质金属蛋白酶9(MMP9)表达的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度(100、200、400、800nmol/L)、不同时间(12、24、36、48 h)TSA作用后7860细胞的抑制率.吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双重染色检测细胞凋亡.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测HDAC1、MMP9的表达.结果 不同浓度TSA作用24h后,细胞生长抑制率分别为32%、45%、58%、62%.TSA作用后部分细胞发生凋亡形态改变.HDAC1、MMP9基因在TSA作用后mRNA表达降低(P<0.01).与空白组、阴性组比较,HDAC1蛋白在TSA作用后表达分别下调18.6%～87.5%(P<0.01)、21.3%～91.4%(P<0.01),MMP9蛋白表达分别下调24.6%～95.7%(P<0.01)、20.8%～89.2%(P<0.01).结论 TSA可抑制肾癌细胞增殖,并可能通过下调HDAC1、MMP9的表达抑制细胞的增殖.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对人骨肉瘤细胞抑制增殖和诱导分化的研究

[目的]观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和分化的影响.[方法]不同浓度的TSA作用MG-63细胞,采用噻唑蓝(MTT)法、倒置相差显微镜观察药物对细胞生长的影响并绘制细胞生长曲线;软琼脂集落形成实验观察细胞生长和侵袭能力的变化;流式细胞仪测定细胞周期变化.[结果]TSA可明显抑制MG-63细胞增殖,并呈现剂量和时间的依赖性;细胞形态呈明显的良性分化;瘤细胞的软琼脂集落形成率明显降低;TSA能够延缓细胞周期G1-S进程,阻滞细胞于G1期,停留在G2/M期.[结论]TSA对MG-63细胞有明显的抑制增殖和诱导分化作用.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对胆囊癌细胞系和肝外胆管癌细胞系HDAC1表达的影响

目的 观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂-曲古抑菌素(TSA)在体外和体内对胆囊癌细胞和肝外胆管癌细胞HDAC1表达的影响.方法 用TSA作用于胆囊癌细胞系(Mz-ChA-1)和肝外胆管癌细胞系(QBC939、KMBC、OZ),然后用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HDAC1之mR-NA的表达变化,用Western blot检测其蛋白的表达变化.将这些细胞接种在裸鼠皮下建立胆囊癌和肝外胆管癌裸鼠种植瘤模型,用免疫组织化学方法 观察TSA在体内对裸鼠种植瘤组织中HDAC1蛋白表达的影响.结果 TSA可以减弱胆囊癌细胞系(Mz-ChA-1)和肝外胆管癌细胞系(QBC939、KMBC、OZ)HDAC1 mRNA和蛋白的表达;TSA作用前后的胆囊癌细胞系(Mz-ChA-1)和肝外胆管癌细胞系(KMBC)裸鼠成瘤组织中的各种蛋白的表达均无变化.结论 TSA在体外可以抑制胆囊癌和肝外胆管癌HDAC1的表达;TSA抑制HDAC1表达的作用可能受到体内环境的影响而消失.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A对肝癌细胞蛋白质差异表达谱的影响

目的 观察组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂-曲古抑菌素A(TSA)对肝癌细胞(BEL-7402)蛋白质表达谱的影响.方法 采用150 g/LTSA处理BEL-7402细胞16hr为试验组,未处理的细胞为对照组,分别抽提其总蛋白质,蛋白定量恒定为200 mg.经第一向固相pH梯度等电聚焦电泳和第二向垂直平板SDS-PAGE,凝胶银染后获得二维凝胶图并扫描输入计算机进行软件分析.将三次重复实验所获得的二维凝胶图进行统计学分析.将差异表达的蛋白质斑点从银染后的二维凝胶中切下,进行质谱分析.结果 实验组BEL-7402细胞90%～95%的蛋白质表达与对照组一致,5%～10%的蛋白质为差异表达;通过质谱对差异点的鉴定,获得了16个差异表达蛋白质,包括:Triosephosphate isomerase、47-KDa heat shock protein、TRAF1,5(up)、annexin A1、Heat shock70 protein、prohibitin、thioredoxin peroxidase、DP-1等分子,这些蛋白质涉及基因表达调控、信号转导、细胞代谢、抑制细胞增殖等众多分子事件.结论 TSA能够通过影响蛋白质的差异表达影响BEL-7402肝癌细胞的生长和增殖.     

表观遗传调控联合内分泌治疗降低女性肺腺癌细胞株NCI-H1975的增殖能力

目的 观察通过表观遗传调控手段联合内分泌治疗对于女性肺腺癌细胞株NCI-H1975增殖能力的影响.方法 采用组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)联合DNA甲基转移酶(DNMT1)抑制剂5-杂氮-2'-脱氧胞嘧啶(5-AZA-CdR,AZA)作用于雌激素受体α(Erα)阴性的NCI-H1975.以聚合酶链反应(PCR)法检测细胞Erα及其下游的产物的mRNA水平改变.结果 经过药物诱导后NCI-H1975 出现Erα下游基因产物PR表达上调.4-羟基三苯氧胺(4-OHT)能抑制经过诱导处理的NCI-H1975细胞株的增殖.以AZA 2.5μmol/L、TSA 100μg/L浓度能诱导NCI-H1975使之PR表达上调程度最强(P＜0.01).同时在该浓度下诱导后,经4-OHT抑制后增殖能力下降(P＜0.01).结论 HDAC抑制剂以及DNMT1抑制剂联合内分泌治疗对于NCI-H1975具有抑制增殖的能力.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂及其衍生的多靶点抑制剂在胃肠道肿瘤中的研究进展

胃癌的新发病例排在恶性肿瘤的第5位,而结直肠癌是世界第三大常见的恶性肿瘤和第四大癌症死亡原因。组蛋白乙酰化的动态平衡由组蛋白乙酰转移酶（HAT）和组蛋白去乙酰化酶（HDAC）两个酶家族共同维持。HDAC能将赖氨酸上的乙酰基去除,从而抑制基因转录,但HDAC异常高表达可诱导正常细胞发生癌变,并参与其发展、增殖、侵袭和转移。靶向抑制HDAC已被证实具有抗肿瘤的效应,组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACi）能抑制HDAC的表达及活性,并通过影响细胞活性氧水平、阻滞细胞周期、促进损伤DNA修复、抗血管新生、影响细胞信号通路、诱导自噬凋亡及增加细胞对放化疗药物的敏感性发挥强效的抗瘤作用,在胃癌及结直肠癌中HDAC则表达增高,HDACi在胃肠道肿瘤的研究中也呈现出良好的成效,由于I、II和IV类HDAC的催化核心发挥功能均依赖于Zn2+,故多数HDACi均含有Zn2+鳌合基团,异羟肟酸类抑制剂中的SAHA、TSA小剂量单独给药时已具有良好的抗肿瘤的成效,但后期临床研究发现,SAHA由于活性低,在治疗胃癌及结直肠癌的临床试验疗效并不佳,TSA的活性有所提高,但对HDAC选择性仍低,苯甲酰胺类HDACi在选择性上得以改善,但也无法只针对于特定亚型的HDAC,后期的环肽类及新报道的HDACi在HDAC的选择性上逐渐增加,但也仅限在动物及细胞实验阶段,并且上述的HDACi除与Zn2+结合之外还能与其他金属酶结合,从而缺乏绝对的特异性,故大多数的HDACi在很小的剂量下就已引发了副作用,由于肿瘤的发生、发展涉及多环节、多因素,单一靶标常常不能有效杀灭癌细胞,并易产生耐药性,联合多靶标比单一靶标具有更强的抑癌效用,甚至能减轻药物耐药性的产生,但有时联合用药时会因药物间相互影响而带来不良反应,为了避免药物间相互影响,研究者基于药效基团拼接理念,将HDACi活性基团与其他不同作用靶点药物的活性基团进行合理拼接设计合成新的具有多靶点抑制剂,研究证实,多靶点抑制剂既能避免药物间的相互作用,还能提高药物作用,现依次介绍HDACi及HDACi相关的多重抑制剂在胃肠道肿瘤的研究进展。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂与肾脏疾病

组蛋白去乙酰化是组蛋白表观遗传学修饰的重要的方式之一。组蛋白去乙酰化酶(HDACs)作为调控基因的关键蛋白,其功能异常早已被证实与肿瘤、神经退行性病变、肾脏病等发生和发展关系密切,进而推动HDAC抑制剂(HDACi)的研发及临床应用。本文综述HDACs在肾脏病发生发展中的作用及HDACi在肾脏病治疗中的应用前景。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228对前列腺癌LNCaP细胞抑制效应的细胞信号通路研究

目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228对前列腺癌LNCaP细胞抑制作用的细胞信号机制.方法 Western blot分析细胞蛋白乙酰化水平、细胞信号通路蛋白及细胞周期相关蛋白的表达.结果 FK228能够使细胞内蛋白乙酰化水平增高,乙酰化组蛋白H3积累,多种细胞信号通路的相关蛋白如雄激素受体、HER-2、Raf-1、Akt、CDK4等呈时间依赖性和剂量依赖性被清除.结论 FK228能够同时阻断对细胞生长具有重要作用的多条细胞信号通路,从而对前列腺癌LNCaP细胞发挥抑制作用.     

组蛋白去乙酰化抑制剂在前列腺癌临床治疗中的研究进展

组蛋白乙酰化和去乙酰化程度的失衡,可影响基因转录的正常进行,引起前列腺癌中抑癌基因的失活与原癌基因的激活,从而促进前列腺癌的发生.针对此现象,研究人员发现许多去乙酰化抑制剂可通过抑制组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性而促进前列腺癌细胞的生长阻滞、分化及凋亡等,达到治疗目的,本文主要总结和回顾组蛋白乙酰化抑制剂在前列腺癌临...     

转染TSLC1基因肝癌细胞株BEL-7402生物学特性的研究

目的 将人TSLCl基因转染人肝癌细胞BEL-7402中稳定表达,检测转染后细胞生物学特性的变化.方法 用脂质体法将TSLCl基因的真核质粒表达载体pcDNA3.1(+)/TSLCl导人人肝癌细胞株BEL-7402中,G418筛选克隆,再以逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)、Western blot的方法检测TSLCI的表达,细胞计数、流式细胞术及裸鼠负荷瘤实验分析转染后细胞的生物学特性变化.结果 TSLCl在BEL-7402细胞中的表达可抑制BEL-7402细胞的生长,BEL-7402-TSLCI与BEL-7402比较s期及G2/M期的细胞减少,G0/G1期的细胞增加.转染后的BEL-7402-TSLCl细胞的凋亡明显增加,转染后荷瘤裸小鼠肿瘤的生长受到抑制.结论 TSLCl基因的转染可以抑制BEL-7402细胞的增殖、诱导肝癌细胞的凋亡,为肝癌的基因治疗提供理论依据.     

奥曲肽与胰岛素对人肝癌细胞影响的实验研究

目的：探讨在体外胰岛素能否促进人肝癌细胞增殖,奥曲肽对其诱导的增殖活动有无抑制作用。方法：将奥曲肽与胰岛素直接作用于体外培养的人原发性肝癌细胞株,运用MTT、直接细胞计数及流仪测定等方法观察奥曲肽与胰岛素对肝癌细胞的活细菌数及其比值,细胞总数、细胞周期及增殖指数（PI）的影响。结果：胰岛素（0－5μg/ml)使人肝癌细胞株BEL0－7402的细胞总数、活细胞数及其比值增加;而奥曲肽（0－2μg/ml）则使细胞基础的及胰岛素刺激的细胞总数、活细胞数及其比值下降,5μg/ml的胰岛素增加细胞的PI值而1μg/ml的奥曲肽降低其PI值（P＜0．05）,并产生S期限滞作用。结论：在体外,胰岛素可诱导人肝癌细胞增殖,奥曲肽不仅直接抑制肝癌细胞的增,对胰岛素诱导的肝癌细胞增殖也有抑制作用。     

羟基磷灰石纳米粒子对人肝癌和结肠癌细胞生长的抑制作用

目的研究羟基磷灰石纳米粒子（nano-HAP）对人肝癌BEL-7402细胞和结肠癌SW-480细胞生长及凋亡的影响。方法用羟基磷灰石纳米粒子以不同终浓度作用于这二株细胞。用噻唑蓝（MTT）比色法观察其对两株细胞的生长抑制，荧光显微镜、透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术（FCM）等方法从细胞凋亡的角度探讨其作用机制。结果羟基磷灰石纳米粒子对BEL07402和SW-480细胞的半数有效抑制浓度（IC50）值分别为29．28mg／L和36．66mg／L。50～100mg／L的纳米粒子处理48h后，癌细胞即可表现出细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等凋亡特征性形态改变。作用48h后，琼脂糖凝胶电泳观察到DNA“梯带”。流式细胞仪定量分析显示人肝癌、结肠癌细胞经0、50、100、200mg／L作用48h后的细胞凋亡率分别为2．23％、20．35％、29．34％、53．64％和3．57％、21．45％、37．10％、49．45％。结论羟基磷灰石纳米粒子对人肝癌BEL07402和结肠癌SW-480细胞有明显的生长抑制作用，诱导癌细胞凋亡可能是其主要作用机制．     

上调miR-449a表达对肝癌细胞生长和侵袭能力的影响

目的:探讨miR-449a在肝癌(HCC)细胞中的表达及其对HCC细胞生物学行为的影响。方法:用qRT-PCR检测miR-449a在正常肝细胞L02和4种HCC细胞株(HepG2、Hep3B、SMMC-7721和Bel-7402)的表达。用脂质体法将miR-449a模拟物或阴性对照序列转染HCC细胞后,分别用CCK-8法、流式细胞术、Transwell小室实验检测细胞增殖、细胞周期、侵袭能力的变化,并观察以上两种不同转染的HCC细胞在裸鼠体内的成瘤情况。结果:miR-449a在4种HCC细胞株的表达水平均明显低于L02细胞(均P0.05),其中在Bel-7402细胞表达的水平最低。与转染阴性对照序列的Bel-7402细胞比较,转染miR-449a模拟物的Bel-7402细胞增殖活性明显降低、G_1/S期阻滞明显增加、穿室细胞数明显减少(均P0.05);与转染阴性对照序列的Bel-7402细胞比较,转染miR-449a模拟物的Bel-7402细胞在裸鼠体内成瘤后的移植瘤质量与体积均明显减小(0.748 g vs.1.234 g;33.667 mm~3 vs.1 400.500 mm~3,均P0.05)。结论:HCC细胞中miR-449a表达降低,上调miR-449a表达可以抑制HCC细胞在体内外的生长。     

拓扑替康对人肝癌BEL-7402细胞体外迁移、黏附的影响

目的 研究拓扑替康（topotecan,TPT）对人肝癌BEL-7402细胞体外迁移、黏附的影响.方法 体外培养人肝癌BEL-7402细胞,分为实验组和空白组,实验组分为三个亚组,分别用0.1、0.2、0.3 mmol/L的TPT进行干预,空白组给予不合TPT的培养液.采用划痕实验和Transwell小室迁移实验检测TPT对BEL-7402细胞体外迁移能力的影响,采用黏附实验检测TPT对BEL-7402细胞黏附和异质黏附能力的影响.结果 0.2、0.3 mmol/L TPT组中BEL-7402细胞的体外迁移能力受到抑制,同质黏附能力增强,而异质黏附能力减弱,差异具有统计学意义（P均＜ 0.05）.结论 拓扑替康可抑制肝癌BEL-7402细胞的迁移和异质黏附能力,增强肝癌细胞的同质黏附能力.     

TGF—β1抑制肝癌细胞株BEL—7402的增殖

目的 研究转化生长因子－β１对体外培养肝癌细胞株ＢＥＬ－７４０２增殖的影响。方法 用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入方法检测ＴＧＦ－β１对肝癌细胞株ＢＥＬ－７４０２增殖的抑制率;用逆转录整合酶链方法检测转化生长因子－β１及其Ⅱ型受体在ＢＥＬ－７４０２中的基因表达。     

靶向Plk1基因的shRNA对肝癌BEL-7402细胞株生物学行为及化疗增敏的影响

目的 利用RNA干扰技术(RNAi),研究表达Polo-like kinase 1 (Plk1)的短发夹RNA (shRNA)载体对肝癌细胞株BEL-7402生物学行为及对化疗药物长春新碱敏感性的影响. 方法 根据靶基因的不同区域构建针对Plk1mRNA的两组干扰质粒shRNA-Plk1:Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396以及阴性对照质粒Plk1siRNA-hk,利用电穿孔法转染入肝癌细胞株BEL-7402,用长春新碱处理细胞后,用MTT法检测四组细胞的生长抑制率,计算IC50值,流式细胞仪检测各组细胞凋亡. 结果 半定量RT-PCR检测Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396组Plk1mRNA、Cdc25CmRNA表达较Plk1siRNA-hk转染组与空白对照组明显下降(P＜0.01),p53mRNA表达增加.长春新碱处理后,Plk1siRNA-251组和Plk1siRNA-1396组与BEL7402组之间的生长抑制率有显著性差异(P＜0.01).5 μg/ml浓度长春新碱作用24h后,Plk1siRNA-251组和Plk1siRNA-1396组凋亡指数分别为19.09％ ±3.97％、19.80％ ±5.47％明显高于Plk1siRNA-hk组和BEL7402组(P＜0.01).结论 成功筛选出两条能特异而高效抑制Plk1基因表达的shRNA,可以显著抑制Plk1 mRNA、Cdc25CmRNA及Plkl蛋白的表达,并使p53mRNA表达增高,并明显抑制细胞增殖,能增加长春新碱的化疗敏感性,从而为进一步研究该基因的功能和作用机制提供了新的手段.     

KDR启动子驱动的CD/TK双自杀基因联合survivin基因干扰抑制肝癌细胞生长的体内研究

目的：探讨腺病毒介导的KDR启动子驱动的CD/TK双自杀基因系统（Ad-KDRP-CD/TK）联合survivin基因干扰对肝癌细胞在裸鼠体内生长的抑制作用。
　　方法：将20只裸鼠随机分均为模型组（皮下植入BEL-7402肝癌细胞成瘤,不加任何处理）、双自杀基因转染组（皮下植入转染Ad-KDRP-CD/TK的BEL-7402细胞,成瘤后瘤内注射前药更昔洛韦与5-氟胞嘧啶）、survivinsiRNA转染组（皮下注射BEL-7402肝癌细胞,成瘤后瘤内注射survivinsiRNA/Lip-DMEM转染混合物）、联合转染组（双自杀基因转染+survivinsiRNA转染处理）。治疗2周后处死各组小鼠,称取肿瘤质量,计算肿瘤抑制率,检测瘤组织微血管密度（MVD）及survivinmRNA与蛋白表达。结果：各治疗组的肿瘤质量明显小于模型组（均P<0.05）,且联合转染组的抑瘤率最大（均P<0.05）;肿瘤组织MVD、survivinmRNA与蛋白水平均明显降低,且联合转染组的降低程度最为明显（均P<0.05）。
　　结论：双自杀基因联合survivin干扰是抑制鼠肝癌细胞在体内生长的有效途径。     

生长抑素通过调节生长抑素受体和Cmet表达抑制肝癌生长

目的 观察生长抑素(SST)对Bel7402肝癌细胞株增殖侵袭黏附能力和对裸鼠种植瘤生长的影响，并对SST抑瘤机制进行一定的探索。方法 以噻唑蓝(MTT)法测量SST、对Be17402细胞增殖的影响，光镜下观察细胞形态的变化。以细胞迁移实验和黏附实验观察细胞侵袭和黏附能力的影响。以流式细胞仪检测细胞表面肝细胞生长因子受体Cmet和生长抑素受体2(SSTR2)的表达和细胞周期的影响。以裸鼠人肝癌转移模型为材料，观察SST对种植瘤生长的影响。以免疫组织化学观察SSTR2和Cmet的表达影响。结果SST处理的7402细胞增殖能力和细胞形态无明显改变，细胞的侵袭和黏附能力明显下降，细胞生长静止期(G0／G1)的比例显著增加，但未见凋亡峰，细胞表面Cmet的表达明显受抑，但SSTR2的表达增加，裸鼠人肝癌种植瘤在SST治疗后生长受到明显抑制，免疫组织化学也可见种植瘤内SS TR2表达增加，而Cmet的表达明显受抑制。结论 SST通过与SSTR起作用抑制肝癌的生长。减少Cmet的表达是SST起作用的重要方式。此外，长期的SST治疗可以上调SSTR2的表达，加大SST抑制肝癌的效果，但短期的处理反而诱导SSTR2的脱敏和抑瘤效果下降。