缺氧诱导肝癌细胞释放高迁移率族蛋白B1及其机制

目的 探讨缺氧对肝癌细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放的诱导作用及其机制.方法 采用正常肝细胞株QSG-7701和肝癌细胞株SMMC-7721,观察缺氧(1％O2)培养3～24h后对HMGB1胞外释放、HMGB1基因表达和HMGB1胞内分布的影响,使用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路抑制剂探讨缺氧诱导HMGB1释放的机制.观察28例肝细胞癌患者血清HMGB1水平的改变.结果 肝细胞癌患者血清HMGB1水平[(19.3±7.2) μg/L]明显高于健康对照者[(4.1±1.6) μg/L,P＜0.01].QSG-7701和SMMC-7721细胞经缺氧培养后,3h即见培养上清液中HMGB1含量明显升高,HMGB1 mRNA表达于6h后显示增强,且SMMC-7721株改变更为显著.SMMC-7721细胞经缺氧培养12 h后,核浆HMGB1分布发生明显改变,胞质HMGB1蛋白表达量升高.SB203580、SP600125和PD98059对缺氧诱导HMGB1释放均显示不同程度的抑制作用.结论 缺氧能诱导肝癌细胞表达、释放HMGB1,其诱导HMGB1释放机制与MAPK信号通路有关.     

肝癌细胞中miR-376c的表达及其与高迁移率族蛋白A2的关系

目的:探讨肝细胞癌(HCC)中miR-376c的表达情况、临床意义及作用机制。方法:用real-time PCR检测miR-376c在HCC组织与癌旁组织、以及不同HCC细胞系与正常肝细胞中的表达,分析miR-376c的表达与HCC患者临床病理特征及预后的关系;将HCC细胞分别转染miR-376c模拟物和阴性对照组序列后,用Transwell法和划痕实验检测细胞的迁移及侵袭,Western blot检测miR-376c可能的靶点高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的表达;用免疫组化检测HCC组织中HMGA2的表达,并分析miR-376c与HMGA2之间的相关性。结果:与癌旁组织或正常肝细胞比较,miR-376c在HCC组织及不同HCC细胞中的表达均明显下调(均P0.05),miR-376c的低表达与门静脉侵犯(P=0.019)、TNM分期(P=0.012)及Edmondson分级(P=0.009)有关;miR-376c低表达的患者3年生存率明显低于其高表达的患者(P=0.0081)。与转染阴性对照序列的HCC细胞比较,转染miR-376c模拟物的HCC细胞的迁移及侵袭数(56.00 vs.26.00;45.33 vs.18.33)明显减少、划痕愈合率明显减低(95.33%vs.60.00%)、HMGA2的表达明显下调(均P0.05);miR-376c高表达的HCC组织中HMGA2表达量明显低于miR-376c低表达的HCC组织(P0.05),HCC组织中miR-376c与HMGA2的表达呈负相关(r=-0.541,P0.01)。结论:miR-376c可能是一种抑癌因子,其在HCC中表达降低,从而削弱了对HMGA2的抑制、促进了HCC细胞的迁移与侵袭。     

利多卡因对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1mRNA表达的影响

目的 探讨利多卡因对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1( HMGB1) mRNA表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠50只,体重200 ～ 250 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n＝10):假手术组(S组)、脓毒症组(L组)、低、中和高剂量利多卡因组(LL1组、LL2组和LL3组).除S组外,其他4组采用盲肠结扎穿孔术制备大鼠脓毒症诱发急性肺损伤模型.LL1组、LL2组和LL3组分别于术毕、术后1、2h时腹腔注射利多卡因5、10、20 mg/kg,S组和L组给予等容量生理盐水.分别于术后24、48 h时处死5只大鼠,取肺组织,测定HMGB1 mRNA表达、髓过氧化物酶(MPO)活性和NF-κB活性,光镜下观察肺组织病理学结果.结果 与S组比较,其他4组肺组织HMGB1 mRNA表达上调,MPO活性升高(P<0.05);与L组比较,LL1组、LL2组和LL3组肺组织HMGB1 mRNA表达下调,MPO活性降低(P<0.01);LL1组、LL2组和LL3组肺组织HMGB1 mRNA表达依次下调,MPO活性依次降低(P<0.05).LL1组、屿LL2和LL3组肺组织NF-κB活性逐渐降低,肺组织损伤程度逐渐减轻.结论 利多卡因减轻脓毒症大鼠急性肺损伤的机制与下调肺组织HMGB1基因表达有关,其下调HMGB1基因表达的机制与抑制NF-κB活化有关.     

高迁移率族蛋白HMGA1在肝细胞癌及胆管细胞癌中的表达差异及临床意义

目的：探讨高迁移率族蛋白A1（HMGA1）在肝细胞癌（HCC）、肝内胆管细胞癌（IHC）中的表达差异和临床意义。 方法：采用免疫组化SABC法对60例HCC、42例胆管细胞癌及10例正常肝脏组织标本中HMGA1的表达情况进行检测,并分析其与临床病理特点之间的关系。 结果：HMG组A1在10例正常肝脏组织中无一例表达,在HCC组中表达率为3.3％（2/60）,在IHC组中表达率为66.7％（28/42）。IHC组与HCC组中HMGA1表达差异有统计学意义（P = 0.000）;IHC组HMGA1与p53的表达呈正相关（r = 0.673,P＜0.05）;1年内死亡患者的HMGA1表达水平（80.0％）较1年内存活患者的（33.3％）高,差异有统计学意义（P 〈 0.05）。 结论：HMGA1可作为鉴别肝细胞癌与肝内胆管细胞癌的一个潜在指标。HMGA1在肝内胆管细胞癌的生成中可能发挥了重要作用,HMGA1在肝内胆管细胞癌的高表达提示预后不良。     

高迁移率族蛋白B1在伴有周围神经浸润的胃癌组织中的表达及意义

目的:检测高迁移率族蛋白(HMGB1)在伴有周围神经浸润的胃癌组织中的表达情况,分析HMGB1与胃癌临床病理特征之间的关系,探讨HMGB1在胃癌侵袭转移中的作用。方法:采用免疫组化二步法检测50例伴有周围神经浸润胃癌组织、40例未伴有周围神经浸润胃癌组织、30例正常胃组织中的表达情况。结果:1)HMGB1在伴有周围神经浸润胃癌组织、未伴有周围神经浸润胃癌组织及正常胃组织表达阳性率分别为76.00%、55.00%、30.00%,差异有统计学意义(P0.05)。2)HMGB1与伴有神经浸润的胃癌患者的淋巴结转移、TNM分期、肿瘤大小呈正相关,而与患者的年龄无明显相关性。结论:HMGB1表达上调可能与胃癌组织周围神经浸润的发生发展及侵袭转移有关,HMGB1高表达可能促进胃癌细胞向周围神经组织浸润。     

细胞外基质蛋白1在原发性肝癌中的表达与预后的关系

目的 探讨原发性肝癌中细胞外基质蛋白1(extracellular matrix protein 1,ECM1)表达水平与肝癌预后的关系.方法 选取77例原发性肝癌手术切除标本,采用免疫组织化学方法检测ECM1表达,并分析ECM1表达与肝癌临床病理特征及预后与复发的关系.结果 免疫组织化学染色显示ECM1主要表达在胞质中.肝癌组织中ECM1表达阳性率为74.0%(57/77),与肝癌血管侵犯(χ2=6.523,P=0.011)和TNM分级有关(χ2=6.989,P=0.030),而与患者性别、年龄、血清AFP水平、肿瘤大小、癌灶数、分化程度等指标无明显相关性(P＞0.05).ECM1阳性表达患者术后总生存率和无瘤生存率明显低于阴性表达者(P=0.016).多因素分析表明,ECM1表达是影响肝癌总生存和无瘤生存的独立危险因素(RR=3.721,P=0.002;PR=2.323,P=0.031).结论 EC M1的表达与肝癌侵袭转移特性有关,可作为判断肝癌术后预后、复发的指标之一.

Abstract：

Objective To examine the expression of extracellular matrix protein 1 ( ECM1 ) in hepatocellular carcinoma (HCC) and its correlation with prognosis and recurrence of HCC.Methods Immunohistochemistry was used to detect expression of ECM1 in cancerous tissues from 77 HCC patients. The correlation between ECM1 expression and clinicopathologic features and prognosis were analyzed. Results ECM1 is mainly expressed in the cytoplasm of liver cells. The positive rate of ECM1 expression in HCC tissues were 74. 0% (57/77), and the expression level was significantly correlated with vascular invasion (χ2 =6.523, P =0.011 ) and TNM stage (χ2 =6.989, P =0.030). No significant correlation was found between the expression of ECM1 and patient's gender, age, AFP level of plasm, tumor size, number of nodules, and tumor differentiation. Patients with positive ECM1 expression have significantly poorer overall survival (OS) and disease-free survival (DFS) after curative resection than those with negative ECM1 expression (P =0. 016). The Cox multivariate analysis demonstrated that among the factors analyzed, ECM1 expression is an independent prognostic factors for OS and DFS in HCC patients after a curative resection (RR=3.721, P=0.002; RR=2.323, P=0.031). Conclusions Positive ECM1 is correlated with postoperative metastasis and invasion of HCC and poor prognosis.     

肝细胞癌Period1 表达与预后的关系

目的：探讨Period1在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及意义。 方法：用RT-PCR与Western blot法检测30例HCC组织与其癌旁肝组织及5例正常肝组织中Period1 mRNA与蛋白表达;甲基化特异性PCR检测HCC组织与癌旁肝组织中Period1启动子甲基化水平;免疫组化检测67例HCC组织及其癌旁肝组织石蜡切片中Period1蛋白的表达;分析Period1的表达与HCC患者临床病理特征及预后的关系。 结果：HCC组织Period1 mRNA和蛋白的表达水平均较癌旁肝组织与正常肝组织明显降低（均P<0.05）,而两者在癌旁肝组织与正常肝组织间差异无统计学意义（均P>0.05）;HCC组织Period1启动子甲基化水平较其癌旁肝组织明显增高（均P<0.05）。HCC组织石蜡切片中Period1阳性表达率为47.8%,而癌旁肝组织阳性表达率为83.6%,差异有统计学意义（P<0.05）;Period1表达与HCC分化程度、结节数目、有无静脉浸润有关（均P<0.05）;Period1阳性表达HCC患者中位复时间与中位生存时间均明显短于阳性者（均P<0.05）。 结论：Period1在肝癌中表达下调可能与HCC的发生发展和侵袭转移密切相关;启动子甲基化可能是Period1表达下调的重要机制。     

胆管癌组织中高迁移率族蛋白B1与突变型p53的表达及临床意义

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和突变型p53(mutp53)在胆管癌组织中的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学方法检测47例胆管癌组织与25例正常胆管组织中HMGB1和mutp53的表达情况,并分析两者的表达与胆管癌临床病理特征之间的关系.结果 HMGB1与mutp53在胆管癌组织中的阳性表达率分别为78.72％ (37/47)、63.83％(30/47),而在正常胆管组织中的阳性表达率为12.00％(3/25)、4.00％(1/25),差异均有统计学意义(P＜0.01).HMGB1与mutp53在胆管癌组织中的阳性表达与患者的性别、年龄、胆红素水平、肿瘤直径大小及肿瘤所在部位均无相关性(P＞0.05);而与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、神经侵犯及肿瘤的TNM分期密切相关,差异均有统计学意义(P＜0.05).HMGB1与mutp53在胆管癌组织中的表达呈正相关(r=0.574,P＜0.05).结论 HMGB1与mutp53在胆管癌组织中均呈高表达.HMGB1与mutp53在胆管癌的发生、发展、浸润及转移过程中起到重要作用.     

Tspan8过表达与肝癌转移潜能及预后的关系

目的:探讨Tspan8表达与肝癌侵袭转移及预后之间关系。方法:用q RT-PCR和Western blot检测不同肝癌细胞系及80例肝癌患者手术标本中Tspan8的m RNA与蛋白表达;应用组织芯片检测352例肝癌组织样本中Tspan8的表达,分析Tspan8表达与肝癌临床病理因素及复发与预后的关系。结果:Tspan8的m RNA与蛋白表达在高转移潜能肝癌细胞系(MHCC97-H、MHCC97-L)中的表达明显高于低转移潜能的肝癌细胞系(PLC/PRF/5、SMMC7721、Hep G2),在肝癌组织中的表达明显高于癌旁与正常肝组织,且在有肝内转移或血管侵犯患者癌组织中的表达明显高于无肝内转移及血管侵犯患者的癌组织(均P0.05)。Tspan8高表达是肝癌术后复发转移(HR=1.64,95%CI=1.21~2.23,P=0.002)和术后生存(HR=1.66,95%CI=1.23~2.25,P=0.001)的独立危险因素,Tspan8高表达患者术后5年总生存率明显低于Tspan8低表达组,术后复发时间明显短于低表达患者(均P0.05)。结论:Tspan8促进肝癌侵袭转移,Tspan8高表达患者预后不良。     

高迁移率族蛋白-1在急性胰腺炎中的表达及意义

目的 观察急性胰腺炎大鼠高迁移率族蛋白-1(HMGBl)表达水平的变化,探讨其在急性胰腺炎发病过程中的作用和意义.方法 分别以2%及3.8%的牛磺胆酸钠逆行注入大鼠胰胆管,制作大鼠轻型和重症急性胰腺炎模型.将84只大鼠随机分成3组:假手术组(SO组n=28),轻型胰腺炎组(MAP组n=28),重症胰腺炎组(SAP组n=28).对胰腺损伤进行病理评分,免疫组织化学方法观察胰腺中HMGB1的表达情况,ELISA法测定血清中HMGB1水平.结果 MAP和SAP组胰腺组织HMGB1的表达在建模后12h明显升高,于24h达高峰,至48h明显下降,各时段胰腺组织HMGB1的表达与SO组比较差异具有显著统计学意义(P＜0.05).建模后12、24、48、72 h SAP组胰腺HMGBl免疫组化IOD均值明显高于MAP组(P＜0.05),胰腺HMGBl表达程度与胰腺病理损伤程度呈正相关.MAP和SAP组大鼠的血清HMGB1水平在建模后12h明显升高,于48h达高峰,至72h明显下降,各时段的血清HMGB1水平与SO组比较差异具有显著统计学意义(P＜0.05).SAP组的血清HMGB1水平于建模后24、48、72 h明显高于MAP组(P＜0.05),血清HMGB1水平与胰腺病理损伤程度呈正相关.结论 HMGB1可能作为晚期炎症介质参与了胰腺炎的局部及全身炎症反应,并可作为评价胰腺炎病变和炎症反应程度的有效指标.     

高迁移率族蛋白1在中枢神经系统疾病中的作用

高迁移率族(high mobiliby group box,HMGB)蛋白是一类核蛋白,释放至细胞外的HMGBI参与了外周诸多疾病的发生.近年来研究表明,HMGBI也参与了中枢神经系统疾病的发生.现简要阐述HMGB1的外周作用,着重介绍其在中枢神经系统疾病,特别脑缺血中的作用.     

肝脏纤维化指数对原发性肝癌患者术后生存状况的影响

目的探讨肝脏纤维化指数对原发性肝癌患者外科治疗后生存状况的影响。方法对2009年7月至2011年10月行肝切除的76例肝癌患者资料进行回顾性分析,根据手术前肝纤维化指数的高低将患者分为高指数组(40例)及低指数组(36例)。采用SPSS 21.0统计软件进行统计分析。患者肿瘤复发情况,生存率用卡方检验;平均生存期用均数±标准差表示,使用t检验;生存分析和比较用log rank法进行单因素分析,以P0.05视为差异有统计学意义。结果两组患者分别在肿瘤数目、最大肿瘤直径、血管侵犯情况、静脉栓塞情况及切缘阳性情况上,低指数组均低于高指数组,差异有统计学意义(P0.05);低指数组患者复发率为16.7%显著低于高指数组67.5%;低指数组患者生存时间(44.2±12.3)个月长于高指数组(21.3±8.7)个月;低指数组患者1、3、5年的生存率分别为94.4%、52.8%及47.2%均显著高于高指数组的72.5%、42.5%及22.5%,差异均有统计学意义(P0.05);回归分析显示:肝纤维化指数、甲胎蛋白含量及术前肿瘤数是肝癌手术后复发的独立危险因素(P0.05)。结论肝纤维化指数对于行肝切除术的肝癌患者的预后具有一定预测意义,可以在临床推广使用。     

术前血小板/淋巴细胞比值与肝癌预后的关系

目的:探讨术前血小板/淋巴细胞比值(PLR)与肝癌预后的关系。方法:回顾性分析行手术治疗的256例肝癌患者的临床资料。根据患者术前PLR水平,绘制PLR诊断肿瘤复发的受试者工作特征(ROC)曲线,确定PLR界值,分析术前外周血PLR水平分与患者临床病理因素及预后的关系。结果:PLR诊断肿瘤ROC曲线下面积为0.625(95%CI=0.544~0.706),灵敏度为0.53,特异度为0.70,界值为131.81。患者术前外周血PLR水平与术前血清白蛋白、Child-Pugh分级、是否伴有腹水、血管侵犯、TNM分期等临床病理因素有关(均P0.05)。Cox风险模型分析显示,TNM分期(HR=1.441,95%CI=1.721~2.635,P0.001)、PLR(HR=1.737,95%CI=1.317~2.291,P0.001)为肝癌预后的独立影响因素,而PLR(HR=1.893,95%CI=1.434~2.497,P0.001)为肝癌复发的独立影响因素。生存分析显示,低PLR患者术后1、3、5年无瘤生存率(81.2%、53.3%、29.6%)明显高于PLR患者(62.4%、30.4%、11.6%)。结论:术前PLR可以作为肝癌患者的预后指标,高PLR水平患者术后复发率高、预后差。     

合并肌少症肝细胞癌患者的临床病理特征及预后分析

目的:探讨合并肌少症肝细胞癌患者的临床病理特征及术后预后。方法:回顾性分析2010年3月—2016年6月期间就诊于武汉大学人民医院因肝细胞癌行肝切除术的139例患者的临床病理及随访资料。结果:139例患者中,56例(40.3%)合并肌少症。与非肌少症患者比较,肌少症患者体质量指数与骨骼肌指数明显降低、高TNM分期与微血管浸润比例明显增加(均P0.05);术后发生感染(14.3%vs.3.6%)、严重并发症(Clavien-Dindo Ⅲ级及以上)(19.6%vs.6.0%)、总并发症(35.7 vs.13.3%)的发生率明显升高(均P0.05);术后恢复时间(17.35 d vs.11.33 d)明显延长,需要入ICU治疗的患者比例(12.5%vs.2.4%)明显增加(均P0.05);术后总生存时间明显减少(P0.05)。Cox比例风险模型结果显示,合并肌少症是影响肝细胞癌患者术后生存的独立危险因素(P=0.001,HR=2.090,95%CI=1.340~3.259)。结论:合并肌少症的肝细胞癌患者术后并发症发率增加、恢复慢,且术后预后不良。     

胃癌组织中辅助性T细胞因子1水平与胃癌患者预后的关系

目的探讨辅助性T细胞（Th1）因子在胃癌组织中的表达与胃癌患者预后的相关性及其临床意义。方法回顾性分析2006年6月至2008年1月间复旦大学附属中山医院收治的58例胃癌患者的临床资料,运用实时定量PCR技术检测58例胃癌组织中Th1细胞因子TRAV10、IRF1、TBX21、CD3Z、GZMB、GNLY、GATA3和IFNG8种Th1细胞的mRNA表达水平,并分析其与58例胃癌患者术后生存的关系。结果58例胃癌患者中位随访期为42．5（1～64）个月。术后1年和3年生存率为84．5％和72．4％。单因素Cox回归分析显示,淋巴结转移、远处转移、TNM分期、脉管癌栓、GNLYmRNA表达水平及Th1细胞8因子综合表达水平与胃癌术后生存有关（均P〈0．05）。GNLY的mRNA表达水平上调者和下调者3年生存率分别86．2％和58．6％．Th1细胞8因子任意上调和全部下调者3年生存率分别为79．6％和33．3％。差异均有统计学意义（均P〈0．05）。多因素Cox回归分析显示．淋巴结转移和Thl细胞8因子综合表达水平是本组胃癌患者的独立预后因素（均P〈0．05）。结论在Th1细胞因子中．GNLYmRNA表达水平与胃癌患者预后有关．但并不是独立因素。Th1细胞8因子综合表达水平可作为胃癌患者的独立预后因素。