实验性帕金森病中线粒体顺乌头酸酶表达的研究

目的探讨线粒体顺乌头酸酶（ACOz）在实验性帕金森病（PD）发病中的表达。方法采用Wistar大鼠6-OHDA右侧内侧前脑束定位注射，制备实验性PD动物模型。在4W后分别进行假手术组和实验组的纹状体定位分离，脑蛋白质提取，荧光差异双向凝胶电泳（DIGE）。通过的Decyder^TM分析软件进行蛋白变化比对，其中AV比〉1．2或〈1．2，并且配对t检验P〈0．05为有意义的蛋白点，针对发现的差异表达的蛋白点进行质谱分析。结果DIGE分析发现表达明显降低的3个差异蛋白质点，经质谱分析确认均为ACO2。结论ACO2在纹状体的表达明显降低，提示线粒体功能障碍在PD发病过程中发挥重要作用。     

6-羟基多巴胺诱导PC12细胞帕金森病模型中CaBP1表达的研究

目的应用蛋白质组学技术研究6-羟基多巴胺（6-OHDA）诱导PC12细胞帕金森病（PD）模型中钙结合蛋白1（CaBP1）的表达。方法在建立6-OHDA诱导PC12细胞帕金森病模型的基础上，分别提取6-OHDA处理组和对照组细胞总蛋白，应用荧光差异双向凝胶电泳（DIGE）技术获得蛋白点的差异表达信息，运用基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱仪（MAID1-TDF MS）鉴定出差异蛋白质。结果DIGE分析发现6-OHDA组表达明显增高的一个蛋白质点，经质谱分析鉴定确认为CaBP1。结论6-OHDA诱导PC12细胞的帕金森病模型中CaBP1表达增高，提示CaBP1增高可能与PD的发病机制有关。     

6-羟基多巴胺诱导SH-SY5Y细胞帕金森病模型中14-3-3蛋白表达的研究

目的 应用蛋白质组学技术研究6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导SH-SY5Y细胞帕金森病(PD)模型中14-3-3蛋白的表达变化.方法 在建立6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞PD模型的基础上,分别提取6-OHDA实验组和对照组孵育24 h的细胞总蛋白,应用荧光差异双向凝胶电泳(DIGE)技术获得蛋白点的差异表达信息,运用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)鉴定出差异蛋白质.结果 DIGE分析发现实验组有一个表达明显上调的差异蛋白质点(P＜0.05),经质谱分析鉴定确认为14-3-3蛋白.结论 6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞的PD模型中14-3-3蛋白表达上调,提示14-3-3蛋白上调可能与PD的发病机制有关.     

PeroxiredoxinⅡ基因在肝癌组织中的表达及意义

目的观察peroxiredoxinⅡ（PrxⅡ）mRNA和蛋白在黄曲霉毒素B1（AFB1）诱发树鼩HCC形成过程中的表达变化,并在人肝癌癌旁组织和正常肝组织中进行验证,以探讨PrxⅡ在肝癌形成过程中的作用。方法应用RT-PCR和Western blot方法,检测6例AFB1诱发的树鼩肝癌、癌旁组织和这些动物肝癌发生前的活检肝组织,以及6例对照组动物相应时期的肝活检组织PrxⅡ在mRNA水平和蛋白水平的表达情况,并在18例人肝癌及其相应癌旁组织以及17名正常人肝组织进行验证。结果PrxⅡ在树鼩肝癌组织中的mRNA和蛋白质表达水平均明显高于相应的癌旁和癌前组织,也高于对照组同期活检肝组织（P〈0．05）;人肝癌组织中PrxⅡ的mRNA和蛋白表达改变和树鼩相符,即肝癌中的表达高于癌旁组织和正常肝组织（P〈0．05）。结论PrxⅡ基因可能与肝癌的发生发展有关,并有可能成为防治肝癌的分子靶标。     

NGF诱导PC12细胞分化晚期的蛋白质组学研究

目的 研究神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞分化晚期的细胞蛋白质组变化,探索NGF诱导细胞分化的分子机制.方法 50 ng/ml NGF作用于PC12细胞96 h,提取细胞总蛋白,应用荧光差异凝胶电泳(DIGE)获取蛋白点的差异表达信息,运用MALDI-TOF质谱鉴定出差异蛋白质.结果 NGF诱导96 h后,共有58个蛋白点发生变化,质谱鉴定出了10种蛋白.结论 本实验首次应用DIGE技术筛选NGF诱导PC12细胞分化晚期的相关蛋白,其中5种蛋白是首次在NGF诱导的PC12细胞中被报道.这些蛋白可能是NGF信号转导过程的新成员,也可以成为药物治疗的新靶点.     

帕金森病脑脊液蛋白质组学研究

目的寻找头痛和帕金森病(PD)患者用药前、后脑脊液差异蛋白质点,确定PD疾病特异性蛋白(DSPs)和药物治疗对蛋白质表达谱的影响。方法收集2004—2006年重庆医科大学附属第一医院神经内科收治的24例PD患者及12例对照组头痛患者脑脊液。用双向凝胶电泳(2D-PAGE)分离蛋白质,银染染色,分析图像寻找有意义的差异蛋白点;进行质谱(MS)鉴定。结果脑脊液蛋白质点主要集中在pH 4~7,头痛组与帕金森用药前后脑脊液电泳图谱蛋白质点分布基本一致,符合临床脑脊液生化常规检查,甲状腺激素结合蛋白、载脂蛋白E在PD患者用药前后相对于对照组都消失,血清转铁蛋白在PD患者用药前后相对于对照组都明显上调。结论用药前后PD患者脑脊液蛋白质点与头痛组脑脊液蛋白质点存在差异,药物治疗对PD患者脑脊液蛋白质表达谱影响不明显。     

荧光差异双向凝胶电泳法筛选大鼠脑缺血相关蛋白

目的 鉴定局灶性脑缺血相关蛋白并筛选早期神经保护蛋白.方法 应用先进的差异蛋白质组学荧光差异双向凝胶电泳（2D DIGE）技术,比较大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）6 h病灶侧大脑皮层和正常大鼠相应部位蛋白质变化;采用DeCyder-DIA软件、单因素方差分析ANOVA,选择两组间蛋白表达量差异具有统计学意义（P＜0.05）且AR＞1.4的蛋白点;基质辅助激光解析/电离-飞行时间（MALDI-TOF）质谱鉴定差异蛋白.结果 脑缺血6 h组与正常对照组比较13个蛋白点符合统计学要求;经质谱分析仅鉴定出一个缺血组明显减少的蛋白点为α-微管蛋白.结论 作为结构蛋白之一的α-微管蛋白在脑缺血早期即发生明显变化,是缺血性脑血管病早期相关蛋白.     

早期肺鳞癌相关蛋白的筛选及其表达验证

目的应用蛋白质组学技术筛选早期肺癌癌变相关蛋白。方法利用双向凝胶电泳方法分离人早期肺鳞癌组织和相应癌旁正常组织总蛋白,选择差异蛋白质点进行质谱分析。免疫组织化学法验证部分差异蛋白质的表达差异。结果用DeCyder软件DIA模块分析显示,每块2-DE胶分离近1470左右个蛋白质点,再经过BVA模块分析,找出在9张图像中均出现,差异有统计学意义(P0.05)、两组间蛋白含量比值在1.5倍以上的差异性蛋白质点24个,成功鉴定14个。选择在癌组织中高表达的差异蛋白点进行质谱分析,最终鉴定为AnnexinⅡ、Cathcpsin D等蛋白质。免疫组织化学检测结果显示,AnnexinⅡ、Cathcpsin D蛋白在肺鳞癌组织中的阳性表达率均显著增高(P0.05)。结论蛋白质组学方法是一种应用于初步筛选早期肺癌相关蛋白的有效方法 ,所鉴定的蛋白为进一步筛选用于肺癌早期诊断及其治疗的分子标志物奠定了前期基础。     

神经胶质成熟因子β对肝星状细胞活化和肝纤维化的影响

目的了解IFN β-1a抑制肝星状细胞活化新的作用分子，并进一步验证该分子与HSC活化和肝纤维化的关系。方法LX-2细胞经2000U／ml IFN β-1a处理48h后，采用二维电泳技术对IFN β-1a处理和未处理的LX-2细胞蛋白质进行分离，质谱鉴定IFN β-1a处理前后LX-2细胞中差异表达超过2倍的蛋白点。对于鉴定出的差异表达分子，通过Western blot和RT-PCR方法验证其在LX-2细胞中、肝组织中以及肺、脑、脾、肾、心组织中的表达情况。结果与对照组相比，IFN—β-1a处理组LX-2细胞中有31个差异蛋白点，其中1个特异表达、5个上调表达、25个下调表达。其中特异表达的蛋白经鉴定为神经胶质成熟因子β（GMFβ）；表达上调的5个点鉴定出2种蛋白，为组蛋白H2A和β-原肌球蛋白；表达下调的25个点鉴定出18种蛋白。进一步对GMFβ的表达情况进行验证发现，与对照组相比，经IFN β-1a作用后的LX-2的GMF β蛋白表达明显（t=1．81，P〈0．01）；大鼠正常肝组织中GMFβ的蛋白和mRNA相对表达量明显高于肝硬化肝组织（蛋白相对表达量为1．81对比0．10，mRNA相对表达量为0．85对比0．12，t值分别为2．53，2．13，P〈0．01）；GMFβ的蛋白和mRNA在大鼠的脑、脾、肝、肾组织中明显表达，而肺、心组织中无表达（t值分别为1．91、1．94，P〈0．01）。结论IFN β-1a处理后的LX-2的蛋白质表达存在差异，这些差异表达的蛋白质可能参与了IFN β-1a对HSC活化的抑制以及HSC的凋亡。IFN β-1a处理后的LX-2以及正常大鼠的肝组织中GMFβ有明显的表达，GMFβ可能抑制HSC的活化以及抑制肝纤维化的进展。     

自发性高血压大鼠肾组织蛋白双向电泳

目的分析氯沙坦干预自发性高血压大鼠肾组织蛋白电泳结果。方法对白发性高血压大鼠和氯沙坦干预后高血压大鼠肾的蛋白质。用蛋白质组学的技术制作二维凝胶电泳图谱，利用Imagemaster2 D v5．0软件分析蛋白点。结果自发性高血压大鼠和氯沙坦干预后凝胶的平均蛋白点数分别为570±48和686±30。氯沙坦干预后有13个蛋白表达发生了显著变化，表达增强4个，表达降低4个，蛋白点消失5个。结论氯沙坦作用于高血压大鼠后，肾组织蛋白表达发生了明显变化，这些差异表达的蛋白点为进一步质谱分析奠定基础。     

投氟大鼠肾组织蛋白质组学的初步研究

目的探讨蛋白质组学技术在投氟所致大鼠肾组织蛋白质的整体表达变化研究中的价值，为氟中毒肾损害机制的研究提供新途径。方法采用固相pH梯度（IPG）等电聚焦双向凝胶电泳方法，对投氟（100mg／L）8周和对照大鼠肾组织的蛋白质进行分离，使用Image master 2Delite图像软件分析电泳图谱．利用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪对两组间比较具有统计学有意义的差异蛋白点进行鉴定。结果在对照组大鼠肾组织蛋白双向电泳图谱上可观察到624个蛋白点．而投氟组肾组织双向电泳图谱上可见到776个蛋白点。与对照组比较，在投氟组大鼠肾组织表达明显改变的蛋白点经质谱鉴定出13种，主要是与细胞代谢、增殖和氧化应激相关的蛋白，其中11种蛋白表达增多，2种降低。结论本实验所采用的双向电泳和质谱鉴定方法可有效分离和分析肾整体蛋白点，并反映出投氟大鼠肾组织细胞代谢旺盛、增殖活跃和氧化应激明显的特点．表明蛋白质组学技术在氟中毒肾损害研究中具有实用价值。     

胃癌及其转移灶差异蛋白质的鉴定和分析

目的应用比较蛋白质组学方法分析和鉴定与胃癌转移相关的蛋白质分子。方法利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术,分离胃癌和其淋巴结转移灶的总蛋白质,采用图像分析软件比较分析两者间差异表达的蛋白质,并对明显差异的蛋白质点进行质谱分析和数据库检索鉴定,同时应用免疫组化方法对鉴定出的蛋白质进行验证。结果23个在胃癌中高表达的蛋白质点经质谱分析和数据库检索鉴定出7个蛋白质,分别为溶胶蛋白、原肌球蛋白2(TM2)、γ肌动蛋白2(ACTG2)、细胞角蛋白19(CK 19)、脑型肌酸激酶、突变结蛋白以及MYL9。免疫组化验证TM和CK的表达,69例胃癌和其转移灶中TM表达率分别为75．3％和37．6％(P<0．05),原发灶的表达率高于转移灶;CK的表达率分别为84％和97．1％(P<0．05),原发灶表达率低于转移灶。结论胃癌转移与细胞微丝相关蛋白、细胞骨架蛋白和代谢相关性蛋白等多种蛋白质有关;蛋白质组学筛选出的蛋白质需要采用其他技术进行大样本的验证。     

热休克蛋白27高表达与肝细胞癌耐药相关

目的应用蛋白质组学技术从蛋白质水平寻找肝癌耐药相关的蛋白质分子。方法以长春新碱（VCR）诱导HepG2细胞建立的耐药肝癌细胞HepG2／VCR为研究对象,用二维电泳技术分离两种细胞的总蛋白,对差异表达的蛋白质点用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱及电喷雾串联质谱进行分析鉴定。再用反义核酸抑制该差异蛋白质表达以研究其与耐药的关系。结果鉴定出一个在肝癌耐药细胞株HepG2／VCR中高丰度表达的蛋白质为热休克蛋白27（HSP27）,反义核酸抑制HSP27的表达后增强了HepG2／VCR对VCR的化疗敏感性（P〈0．05）。结论HSP27可能是与肝癌细胞株HepG2／VCR耐药密切相关的蛋白质。     

不同亚型肠易激综合征患者大肠黏膜组织蛋白质组双向凝胶电泳分析

目的 分析不同亚型肠易激综合征（IBS）患者与正常人大肠黏膜组织蛋白质组表达的差异。方法 采用双向凝胶电泳（2-DE）技术和计算机辅助的图像分析方法，对腹泻型IBS（D-IBS）和便秘型IBS（C-IBS）患者与正常人大肠黏膜组织蛋白质进行分离和比较分析。结果 D-IBS组与正常人大肠黏膜组织比较有11个蛋白点表达明显增强，未发现明显低表达的蛋白质点。C-IBS组与正常人大肠黏膜组织比较有18个蛋白质点的表达存在明显差异，其中有3个蛋白点表达发生明显上调，有15个蛋白点表达发生明显下调。有1个蛋白点表达在D-IBS和C-IBS组均增强；有3个蛋白点在C-IBS组表达减弱，在D-IBS组表达增强。结论 D-IBS、C-IBS患者与正常人大肠黏膜组织蛋白质表达存在明显差异，可能与IBS的发病机制有关；不同亚型IBS的发病机制可能存在不同的分子基础。     

胃痞颗粒治疗胃癌前病变的实验研究

[目的]观察胃痞颗粒对胃黏膜上皮异型增生大鼠胃黏膜上皮细胞凋亡及调控基因蛋白表达的影响。探讨胃痞颗粒治疗胃癌前病变的作用机制。[方法]采用N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）诱导造模。设空白组、模型组、胃痞颗粒Ⅰ组及Ⅱ组，进行常规病理检测、TUNEL细胞凋亡检测、Bcl-2、Fas、P53（突变型）蛋白表达检测。[结果]胃黏膜组织病理学变化，中、重度异型增生率胃痞颗粒Ⅰ、Ⅱ组与模型组相比明显降低（均P〈0．05）；P53（突变型）、Bcl-2基因蛋白表达，胃痞颗粒Ⅰ、Ⅱ组明显低于模型组（均P〈0．05）；Fas蛋白表达，胃痞颗粒Ⅰ、Ⅱ组均高于模型组，但前者差异无统计学意义（P〉0．05），后者差异有统计学意义（P〈0．05）。[结论]胃痞颗粒对大鼠实验性胃黏膜癌前病变有逆转治疗作用。     

肝细胞癌门静脉癌栓相关血清小分子量蛋白质标志物的筛选

目的筛选肝细胞癌门静脉癌栓相关的血清小分子量蛋白质标志物。方法收集健康志愿者、肝细胞癌无癌栓患者和肝细胞癌门静脉癌栓患者3组血清各l2份，用16％SDS-PAGE进行双向电泳，得到3组血清小分子量蛋白质表达图谱；经Image Master软件比对分析后，用基质辅助激光解析飞行时间质谱对差异点进行鉴定。结果在16％SDS-PAGE凝胶中，3×10^3～20×10^3区域内蛋白质条带间距较12．5％SDS-PAGE明显增宽，条带数目明显增多，且3组血清小分子量蛋白质表达图谱中均可清晰显示〈20×10^3的小分子量蛋白质斑点。组间比较显示，3组血清共有15个小分子量差异蛋白质点，经鉴定为5种蛋白质。与健康组比较，无癌栓组中载脂蛋白A-I、脂蛋白CⅢ、转甲状腺素蛋白和DNA拓扑异构酶Ⅱ表达降低，而结合珠蛋白-2表达增高；门静脉癌栓组5种蛋白质表达均较无癌栓组降低。结论在肝细胞癌的发生和发展过程中，血清小分子量蛋白质表达谱发生明显变化，差异表达的小分子量蛋白质有可能为肝细胞癌和门静脉癌栓早期预测及治疗监测提供参考。     

钙激活蛋白酶与蛋白酶体抑制剂诱导细胞凋亡的机制

目的探讨蛋白酶体抑制剂诱导PCI2细胞凋亡的作用通路，为深入研究泛素-蛋白酶体系统（UPS）功能障碍诱发细胞凋亡发病机制提供新线索。方法建立PSI诱导的PCI2细胞模型，在48h提取蛋白，应用荧光差异凝胶电泳（DIGE）系统获得差异蛋白点，运用基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱仪（MALDI—TOFProMS）鉴定出差异蛋白。结果实验组与对照组比较，在48h看到细胞凋亡（细胞核呈固缩状或碎裂状），凋亡率达14．86％。实验组钙激活蛋白酶（calpain）与对照组比较表达量显著增高，有统计学意义（P〈0．05）。结论首次发现在蛋白酶体抑制PC12细胞模型中calpain蛋白表达显著增高。结合GRtr78和GRP94表达上调的发现提示内质网应激（ERS）在UPS功能障碍引起细胞凋亡过程中扮演重要角色。     

胃癌患者有根舌苔与无根舌苔差异蛋白标志物的筛选研究

[目的]探讨胃癌患者有根舌苔与无根舌苔的差异蛋白标志物。[方法]采用荧光差异凝胶电泳（2DDIGE）标记、分离蛋白质，Decyder差异分析软件进行分析、识别差异表达的蛋白质，选择差异点胶内胰酶消化后，应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析差异蛋白质点。[结果]在患者舌苔标本中共鉴定出12个蛋白质点出现L5倍以上的表达差异，其中7个上调，5个下调。[结论]有根舌苔与无根舌苔存在多个差异表达的蛋白质，可能与其形成相关。     

怀化侗族高血压人群IL-1Ra、CK-18、α-烯醇化酶蛋白质表达差异

目的分析怀化侗族高血压患者血淋巴细胞蛋白质谱,寻找高血压患者血淋巴细胞差异蛋白质。方法应用MALDI-TOF-MS技术检测130例血淋巴细胞标本(侗族高血压50例,汉族高血压40例,侗族正常人群40例)的蛋白质质谱,用MatrixScience公司的Mascot对蛋白质质谱数据进行数据库查询比对,并搜索鉴定蛋白。结果三组均获得重复性好的血淋巴细胞蛋白质双向凝胶电泳图谱。通过对其中3个差异表达蛋白点分析,并经质谱鉴定。与侗族正常人对照,侗族高血压人群α-烯醇化酶表达上调,CK-18表达差异无统计学意义(P﹥0.05),IL-1Ra表达下调;汉族高血压人群CK-18、α-烯醇化酶两个点表达上调,IL-1Ra表达下调。结论 IL-1Ra和α-烯醇化酶可作为预测高血压发生、发展程度的一个候选生物学标志物。     

2型糖尿病患者脂肪组织蛋白谱差异研究

目的比较肥胖型2型糖尿病患者和非2型糖尿病对照者脂肪组织蛋白谱的差异。方法采用蛋白双向凝胶电泳技术分离脂肪组织总蛋白，PD—Quest软件分析电泳结果，选择有显著差异的蛋白点做介质辅助的激光解吸飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析。结果两种脂肪组织标本大部分蛋白点匹配。经质谱分析和数据库搜索有一个未知蛋白和两个巳知序列蛋白在两种脂肪组织的表达有显著性差异。结论双向凝胶电冰技术和MALDI-TOF-MS是进行脂肪组织蛋白质组研究的有效手段，分析表达差异的蛋白质可以进一步明确肥胖症、2型糖尿病病因，为药物治疗提供新的靶点。