SKP2 siRNA对HL-60/A细胞周期及药物敏感性的影响

  【目的】 观察S期激酶相关蛋白2(SKP2)siRNA转染后耐阿霉素的HL-60细胞(HL-60/A)P27kip1及多药耐药相关蛋白MRP表达水平的变化,探讨其对细胞周期及药物敏感性的影响｡【方法】 siRNA转染HL-60/A细胞,荧光显微镜､流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR､Western-blot 检测转染后细胞SKP2､P27kip1､MRP mRNA及蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期,药物毒性分析CCK-8法检测细胞对化疗药物的敏感性｡【结果】 SKP2 siRNA转染24 h后,HL-60/A的SKP2 mRNA及蛋白表达分别下调43%(P = 0.020)和69.6%(P = 0.003);P27kip1蛋白上调78.1%(P = 0.049),P27kip1 mRNA表达无明显变化;MRP mRNA及蛋白表达分别下调55%(P = 0.001)和62.3%(P = 0.001);G0/G1期细胞比例升高;细胞对阿霉素､柔红霉素､阿糖胞苷的敏感性分别提高1.15倍､4.79倍和3.76倍｡【结论】 SKP2 siRNA下调HL-60/A细胞的SKP2表达可使P27kip1蛋白表达升高,细胞增殖周期延长;细胞耐药性的改善可能与MRP表达的降低有关｡     

细胞调控因子SKP2的表达与HL-60/A耐药的关系

【目的】观察细胞周期调控因子SKP2、P27kip1在白血病耐药细胞株HL-60/A和非耐药细胞株HL-60细胞中的表达及细胞周期比例,探讨细胞增殖与耐药的关系。【方法】RT-PCR、Western blot检测SKP2、P27kip1、MRP mRNA及蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期,采用药物毒性分析方法检测细胞对化疗药物的敏感性。【结果】白血病耐药细胞株HL-60/A对阿霉素、柔红霉素、阿糖胞苷的耐药倍数分别为49.14倍、39.20倍和6.43倍;HL-60/A细胞MRP的表达高于HL-60;HL-60/A和HL-60细胞株G0/G1细胞期比例分别为（35.10±0.81）%和（43.96±1.12）%,两组比较P〈0.05;HL-60/A细胞中SKP2的表达高于HL-60细胞;P27kip1的表达低于HL-60细胞。【结论】HL-60/A细胞多药耐药机制产生与MRP的表达增高有关。耐药HL-60/A处于增殖期的细胞比例高,具有更高的增殖活性。     

结缔组织生长因子介导高糖诱导肾小管 上皮细胞肥大的机制

 【目的】 研究高糖诱导肾小管上皮细胞肥大的作用途径及可能机制｡【方法】 HK-2细胞分正常对照组(培养基含葡萄糖1 g/L),等渗对照组(葡萄糖1 g/L + 甘露醇3.5 g/L)和高糖组(葡萄糖4.5 g/L)培养｡收集各组培养至24 h,48 h,96 h的细胞,检测结缔组织生长因子(CTGF)､p27kip的mRNA水平､CTGF､p27kip的蛋白水平､细胞增殖活力､细胞周期分布及细胞总蛋白含量｡另外检测各组培养30 min､1 h､24 h､48 h时的磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)水平｡每个检测指标设3个重复样本｡ 【结果】 高糖刺激可引起HK-2细胞的CTGF､p27kip的mRNA及蛋白表达水平显著升高,ERK1/2磷酸化激活,阻滞于G1期的细胞显著增多,细胞增殖活力受抑制,细胞肥大主要指标胞内蛋白总含量进行性增高｡ 【结论】 证实了高糖可通过上调CTGF激活ERK1/2信号转导,从转录水平上调p27kip,从而使增殖细胞阻滞于G1期诱导细胞肥大｡     

PTEN 基因影响K562细胞周期的分子机制探讨

  【目的】 探讨抑癌基因PTEN对人慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞周期的影响｡ 【方法】 将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及对照载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病细胞系K562｡MTT检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测转染效率､细胞凋亡率和细胞周期的变化;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN､Cyclin D1､Cyclin D2､CDK4､P27Kip1 mRNA水平变化,Western blot检测上述蛋白表达水平的变化｡ 【结果】 与Ad-GFP组比较,Ad-PTEN-GFP 转染K562细胞后,细胞凋亡率最高为30%,细胞周期显示:G0/G1期细胞比例由54.9%增加至78.5%,G2/M期比例由30.2%降至13.6%,Cyclin D1､Cyclin D2､CDK4 mRNA及CyclinD1蛋白表达降低,P27Kip1 mRNA及蛋白表达增加｡ 【结论】 PTEN基因高表达可以促进K562细胞凋亡,并通过抑制Cyclin D1､Cyclin D2､CDK4及增加P27Kip1表达使细胞周期阻滞在G0/G1期｡     

吉西他滨对人肺癌A549细胞株CN-Ⅱ, APE/Ref-1 mRNA 和蛋白表达的影响

 【目的】 研究人肺癌A549细胞株在吉西他滨化疗时CN-Ⅱ, APE/Ref-1基因表达的变化,并探讨其在肺癌化疗耐药中所起的作用｡【方法】 不同浓度吉西他滨0､10､20､40及60 μmol/L作用人肺癌A549细胞株24 h,分别以RT-PCR及Western blot方法测定用药后CN-Ⅱ和APE/Ref-1的mRNA及蛋白表达情况｡ 【结果】 吉西他滨作用人肺癌A549细胞株24 h后, CN-Ⅱ和APE/Ref-1的mRNA及蛋白表达水平均明显上升,并与吉西他滨的浓度呈正相关(CN-Ⅱ RT-PCR: r = 0.687, P = 0.009; Western blot: r = 0.594, P = 0.021; APE/Ref-1 RT-PCR: r = 0.669, P = 0.010; Western blot: r = 0.562, P = 0.029)｡ 【结论】 CN-Ⅱ和APE/Ref-1在肺癌化疗时表达明显增强,可能与化疗耐药性的产生有关,并提示针对CN-Ⅱ和APE/Ref-1的靶向干预可能有助于提高肺癌的化疗敏感性｡     

曲古抑菌素A对膀胱癌T24细胞增殖及Apaf-1和APC基因表达的影响

 【目的】 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人膀胱癌T24细胞的增殖抑制作用及对Apaf-1&#65380;APC基因表达的影响&#65377; 【方法】 采用3 × 10-4 mmol/L TSA作用T24细胞,MTT法检测TSA对T24细胞生长的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测TSA作用前后T24细胞周期和凋亡的变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TSA作用前后膀胱癌细胞中Apaf-1&#65380;APC mRNA表达的变化&#65377;【结果】 TSA对T24细胞的生长具有明显的抑制作用;TSA作用后T24细胞的G0/G1期比例增加,S期比例减少,细胞凋亡率增加(P < 0.05);RT-PCR结果显示TSA处理能明显诱导Apaf-1&#65380;APC基因表达增加&#65377;【结论】 TSA能抑制T24细胞体外生长,诱导细胞周期阻滞和凋亡,其可能通过诱导Apaf-1&#65380;APC基因表达增加而发挥体外抗膀胱癌作用&#65377;     

Biglycan 对地塞米松诱导血管平滑肌细胞钙化的作用

  【目的】 初步探讨地塞米松导致VSMCs钙化的分子机制&#65377; 【方法】 用地塞米松(Dex)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs),检测其双链蛋白聚糖(BGN)的表达&#65377;并通过10-8 mol/L Dex诱导BGN重组腺病毒Ad/BGN感染的VSMCs,分别检测VSMCs钙化程度,BGN&#65380;osteocalcin&#65380;cbfa1&#65380;骨形态生成蛋白4(BMP4)的表达&#65377;实验分4组(n = 3):Ad/Bgl-BGP组:用空载体Ad/Bgl感染细胞;Ad/BGN-BGP组:用Ad/BGN感染细胞;Ad/Bgl-Dex组:用Dex诱导Ad/Bgl感染的VSMC;Ad/BGN-Dex组:用Dex诱导Ad/BGN感染的VSMCs&#65377; 【结果】 Ad/BGN转染后,VSMCs钙化增强,osteocalcin&#65380;cbfa1 和BMP4蛋白水平较之相应对照组表达明显增多(P < 0.05),而Dex诱导组在转染Ad/BGN后osteocalcin&#65380;cbfa1&#65380;BMP4蛋白表达更多&#65377;Dex诱导后,Ad/BGN转染的VSMCs,其BGN蛋白的表达量较未加Dex的相应对照组显著增加(P < 0.05)&#65377; 【结论】 BGN能促进地塞米松诱导的血管平滑肌细胞钙化&#65377;     

同型半胱氨酸诱导细胞周期G1/S阻滞抑制人脐静脉内皮细胞的增殖

  【目的】 探讨同型半胱氨酸( Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和细胞周期的影响及其可能的机制&#65377;【方法】 HUVEC细胞采用含200 mL/L胎牛血清&#65380;0.06 g/L内皮细胞生长添加剂(ECGS)&#65380;0.05 g/L肝素的M199培养&#65377;分为对照组(Control)&#65380;50 μmol/L腺苷(Ade)组(A50)&#65380;50 μmol/L Hcy组(H50)以及Ade 50 μmol/L+Hcy 50 μmol/L组(A50H50)&#65377;分别通过细胞计数和MTT法观察Hcy对HUVEC增殖的影响,流式细胞仪检测Hcy对HUVEC细胞周期的影响,Western Blot检测Hcy对细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)及磷酸化状态的影响&#65377;【结果】 A50H50组的细胞数与细胞增殖活性显著低于对照组&#65380;A50组和H50组(P < 0.05)&#65377;A50H50组G1期细胞百分比显著高于对照组,S期细胞百分比则显著低于对照组(P < 0.05),出现明显的G1/S期阻滞&#65377;A50H50组ERK磷酸化水平明显低于对照组&#65377;【结论】 Hcy(50 μmol/L)和Ade(50 μmol/L)联合使用可引起HUVEC细胞周期的G1/S阻滞,抑制HUVEC细胞的增殖,其机制可能与ERK的磷酸化水平降低有关&#65377;     

生长激素促进体外培养的Bel-7402肝癌细胞增殖

  【目的】 了解重组人生长激素(rhGH)对体外培养的Bel-7402肝癌细胞增殖的影响&#65377;【方法】 应用放射性配体法了解GHR在Bel-7402肝癌细胞株的表达情况;采用肿瘤细胞计数&#65380;噻唑蓝比色法和集落形成实验了解Bel-7402肝癌细胞株在不同浓度rhGH(0&#65380;1&#65380;10&#65380;100&#65380;1 000&#65380;10 000 ng/mL)作用下的药物敏感性,计算细胞生长率,集落形成率;并用3H-TdR渗入法了解肿瘤细胞DNA代谢情况&#65377;【结果】 放射配体法发现Bel-7402肝癌细胞表达GHR, rhGH对体外培养的7402肝癌细胞的生长具有一定程度的刺激作用,表现为rhGH在100 ng/mL的浓度时促进肝癌细胞的增殖较为显著,而rhGH在其它浓度时(1&#65380;10&#65380;1 000&#65380;10 000 ng/mL)的部分时段,对肝癌细胞的增殖虽也能表现出一定程度的促进作用,但总体效果较rhGH 在100 ng/mL浓度时为弱&#65377;【结论】 一定浓度范围的rhGH对7402肝癌细胞的增殖有促进作用,原因可能与7402肝癌细胞表达GHR有关&#65377;     

稳定表达人水通道蛋白4的胚肾细胞系HEK293/AQP4的建立及应用

 【目的】 建立一种可临床应用的并能稳定表达水通道蛋白4的胚肾细胞系HEK293/AQP4,用于检测视神经脊髓炎患者血清中的AQP4抗体&#65377; 【方法】 构建有AQP4基因的表达载体,利用脂质体将载体转入HEK293细胞,G418筛选,RT-PCR&#65380;间接免疫荧光检测稳定细胞系中水通道蛋白4的表达及分布&#65377;细胞间接免疫荧光检测20例NMO患者&#65380;20例MS患者&#65380;30例健康对照血清中的AQP4抗体,并同鼠脑间接免疫荧光检测法比较&#65377; 【结果】 限制性酶切消化&#65380;PCR&#65380;测序结果证明载体构建成功&#65377;间接免疫荧光证实稳定细胞系中有AQP4表达,且主要分布在细胞膜上&#65377;20 例NMO患者血清中11例NMO-IgG阳性,18例AQP4抗体阳性,滴度在1 ∶ 60 - 1 ∶ 15 360之间,而MS患者仅检测到1例阳性,健康对照未检测到阳性&#65377; 【结论】 成功构建稳定表达水通道蛋白4的胚肾细胞系HEK293/AQP4 ,并检测出国人NMO患者血清中存在AQP4抗体,且敏感性高于鼠脑法,可以有效的鉴别视神经脊髓炎和多发性硬化&#65377; 关键词: 视神经脊髓炎; NMO-IgG; 水通道蛋白4( AQP4); HEK293     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。