重组TGF_α-PE40对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用(英文)

目的:探讨基因重组转换生长因子α-绿脓杆菌外毒素融合蛋白(TP40)对血管平滑肌细胞(SMC)增殖的抑制作用。方法:用RNA印迹法和免疫组化检测原代培养增殖期SMC及静止期SMC表皮生长因子受体(EGFR)的表达,用结晶紫染色法和[~3H]亮氨酸掺入法检测TP40对增殖期SMC和静止期SMC增殖及蛋白质合成的抑制作用,用过量EGF(TP40浓度的100倍)竞争拮抗TP40的细胞毒作用。结果:增殖期SMC EGFR的mRNA及受体蛋白质的表达显著高于静止期SMC。TP40浓度为10及100μg·L~(-1)时,对增殖期SMC增殖及蛋白质合成的抑制作用较静止期SMC强(P<0.01),对[~3H]亮氨酸掺入抑制的IC_(50)及其95％可信限分别为8.01(5.05-12.69)和121.95(90.98-163.47)μg·L~(-1)。过量EGF能完全拮抗TP40的细胞毒作用。结论:增殖期SMC能高水平地表达EGFR,TP40对增殖期SMC的增殖具有导向抑制作用,作用部位为细胞的EGFR。     

石蒜碱内铵盐对小鼠艾氏腹水癌细胞周期及核分裂的影响

石蒜碱内铵盐是一种有效的抗癌物质,本工作以荧光激活细胞分类器方法证明,它在治疗剂量40mg/kg时能使G_1期细胞百分比下降,G_2+M期细胞明显上升,对G_2期细胞向G_1期的过渡有阻滞作用。在给药后8～72h使癌细胞有丝分裂指数明显下降。至第6d趋向恢复。此药对早期和中期细胞分裂象的抑制作用较强,尤其在用药后8h为最显著,对晚期、末期的作用不明显。     

重组人睫状神经营养因子对大鼠胶质瘤C_6细胞系体外生长的影响

目的 观察重组人睫状神经营养因子(rhCNTF)对大鼠胶质瘤C6细胞系体外生长的影响。方法 MTT、软琼脂克隆试验和流式细胞仪检测C6细胞体外增殖、克隆形成和细胞周期。结果 20～2000 ng/ml rhCNTF可明显抑制C6细胞的增殖,其克隆形成率降低显著,G_1、G_2期细胞明显增多,S期细胞显著减少。结论 rhCNTF对C6细胞的生长抑制作用可能与其参与瘤细胞的生长调节有关,表明CNTF作为一种细胞调节因子对胶质瘤具有潜在治疗作用。     

丹酚酸B和丹参酮ⅡA对大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞增殖的影响

目的探讨丹酚酸B(salvianolic acid B,SAB)和丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TA)单独用药、二者配伍对SpragueDawley(SD)大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞增殖的影响,以及在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导下,SAB和TA有效成分配伍对大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazoli-um,MTT)方法检测SAB和TA对大鼠胸主动脉成纤维细胞增殖的影响,流式细胞术检测SAB和TA有效成分配伍对细胞周期的影响。结果 MTT检测结果显示,SAB和TA单独用药均可不同程度抑制成纤维细胞增殖,通过一系列浓度筛选,分别获得3个有效浓度,将其两两组合后比较对细胞生长的抑制作用,结果显示TA(10~(-8)mol·L~(-1))和SAB(10-5mol·L~(-1))组合显示明显的抑制作用(P<0.01)。而且,TA(10~(-8)mol·L~(-1))和SAB(10~(-5)mol·L~(-1))配伍组合亦能对AngⅡ诱导的细胞增殖产生明显的抑制作用,进一步采用流式细胞术观察SAB、TA及二者配伍对细胞周期的影响,结果显示,SAB和TA配伍明显地阻滞细胞在G_0/G_1期。对AngⅡ预刺激的细胞,SAB和TA组合,也明显阻滞细胞在G_0/G_1期;而SAB和TA分别给药,细胞主要被阻滞在S期。结论SAB和TA对成纤维细胞的增殖有明显的抑制作用,对AngⅡ诱导的细胞增殖也有明显的抑制作用,并且这种抑制作用主要是通过将细胞阻滞在G_0/G_1期而发挥作用的。     

芒柄花黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的作用

目的探讨芒柄花黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞生长的作用。方法获取手术切除的人增生性瘢痕组织以及局部皮瓣转移修复后剩余的正常皮肤,提取成纤维细胞。通过MTT试验检测不同浓度的芒柄花黄素对成纤维细胞增殖的作用,应用流式细胞术对芒柄花黄素处理后的成纤维细胞周期进行分析。通过Annexin V-FITC/PI双染色法和Hoechest 33258染色观察成纤维细胞的凋亡情况。通过Western blot与RT-PCR试验,检测芒柄花黄素对细胞周期蛋白Cyclin D1和凋亡调节蛋白Bcl-2的作用。结果与对照组比较,芒柄花黄素对正常皮肤成纤维细胞的增殖影响较小,对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用,且药物浓度越高、作用时间越长,抑制作用越强。成纤维细胞大部分阻滞于G_1期,S期的细胞减少,细胞周期的进程受到阻断。芒柄花黄素能够通过抑制细胞周期蛋白Cyclin D1来影响细胞周期的进程,将细胞周期阻滞于G_1期;通过抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达诱导成纤维细胞的凋亡,从而实现对细胞生长的抑制作用。结论芒柄花黄素能够抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖并诱导其凋亡,可考虑用于增生性瘢痕的预防与临床治疗。     

孕激素对人子宫内膜癌细胞体外增殖、凋亡的影响

目的探讨孕激素对人子宫内膜癌细胞对体外增殖及凋亡的影响。方法体外培养子宫内膜癌细胞,采用流式细胞仪观察不同浓度孕酮对细胞周期及凋亡率的影响、光学显微镜检测其形态学变化、MTT比色法观察不同浓度孕酮对细胞增殖的作用。结果流式细胞仪分析,实验组G_0/G_1期上升,S期下降,细胞凋亡率上升;光镜可观察到细胞凋亡的形态学改变;MTT结果显示,随着孕酮浓度的增加,其对细胞生长的抑制作用明显增强,与对照组比较,差异有显著性,且具有剂量依赖性。结论孕酮抑制子宫内膜癌细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

瓜蒂水提物和醇提物对食管癌TE-1、EC-1细胞的增殖、迁移、克隆形成的影响及机制研究

目的:研究瓜蒂水提物和醇提物对食管癌TE-1、EC-1细胞增殖、迁移、克隆形成的影响及作用机制。方法:体外培养TE-1、EC-1细胞,分别加入质量浓度均为0、1.562 5、3.125、6.25、12.5、25、50、100、200μg/m L的瓜蒂水提物或醇提物(以提取物粉末计)进行培养,采用MTT法检测细胞的生长抑制率并计算半数抑制浓度(IC_(50))。将TE-1、EC-1细胞分为TE-1/EC-1空白组、TE-1/EC-1瓜蒂水提物组(药液浓度均为IC_(50))、TE-1/EC-1瓜蒂醇提物组(药液浓度均为IC_(50)),采用实时无标记细胞分析(RTCA)法检测各组细胞的增殖与迁移,绘制细胞增殖、迁移曲线;采用显微镜观察各组细胞形态学的变化;采用软琼脂克隆形成试验分析各组细胞克隆形成能力的变化,并计算细胞克隆形成率;采用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期、凋亡率;采用Western blotting检测各组细胞表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶C-α(PKC-α)的相对表达量。结果:瓜蒂水提物作用于TE-1、EC-1细胞的IC_(50)分别为49.24、76.38μg/m L,瓜蒂醇提物作用于TE-1、EC-1细胞IC_(50)分别为9.08、14.53μg/m L;瓜蒂水提物和醇提物加药后30 h内对细胞有增殖抑制作用;瓜蒂水提物和醇提物加药后60 h内对细胞有迁移抑制作用。与TE-1/EC-1空白组比较,各加药组细胞数量明显减少,细胞结构松散,多数细胞轮廓消失、变圆等;细胞克隆形成率显著下降(P<0.01);G_2期细胞百分率显著升高(P<0.01),G_1期、S期细胞百分率显著降低(P<0.05);早、晚期凋亡率均显著增加(P<0.05);EGFR、PKC-α蛋白相对表达量显著降低(P<0.01)。与TE-1/EC-1瓜蒂水提物组比较,TE-1/EC-1瓜蒂醇提物组细胞克隆形成率显著下降(P<0.05);G_2期细胞率显著升高(P<0.05);EGFR、PKC-α蛋白相对表达量显著降低(P<0.01);TE-1瓜蒂醇提物组早、晚期细胞凋亡率显著降低(P<0.05);EC-1瓜蒂醇提物组早、晚期细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论:瓜蒂水提物和醇提物可影响TE-1、EC-1细胞增殖、迁移、克隆形成的能力,促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调EGFR、PKC-α蛋白有关。     

保尔佳抗恶性肿瘤的临床应用

<正> 保尔佳(Polyerga)为具有天然活性的新型抗肿瘤药,通过非毒性地抑制糖酵解使肿瘤细胞营养缺乏,进而变性死亡发挥抗瘤作用。保尔佳主要作用于G_0和G_1期肿瘤细胞,干扰其能量代谢,使由G_0和G_1期向G_2和S期的转化过程发生障碍。亦通过激活机体免疫系统,提高机体免疫力。由于保尔佳的抑制肿瘤细胞和激活免疫系统的双重作用,单独或与化疗、放疗、介入疗法联合用于治疗各种恶性肿瘤,效果均佳。1.单独用于各种晚期肿瘤     

3,4-二羟基苯乙酮(DHAP)对离体心肌电活动和机械活动的作用

3,4-二羟基苯乙酮(DHAP)是禿毛冬青叶中有效成分。临床用于冠心病患者,对心绞痛及部分患者的心律失常有一定缓解作用。整体动物实验表明,DHAP能扩张全身动脉,降低心脏后负荷,增加冠脉血流量。此作用可能为DHAP临床效应的作用机理之一。DHAP对心肌细胞直接作用的研究很少。范世藩报道DHAP 0.5～1mg/ml(相当于3.5～     

胰岛素-反义c-myb-硫代磷酸寡脱氧核苷酸对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的研究新制剂胰岛素 反义c myb 硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (PS ODN)对平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法大鼠主动脉平滑肌细胞 (SMC)置DMEM中培养。用 2 0 %胎牛血清刺激SMC快速增殖。胰岛素与反义c myb PS ODN在一定条件下 ,如反应液、pH、温度、离子浓度 ,共孵育形成交联物。通过高效液相色谱定性和纯化该交联物。用3H TdR掺入率反映SMC增殖抑制效率。结果在加 2 0 %FBS的DMEM中生长的SMC胰岛素结合力明显增强。交联物胰岛素 反义c myb PS ODN对SMC增殖的抑制作用比单纯反义c myb PS ODN的抑制作用强 ,抑制效率分别为 4 8.3 %和 2 9.5 %。结论胰岛素受体靶向途径可能为一种治疗再狭窄的有效方法。     

人参二醇组皂苷对小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制

目的:探讨人参二醇组皂苷对小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制.方法:在小细胞肺癌细胞的培养液中加入不同浓度(50～250mg/L)的人参二醇组皂苷,培养一定时间后,通过测定其中氚标胸腺嘧啶脱氧核苷酸掺入量(3H-TdR),及以MTT法来评定小细胞肺癌细胞增殖程度.同时,测定细胞培养液中超氧化物歧化酶(S0D)、脂质过氧化物水平,以反映细胞氧化还原状态.结果:随着人参二醇组皂苷浓度的增加,3H-TdR及MTT测定的0D值逐渐减少,细胞增殖率逐渐增加,SOD水平逐渐增加,丙二醛(MDA)水平逐渐减少.当人参二醇组皂苷浓度为150,200,250mg/L时,各指标与对照组(未用药)相比均具有显著性差异(P＜0.05).结论:人参二醇组皂苷可增加S0D水平,减少活性氧自由基的产生,抑制小细胞肺癌细胞的增殖.     

甘草酸对血清和组织胺诱发的大鼠气道平滑肌细胞增生的影响

目的　观察甘草酸对血清和组织胺诱发的大鼠气道平滑肌细胞 (ASMC)增生的影响。方法　MTT法、细胞计数法和流式细胞术检测体外培养的ASMC的光密度、细胞数和细胞周期。结果　①在含 10 0g·L-1FCS的培养液中加入 6×10 -5mol·L-1的甘草酸可使A570 的增速增加 ,而加入 384×10 -5mol·L-1和 15 36× 10 -5mol·L-1却使A570 的增速减慢 ;在含 10 -2 mol·L-1组织胺的培养液中加入甘草酸使A5 70的增速减慢 ,浓度越大作用越明显。②在含 10 0g·L-1FCS的培养液中加入 6× 10 -5mol·L-1的甘草酸可促进细胞增生 ,而加入 384× 10 -5mol·L-1和 15 36× 10 -5mol·L-1则抑制细胞增生 ;在含 10 -2 mol·L-1组织胺的培养液中加入甘草酸 ,细胞增生受到抑制 ,浓度越大作用越明显。③在 10 0g·L-1FCS或 10 -2 mol·L-1的组织胺中培养 96h ,随着甘草酸浓度的增加 ,G1期细胞数增多 ,S期和G2 +M期细胞数减少。结论　①对FCS刺激引起的ASMC增生 ,低浓度甘草酸有促进作用 ,高浓度有抑制作用。②对组织胺刺激引起的ASMC增生 ,低浓度和高浓度甘草酸都有抑制作用     

Platelet-derived growth factor (PDGF) accelerates induction of competence, and heparin does not inhibit PDGF-induced competence in primary cultured smooth muscle cells of rat aorta.

The time-dependent effect of platelet-derived growth factor (PDGF) on cell proliferation was investigated to clarify whether PDGF accelerates the rate of proliferation or its start in primary cultured smooth muscle cells (SMC) of rat aorta. In synchronized SMC at the G0 phase, 1, 10 and 100 ng/ml PDGF started DNA synthesis at 24, 15-18 and 12 hr, respectively, after stimulation by 3% fetal bovine serum (FBS) or hypophysectomized rat plasma (deficient in insulin-like growth factor-I (IGF-I)). Heparin (1, 10 or 100 micrograms/ml) decreased only the rate of DNA synthesis stimulated by PDGF in synchronized SMC. DNA synthesis in non-synchronized cells stimulated by PDGF with FBS was determined up to 10 days in culture. The stimulation with 1% FBS plus 30 ng/ml PDGF potentiated the DNA synthesis which was saturated with stimulation by 10% FBS alone, suggesting that prolonged treatment of PDGF transforms SMC. These results demonstrated that PDGF concentration-dependently accelerated the induction of competence independently of IGF-I, and heparin did not inhibit PDGF-induced competence but inhibited progression in primary cultured SMC of rat aorta.     

Direct vascular effects of HR780, a novel 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor

1. We have examined the effects of HR780, a novel 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A (HMG-CoA) reductase inhibitor, on porcine endothelial cell (EC) injury induced by xanthine (X)/xanthine oxidase (XO), a source of superoxide anion. Furthermore, the effects of HR780 on platelet-derived growth factor (PDGF)-induced migration and fetal calf serum (FCS)-induced proliferation of rabbit smooth muscle cells (SMC) were investigated. 2. Probucol, at 10 micro mol/L, significantly (P < 0.001) and completely suppressed lactate dehydrogenase leakage induced by X/XO. At 10 micro mol/L, HR780 significantly (P = 0.010) inhibited X/XO-induced EC injury. 3. HR780 dose-dependently inhibited PDGF-induced SMC migration and FCS-induced SMC proliferation. The addition of mevalonate completely abolished the inhibitory effect of HR780 on SMC proliferation. Another HMG-CoA reductase inhibitor, simvastatin (0.1-100 micro mol/L), also inhibited the migration and proliferation responses as potently as HR780. In contrast, pravastatin (0.1-100 micro mol/L) did not show any effects. 4. This in vitro study provides the first evidence that HR780 protects the vascular endothelium from oxidant stress and inhibits the migration and proliferation of SMC.     

前胡丙素对牛主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨前胡丙素(pra-C)对牛主动脉平滑肌细胞(SMC)增殖的影响 方法:细胞DNA的合成量由~3H-胸腺嘧啶核苷[~3H]TdR)掺入试验测定,应用流式细胞术测定细胞周期,用乳酸脱氢酶活性测定观察药物的毒性.结果:无论有无血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),在0.01μmol/L到10μmol/L浓度范围内,pra-C均可呈浓度依赖性地抑制SMC的增殖,抑制作用主要与阻止细胞进入有丝分裂期有关,而与细胞毒性无关.结论:pra-C能够完全阻断Aug Ⅱ诱导SMC的增殖效应,部分阻止小牛血清诱导的细胞分裂,这对于血管增生性疾病的防治有重要意义.     

甘糖酯对培养的牛脑微血管平滑肌细胞增殖的影响

应用牛脑微血管平滑肌细胞(BCMSMCs)体外培养技术,观察了酸性多糖药物甘糖酯(PGMS)对10％小牛血清(FCS)、白细胞介素1(IL-1)致BCMSMCs过度增殖的影响。将培养的5～8代细胞接种于96孔板,正常组加入含10％FCS的MEM培养液(或含有50u/ml IL-1的0.4％FCS培养液),给药组分别加入含有PGMS0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mg/ml浓度的10％FCS培养液(或50u/ml IL-1的0.4％FCS培养液),以结晶紫染色,MTT比色,测定72h后细胞生长情况。结果显示,与10％FCS组和IL-1组比较,PGMS组BCMSMCs的增殖受到明显抑制(P<0.01),提示PGMS对10％FCS和IL-1引起的BCMSMCs异常增殖具有明显的抑制作用。     

猪十二指肠类肝素对动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的　研究类肝素对平滑肌细胞增殖的影响及其机制。方法　分别以结晶紫和MTT染色、透射电镜及流式细胞仪等方法,观察类肝素对平滑肌细胞增殖,细胞形态,细胞内α-肌动蛋白含量及原癌基因c-myc,c-fos表达的影响。结果　类肝素0.2,0.4及0.8 mg.mL^-1可以抑制10%小牛血清所致平滑肌细胞增殖,类肝素0.8 mg.mL^-1可以使细胞维持类似收缩型的形态学表现,使细胞内α-actin含量增加,c-myc, c-fos原癌基因表达减少。结论　类肝素可以抑制平滑肌细胞增殖,其机制可能与抑制细胞表型转化,抑制细胞内原癌基因表达有关。     

木黄酮对心肌成纤维细胞增殖的影响

观察木黄酮对心肌成纤维细胞 (CF)增殖的影响 .采用培养的新生大鼠CF ,以 [3 H]TdR参入率作为细胞增殖指标 ;流式细胞仪分析细胞周期 .结果显示木黄酮 (0 .5～ 50 μmol·L- 1)具有浓度依赖性地抑制 2 .5%胎牛血清刺激CF增殖的作用 ,并将CF细胞周期阻抑在G2 /M期 ;提示木黄酮有望成为防治心脏纤维化的物质     

■牛儿基■牛儿醇转移酶抑制对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的研究1种牛儿基牛儿醇转移酶抑制(GGTI-286)对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响。方法用含有不同浓度的GGTI-286处理被10%胎牛血清(FCS)或血小板源生长因子(PDGF)刺激的大鼠肾小球系膜细胞,应用细胞增殖ELISA系统测定溴化脱氧尿嘧啶核苷进入细胞的量来评估DNA的合成,并测定细胞的数量。用蛋白质印迹法研究GGTI-286对原癌基因(Ras)蛋白和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活化的影响。结果GGTI-286对10%FCS或PDGF刺激大鼠肾小球系膜细胞DNA的合成抑制是剂量依赖性,并且能够抑制细胞的生长,应用台盼蓝排除试验,GGTI-286并不改变系膜细胞的存活率。GGTI-286也能够抑制10%FCS或PDGF诱发的肾小球系膜细胞Ras蛋白活动和MAPK的激活。结论GGTI-286通过影响肾小球系膜细胞Ras蛋白活动和MAPK的激活而抑制肾小球系膜细胞增殖,这可能为治疗系膜增殖性肾小球疾病提供1种新的方法。     

Relationships among the cell cycle,cell proliferation,and aryl hydrocarbon receptor expression in PLHC-1 cells

Aryl hydrocarbon receptor (AHR) ligands such as 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) cause altered cell proliferation in many tissues in vivo and cell types in vitro, and the AHR has been suggested to play a role in cell cycle regulation in mammalian systems. However, the mechanisms underlying these effects are poorly understood. The overall objective of the present work was to investigate possible interactions between cell proliferation, the cell cycle, and AHR signal transduction in a piscine system, the PLHC-1 cell line, which is being used increasingly in aquatic toxicological research. The specific objectives were to characterize proliferation rates and the cell cycle in these cells, to measure effects of TCDD on cell proliferation, and to determine if expression of the AHR varies during the cell cycle. The doubling time of PLHC-1 cells was determined to be 22 h, and the durations of the G1, S and G2/M stages of the cell cycle were 13, 3, and 6 h, respectively. A minimum seeding density of 1.2 x 10(5) cells/cm(2) in medium with 10% calf serum and 0.3 x 10(5) cells/cm(2) in 10% fetal bovine serum was found to be required for subsequent proliferation. Of several cell cycle inhibitors tested, only aphidicolin and nocodazole were effective for obtaining synchronous cell populations. TCDD was found to inhibit PLHC-1 cell proliferation in a time- and dose-dependent manner in multiple passages of one sub-clone, but not in several other sub-clones. Neither AHR mRNA nor protein expression varied during the cell cycle, as measured by RT-PCR and specific binding of [(3)H]TCDD in synchronous PLHC-1 cells. This work establishes techniques for identifying and characterizing possible interactions between the cell cycle and AHR signal transduction in PLHC-1 cells. Taken together, the results indicate that PLHC-1 cells are amenable to analysis of AHR-cell cycle interactions, but that heterogeneity of sub-clones may complicate their use for investigating AHR-mediated changes in proliferation.