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1.
隐孢子虫感染小鼠动物模型的建立   总被引:16,自引:0,他引:16  
目的 建立免疫抑制小鼠的隐孢子虫感染模型。方法 饮水中加地塞米松(DEX)抑制4周龄小鼠免疫功能,人工灌喂隐孢子虫卵囊(CSO)感染小鼠。通过观察小鼠粪便中CSO排出情况和小鼠生存情况,比较5个品系小鼠(BALB/c,C57,ICR,NIH,KM)的易感性,比较不同DEX剂量(1mg/L,2.5mg/L,5mg/L,5mg/L,10mg/L)对小鼠免疫功能的影响,比较不同CSO接种剂量(10^5,10^6)对小鼠感染的影响,从而确定适宜的模型小鼠,DEX剂量和CSO接种剂量,建立小鼠感染模型。结果 (1)5个品系小鼠中KM鼠的CSO排出量最多,而且持续整个实验期,小鼠死亡数较少(NIH鼠全部死亡);(2)10mg/L,5mg/L DEX组小鼠CSO排出量较多,2.5mg/L,1mg/L组小鼠死亡数少,但卵囊排出量明显低于前两组,且不能持续整个实验组;(3)10^5与10^6个CSO接种量的小鼠CSO排出量没有明显差别,但前者的小鼠死亡数较少。结论 KM鼠饮水中加入DEX5mg/L,每只小鼠接种10^5个CSO,可以建立稳定的感染模型。  相似文献   

2.
隐孢子虫感染小鼠动物模型   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的建立隐孢子虫感染小鼠动物模型,为药物筛选和分子生物学研究奠定基础。方法饮水中添加地塞米松(DEX)抑制鼠免疫功能,5d后经口灌喂隐孢子虫卵囊感染小鼠。比较粪便中排卵囊量和小鼠生存情况,从不同品系小鼠(KM、BALB/c)、不同鼠龄(乳鼠断乳2d、56周、1012周)、不同免疫抑制剂量(0,2.5,5,7.5,10,12.5mg/L)、不同卵囊接种量(75,1.5×102,1.5×103,1.5×104,3.0×104)及不同保存时间(1,2,6,8个月)等影响小鼠感染的因素中,选出最佳条件,建立稳定的隐孢子虫感染小鼠动物模型。结果(1)KM、BALB/c两种小鼠都能感染微小隐孢子虫,BALB/c组小鼠开始死亡的时间比KM组的早,BALB/c组收集的卵囊数比KM组的少;(2)乳鼠组小鼠排卵囊的数量总体大于其他年龄段小鼠,但是其生存时间较短;(3)7.5,10mg/LDEX剂量组排卵囊数量较多,且持续整个实验期,低于此剂量组小鼠排卵囊数量少,多于此剂量组易死亡;(4)接种75个以上微小隐孢子虫卵囊均能使小鼠感染;(5)保存1,2,6,8个月的微小隐孢子虫卵囊均能感染小鼠。结论采用56周龄的KM雌性鼠,在饮水中添加7.5~10mg/LDEX,接种75个以上保存时间在8个月内的微小隐孢子虫卵囊可以建立较稳定的感染模型。  相似文献   

3.
隐孢子虫动物模型的建立   总被引:6,自引:0,他引:6  
本文通过饮水给予免疫抑制药和用人源隐孢子虫卵囊感染NIH小鼠,建立了隐孢子虫感染小鼠模型。实验结果显示:免疫功能抑制组比正常组易感,两者感染度有显著性差异(P<0.05)。通过动物实验进一步证明免疫功能正常宿主感染隐孢子虫为自限性感染,免疫功能低下或缺陷者感染隐孢子虫可引起严重腹泻甚至死亡。  相似文献   

4.
鼠隐孢子虫感染模型的建立   总被引:5,自引:0,他引:5  
隐孢子虫 (Crytosporidium)是一种新近被人们重视的腹泻的重要病原之一。 1970年Tyzzer在无症状的实验小鼠胃组织切片时发现了大量的隐孢子虫体。 1976年由Nirm和MeiseI等在美国首先发现。 1981年最早从动物体内检查抗体。多数隐孢子虫病患儿的临床症状类似一般的肠炎 ,细菌性痢疾 ,消化不良 ,表现为间隙性难治性腹泻 ,重者可导致死亡。为建立隐孢子虫的动物模型 ,以探讨该病发病机理 ,观察其病理变化与排卵囊规律 ,提供药物治疗有价值的依据。本研究利用氢化可的松 ,环磷酰胺抑制白鼠免疫功能后分别接种高 ,低浓度隐孢子虫卵囊以建立隐孢…  相似文献   

5.
隐孢子虫的体外培养和感染动物模型的研究进展   总被引:3,自引:0,他引:3       下载免费PDF全文
隐孢子虫 (Cryptosporidium)于 190 7年由Tyzzer[1] 在实验小鼠胃内首次发现并描述 ,而此后的 70年中并未得到医学及兽医学界的关注。 1976年Nime等[2 ] 和Meisel[3] 相继报道了一名免疫功能正常的儿童和一名免疫抑制的成人的隐孢子虫病病例。 1982年以来 ,随着艾滋病 (AIDS)的出现和流行 ,对本虫的流行病学、诊断和治疗的研究明显增多。隐孢子虫属属于隐孢子虫科 (Cryptosporidiids) ,艾美球虫亚目 (Einerioiine) ,真球虫目 (Eucoccidiorida) ,球虫亚纲 (AsinCoccidia) ,孢子虫纲 (Sporozoasida) ,端复亚门 (Apicanplex)。公认有 6个…  相似文献   

6.
低剂量隐孢子虫感染正常和免疫抑制小鼠的效应研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的 研究低剂量隐孢子虫感染正常和免疫抑制小鼠的相关效应指标,了解低剂量隐孢子虫感染的风险及相关效应。方法 采用地塞米松作为免疫抑制剂,建立小鼠的免疫抑制模型,再给予不同剂量的隐孢子虫攻击,比较不同的效应指标。结果 免疫抑制组小鼠脾重指数、胸腺指数与对照组比较差异有显著性(P〈0.05)。免疫抑制小鼠IgG、IgM含量与对照组比较差异亦有显著性(P〈0.05)。免疫抑制情况下粪便白细胞计数与相应的对照组比较,50、100、500个卵囊剂量组之间差异均有显著性(P〈0.05)。免疫抑制组与对照组的腹泻发生率,500个剂量组差异有显著性(P〈0.05)。将剂量对数和腹泻发生率作回归分析,免疫抑制和对照组的剂量对数和腹泻发生率呈现较好的线性关系(P〈0.05)。结论 较低剂量(10~50个卵囊)的隐孢子虫即可引起小鼠感染并出现腹泻症状,且出现粪便白细胞排出增加。在较低剂量条件下,免疫抑制小鼠粪便白细胞、腹泻发生率均高于相应的对照组,且潜伏期缩短,免疫抑制小鼠感染低剂量隐孢子虫发病的风险更大。  相似文献   

7.
目的建立免疫抑制昆明小鼠肺孢子虫肺炎动物模型。方法饮水中加入地塞米松(DEX)抑制小鼠免疫功能,通过对小鼠生存情况、肺组织病原学和病理学观察,判断小鼠是否诱发肺孢子虫肺炎;通过比较不同剂量DEX(2.5mg/L、5mg/L、7.5mg/L)对小鼠死亡情况、肺孢子虫感染情况的影响,确定适宜的DEX剂量。结果小鼠免疫抑制第4周查到滋养体,第7周查到包囊,第10周肺组织出现典型的间质性肺炎病理改变;DEx3个剂量组(2.5mg/L、5mg/L、7.5rag/L)均能感染肺孢子虫,但以5mg/L组感染率较高(75%),且小鼠死亡率较低(26.67%)。结论饮水中加入DEX可以建立昆明小鼠肺孢子虫肺炎动物模型,适宜剂量5mg/L。  相似文献   

8.
纯系 Wistar 大鼠38只,皮下注射醋酸可的松25mg/次,2次/周,连用4周开始检查大鼠粪便涂片中隐孢子虫卵囊和肺印片中卡氏肺孢子虫包囊。结果表明,大鼠用药4周粪便即可检出隐孢子虫卵囊,11周时检出率最高。用药4周肺印片亦可检出卡氏肺孢子虫包囊,7—8周时全部大鼠均可检出。  相似文献   

9.
目的 阐明空肠黏膜肥大细胞激活在隐孢子虫致病机制中的作用, 探讨苦参合剂抗隐孢子虫感染的作用机理。方法 30只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、 隐孢子虫感染模型对照组和苦参合剂实验组。建立隐孢子虫肠道感染小鼠模型, 经苦参合剂治疗3周后, 光镜下观察小鼠空肠病理变化; 甲苯胺蓝染色, 计数肥大细胞数量并观察其脱颗粒变化。结果 隐孢子虫感染模型对照组小鼠小肠上皮出现明显炎性病理改变。苦参合剂实验组小鼠治疗3周后小肠上皮较完整, 接近正常。甲苯胺蓝染色显示隐孢子虫感染模型对照组小鼠肥大细胞数量 (12.80±0.84) 较正常对照组 (1.60±0.89)明显增多 (P < 0.01), 且脱颗粒现象明显; 苦参合剂实验组小鼠肥大细胞数量 (2.00±0.71) 较隐孢子虫感染模型组明显减少(P < 0.01), 肥大细胞数量和形态接近正常对照组。结论 肥大细胞活化参与了隐孢子虫感染引起的肠黏膜炎症反应。苦参合剂可减少隐孢子虫感染小鼠空肠黏膜肥大细胞数量及抑制肥大细胞活化脱颗粒, 从而减轻炎症、 修复受损肠黏膜, 发挥治疗隐孢子虫病的作用。  相似文献   

10.
隐孢子虫是一种重要的人兽共患寄生原虫,能引起婴幼儿和免疫低下人群及动物以胃肠道腹泻为主的严重消化道疾病。隐孢子虫动物感染模型和体外培养体系的建立,为隐孢子虫的生长发育过程、免疫学、疫苗研究、药物筛选和疗效考核以及卵囊灭活技术提供了良好的基础。本文就近年来隐孢子虫的动物感染模型和体外培养体系的发展及其应用情况作一综述。  相似文献   

11.
用于评价小球隐孢子虫卵囊感染力的NMRI乳鼠模型   总被引:4,自引:0,他引:4  
[目的 ]评价一定数量的小球隐孢子虫卵囊的感染力。 [方法 ]4日龄 NMRI乳鼠经口腔管饲法接种不同数量的卵囊 ,7d后处死乳鼠 ,取消化道幽门至肛门段并匀成悬液 ,取此悬液置载玻片上 ,石碳酸品红染色 ,相差显微镜查见卵囊的为被感染乳鼠。以各组被感染乳鼠百分率评价卵囊的感染力。 [结果 ]接种 15 0 0或 2 0 0 0的乳鼠均被感染 ;接种 10 0 0、 5 0 0、2 5 0、 10 0和 5 0个卵囊的乳鼠 ,感染率分别为 88%、 74%、 5 1%、 2 8%和 9.5 %。 [结论 ]NMRI乳鼠模型接种卵囊数在 15 0 0~5 0范围内 ,其接种量与感染率呈正相关。该模型可用于评价一定数量小球隐孢子虫卵囊的感染力。  相似文献   

12.
微小隐孢子虫DNA探针的制备   总被引:2,自引:1,他引:2       下载免费PDF全文
目的:制备一种高度特异敏感的隐孢子虫检测探针。方法:应用聚合酶链反应(PCR)扩增微小隐孢子虫的一段核苷酸片段,扩增产物452bpDNA用半抗原地高辛标记制备成探针。结果:经敏感性试验,该探针可检测2pg水平的隐孢子虫DNA。用该探针与隐孢子虫DNA和溶组织内阿米巴、贾第虫、大肠杆菌及痢疾杆菌等相关生物的DNA和隐孢子虫宿主的DNA进行斑点杂交试验,该探针只与隐孢子虫DNA杂交。结论:该探针具有高度特异性和较高敏感性。  相似文献   

13.
聚合酶链反应检测粪便中微小隐孢子虫   总被引:29,自引:0,他引:29  
目的:利用聚合酶链反应(PCR)原理建立一种敏感且特异的方法检测人和动物粪便标本中的微小隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum,C.p.)。方法:从含有C.p.卵囊的人和豚鼠粪便标本中直接提取DNA用作PCR的模板。用一对人工合成的寡核苷酸序列作为PCR引物,扩增长为452bp的C.p.目的DNA片段。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳、溴化乙锭染色检测。结果:从感染C.p.的人和豚鼠粪便标本DNA抽提物中均扩增出目的片段,而从其他几种寄生虫、肠道微生物或宿主DNA中均不能扩增出目的片段。本方法的敏感性比目前常用的检测方法高约100倍。结论:PCR技术检测人和动物粪便中的C.p.,具有敏感性高且特异性强的特点,有希望成为隐孢子虫病诊断和流行病学调查的有力手段。  相似文献   

14.
目的 探讨隐孢子虫感染的基因检测方法。方法 用分离自人和牛的微小隐孢子虫各1株分别感染2组昆明小鼠,于接种后第6d、10d和14d分别收集每只动物粪便,用显微镜检查,再用Sheather's蔗糖梯度密度离心法纯化卵囊,提取总DNA,对每份DNA样本做10~0~10~(-3)稀释,然后用PCR对微小隐孢子虫18SrRNA基因进行特异性扩增。结果 接受具有活力的1×10~4个卵囊/只的36只小鼠,均获得感染;阳性样本被扩增出1条500hp的片段。隐孢子虫感染小鼠粪便样本各稀释度的PCR检测实验结果表明,PCR检测阳性率随模板DNA样本稀释倍数的增加而增高;小鼠感染后第6d、10d和14d的10~0和10~(-1)两个稀释度的PCR检测阳性率低于镜检结果,而10~(-2)和10~(-3)两个稀释度均高于镜检结果。结论 受染昆明鼠粪便内的微小隐孢子虫可通过扩增其18SrRNA基因检出。  相似文献   

15.
目的 探讨聚合酶链反应 (PCR)检测微小隐孢子虫 (Cryptosporidium parvum)感染的特异性和敏感性。 方法用 Sheather's蔗糖梯度离心法从微小隐孢子虫感染者粪便标本中分离纯化卵囊。用酚 -氯仿法抽提卵囊总 DNA。针对本虫 18S r RNA基因片段设计 1对引物 ,对模板 DNA进行 PCR扩增 ,同时以蓝氏贾第鞭毛虫 (Giardia lamblia)、溶组织内阿米巴 (Entamoeba histolytica)、阴道毛滴虫 (Trichomonas vaginalis)、刚地弓形虫 (Toxoplasma gondii)、日本血吸虫(Schistosoma japonicum)和旋毛虫 (Trichinella spiralis) ,以及人体血细胞等 DNA样本为对照。用琼脂糖电泳和溴乙腚染色对 PCR产物进行检测。 结果 仅微小隐孢子虫 DNA被扩增出一 5 0 0 bp的 DNA片段。其它对照 DNA样本均未出现扩增反应。 结论 PCR对隐孢子虫检测的特异性可高达 10 0 % ,敏感性也很强 ,可检测到 2 0 pg微小隐孢子虫卵囊的DNA。表明本实验建立的检测微小隐孢子虫的 PCR方法有效  相似文献   

16.
目的 构建微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP15的原核表达载体 ,并且在大肠杆菌中表达。 方法 用HindⅢ和EcoRⅠ酶分别从pET 2 8a(+ )和 pMD18 T 15质粒中酶切得到线性片段和CP15基因片段 ,然后用T4DNA连接酶连接 ,构建重组的CP15的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中表达 ,并用SDS PAGE、ELISA和Westernblotting进行鉴定。 结果 构建了CP15的原核表达载体 ,得到了一分子质量约为 15ku的融合蛋白 ,占大肠杆菌总蛋白的 3 8%。 结论 CP15融合蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达。  相似文献   

17.
抗微小隐孢子虫单克隆抗体免疫保护作用的研究   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
目的:探讨抗隐孢子虫单克隆抗体(McAb)的免疫保护作用。方法:在细胞培养的基础上进行体外中和试验,筛选具有保护作用的McAb,并通过大鼠及MDCK细胞接种隐孢子虫子孢子(CPS)进行动物实验和受染MDCK细胞透射电镜观察证实。结果:Z3D2可显著降低CPS在大鼠肠粘膜表面定植的隐孢子虫虫体及卵囊数。可使隐孢子虫各发育期的虫体减少,使MDCK细胞的超微结构受损减轻。结论∶McAbZ3D2具有良好的保护作用。  相似文献   

18.
聚合酶链反应检测隐孢子虫的临床应用探讨   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 探讨一种更为简便的聚合酶链反应(PCR)检测人体微小隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum,C.p.)的模板制备方法。方法 根据LaxerMA等克隆的C.p.核酸序列片段设计并合成一对引物,将含有C.p.卵囊的粪便经浓集、裂解后,直接取上清液作为模板与引物进行PCR反应。 结果 取自于桂林、福州和徐州三地含有C.p.的粪便标本均能扩增出418bp的C.p.目的DNA条带,阴性对照无扩增。结论 应用该引物对人粪便中的C.p.进行PCR检测具有高度特异性,该模板制备方法能缩短PCR检测C.p.时间,较适于临床实际应用。  相似文献   

19.
目的:利用非放射性标记探针技术检测经聚合酶链反应扩增后的人粪便中微小隐孢子虫DNA,观察该方法的特异性和敏感性。方法:用裂解法从粪便标本直接制备微小隐孢子虫模板DNA,用一对人工合成的寡核苷酸作PCR引物,扩增长度为452bp的微小隐孢子虫目的DNA片段。将扩增产物直接点在或经Southern印迹法转移到硝酸纤维素膜上,再和生物素标记的寡核苷酸探针杂交,经底物(BCIP)呈色观察。结果:阳性杂交信号只见于微小隐孢子虫DNA扩增产物,而约氏疟原虫、杜氏利什曼原虫、贾第虫、白色念珠菌、大肠杆菌和人白细胞DNA均无杂交信号。PCR结合斑点杂交或Southern印迹法检测隐孢子虫DNA 的敏感性均为011 pg。结论: 非放射性探针检测人粪便隐孢子虫DNA 的PCR 扩增产物, 具有敏感性高、特异性强、操作较简便及无放射性污染等优点。  相似文献   

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