PCR—RFLP分析人结直肠癌DCC基因杂合性缺失

目的；探讨ＤＣＣ基因在结直肠癌中杂合性缺失情况及其意义。方法；应用ＰＣＲ技术检测了２５例中国人散发型结直肠癌病人正常粘膜及癌组织和３个直肠癌细胞系ＤＣＣ基因Ｍ２位点限制性片断长度多生。结果；１６例（６４％）病人具有杂合生，其中４例（２５％）癌组织表现等位基因杂合性缺失。此４例均有淋巴结或肝转移。细胞系ＨＣＴ，ＨＲ８３４８表现杂合性，ＨＴ２９表现纯合性，结论；ＤＣＣ基因是一个在结直肠肿瘤发生发展中起     

PCR-RFLP分析人结直肠癌DCC基因杂合性缺失

目的：探讨DCC基因在结直肠癌中杂合性缺失情况及其意义。方法：应用PCR技术检测了25例中国人散发型结直肠癌病人正常粘膜及癌组织和3个直肠癌细胞系DCC基因M2位点限制性片断长度多态性。结果：16例（64％）病人具有杂合性，其中4例（25％）癌组织表现出等位基因杂合性缺失。此4例均有淋巴结或肝转移。细胞系HCT，HR8348表现杂合性，HT29表现纯合性。结论：DCC基因是一个在结直肠肿瘤发生发展中起重要作用的抑癌基因，该基因的异常与结直肠癌发生发展有关。     

抑癌基因Pdcd4在肾透明细胞癌中的表达及生物学意义

目的研究Pdcd4 mRNA及蛋白在肾透明细胞癌中的表达及探讨其与肾肿瘤分期分级的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应（半定量RT-PCR）及免疫组织化学方法同时检测肾脏透明细胞癌及癌旁正常组织Pdcd4 mRNA及蛋白的表达情况。结果 Pdcd4 mRNA在肾癌及癌旁正常组织中均有表达,透明细胞癌中的表达低于癌旁正常组织。肾透明细胞癌Pdcd4蛋白表达阳性率为37.5%（15/40）,显著低于癌旁正常肾脏组织阳性表达率90%（18/20）,G1~G2期Pdcd4蛋白表达阳性率为56.5%（13/23）高于G3~G4期Pdcd4蛋白表达阳性率为11.7%（2/17）,两者差异有显著性（P〈0.05）。结论 Pdcd4基因在肾透明细胞癌中呈低表达,与肾癌的发生及恶性分化程度相关,作为抑癌基因,Pdcd4蛋白表达可作为判定肾透明细胞癌生物学行为的客观指标。     

抑癌候选基因NDRG2在乳腺肿瘤组织及乳腺癌细胞系中的表达分析

目的：分析抑癌候选基因NDRG2在人类乳腺肿瘤组织及乳腺癌细胞系中的表达情况．方法：收集4种乳腺癌细胞系及21例乳腺肿瘤组织及其癌旁组织,提取总RNA,应用半定量RT-PCR及RNA斑点杂交的方法检测NDRG2 mRNA的表达水平．为进一步分析Ndrg2蛋白质的表达水平,分别提取21例组织及细胞系的总蛋白,应用蛋白印迹技术检测其Ndrg2的蛋白表达水平,同时运用免疫组化的方法检测4种乳腺癌细胞系中Ndrg2的表达情况．结果：RT-PCR结果显示,4种乳腺癌细胞系中,有3种NDRG2 mRNA水平明显降低．21例乳腺肿瘤组织中,有5例NDRG2的mRNA水平明显降低．蛋白印迹结果显示,筛选出的3种低表达NDRG2 mRNA乳腺癌细胞系中2种Ndrg2的蛋白表达明显降低,而有1种Narg2的蛋白表达没有变化．21例乳腺肿瘤组织中发现5例Narg2的蛋白水平明显下降,与RT-PCR检测结果一致．免疫组化结果显示,4种乳腺癌细胞系中,2种细胞系Narg2的表达水平明显降低,1种细胞系Ndrg2表达水平没有明显变化,与蛋白印迹结果一致．结论：Ndrg2在某些乳腺肿瘤组织和乳腺癌细胞系中呈低表达,提示其可能对乳腺肿瘤的发生或发展有重要作用,这不仅为研究乳腺癌的发病机制进一步提供了线索,而且对乳腺癌的诊断和治疗具有重要意义．     

抑癌基因PTEN在胃癌细胞中的表达及意义

目的探讨PTEN基因mRNA及蛋白在胃癌细胞中的表达规律及其生物学意义。方法分别采用RT-PCR技术和Western blot方法检测SGC-790l，BGC-823，MGC-803，HGC-27等4种胃癌细胞系的PTEN mRNA表达及蛋白表达水平。结果PTEN mRNA与蛋白质在4种胃癌细胞系中均有异常表达，且表达水平呈正相关（r=0．99，P〈0．01），表达顺序依次为：SGC-7901（中分化）表达最高（P〈0．01），BGC-823（低分化）、MGC-803（低分化）次之（两者差异无显著性，P〉0．05），HGC-27（未分化）表达水平最低（P〈0.01），其相关表达与细胞分化程度呈正比关系。结论PTEN基因的异常改变与胃癌的发生发展密切相关；PTEN基因mRNA及其蛋白表达可能是反映胃癌发生发展及预后的重要生物学指标之一。     

黑色素瘤抗原-1基因在胃癌组织中的表达

①目的检测黑色素瘤抗原-1(MAGE-1)基因在胃癌组织中的表达，为应用MAGE-1基因产物对胃癌病人进行特异性抗肿瘤免疫治疗提供理论依据。②方法用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测30例胃癌组织及相应癌旁组织中MAGE-1基因的表达，并对1例RT-PCR阳性扩增产物进行DNA序列测定。③结果30例胃癌组织标本中有14例(46．7％)表达MAGE-1基因，而相应的癌旁组织均不表达MAGE-1，两组比较差异有显著性(P=0．001)；DNA序列测定证实1例RT-PCR扩增产物中的目的基因片段为MAGE-1 cDNA序列。④结论MAGE-1基因在胃癌组织中有较高表达，这使得以该基因编码蛋白作为疫苗用于胃癌的免疫治疗成为可能。     

脆性位点基因WWOX mRNA在肝细胞癌中的表达及临床病理意义

目的 检测WWOX野生型mRNA及其异常转录剪接体在肝细胞癌中的表达情况,并分析其临床病理意义.方法 采用Real-time RT-PCR和RT-PCR方法检测44例肝细胞癌(HCC)、相应癌旁肝组织和5例正常肝组织中WWOX野生型mRNA及转录剪接体Variant1、Variant4及Variant6的表达,同时分析...     

抑癌基因WWOX在甲状腺癌中的表达及意义

目的探讨WWOX基因在甲状腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化方法检测50例甲状腺癌,31例甲状腺腺瘤及20例正常组织中WWOX蛋白的表达,并分析其与病理指标及临床特征之间的相关性。结果WWOX在甲状腺癌、甲状腺腺瘤及正常甲状腺组织中的平均积分光密度分别为：50．86±6．05、70．95±4．23、87．77±8．46。WWOX在甲状腺癌中的表达与后两者之间差异有统计学意义（P〈0．05）。未发现WWOX蛋白表达在不同临床病理指标间存在显著性差异。结论WWOX蛋白在甲状腺癌组织中呈低表达,该蛋白表达的缺失可能在甲状腺癌的发生、发展过程中发挥重要作用。     

肺癌中抑癌基因PTEN的研究

肺癌是危害人类健康的呼吸系统恶性肿瘤之一。近年来，世界各地肺癌的发病率、病死率急剧上升，肺癌的相关研究日益受到关注。肺癌的发生、发展是一个多因素、多步骤、多阶段和多基因改变的过程，主要由于癌基因激活和(或)抑癌基因及DNA修复基因突变或缺失所致。第10号染色体缺失的张力蛋白同源的磷酸酶基因(phosphatase and tensin homoIogy deleted on chromosome ten，PTEN)，     

肺癌p53基因突变与蛋白表达关系的研究

目的 以测序结果为标准,探讨免疫组织化学和聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）两种方法用于检测肺癌ｐ５３基因突变的敏感性及优缺点。方法 用免疫组织化学,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ产物直接测序检查３０例肺癌标本的Ｐ５３蛋白和基因改变,结果 ３０例肺癌标本经测序共检出２２例突变,突变位于第５外显子８例（３６％）,位于第６外显子２例（９％）,位于第７外显子７例（３２％）,位于第８外显子５例（２     

人原发性食管癌组织中多种抑癌基因的研究

应用ＰＣＲ扩增与直接测序技术，分析１０例食管癌和癌旁组织标本中多个抑癌基因ｐ５３、Ｒｂ、ＡＰＣ和ＭＣＣ的突变与丢失。结果：１０例中６例有ｐ５３基因突变；５例有Ｒｂ基因改变；３例有ＡＰＣ改变；３例有ＭＣＣ基因改变；８例食管癌标本中至少有一种抑癌基因有改变；６例至少有两种或多种抑癌基因改变，１例癌旁组织中也有两个抑癌基因改变。结果表明，食管癌癌变与多个抑癌基因变化的累积有关。     

肺癌患者外周血CK19 mRNA和CEA mRNA表达的检测及临床意义

目的探讨CK19 mRNA、CEA mRNA能否作为判断肺癌血源性微转移的参考指标.方法取67例肺癌患者及37例健康体检者外周血,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测上述两个指标的表达.结果肺癌组外周血中CK19 mRNA阳性率(57.6%)及CEA mRNA阳性率(52.2%)均显著高于健康对照组的2.7%和5.4%(均P＜0.01),两个指标联合检测能将对肺癌微转移诊断的灵敏度提高至76.1%;CK19 mRNA的表达与临床分期相关(P＜0.01),CEA mRNA的表达与组织类型相关(P＜0.05).结论 CK19 mRNA和CEAmRNA可作为判断肺癌血源性微转移的参考指标,两者联检可提高诊断价值.     

肺癌组织p16基因启动子区高甲基化情况分析

目的:了解不同临床病理情况下肺癌组织中p16基因启动子区高甲基化的情况。方法:采用甲基化特异的PCR(MSP)法,根据5-甲基胞嘧啶与胞嘧啶修饰后的不同,设计甲基化与非甲基化等位基因特异的引物,通过PCR扩增检测手术后53例不同临床病理类型肺癌组织中p16基因启动子区高甲基化情况。结果:肿瘤组织标本中p16基因启动子区甲基化比例为占71.7%(38/53),其中鳞状细胞癌占80.0%(20/25),腺癌占66.7%(10/15),小细胞肺癌占61.5%(8/13)。长期吸烟史与鳞状细胞癌p16基因启动子区高甲基化比例增高有关(P<0.001),与小细胞肺癌(P=0.293)、腺癌的(P=1.000)p16基因启动子区高甲基化关系不密切。肿瘤T分期与鳞状细胞癌p16基因启动子区高甲基化比例增高有关(χ2=8.719,P=0.013)。结论:肺癌瘤组织标本中p16基因启动子区高甲基化是比较常见的现象;肿瘤组织基因启动子区高甲基化发生率随TNM分期的提高有升高趋势;基因启动子区甲基化状态与吸烟有关,有长期吸烟史的肺癌病人p16基因启动子区甲基化率增高。肺鳞状细胞癌中随T分期增高p16基因启动子区高甲基化比例增高。     

甲硫腺苷磷酸化酶基因在非小细胞肺癌中的转录表达及临床意义

目的 探讨甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)基因在非小细胞肺癌中的转录表达变化情况及其临床意义。方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测了15例新鲜肺癌标本及相应癌旁组织中MTAP mRNA的表达情况。同时运用Western印迹法检测了MTAP蛋白质的表达情况。结果 MTAP在73．30%,(11／15)的肿瘤标本中不表达或转录水平降低,而MTAP在癌旁对照组织中的表达率却高达93．3％(14／15);对于11例RT-PCR分析认定低表达或不表达的样本,再通过Western印迹方法进一步验证,发现与RT-PCR结果一致。另外,MTAP在肺腺癌和鳞癌中低表达现象差异无显著意义,但在中／低分化肺癌中的低表达与高分化癌相比增高,差异有显著意义。结论 MTAP基因低表达或丢失可能与肺癌的恶性程度密切相关。     

9-顺-维甲酸对人肺鳞癌细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录的影响

目的:检测9-顺-维甲酸(9-cis-RA)处理前后人肺鳞癌细胞株L78、A2的细胞周期调控因子Cy-clinD1、Cdk4转录水平的变化。探讨其抑制肺鳞癌细胞生长的作用机制。方法:采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录水平的变化。结果:9-cis-RA对两细胞株的细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4转录水平均有所降低,且具有统计学意义(P<0.05)。结论:9-cis-RA抑制肺鳞癌细胞株L78、A2增殖的作用机理与其调节细胞周期调控因子CyclinD1、Cdk4的转录有关。     

双重实时荧光逆转录聚合酶链反应检测尿液DD3/PSA mRNA比值及其应用

目的建立双重实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测尿液DD3／PSAmRNA比值,评价其初步应用。方法分别在前列腺特异性抗原（PSA）基因外显子1和2、差异显示编码3（DD3）基因外显子1和3之间设计一对引物和一条探针,PSA和DD3基因的TaqMan—MGB探针5’分别标记HEX和FAM荧光素,建立双重实时荧光RT—PCR检测尿液DD3／PSAmRNA比值的方法,并对方法学进行评价。对34例前列腺癌（PCa）、44例良性前列腺增生（BPH）患者前列腺按摩后尿液中的DD3／PSAmRNA比值进行检测,评价其临床应用价值。结果扩增产物经测序证明为PSA和DD3特异性片段。以LNCaP细胞cDNA作模板,PSAmRNA和DD3mRNA最低检测限分别为0,6细胞／反应和60细胞／反应。DD3／PSAmRNA比值批内、批间变异系数分别为3．8％-4,7％和4．1％-4,9％。PCa组尿液DD3／PSAmRNA比值明显高于BPH组（P〈0．01）。尿液DD3／PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积（AUC）为0．746（95％CI：0．630—0．862）,当截断值为0．254时其敏感度和特异度分别为64．7％和77.3％,其阳性率与临床和病理分级均无关。结论成功建立了双重实时荧光RT—PCR检测尿液DD3／PSAmRNA比值的分子生物学诊断方法。该方法对PCa诊断具有较高特异度和敏感度,且节省操作时间、降低实验成本,有望成为PCa早期诊断的有效方法。     

肺癌中GRIM-19 mRNA的表达及其临床意义

目的了解干扰素／维甲酸诱导凋亡相关基因（GRIM-19）在肺癌中的表达及其临床意义。方法RT-PCR检测40例肺癌患者的癌组织和癌旁组织中GRIM-19mRNA表达水平,用Western blot法验证20例肺癌组织中GRIM-19蛋白表达情况,并分析GRIM-19mRNA表达与临床病理参数之间的关系。结果肺癌组织中GRIM-19mRNA表达水平低于癌旁组织,两组间差异有显著性（P〈0．05）,并且mRNA表达水平的降低伴随有蛋白表达水平的相应下降。GRIM-19mRNA水平与临床病理分期之间有关联（P〈0．05）,Ⅰ-Ⅱ期Grim19mRNA表达量显著高于Ⅲ～Ⅳ期中的表达,而与患者性别、年龄、组织分型、吸烟指数之间均无关联（P〉0．05）。结论GRIM-19mRNA的表达下降是肺癌发生过程中的重要事件,可能与肺癌的发生及进展有关。     

大肠癌细胞中C－erbB－2基因扩增与临床的关系

应用差异聚合酶链反应方法检测了２３例大肠癌组织的Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因。结果发现在７例（３０．４３％）的大肠癌组织内存在Ｃ－ｅｒｂＢ－２基因的扩增。高中分化管状腺癌的Ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增阳性率（３／３）高于中分化管状腺癌（４／１７）（Ｐ＜０．０５）。在已有淋巴结转移的大肠癌患者，Ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增的阳性率为５／１３（３８．４６％），而尚无淋巴结转移患者的阳性率为２／１０（２０％），但差异无统计学意义（Ｐ＞０．２０）。