丙型肝炎患者肝组织中病毒抗原检测

目的研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）抗原在患者肝组织中的分布状况及其相互关系。方法采取免疫组织化学方法，用多克隆抗－ＨＣＶ和单克隆抗－ＨＣＶ－ＮＳ３、抗－ＨＣＶ－ＮＳ５，对１０７例ＨＣＶ感染患者肝组织中ＨＣＶ抗原进行检测。结果应用三种抗体均从ＨＣＶ患者肝组织中检出相应抗原，检出率分别为３８．３％，２８．０％和５２．３％；阳性颗粒定位于肝细胞浆；阳性细胞分布呈散在、弥漫状和簇状；ＨＣＶ－ＮＳ３的表达与炎症反应无明显解剖学关系，ＨＣＶ－ＮＳ５阳性细胞较常见位于炎症灶旁或灶中。结论ＨＣＶ各成分在肝组织中的表达水平存在差别；ＨＣＶ－ＮＳ５的表达可能与ＨＣＶ的致病机制有关。     

分泌抗丙型肝炎病毒NS5a蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立及应用

制备抗丙型肝炎（丙肝）病毒（ＨＣＶ）－ＮＳ５ａ重组蛋白的单克隆抗体（单抗），并探讨其在临床诊断中的应用价值。方法通过常规细胞融合技术制备分泌单抗的杂交瘤细胞株，用含该杂交瘤细胞的腹水对石蜡包埋肝组织细胞中的ＨＣＶ－ＮＳ５ａ抗原进行免疫组化测定，同时用抑制法检测６７例丙肝血清中的ＨＣＶＮＳ５ａ和ＮＳ３抗体分布，并与ＮＳ３单抗的结果进行比较。结果融合后的阳性克隆中筛选出４株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株，命名为８Ｂ２，６Ｆ１１，４Ｃ６和７Ｄ９。这４株单抗与ＮＳ５ａ抗原有良好的反应性；与ＨＣＶ核心区多肽，ＮＳ３区表达多肽及乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的表面抗原均无反应。免疫组织化学检测显示，在ＨＣＶ感染肝组织中，ＮＳ５ａ抗原阳性占５４．９％（１７／３１），而ＮＳ３抗原阳性占５１．６％（１６／３１），抗原分布多呈包涵体分布，少数病例为胞浆型，１例ＮＳ５抗原呈核型表达。在６７例抗ＨＣＶ阳性血清中，ＮＳ５抗体阳性４０例，占５９．７％，而ＮＳ３阳性４７例，占７０％。结论此法制备的单抗有强特异性，在开展ＨＣＶ免疫组织化学研究上具有广阔应用前景。     

丙型肝炎病毒抗原的免疫组化检测及方法学探讨

采用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ区、Ｃ区、ＮＳ３区单克隆及多克隆抗体以及丙型肝炎患者血清及血清中ＩｇＧ抗体作为特异性第一抗体，分别应用ＬＳＡＤ、改良ＰＡＰ及直接酶标法对６５例丙型肝炎患者肝组织冰冻及石蜡包埋标本进行ＨＣＶ抗原检测，其中以ＮＳ３区抗体、ＬＳＡＢ法的检测结果较为理想（检出率２７．７％～２９．２％）。ＨＣＶ抗原呈肝细胞胞浆弥漫型、胞核型及胞浆类包涵体型表达。阳性肝细胞多呈单个散在分布。急性丙型肝炎比慢性丙型肝炎的ＨＣＶ抗原检出率更高且抗原颗粒的分布与病理损伤呈正相关，炎症区浸润的淋巴细胞中可见阳性颗粒；而慢性丙型肝炎肝组织中ＨＣＶ抗原与病理损伤无明显关联；支持急性丙型肝炎的肝细胞损伤由病毒的直接作用及免疫攻击协同所致，而慢性丙型肝炎则以免疫反应引起肝细胞持续损伤为主。胞浆弥漫型ＨＣＶ抗原表达是急性或活动性病变时的主要表达形式，而胞核型ＨＣＶ抗原表达多见于病变静止期。     

肝病患者中丙型肝炎病毒感染的免疫组化检测

以ＨＣＶＮＳ３区单克隆抗体，ＬＳＡＢ法检测了１１６例各类肝病肝组织（其中肝细胞癌５２例，肝炎后肝硬化１６例，慢性肝炎４０例，体质性黄疸８例）及６份正常肝组织（作为对照）中ＨＣＶ抗原的表达状况，结果表明，ＨＣＶ抗原在肝细胞癌，肝炎后肝硬化及慢性肝炎中检出率分别为１３．５％（７／５２），１２．５％（２／１６），１０％（４／４０），而在体质性黄疸及正常肝组织中未检出ＨＣＶ抗原，ＨＣＶ抗原可见于癌细胞或癌     

丙型肝炎病毒非结构区3抗原的制备及其相应抗体的检测

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）非结构区３（ＨＣＶＮＳ３）是ＨＣＶ的一个多功能区,在ＨＣＶ复制中起重要作用,与丙型肝炎（简称丙肝）发病及转归关系密切。我们提取ＨＣＶＮＳ３不同末端蛋白作为抗原,并检测了干扰素（ＩＦＮ）治疗的ＨＣＶＲＮＡ阳性丙肝患者血清,寻...     

肝病患者中丙型肝炎病毒感染的免疫组化检测

以ＨＣＶＮＳ３区单克隆抗体、ＬＳＡＢ法检测了１１６例各类肝病肝组织（其中肝细胞癌５２例，肝炎后肝硬化１６例，慢性肝炎４０例，体质性黄疸８例）及６份正常肝组织（作为对照）中ＨＣＶ抗原的表达状况，结果表明，ＨＣＶ抗原在肝细胞癌、肝炎后肝硬化及慢性肝炎中检出率分别为１３．５％（７／５２）、１２．５％（２／１６）、１０％（４／４０），而在体质性黄疸及正常肝组织中未检出ＨＣＶ抗原。ＨＣＶ抗原可见于癌细胞或癌周肝细胞的胞浆或胞核中，实验结果支持ＨＣＶ与肝细胞癌的关联，ＨＣＶ感染对促使肝病的加重也具有一定影响。肝细胞癌中，胞核型ＨＣＶ抗原表达较多见。癌周组织中ＨＣＶ抗原检出率高于癌组织，提示ＨＣＶ可能主要作用于癌前病变，在肝细胞癌发生的初始阶段起作用，促使正常细胞恶性化。     

间接免疫荧光法检测肝活检组织中HCV抗原

用抗ＨＣＶ ＮＳ３的单克隆抗体检测慢笥丙型肝炎肝活检组织中的ＨＣＶ抗原，并观察ＨＣＶ抗原在肝组织中的分布及单克隆抗体的特异性。间接免疫荧光法。ＨＣＶ抗原分布于肝细胞核，胞浆及肝细胞中，慢性乙型肝炎肝活检组织，胎肝组织及胃活检组织均为阴性。     

慢性丙型肝炎患者肝内HLA-Ⅱ类抗原和丙型肝炎病毒NS_3抗原的表达

为了研究丙型肝炎的ＨＬＡ－Ⅱ类抗原相关性免疫发病机制,对４７例慢性病毒性肝炎患者的肝活检组织标本应用免疫组织化学技术研究了肝内ＨＬＡ－Ⅱ类抗原和ＨＣＶ,ＮＳ３抗原的表达。１１例慢性丙型肝炎患者中３例肝内ＨＬＡ－Ⅱ类抗原表达呈阳性,其阳性程度明显低于慢性乙型肝炎患者（１５／１９）和慢性乙型和丙型肝炎病毒重叠感染者（１５／１７）。１０例患者肝细胞内ＨＣＶ,ＮＳ３抗原阳性,其中６例为慢性丙型肝炎患者,４例为慢性乙型和丙型肝炎病毒重叠感染者。慢性乙型肝炎患者的肝细胞中无ＨＣＶ,ＮＳ３抗原阳性。尽管在ＨＣＶ,ＮＳ３抗原阳性肝细胞表面未发现ＨＬＡ－Ⅱ类抗原,但ＨＬＡ－Ⅱ类抗原阳性表达明显与肝组织损伤的严重性有关。因此肝内ＨＬＡ－Ⅱ类抗原的表达可能在慢性丙型肝炎患者的免疫发病中有一定的作用     

肝细胞癌组织中丙型肝炎NS3蛋白对P53蛋白表达的影响

目的探讨肝细胞癌（ＨＣＣ）及其癌旁肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３蛋白对Ｐ５３蛋白表达的影响及其在肝癌发生中的作用。方法用免疫组织化学技术检测４７例乙型肝炎病毒阴性的ＨＣＣ及其癌旁肝组织中ＨＣＶＮＳ３蛋白和Ｐ５３蛋白的表达。结果ＨＣＶＮＳ３蛋白在ＨＣＣ中的阳性率（６２％）明显低于癌旁肝组织（８３％）,Ｐ＜００２５。癌组织中其表达强度与癌细胞分化程度呈相关性（Ｐ＜００２５）。Ｐ５３蛋白在癌组织中的阳性率（８１％）明显高于癌旁组织（４７％）,Ｐ＜００２５;癌细胞分化愈差,表达愈强（Ｐ＜００５）;癌组织中Ｐ５３蛋白表达与ＨＣＶＮＳ３蛋白的表达无相关性（Ｐ＞０５）,而癌旁肝组织中两者表达呈显著相关性（Ｐ＜００１）,ＨＣＶＮＳ３蛋白阳性患者中Ｐ５３蛋白表达明显高于ＨＣＶＮＳ３阴性病例,Ｐ＜００５。结论ＨＣＶＮＳ３蛋白可能是在肝细胞转化早期通过内源性机制间接作用于Ｐ５３基因使其突变导致肝细胞癌变。     

丙型肝炎病毒抗原的免疫组化检测及方法学探讨

采用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ区、Ｃ区、ＮＳ３区单克隆及多克隆抗体以及丙型肝炎患者血清及血清中ＩｇＧ抗体作为特异性第一抗体，分别应用ＬＳＡＢ、改良ＰＡＰ及直接酶标法对６５例丙型肝炎患者肝组织冰冻及石蜡包埋标本进行ＨＣＶ抗原检测，其中以ＮＳ３区抗体、ＬＳＡＢ法的检测结果较为理想（检出率２７．７％－２９．２％）。ＨＣＶ抗原呈肝细胞胞浆弥漫型、胞核型及胞浆类包涵体型表达。阳性肝细胞多呈单个散在分布。急性丙     

慢性肝病患者肝组织中庚型肝炎病毒NS5抗原的检测

目的了解慢性肝病患者肝组织中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的存在状况。方法采用免疫组织化学方法,用抗ＨＧＶＮＳ５单克隆抗体对１１０例血清学病毒标记非甲非戊、乙型及丙型肝炎的慢性肝病患者肝组织中的ＨＧＶ抗原进行了检测。结果ＨＧＶ的总检出率为３２７％（３６／１１０）,非甲非戊、乙型及丙型肝炎病毒的检出率分别为２１％（４／１９）、３６％（２５／６９）及３２％（７／２２）;活动性肝硬化、原发性肝癌及慢性重型肝炎中ＨＧＶ的检出率为２２％（１０／４５）、４３％（２０／４７）及３３％（６／１８）,不同血清病毒标志组或病理类型之间其检出率差异均无显著意义（χ２＝４３１,１．５２;Ｐ＞０１０,Ｐ＞０２５）。ＨＧＶＮＳ５Ａｇ主要于肝细胞或癌细胞胞浆内表达,阳性肝细胞呈弥漫或大片灶状分布,免疫组织化学双标记染色显示ＨＢｓＡｇ或丙型肝炎（ＨＣＶ）ＮＳ３Ａｇ阳性细胞呈单个或小片灶状,多与ＨＧＡｇ阳性细胞位于同一区域内,或在同一肝细胞内表达。结论在慢性肝病患者肝组织中ＨＧＶ的感染较为常见     

抗HCV NS3抗原单克隆抗体的研制与初步鉴

目的：为研制抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３抗原单克隆抗体,用于检测丙肝患者血清中的ＨＣＶＮＳ３抗原。方法：用基因工程表达的ＨＣＶ非结构区ＮＳ３蛋白与鼠血清白蛋白交联后,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,用杂交瘤技术获得能分泌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的细胞株。结果：获得有实用价值的两株ＭｃＡｂ。两株ＭｃＡｂ与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应,与ＨＣＶＮＳ４、ＮＳ５及核心区Ｃ３３肽、ＣＰ９、ＣＰ１０抗原无反应性,在竞争ＥＬＩＳＡ中,对ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。结论：用基因工程表达的ＨＣＶ非结构区ＮＳ３蛋白,能够制备出有实用价值的单克隆抗体。     

庚型肝炎病毒抗原在乙型肝炎病人肝组织中的检测及免疫病理 …

使用基因重组的抗－ＨＧＶＮＳ５单克隆抗体，采取链霉抗生物素蛋白－过氧化酶（ＳＰ）方法对３３６例乙型肝炎患者肝穿活检组织进行庚型肝炎病毒抗原（ＨＧＶＡｇ）检测，检出率为７．４％，阐明ＨＧＶＡｇ在肝组织中的分布及免疫病理表达特点，提出了在乙肝患者人群中ＨＧＶ的同时感染或重叠感染比ＨＧＶ单一感染有其更广泛的意义。     

分泌抗丙型肝炎病毒NS5a蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立…

制备抗丙型肝炎（丙肝）病毒（ＨＣＶ）－ＮＳ５ａ重组蛋白的单克隆抗体（单抗），并探讨基估临床论断中的应用价值。方法 通过常规细胞融合技术制备分泌单抗的杂交瘤细胞株，用含该杂交瘤细胞的腹水对石蜡包埋肝组织细胞中的ＨＣＶ－ＮＳ５ａ抗原进行免疫组化测定，同时用抑制法检测６７例丙肝血清中的ＨＣＶＮＳ５display status     

重型病毒性肝炎肝组织内丙型肝炎病毒抗原表达的研究

目的：研究重型肝炎肝组织内丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）抗原表达及特点，探讨ＨＣＶ感染在重型肝炎发生中的地位和作用。方法：用免疫组化法检测２０例重型肝炎组织内ＨＣＶ抗原。结果：肝组织内ＨＣＶ抗原表达阳性率４５％（９／２０），其中慢性重型肝炎６０％（６／１０），亚急性４２．９％（３／７），急性０％（０／３），ＨＣＶ抗原仅在肝细胞内表达，可呈胞浆均质型、包涵体型和膜下型，９例肝组织ＨＣＶ抗原表达阳性患者均混合     

乙型和丙型肝炎重叠感染患者肝组织免疫组织化学双标记研究

探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）重叠感染患者肝组织中病毒的复制状况和相互关系。方法采用免疫组织化学双标记技术，以抗－ＨＣＶＮＳ３、抗－ＨＣＶＮＳ５单克隆抗体和抗－ＨＢｓ、抗－ＨＢｃ多克隆抗体，检测２５例尸检肝组织中ＨＣＶＡｇ和ＨＢＶＡｇ的分布和表达。结果ＨＢ－ｓＡｇ和ＨＣＶＮＳ３Ａｇ同时阳性１１例，ＨＢｓＡｇ和ＮＳ５Ａｇ阳性１２例，ＨＢｃＡｇ和ＨＣＶＮＳ３Ａｇ及ＨＣＶＮＳ５Ａｇ阳性各１０例。几乎所有单标记染色阳性切片，其双标记染色也阳性。感染ＨＣＶ或ＨＢＶ的肝细胞各呈灶性、散在或弥散混杂分布，在重叠感染肝组织中，与ＨＢＶ复制有关的表达类型，如ＨＢｓＡｇ膜、浆型和ＨＢｃＡｇ浆型以及ＨＣＶＮＳ３Ａｇ和ＨＣＶＮＳ５Ａｇ的检出例数，同单纯感染组相比差异无显著意义（χ２＝０．１５４及０．１９８，Ｐ＞０．０５）。结论乙型和丙型肝炎病毒在重叠感染时，两种病毒在肝组织内可能不存在互相干扰和抑制。     

丙型肝炎病毒C33c抗原、核心抗原和HBxAg在人原发性肝内胆管细胞癌中的分布及意义

目的：研究丙型肝炎病毒Ｃ３３ｃ抗原及核心抗原在人肝内胆管细胞癌中的分布及意义。方法：以免疫组织化学方法检测ＨＣＶ两种抗原及ＨＢｘＡｇ在肝内胆管细胞癌及癌旁肝组织中定位及分布。结果：ＨＣＶＣ３３ｃ抗原位于癌细胞或肝细胞的胞浆内；ＨＣＶ核心抗原在癌组织主要呈核阳性，在癌旁肝以胞浆阳性为主。ＨＣＶＣ３３ｃ抗原在癌组织及癌旁肝的阳性率分别为６０％（２１／３５）及１００％（２１／２１），ＨＣＶ核心抗原在上述两种组织的阳性率分别为８７．８％（２９／３３）及６１．９％（１３／２１）；ＨＢｘＡｇ在两种组织中检出率分别为７４．３％（２６／３５）及７６．２％（１６／２１）．Ｃ３３ｃ及ＨＢｘＡｇ双阳性分别为４８．６％（１７／３５）及７６．２％（１６／２１）．结论：除ＨＢＶ感染外，ＨＣＶ感染在人肝内胆管细胞癌的发生中可能起重要作用     

乙型肝炎病毒基因多重PCR的临床观测

为探讨多重多聚酶链反应（ＰＣＲ）在慢性乙型肝炎检测中的应用价值，选用ＨＢＶＤＮＡ的Ｓ区、Ｃ区及Ｘ区的３对引物Ｓ１／Ｓ２，Ｃ１／Ｃ２和Ｘ１／Ｘ２，同时扩增ＤＮＡ。结果发现，３个基因区的表达情况不同。７７例慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者ＨＢＶＤＮＡ的检出率分别是Ｓ区６１０％，Ｃ区４５５％，Ｘ区３９０％；且三区联合检出率为７５３％，与单独Ｃ区检出有明显差异（Ｐ＜００５）。提示多重ＰＣＲ能对ＨＢＶＤＮＡ同一模板的各基因区同时扩增，从而可以得到Ｃ区以外的其它保守基因区特异性的扩增片段，提高了对乙型肝炎病毒患者ＨＢＶＤＮＡ的检出率。     

慢性丙型肝炎患者肝内HLA—Ⅱ类抗原和丙型肝炎病毒NS3抗？…

为了研究丙型肝炎的ＨＬＡ－Ⅱ类抗原相关性免疫发病机制,对４７例慢性病毒性肝炎患者的肝活检组织标本应用免疫组织化学技术研究了肝内ＨＬＡ－Ⅱ类抗原和ＨＣＶ,ＮＳ３抗原的表达。１１例慢性丙型肝炎患者中３例肝内ＨＬＡ－Ⅱ类抗原表达呈阳性丙型肝炎其阳性明显低于慢性乙型肝炎患者（１５／１９）和慢性乙型有丙型肝炎病毒重叠感染者,１０直细胞内ＨＣＶ、ＮＳ３怕阳性,其中６例为慢性丙型肝炎患者,４例为慢性乙型和丙型肝     

乙型肝炎病毒X蛋白单克隆抗体的制备及肝癌组织中相应抗原的检测

应用基因工程技术制备的１７０００乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｘ蛋白（ＨＢｘＡｇ）免疫动物，成功地制备了抗－ＨＢｘ单克降抗体，以此抗体对原发性肝癌（ＨＣＣ）组织、慢性活动性肝炎（ＣＡＮ）肝组织行相应抗原检测，并同时进行乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）及乙型肝炎病毒核心抗原（ＨＢｃＡｇ）的检测。在ＨＣＣ标本中ＨＢｘＡｇ在癌内及癌周肝组织中的阳性率分别为５６％及４８％，ＨＢｓＡｇ为１６％及７４％。ＨＢｃＡｇ仅见于癌周，阳性率为１８％。在ＣＡＨ标本中，ＨＢｘＡｇ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ阳性率分别为６．６％、７３．３％及０。血清ＨＢｓＡｇ阳性ＨＣＣ标本中，ＨＢｘＡｇ的检出率为８２．３％、明显高于血清ＨＢｓＡｇ阴性标本（５４．５％）。结果显示。ＨＢｘＡｇ在ＨＣＣ标本中的表达是ＨＢＶ标志物中最活跃的。ＨＢｘＡｇ的表达不依赖于ＨＢＶ的复制，可能是ＨＢＶＸ基因同宿主细胞基因整合后的产物，ＨＢｘＡｇ在ＨＣＣ标本中的活跃表达为抗－ＨＢｘ抗体作为ＨＣＣ导向治疗载体提供了依据。