大鼠血清ApoA-I、LDL的分离和纯化

用沉淀法分离大鼠血清高密度脂蛋白(HDL),SephadexG—200层析纯化;将脱脂的HDL(ApoHDL)通过SephadexG—200柱层析得到单一的载脂蛋白A-I(ApoA-1)。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)测定该ApoA-Ⅰ的表观分子量为27000道尔顿,其免疫学特征及化学组成分析结果与文献报道一致。同时用超速离心法分离制备出纯化的大鼠血清低密度脂蛋白(LDL)。     

琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测肠道菌群基因扩增产物的方法学比较研究

琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis, AGE))和聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法.琼脂糖凝胶电泳的有效分离范围是0.1～2kb,聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5～500 bp)效果最好,分辨力极高,测序的聚丙烯酰胺凝胶可分离相差lbp的DNA片段.     

蝮蛇毒蛋白C激活物的纯化与抗血小板活性

目的　研究蝮蛇毒蛋白C激活物 (PCA)组分对兔血小板聚集性的影响。方法　借助DEAE Cellulose、SP SephadexC 5 0及SP SephadexG 75柱层析 ,以离子交换和凝胶过滤法从江浙蝮蛇 (AHV)粗毒中分离纯化PCA抗凝组分 ;SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)检测其纯度和分子量。比浊法测定血小板聚集率。结果　从AHV分离纯化的PCA抗凝组分经SDS PAGE电泳测定为单一区带 ,相对分子质量为 14 0 0 0左右 ,等电点 pH 4 .7;该PCA在体外对由诱聚剂ADP诱导的血小板聚集呈剂量依赖性的抑制作用 ,其IC50 为 12 5 μg/ml。PCA(1.0mg/kg) 体内给药可逆性抑制血小板聚集反应。结论　从蝮蛇毒中纯化的这种PCA抗凝组分可通过抑制血小板聚集而影响血凝过程。     

酶免疫转移印渍试验(EITB)分析斯氏狸殖吸虫成虫抗原

本文应用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离斯氏狸殖吸虫成虫抗原,并通过转移电泳至硝酸纤维薄膜(NC)上,然后用酶联免疫试验观察成虫抗原蛋白与感染斯氏狸殖吸虫的病人、犬及大鼠血清的反应,检测和识别特异性虫体抗原蛋白。实验结果呈示;虫体抗原经SDS-PAGE分离、染色后可显示20余条蛋白区带;分子量分别为22、24、26KD的抗原蛋白对人体和动物的斯氏狸殖吸虫感染具有诊断价值。     

亲和层析法纯化溶栓素

目的 :探讨亲和层析纯化溶栓素的方法。方法 :采用高碘酸钠法制备溶栓素抗体的亲和层析介质纯化溶栓素。结果 :提纯的溶栓素经聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( PAGE)鉴定为一条带 ,活性回收率为 49.5 %。结论 :亲和层析的高碘酸钠法是纯化溶栓素的一种分离速度快、特异性强、经济、安全可靠的方法 ,并适合于大规模纯化     

非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析切割海马伞大鼠海马组织蛋白

目的 :应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统研究切割海马伞后大鼠海马组织蛋白的生化改变 ,为分离、纯化海马中诱导神经干细胞迁移和向神经元分化的信号物质奠定基础。方法 :取SD大鼠 ,行单侧切割海马伞术 ,于术后不同时期取切割侧海马和正常侧海马组织。进行 10 %的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。观察切割海马伞海马和正常海马的蛋白表达差异。结果 :两者在低分子量区存在一条差异性蛋白条带。其中正常海马组织的条带染色最浅 ,切割海马伞海马组织中 10天组和 2 0天组染色较深 ,14天组染色最深。结论 :结合我们过去实验 ,本研究中切割海马伞海马及正常海马组织蛋白出现的差异性条带中 ,可能存在着诱导神经干细胞迁移和向神经元分化的信号物质     

连续酸－尿素－聚丙烯酰胺凝胶电泳制备人和兔中性粒细胞防御素各组分

目的 :建立和应用连续酸 -尿素 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (CAU- PAGE)纯化人和兔中性粒细胞防御素组分(HNP- 1～ 3和 RNP- 1～ 5 )。　方法 :从人外周血或兔人工无菌性腹水中分离中性粒细胞 ,用 5 %冰醋酸直接提取 ,经 CAU- PA GE洗脱 ,获取纯化的 HNP- 1～ 3或 RNP- 1～ 5组分。以聚丙烯酰胺凝胶过滤作为参比方法。　结果 :1次洗脱电泳可从 5× 10 8个细胞中获得纯化的 HNP组分约 1.5 0 mg或 RNP组分 2 .5 0 mg,并保持天然的生物活性。　结论 :CAU- PAGE是一种较简便、快速、经济的分离纯化防御素组分的方法     

Isolation and purification of guinea pig inner ear antigens by preparative polyacrylamide gel electrophoresis

目的　分离与纯化豚鼠内耳抗原 ,为寻找内耳特异性抗原打下基础。方法　采用冻融法提取豚鼠内耳抗原 ,制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与纯化内耳抗原的亚组份 ,快速染色和脱色定位蛋白区带 ,将主要蛋白区带切下匀浆回收 ,并与分析性聚丙烯酰胺凝胶电泳比较。结果　豚鼠内耳抗原的加样量为 3mg时 ,各亚组份仍能有效分离 ,三种主要亚组份 (31、4 2 - 4 5和 60kD)的相对含量分别为 2 5 99%、2 1 91%和 2 1 1%。结论　制备性PAGE可以用于纯化内耳抗原的主要亚组份。     

小鼠SRS腹水瘤病毒逆转录酶的纯化

本文采用PolyG-DEAE纤维素柱亲和层析法纯化小鼠SRS腹水瘤病毒逆转录酶(SRSV-RTase)。经测定,该酶的分子量为70,000,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定为一条带,用不同模板引物比较酶的活性,表明酶对PolyA-OligodT活性大于PolydA-OligodT。     

大鼠各组织器官蛋白质图谱分析

目的　研究大鼠各组织器官的蛋白质图谱。方法　用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)技术分析大鼠 17种组织器官的蛋白质表达。结果　获得大鼠不同组织器官蛋白质图谱 ,其中肝脏中蛋白质种类最多。结论　各组织器官蛋白质含量与种类存在差异 ,但与相应的组织器官具有和执行的功能呈一定的相关性。     

cAMP—依赖性蛋白激酶的提纯及活性测定

用ＤＥＡＥ－纤维素层析和羟基磷灰石层析方法,从牛心中提取了ｃＡＭＰ－依赖性蛋白激酶。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定分子量为３８ｋＤａ,并测定了其活性,为ｃＡＭＰ代谢途径的研究打下了基础。     

RUNX3全长和不同结构域原核表达载体的构建及其重组蛋白表达

目的：构建RUNX3全长和不同结构域的原核表达载体并表达其重组蛋白。方法：以pcDNA3.1-myc-RUNX3为模板,采用PCR法扩增RUNX3全长和各个结构域片段,通过EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点将RUNX3全长和不同结构域定向插入谷胱甘肽转移酶（GST）融合表达载体pGEX-4T-2中,在大肠杆菌(E.coli) BL21中诱导其融合蛋白表达,SDS-PAGE电泳检测其蛋白表达情况。结果：EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后得到与预期大小相符的FL（1 245 bp）、ΔRunt(843
 bp)、Nter（159 bp）、Runt（402 bp）和Cter（684 bp）5个载体片段。SDS-PAGE电泳检测,RUNX3全长及各个结构域截短GST-RUNX3截短融合蛋白（GST-FL、GST-Runt、GST-Nter和GST-Cter）相对分子质量分别为72 000、40 000、32 000和51 000。 结论：成功构建RUNX3全长和各个结构域截短的GST标签的原核表达载体,并实现其重组蛋白在原核细胞中的表达。
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Livin蛋白和Bcl-2蛋白在结直肠癌中的表达

目的探讨Livin蛋白和Bcl-2蛋白在结直肠癌中的表达及二者的相关性。方法采用免疫组织化学法检测60例结直肠癌组织、15例腺瘤性息肉和15例癌旁正常组织中Livin和Bcl-2蛋白的表达情况。结果 Livin蛋白在肠癌组织中的表达明显高于腺瘤性息肉及癌旁正常组织中的表达,Bcl-2蛋白在肠癌组织中和腺瘤性息肉中高于癌旁正常组织中的表达,但在肠癌组织中和腺瘤性息肉中表达无统计学意义。Livin蛋白表达与肿瘤分期有关,Bcl-2蛋白表达与肿瘤分化程度有关,在结直肠癌中,Livin蛋白表达与Bcl-2蛋白无相关性。结论 Livin蛋白、Bcl-2蛋白在结直肠癌组织中表达上调,参与结直肠癌发生发展。     

PTEN、Survivin蛋白在卵巢子宫内膜异位囊肿表达的相关性及临床意义

目的:探讨卵巢子宫内膜异位囊肿及正常子宫内膜组织中抑癌基因PTEN蛋白和凋亡抑制基因Survivin蛋白表达及其意义。方法:利用免疫组织化学二步抗法检测妇科手术切除的卵巢子宫内膜异位囊肿20例和正常子宫内膜20例中PTEN蛋白、Survivin蛋白的表达。结果:PTEN、Survivin蛋白在卵巢子宫内膜异位囊肿中的表达无明显周期性(P>0.05)。卵巢子宫内膜异位症中PTEN蛋白和Survivin蛋白的表达分别与正常子宫内膜表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);PTEN蛋白、Survivin蛋白表达在卵巢子宫内膜异位症无明显相关性(P>0.05)。结论:PTEN蛋白;Survivin可能促进了子宫内膜异位症的发生、发展,两者可能独立发挥作用。     

C反应蛋白和高敏C反应蛋白在新生儿败血症早期的改变及其临床意义

目的探讨C反应蛋白（CRP）和高敏C反应蛋白（hsCRP）在新生儿败血症早期的改变及临床意义。方法对本院在2009年8月至2011年1月收治的96例新生儿败血症患者（败血症组）以及其他疾病的93例新生儿患者（对照组）进行血清CRP和hsCRP的浓度测定,观察比较两组患者的CRP和hsCRP阳性率变化。结果败血症组和对照组之间的CRP阳性率分别为94.79%和8.60%,二者之间差异有统计学意义;败血症组和对照组之间的hsCRP阳性率分别为97.92%和5.38%,二者之间差异有统计学意义。结论 CRP和hsCRP在新生儿败血症早期有显著的改变并有助于新生儿败血症的临床早期诊断。     

镉对培养心肌细胞~3H-亮氨酸掺入和细胞生长的作用

目的 本实验探讨了镉对培养心肌细胞～3H—亮氨酸掺入及细胞生长的作用.方法 实验用检测培养乳鼠心肌细胞体积和掺入同位素标记氨基酸量的方法,测定细胞的蛋白质合成和生长情况.结果 实验见到培养心肌细胞在1×10(-4)mmol/LCdCl_2的作用下,24h以后的～3H亮氨酸掺入量明显低于对照组,且虽时间延长～3H—亮氨酸掺入量逐渐减少;镉染毒12、24、48h,均未见到细胞数量的改变;在染毒48h后,细胞体积较对照组减小,由对照组的2053±189μm~3降低到染毒组的1847±176μm~3.结论 镉可抑制培养心肌细胞蛋白质合成和细胞个体的生长.     

大肠杆菌表达的重组人骨形成蛋白—3C端肽的纯化

目的：在用大肠杆菌表达人骨形成蛋白－３羧基端肽段获得成功的基础上，进一步探讨ｒｈＢＭＰ－３Ｃ的纯化方法。     

重组人骨形成蛋白-7成熟肽的表达、纯化及活性的研究

目的:研究重组人骨形成蛋白-7(rhBMP-7m)羧基端140个氨基酸成熟肽的大肠杆菌表达、纯化及活性,为其实际应用打下基础.方法:将编码此成熟肽的cDNA亚克隆入含PL启动子的表达质粒pDH2中,构建表达质粒pDH2-B7m,转化大肠杆菌DH5α,温度诱导表达;通过包涵体洗涤、离子交换层析纯化目的蛋白;用Western blot验证透析复性后表达蛋白的抗原性,用含荧光素酶报告基因专门用于检测BMP活性的细胞株C2C12-K4检测其活性.结果:成功构建了PL启动子控制的原核表达载体pDH2-B7m;42℃诱导5 h后表达量达到最高水平,约占菌体总蛋白40.3%,表达产物以包涵体形式存在.包涵体经洗涤、离子交换层析纯化,目的蛋白纯度至少在96.0%以上.Western blot实验证实其抗原性,细胞株C2C12-K4反应的检测表明透析复性后的rhBMP-7m有较强的活性.结论:成功地在E.coli中表达了hBMP-7m重组蛋白并证明其有较强的生物活性.     

TTV蛋白抗原在大肠杆菌中的表达

目的 :用原核系统表达TTV的重组蛋白抗原 ,建立诊断TTV感染的特异性方法。方法 :采用PCR方法扩增TTVORF2 基因 ,将之插入到测序质粒载体中进行测序 ,验证序列正确后再嵌入到原核表达载体pQE30 ,并转化大肠杆菌M15菌株 ,进行诱导表达。用SDS PAGE分析表达产物。表达产物经Ni NTA柱层析纯化后 ,得到纯度为90 %的ORF蛋白抗原。用TTV感染者的阳性血清对该蛋白进行了Western BlotBlotting分析。结果 :经IPTG诱导后 ,筛选出 2株高表达株。结论 :该蛋白具有良好的抗原活性     

孕期尿微量蛋白检测与高血压疾病发生的相关因素探讨

【目的】对311例孕妇从孕中期开始进行尿微量蛋白成分测定并予以追踪,探讨与高血压疾病发生的相关性。【方法】随机抽取初次中期孕检孕妇311例,常规尿检后行蛋白电泳检测并予以追踪至分娩,根据追踪过程中有无血压升高发生分为2组,即高血压组与非高血压组,2组孕妇的年龄、产次、孕周无限定。【结果】(1)发生高血压的孕妇平均年龄低于非高血压孕妇,体块指数、追踪次数及孕周明显高于非高血压孕妇,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)孕期高血压97.10%发生在孕晚期(28周后);(3)非高血压孕妇蛋白尿主要以1+为主,占67.24%,高血压组孕妇蛋白尿以2+为主,占46.84%,两者比较有统计学差异(P<0.01);(4)非高血压孕妇尿蛋白电泳条带数主要以2、3条带为主,分别占到41.38%和29.31%,而高血压组孕妇主要以3、4和≥5条带为主,分别占32.91%、24.15%和32.91%,两者比较有统计学差异(P<0.01)。(5)高血压孕妇尿中γ蛋白成分明显增高(P<0.05)。【结论】(1)孕期高血压的发生与年龄、体重指数及孕周具有关联性。(2)孕期尿中蛋白含量和成分增加,高血压疾病的发生几率增高。(3)孕期对孕妇行尿微量蛋白成分监测是早期发现妊娠高血压疾病发生的有效方法。(4)当孕期尿中出现γ蛋白成分时,妊娠高血压疾病发生率极高。