miR-18a-3p在肝癌中的表达及其调控ADCY1表达对肝癌细胞侵袭及增殖的影响

背景与目的 研究表明多种microRNA（miRNA）可能在肝癌的发生发展中发挥重要作用,其作用机制仍值得进一步研究和探讨。因此,本研究从已报道的肝癌差异表达miRNA中进一步筛选关键miRNA,并验证和探讨其作用机制。方法 从已发表的研究中筛选出肝癌组织及肝癌患者血清/血浆中与正常肝组织及正常血清/血浆中共同的差异表达miRNA;用qRT-PCR在正常肝细胞与肝癌细胞中对筛选出的目标miRNA表达情况进行验证;用过表达和抑制的方法观察目标miRNA对肝癌细胞侵袭能力（Transwell实验）与增殖能力（MTT实验）的影响,以及在30例临床标本中检测目标miRNA的表达并通过KM plotter网站分析其对肝癌患者生存的影响;通过miRDB和GEPIA数据库预测和分析目标miRNA的靶基因,并用逆转实验和双荧光素酶报告实验进一步验证。结果 在肝癌组织（vs.正常肝组织）及肝癌患者血清/血浆（vs.正常人血清/血浆）中共同高表达的miRNA有4个（miR-18a-3p、miR-221-3p、miR-222-3p、miR-224-3p）,共同低表达的miRNA有2个（miR-26a-3p、miR-125b-3p）。qRT-PCR实验证实,与正常肝细胞比较,miR-18a在肝癌细胞中高表达,miR-26a在肝癌细胞中低表达（均P<0.05）。过表达/抑制miR-18a-3p表达能促进/降低肝癌细胞的侵袭及生长能力（均P<0.05）,而过表达/抑制miR-26a-3p对肝癌细胞的侵袭及生长能力影响无不法确定。分析结果显示,ADCY1是miR-18a-3p的靶基因,过表达ADCY1能部分逆转miR-18a-3p对肝癌细胞的上述作用,同时,表达上调的miR-18a-3p能通过结合到ADCY1 mRNA 3''UTR抑制ADCY1的表达。结论 miR-18a-3p可能在肝癌的发生发展中起了关键作用,其在肝癌中表达上调,并能通过抑制下游靶基因ADCY1的表达增强进肝癌细胞的侵袭和增殖能力。     

ε和δ亚型微管蛋白复合物2在肝细胞癌中的表达及其与患者预后的关系

背景与目的 肝癌（肝细胞癌占75%~85%）每年的新发病例数及死亡例数在我国所有癌症类型中高居第五和第二位,肝癌生长、转移、免疫逃逸及治疗抵抗的分子机制复杂,是目前研究的热点及难点。研究发现ε和δ亚型微管蛋白复合物2（TEDC2）在多种恶性肿瘤中表达上调,且与预后相关,但目前肝癌中的临床意义尚未见报道,因此,本研究探讨TEDC2在肝癌中的表达及其与患者预后的关系。方法 从TCGA和ICGC数据库中下载肝癌患者的转录组数据及临床病理资料,通过GEPIA2网站对TEDC2行泛癌分析,用Kaplan-Meier法分析TEDC2表达与患者预后的关系,用单因素和多因素Cox回归模型分析患者的预后因素,用基因富集分析探索TEDC2表达相关的生物学功能。结果 泛癌分析发现TEDC2是肾上腺皮质癌（ACC）、肾透明细胞癌（KIRC）、肾乳头状细胞癌（KIRP）、急性髓细胞样白血病（LAML）、肝癌（LIHC）和肺腺癌（LUAD）这6种癌症的风险预后因子。TCGA和ICGC数据分析均表明肝癌组织中的TEDC2表达水平高于正常组织（均P<0.05）。TEDC2的表达水平与TNM分期、T分期、组织学分级有关（均P<0.05）,与性别、年龄无关（均P>0.05）。生存分析显示,TEDC2高表达的患者总生存期和无病生存期短于TEDC2低表达的患者（均P<0.05）。单因素和多因素Cox回归分析发现,TNM分期、T分期、TEDC2表达是肝癌预后的风险因素,而仅TEDC2表达在TCGA和ICGC患者中均是肝癌的独立预后因子（均P<0.05）。基因富集分析发现在TEDC2高表达样本中富集细胞增殖相关的通路。结论 TEDC2在肝癌组织中高表达,并且是肝癌的独立预后因子,其高表达与患者的不良预后密切相关,而且,机制可能与细胞增殖活性增加有关。     

结直肠癌细胞中NF-κB活化与TRAF6、CCR5及PTEN/PI3K通路的关系及作用

背景与目的 NF-κB的活化在多种恶性肿瘤的发生、发展中起了重要的作用。研究发现，趋化因子受体5（CCR5）、肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）以及PTEN/PI3K通路相关蛋白均在恶性肿瘤中异常表达。因此，本研究探讨以上分子在结直肠癌细胞中的作用及相互关系。方法 分别用Western blot、CCK-8实验、Transwell法检测结直肠癌HT29和SW480细胞经Maraviroc（CCR5抑制剂）、MG132（TRAF6抑制剂）和NF-BAY（NF-κB抑制剂）处理后，各蛋白表达的变化，以及增殖、迁移、侵袭能力的变化。结果 在两种结直肠癌细胞中，抑制CCR5蛋白后，PI3K的表达降低，PTEN表达升高（均P<0.05），TRAF6和NF-κB表达无明显变化（均P>0.05）；抑制TRAF6蛋白后，PI3K和CCR5表达降低，PTEN表达升高（均P<0.05），NF-κB的表达无明显变化（均P>0.05）；抑制NF-κB表达后，CCR5、TRAF6和PI3K表达降低，PTEN表达升高（均P<0.05）。三种抑制剂均可明显降低两种结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.05）。结论 结直肠癌细胞中存在NF-κB异常活化，后者可能通过上调TRAF6与CCR5的表达，抑制抑癌分子PTEN的活性，从而导致促癌分子PI3K及其通路的活性升高。     

血清白细胞介素34与肝癌肝移植临床预后的关系及其作用机制

背景和目的：肝移植在肝癌的治疗中发挥了越来越重要的作用。目前移植术后肿瘤复发与转移的临床问题尚未解决。本研究旨在分析白细胞介素34（IL-34）表达与肝癌肝移植受者预后、肿瘤复发与转移的关系,并探讨其在肝癌生长和转移中的作用机制。方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测93例肝癌肝移植受者术前血清中IL-34表达情况,用统计学方法分析IL-34表达与临床病理特征和预后的关系;用受试者工作特征（ROC）曲线分析IL-34检测肿瘤复发和转移的诊断价值。取雄性5~6周龄NOD/SCID小鼠建立人源性肝癌原位移植瘤模型,并随机分为4组,分别腹腔注射不同浓度的IL-34（5、10、35 μg/kg）（干预组）及等量生理盐水（对照组）,1次/d,共2周。比较10周后各组小鼠总体生存率、移植瘤体积与质量、肺组织转移情况;用Western blot检测各组移植瘤中细胞增殖相关蛋白（Ki-67与PCNA）、肿瘤转移相关蛋白（MMP-2与MMP-9）、上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白（E-cadherin、vimentin和snail）的表达。结果 经5年随访,93例肝癌肝移植受者中肿瘤复发27例、转移9例、死亡45例。肿瘤复发和转移患者中IL-34表达水平明显低于肿瘤未复发和未转移患者（均P<0.05）;IL-34低表达与肿瘤复发、转移、血管侵犯呈负相关（均P<0.05）;IL-34低表达患者5年总体生存率和无瘤生存率明显低于IL-34高表达患者（均P<0.05）。IL-34低表达、肿瘤复发与转移是影响总体生存率的独立危险因素（均P<0.05）。血清IL-34检测肿瘤复发与转移曲线下面积（AUC）分别为0.93与0.79,优于甲胎蛋白（AFP）。与对照组比较,3个IL-34干预组小鼠总体生存率增加,移植瘤体积与重量减少,肺组织转移率和转移灶数量降低,移植瘤中Ki-67、PCNA、MMP-2、MMP-9、vimentin、snail蛋白表达水平降低而E-cadherin表达水平增加,且均呈浓度依赖性（均P<0.05）。结论 血清IL-34低表达与肝癌肝移植受者不良预后、肿瘤复发与转移密切相关。IL-34具有对抗肝癌生长与转移的作用,机制可能与抑制细胞增殖和EMT有关。     

RUNX3在结直肠癌中的表达与作用及其与TGF-β/SMAD4信号通路的关系

背景与目的 转化生长因子β（TGF-β）/SMAD4信号传导通路在结直肠癌发生与发展中起了重要作用。runt相关转录因子3（RUNX3）在结直肠癌组织中的表达水平显著降低,且可能发挥抑癌作用。但RUNX3的作用与TGF-β/SMAD4通路的关系尚未见报道。因此,本研究旨在探讨RUNX3与SMAD4在结肠癌中的表达及作用,以及两者的关系。方法 收集98例结直肠癌组织和癌旁正常组织标本,分别用Western blot检测RUNX3和SMAD4蛋白的水平,qRT-PCR检测SMAD4 mRNA的水平,并分析两者表达的相关性。将人结直肠癌细胞SW480分别转染RUNX3过表达载体（RUNX3组）、SMAD4过表达载体（SMAD4组）、RUNX3+SMAD4过表达载体（RUNX3+SMAD4组）,以转染阴性对照质粒的SW480细胞为对照组,分别用Western blot与qRT-PCR检测各组细胞RUNX3与SMAD4表达的变化;用CCK-8实验与Transwell实验分析各组细胞的增殖与侵袭能力的差异。结果 结直肠癌组织中的RUNX3蛋白表达量明显低于癌旁正常组织,而SMAD4的mRNA与蛋白表达水平均明显高于癌旁正常组织（均P<0.05）;结直肠癌组织中RUNX3蛋白表达与SMAD4 mRNA和蛋白表达均呈负相关（r=0.511,P=0.004;r=0.487,P=0.009）。与对照组比较,RUNX3组的RUNX3蛋白水平均明显升高,但SMAD4 mRNA和蛋白水平明显降低（均P<0.05）;SMAD4组的RUNX3蛋白水平无明显变化（P>0.05）,但SMAD4 mRNA和蛋白的表达水平明显升高（均P<0.05）;RUNX3+SMAD4组的RUNX3蛋白水平均明显升高（P<0.05）,SMAD4 mRNA和蛋白水平变化不明显（均P>0.05）。RUNX3组细胞增殖与侵袭能力均明显低于对照组（均P<0.05）,SMAD4组的细胞增殖和侵袭能力均明显高于对照组（均P<0.05）,RUNX3+SMAD4组的细胞增殖和侵袭能力介于RUNX3组与SMAD4组之间,与对照组比较,差异无统计学意义（均P>0.05）。结论 RUNX3在结肠癌组织中表达降低,上调RUNX3的表达对结肠癌细胞的恶性生物学行为有抑制作用,其机制可能与抑制TGF-β/SMAD4通路的活性有关。     

磷脂酰肌醇转运蛋白细胞质1在肝细胞癌中表达及临床意义

背景和目的：肝细胞癌（HCC）侵袭性强,极易发生复发转移,临床预后差。目前HCC发生发展分子机制仍然不清楚。磷脂酰肌醇转运蛋白细胞质1（PITPNC1）是一种脂质代谢相关基因,表现出促癌作用。然而,PITPNC1是否在HCC发展中发挥作用仍然未知。因此,本研究探讨PITPNC1在HCC中的表达及其作用。方法 招募2015年1月—2018年12月间中南大学湘雅医院行肝切除手术的HCC患者116例进行前瞻性队列研究,收集患者的病历资料和组织标本,并进行规律随访。通过免疫组化方法检测患者组织标本PITPNC1蛋白的表达,分析PITPNC1表达和临床病理特征预后之间的关系。通过LCCLD数据库分析PITPNC1在人HCC细胞系中的表达,利用慢病毒包装小RNA干扰PITPNC1在高侵袭转移性HCC细胞系MHCC97H中表达,利用集落形成和皮下成瘤实验观察PITPNC1表达与HCC生长的关系,并对皮下移植瘤行油红O染色。利用生物信息学方法分析PITPNC1作用的分子机制。结果 PITPNC1蛋白阳性染色定位于细胞浆,在癌组织阳性表达率为76.7%（88/116）,在癌旁组织阳性表达率为21.5%（24/116）,差异有统计学意义（P<0.001）。PITPNC1高表达与卫星结节（P=0.041）、血管侵犯（P<0.001）、肿瘤分化（P=0.027）、BCLC分期（P=0.009）、TNM分期（P=0.028）明显有关。Kaplan-Meier生存分析表明,PITPNC1高表达HCC患者总体生存（OS）率与无复发生存（RFS）率均明显降低（均P<0.001）;PITPNC1表达是OS率与RFS率的独立影响因素（HR=11.775,95% CI=1.462~4.082,P=0.006;HR=1.928,95% CI=1.306~4.889,P=0.004）。PITPNC1沉默后,MHCC97H细胞体内和体外生长均明显抑制（均P<0.05）。油红O染色显示,PITPNC1表达下调后,皮下移植瘤的脂质积累明显减少（P<0.05）。数据库分析结果显示,PITPNC1过表达涉及脂质代谢相关的PPAR信号通路活性。结论 PITPNC1是HCC新的癌基因和不良预后标志物。PITPNC1可能通过调控脂质代谢途径而在促进HCC生长过程中可能起重要作用。     

肝癌切除术序贯腹腔热灌注化疗在肝癌自发性破裂出血中的临床应用

背景与目的 肝癌自发性破裂出血（SRHCC）是肝癌严重并发症之一。针对SRHCC治疗,首选简单有效的方法快速止血,然后在全身及局部状况允许的情况下进一步治疗,以期挽救患者生命及延长患者生存。本研究探讨肝癌切除序贯腹腔热灌注化疗（HIPEC）在SRHCC中的临床应用价值。方法 回顾性分析玉溪市人民医院肝胆外科2013年5月1日—2021年12月1日期间收治的102例SRHCC患者的临床资料。其中48例行肝切除术序贯HIPEC治疗（观察组）,54例行单纯肝切除术治疗（对照组）。比较两组患者的相关临床指标。结果 两组患者术前一般资料、主要手术指标、术后病理、住院时间、腹腔引流管术后留置时间、Clavien-Dindo 2级以上并发症发生率和围手术期病死率、复发后再手术率差异均无统计学意义（均P>0.05）。观察组住院总费用、术后累积无瘤生存率及总生存率均高于对照组（均P<0.05）,但腹膜种植转移发生率明显低于对照组（P<0.05）。结论 肝切除序贯HIPEC能降低SRHCC术后腹膜种植转移率,改善术后无瘤生存率及累积总生存率,是一种安全有效治疗方式,具有重要临床应用价值,但具有费用较高的缺点。     

结直肠癌干细胞中miR-520c-3p的表达及其对丙酮酸代谢的调控机制研究

背景与目的 研究显示,丙酮酸代谢的改变在结直肠癌的发生发展中起重要作用,而结直肠癌干细胞中microRNA（miRNA）表达异常可能与丙酮酸代谢密切相关。笔者前期通过TCGA数据库分析发现,miR-520c-3p在结直肠癌中表达升高,且与预后相关。然而,miR-520c-3p是否参与了丙酮酸代谢尚不清楚。因此,本研究探讨结直肠癌干细胞中miR-520c-3p的表达与丙酮酸代谢的关系。方法 选择人结肠癌细胞株,并从中分离纯化结直肠癌干细胞。检测过表达或敲低miR-520c-3p后,结直肠癌干细胞及结直肠癌细胞增殖能力、丙酮酸氧化水平、乳酸产量的变化。用_D-［U-¹³C］葡萄糖孵育细胞,质量同位素分析追踪葡萄糖衍生碳的命运。通过miRNA序列分析和遗传学手段分析和鉴定miR-520c-3p的功能底物。结果 过表达miR-520c-3p后,结直肠癌干细胞的增殖能力明显增强、丙酮酸氧化水平明显下降、乳酸产量明显升高（均P<0.05）;用_D-（U-¹³C）葡萄糖培养后,未标记的柠檬酸盐（m+0）明显增加,而高阶柠檬酸盐标记（m+1、m+4和m+5）明显减少（均P<0.05）。在敲低miR-520c-3p后,结直肠癌干细胞的上述情况呈反向变化（均P<0.05）。过表达或敲低miR-520c-3p对结直肠癌细胞的上述指标均无明显影响（均P>0.05）。miR-520c-3p可以靶向线粒体丙酮酸载体1（MPC1）mRNA 3''UTR（P<0.05）。过表达miR-520c-3p后,结直肠癌干细胞中MPC1的mRNA与蛋白水平均明显下降,敲低miR-520c-3p后则相反（均P<0.05）。TCGA数据库分析结果显示,低表达MPC1的结直肠癌患者预后较差（P<0.05）。敲低MPC1后,结直肠癌干细胞的丙酮酸氧化水平明显降低、乳酸产量明显增高、增殖能力均明显增强（均P<0.05）;用_D-［U-¹³C］葡萄糖培养后,未标记的柠檬酸盐（m+0）在敲低MPC1的结直肠癌干细胞中明显增加,而高阶柠檬酸盐标记（m+1、m+4和m+5）明显减少（均P<0.05）。同时敲低miR-520c-3p和MPC1后,结直肠癌干细胞丙酮酸氧化水平、乳酸产量、增殖能力均无明显变化（均P>0.05）。结论 结直肠癌中miR-520c-3p的高表达与较差的预后相关,其机制可能是miR-520c-3p靶向MPC1调控结直肠癌干细胞中的丙酮酸代谢水平,促进了结直肠癌干细胞的增殖。     

富亮氨酸α2糖蛋白1在乳腺癌中的表达及其功能的生物信息学分析

背景与目的 富亮氨酸α2糖蛋白1（LRG1）是富亮氨酸重复序列（LRR）家族蛋白成员,近些年研究显示LRG1在恶性肿瘤的发生、上皮间质转化、侵袭转移、异常血管生成、预后预测中发挥重要作用。然而LRG1在乳腺癌中的表达、预后、功能和潜在机制方面尚待阐明。本研究旨在通过生物信息学方法系统分析LRG1在乳腺癌中的表达及意义。方法 使用TCGA、Breast Cancer Gene-Expression Miner、UALCAN、Kaplan-Meier Plotter、GeneMANIA、DAVID等多个数据库对LRG1在乳腺癌中的表达与临床病理特征关系、预后价值、相互蛋白作用网络及功能富集进行综合分析。结果 TCGA数据库分析显示,LRG1 mRNA在乳腺浸润癌中的表达量明显高于正常组织（23.461 vs. 8.357,P<0.001）。在不同分子亚型中,luminal型乳腺癌中LRG1 mRNA表达量为37.462（9.930~74.197）,高于HER-2阳性型乳腺癌和三阴性乳腺癌（TNBC）（均P<0.01）;I、II、III期乳腺癌中LRG1 mRNA的表达水平均高于正常乳腺组织（均P<0.05）。Breast Cancer Gene-Expression Miner数据库分析显示,雌激素受体（ER）和（或）孕激素受体（PR）阳性乳腺癌中LRG1 mRNA的表达水平高于ER和（或）PR阴性乳腺癌,HER-2阴性乳腺癌中LRG1 mRNA表达高于HER-2阳性型乳腺癌（均P<0.05）;淋巴结阳性乳腺癌LRG1 mRNA表达量高于淋巴结阴性乳腺癌（P<0.000 1）。用GEPIA在线平台对TCGA数据库中乳腺癌数据进行生存分析发现,LRG1高表达患者总生存率（OS）及无复发生存率（RFS）均低于低表达患者,但差异无统计学意义（HR=0.81,P=0.200;HR=0.70,P=0.064）;用Kaplan-Meier plotter对TCGA中乳腺癌数据进行生存分析发现,LRG1的表达与luminal A型、luminal B型、HER-2阳性型乳腺癌的OS无明显关系（均P>0.05）,但在basal-like亚型中,LRG1低表达患者OS明显优于LRG1高表达患者（HR=3.12,95% CI=1.54~6.29,P<0.001）。使用GeneMANIA数据库进行分析,共筛选出20个与LRG1相互作用蛋白质,GO富集分析显示,LRG1及与其共表达相关的20个蛋白富集于细胞胞外区,外泌体,血液微粒,受体复合物等结构中,参与细胞的血管生成调控、上皮间充质的转化、缺氧反应等相关生物学过程。结论 LRG1在乳腺癌组织中表达上调,并可预测部分不良乳腺癌亚型的预后,LRG1可能为乳腺癌治疗提供新的靶点。     

TMEM117调控TGF-β信号通路促进胃癌的作用及机制研究

背景与目的 跨膜蛋白（TMEM）是一种跨越整个脂质双分子层的蛋白质。TMEM117是TMEM家族中很重要的一员，以往研究发现TMEM117主要在调节血糖、预防心肌肥厚、参与内质网应激等方面发挥重要作用，然而TMEM117在胃癌（GC）中的作用机制尚不清楚。因此，本研究探索TMEM117在GC中的表达及其生物学功能与作用机制。方法 通过生物信息学方法分析TMEM117在泛癌中的表达情况，用qRT-PCR与Western blot检测人正常胃上皮细胞与不同GC细胞系中TMEM117 mRNA与蛋白水平的表达。用qRT-PCR检测TMEM117在GC组织与对应癌旁组织中mRNA的表达。分别在不同GC细胞系中对TMEM117进行敲低或者过表达，然后通过CCK-8实验、EdU实验、Transwell实验检测TMEM117对GC细胞功能的影响，通过Western blot检测相关通路蛋白水平以及加入相关抑制剂分析TMEM117对GC细胞产生影响的机制。最后，观察敲低TMEM117对GC细胞在裸鼠体内生长的影响。结果 数据库分析结果显示，TMEM117在多种癌症组织中表达升高，TMEM117在GC组织中的表达明显高于正常组织（P<0.05），TMEM117高表达GC患者的预后较差（P<0.05）。qRT-PCR与Western blot结果显示，GC细胞中TMEM117的mRNA与蛋白表达均明显高于正常胃上皮细胞，GC组织中的TMEM117的mRNA表达明显高于癌旁组织（均P<0.05）。细胞功能实验结果显示，敲低TMEM117的GC细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显降低，而过表达TMEM117的GC细胞则呈反向变化（均P<0.05）；敲低TMEM117的GC细胞中TGF-β的表达明显下调，而过表达TMEM117的GC细胞中TGF-β的表达明显上调；使用TGF-β抑制剂LY2157299可以部分逆转过表达TMEM117对GC细胞恶性表型的促进作用（均P<0.05）。裸鼠体内成瘤实验显示，敲低TMEM117的GC细胞在裸鼠体内的生长被明显抑制。结论 TMEM117在GC中高表达且与患者的不良预后密切相关，其促进GC进展的作用机制可能与活化TGF-β信号通路促进GC细胞的增殖及侵袭与迁移能力有关，TMEM117有可能是治疗GC的有效靶点。     

环状RNA KIF4A在结直肠癌中表达与功能及其作用机制

背景与目的：环状RNA KIF4A (circKIF4A)被发现在多种肿瘤的恶性进展中起到重要作用,然而,circKIF4A在结直肠癌中的生物学作用尚未见报道。因此,本研究探讨circKIF4A对结直肠癌生物学行为的影响及机制。方法：用qRT-PCR检测不同结直肠癌细胞系与结肠黏膜上皮细胞以及结直肠癌组织与癌旁正常组织中circKIF4A的表达;用siRNA敲低结直肠癌SW620细胞中circKIF4A的表达后,分别检测细胞生长、克隆形成及侵袭能力以及细胞内总谷胱甘肽（T-GSH）/氧化型谷胱甘肽（GSSG）比例与铁死亡抑制蛋白SLC7A11表达的变化;通过生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验预测和分析circKIF4A的目标microRNA (miRNA)以及下游的靶基因并验证。结果：与正常结直肠上皮细胞及癌旁组织比较,circKIF4A在不同直肠癌细胞系及癌组织中的表达均明显上调（均P<0.05）;敲低circKIF4A后,SW620细胞的生长、克隆形成、侵袭能力、细胞内T-GSH/GSSG比例及SLC7A11蛋白表达均明显降低（均P<0.05）;预测与分析结果显示,...     

circRAD18/miR-516b/PDK1轴调节葡萄糖代谢重编程与结直肠癌增殖的关系

背景与目的 环状RNA circRAD18被发现在乳腺癌和甲状腺癌的进展中起了促进作用,但其在其他恶性肿瘤的表达及作用尚未被充分揭示。笔者前期通过生物信息学软件预测circRAD18可与miR-516b互补结合,而葡萄糖代谢关键调节酶丙酮酸脱氢酶激酶1（PDK1）可能是miR-516b的靶基因。因此,本研究初步探讨circRAD18在结直肠癌细胞中的表达及作用,及其对靶miRNA及下游靶基因的调控关系。方法 用qRT-PCR检测不同结直肠癌细胞系（SW480、SW620、HT-29）及正常结直肠上皮细胞（NCM460）中circRAD18的表达;用si-circRAD18沉默结直肠癌细胞中circRAD18的表达后,分别用CCK-8实验和相应的试剂盒检测细胞的增殖情况以及葡萄糖摄取量和乳酸产生量。用双荧光素酶报告基因实验与RNA免疫沉淀（RIP）实验分析circRAD18、miR-516b及PDK1之间的结合关系;最后,采用过表达/敲低实验进一步验证三者之间的关系。结果 与正常结直肠上皮细胞比较,circRAD18在各结直肠癌细胞系中的表达均明显上调（均P<0.05）;转染si-circRAD18后,结直肠癌细胞增殖能力、葡萄糖摄取及乳酸产生量均明显降低（均P<0.05）;双荧光素酶报告基因实验与RIP实验证实circRAD18可与miR-516b结合,而PDK1是miR-516b的下游靶基因。miR-516b模拟物及si-circRAD18的转染可明显抑制细胞葡萄糖摄取、乳酸产生及PDK1蛋白表达,且补充PDK1可逆转该抑制作用（均P<0.05）。结论 circRAD18在结直肠癌细胞中表达上调,并与结直肠癌细胞增殖能力的增强密切相关,作用机制可能与circRAD18通过海绵样吸附miR-516b后,上调PDK1表达,从而导致结直肠癌细胞葡萄糖代谢重编程有关。     

长链非编码 RNA SOX21-AS1调控 miR-31-5p/MMP-16轴对胰腺癌细胞活性与增殖的影响

背景与目的:胰腺癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤,也是癌症死亡的常见病因.长链非编码RNA(lncRNA)已在多种恶性肿瘤中被鉴定为调节因子和特异度生物标志物.最新研究表明,lncRNA SOX21-AS1在多种恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用.但其在胰腺癌中的作用尚未明确.因此,本研究探讨SOX21-AS1在胰腺癌中的...     

A novel diagnostic tool for the detection of bladder cancer: Measurement of urinary high mobility group box-1

ObjectiveWe aimed to investigate the diagnostic value of urinary High Mobility Group Box-1 (HMGB1) level as a noninvasive tool that can be potentially used for diagnosis and during follow-up in patients with bladder cancer patients.MethodThe study was conducted in a total of 121 participants including 61 patients diagnosed with primary bladder cancer, 30 patients with an acute urinary tract infection and 30 healthy controls. Age, gender and urinary HMGB1 levels of the study groups were evaluated. The association of clinical features (tumor diameter, number of foci, pathological grade, muscle invasion) with urinary HMGB1 levels was investigated in patients with bladder cancer.ResultsAll 3 groups showed a normal age and gender distribution with no significant difference among them (P = 0.775 and P = 0.967, respectively). A significant difference was detected in urinary HMGB1 levels among the 3 groups (P < 0.001). When urinary HMGB1 levels were compared between patients with high grade vs. low grade tumors, the mean HMGB1 level was 44.39 pg/ml (12.1–505.2) in patients with low grade tumors and 280 pg/ml (18.7–2685.3) in patients with high grade tumors (P < 0.001). Patients with a greater number of tumor foci had higher HMGB1 levels in comparison to patients with a single tumor focus (P = 0.008). Urinary HMGB1 levels were higher in patients with a tumor diameter of ≥3 cm than in patients with a tumor diameter less than 3 cm (P = 0.001). Patients with muscle-invasive bladder cancer exhibited higher urinary HMGB1 levels compared to patients with non-muscle-invasive bladder cancer (P = 0.033). The cut-off values derived from the ROC analysis were 63.30 pg/ml for distinguishing bladder cancer from urinary tract infection, 30.94 pg/ml for urinary tract infection versus control group and 38.70 pg/ml for bladder cancer vs. control group, respectively. Sensitivity was 59% and specificity was found 77%.ConclusionIn future controlled studies involving larger patient groups, urinary HMGB1 levels can be used for diagnostic and screening purposes in bladder cancer patients.     

高糖环境下肝细胞外泌体对胰腺癌细胞迁移与侵袭能力的影响

背景与目的：在肿瘤微环境的影响和调控下,一些非肿瘤细胞通过外泌体在肿瘤的转移中起着关键作用。研究表明在胰腺癌中,高糖微环境可以促进其侵袭和转移。肝脏既是糖代谢的重要器官,也是胰腺癌转移的高发器官,胰腺癌肝转移的机制尚不清楚。因此,本研究探讨在高糖微环境下肝细胞分泌的外泌体对胰腺癌细胞侵袭、迁移的影响及机制。方法：将永生化肝细胞MIHA分别在高糖与正常糖培养基中培养后,从上清液中提取外泌体,并通过透射电镜、粒径分析和Western blot对两种培养基来源的外泌体进行鉴定;用荧光染料PKH67标记两种培养基来源的外泌体后,分别与荧光染料DAPI标记的胰腺癌细胞PANC-1共培养,通过实时激光扫描共聚焦显微镜观察PANC-1细胞对外泌体的吞噬情况。将PANC-1细胞分别与高糖培养基来源的外泌体（高糖组）及正常糖培养基来源的外泌体（正常糖组）共培养,以未加外泌体培养的PANC-1细胞为阴性对照组,随后分别用划痕试验、Transwell实验检测各组PANC-1细胞的迁移与侵袭能力,用Western blot检测各组PANC-1细胞中上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin和N-c...     

IFITM1在胰腺癌中的表达及对胰腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的:干扰素诱导的跨膜蛋白1(IFITM1)是一种在淋巴细胞中转导同型黏附信号的膜复合物,在胰腺癌组织中表达量异常,但是其在胰腺癌中的作用机制则仍不清楚,因此,本研究初步探讨IFITM1的表达对胰腺癌细胞生物学行为的影响.方法:用Western blot法检测78例胰腺癌患者(32例转移,46例未转移)的癌组织和...     

FBXO43在胃癌中的表达及其生物学功能与作用机制

背景与目的：F-BOX蛋白（FBP）家族成员F-box only protein 43 (FBXO43）在肝癌和结直肠癌等消化系统肿瘤中高表达,促进肿瘤恶性进展,且研究显示,FBXO43促进p53降解,发挥促瘤功能。为此本研究进一步探讨FBXO43在胃癌中的表达及其在胃癌恶性进展中的功能与相关机制。方法：基于TCGA、GTEx和Kaplan-Meier Plotter等在线数据库,分析FBXO43在胃癌组织中的表达及其与胃癌患者预后的相关性。用Western blot和qPCR检测FBXO43在胃癌细胞与正常胃黏膜上皮细胞中的表达水平;用免疫组化检测在胃癌组织与癌旁组织中FBXO43的蛋白水平。利用脂质体转染特异性靶向FBXO43和p53的小分子干扰RNA分子（siFBXO43和sip53）,分别或同时敲低HGC27和MGC803细胞中的FBXO43和p53的表达,利用CCK8、平板克隆形成、Transwell侵袭和迁移等实验,检测细胞生长、增殖、迁移和侵袭能力的影响;利用免疫共沉淀（Co-IP）检测FBXO43和p53的相互作用情况,以及敲低FBXO43后,p53的总泛素化水平。结果...     

A prospective analysis of plasma endostatin levels in colorectal cancer patients with liver metastases

Background: Circulating inhibitors of angiogenesis have been suggested to affect the growth of distant micrometastatic disease in patients with cancer. This study was designed to evaluate circulating endostatin levels in colorectal cancer patients with liver metastases.Methods: Plasma samples from 30 colorectal cancer patients with liver metastases were analyzed for endostatin and vascular endothelial growth factor (VEGF) by using competitive enzyme immunoassays. Samples were compared with plasma from age- and sex-matched healthy controls; values >2 SD above the control mean were considered elevated.Results: Plasma endostatin levels were significantly higher in the 30 cancer patients than controls (P < .0001) and correlated with preoperative VEGF levels (P = .0008). Eighteen patients underwent surgical treatment (liver resection, n = 10; or isolated hepatic perfusion with melphalan, n = 8). Seventeen treated patients were available for follow-up. Eight of 11 patients who progressed had elevated plasma endostatin levels at the time of progression. None of six patients who remained progression free had elevated endostatin levels at last follow-up (P = .02).Conclusions: Plasma endostatin levels are elevated in colorectal cancer patients with liver metastases and correlate with VEGF levels. Elevated endostatin levels during follow-up are associated with disease progression. Understanding the role of endogenous endostatin in cancer patients may lead to novel strategies to inhibit tumor angiogenesis.