联合应用CD9及CD10类细胞毒性单克隆抗体清除骨髓中非T急淋白血病细胞的研究

用B细胞培养细胞系SB及Nalm-1作为异质性白血病细胞模型,与9倍数量正常骨髓细胞混合后,观察 CD9类抗体 DS21、CD10类抗体55对骨髓中 SB 及 Nalm-1细胞依赖补体的净化效果。用间接免疫荧光及溴乙锭双染法及集落形成实验均证明,联合使用 DS21及55抗体对靶细胞清除效果优于任何一个单一抗体,同时对骨髓中造血祖细胞无明显杀伤作用。本实验结果为临床联合应用 DS21及55抗体净化非 T-ALL 患者自体骨髓提供了依据。     

急性非淋巴细胞性白血病细胞共刺激分子的表达

目的：检测急性非淋巴细胞白血病患者白血病细胞表面MHC—Ⅱ类分子和共刺激分子的表达情况。方法：采集骨髓中白血病细胞大于70％的27例初诊或复发息者骨髓细胞。荧光抗体标记。应用流式细胞仪进行HLA—DR、CD80(B7-1)和CI)和(B7—2)免疫标记检测。结果：27例病人除M3型表达明显低于其他各型外。HLA—DR抗原的表达均较高。其中M2型最高为90％；CD80阳性率很低，最高为M1型只有5％。其余均在l％～3％之间。CD86的表达高于CD80，最高为M5型为48％，最低为M6型为11％。结论：白血病细胞表面共刺激分子表达以CD80缺乏为主。     

抗人IgM（μ链）单克隆抗体的制备

本实验用可溶性抗原人 IgM 免疫 BALB/C 小鼠,按常规方法取免疫鼠脾细胞,分别与 NS-1、SP2/0细胞进行融合,ELISA 法筛选只与 IgM 反应阳性的抗体分泌杂交细胞,建立了6株杂交瘤株。经鉴定,此6株细胞分泌的抗体与 IgM 产生特异性反应,而不与其它免疫球蛋白重、轻链及 J 链交叉反应。经免疫电转印的硝酸纤维膜染色只显示分子量为72kD 的电泳带。放射免疫方法检测6个单克隆抗体,可分别识别4个不同的抗原决定簇。此组抗体识别 B 细胞胞浆内及膜表面μ链并可检测乙型病毒性肝炎患者血清中 HB_C-IgM 复合物。本组抗体间彼此加合可提高检测的灵敏性。抗 IgM(μ链)单克隆抗体对研究人 B 细胞的分化、成熟及功能提供了重要途径。     

甲基转移酶抑制剂对Raji细胞系增殖抑制的实验研究

 目的探索不同浓度甲基转移酶抑制剂(5-Aza-CdR)对甲基化细胞系Raji细胞的生长抑制效应,为临床应用提供实验依据.方法对5-Aza-CdR体外处理高甲基化致P15基因失活的淋巴肉瘤白血病细胞株Raji细胞,经流式细胞术、细胞生物学特征观察细胞的生长抑制效应.结果在(10-7～10-6)mol/L的范围内,随着药物浓度的升高,Raji细胞生长受到抑制,并表现出剂量时间依赖关系.5-Aza-CdR诱导细胞分化,阻滞于G0/G1期.结论甲基转移酶抑制剂抗DNA甲基化的白血病是可行的,值得进一步探索.     

分泌抗B型肉毒毒素单克隆抗体的产生与特性鉴定

以B型肉毒类毒素免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞进行细胞融合。用ELISA方法筛选有杂交细胞生长孔的上清液,其中有66.7％的孔可分泌肉毒毒素特异性抗体。用有限稀释法进行克隆化培养后,获得4株稳定的杂交瘤细胞系(3B10、3B11、3G12和4A5),在体外培养中均持续分泌抗体,培养液抗体效价达10~(-3)～10~(-5);注入BALB/C小鼠腹腔制备出富含抗体的腹水,抗体效价达10~(-6)～10~(-8)。经用A型和B型类毒素作特异性鉴定,表明抗体3G12及4A5与A型无交叉反应,为B型特异性的。抗体3B10及3B11与A型有弱交叉反应。Ig种类鉴定表明抗体3B10及3G12为IgG_1;抗体3B11及4A5为IgG_2。染色体检查证明4株细胞均为杂交瘤细胞。小白鼠体内进行中和保护力测定表明4种单克隆抗体对肉毒毒素均无保护作用。     

γ射线对白血病细胞B7分子、HLA抗原及抗原递呈能力的调节

协同刺激分子B7-1(CD80)、B7-2(CD86)及人类白细胞抗原(HLA)的缺乏是许多肿瘤逃逸免疫作用的重要机制之一.有效抗原递呈是诱导抗原特异免疫应答的始动环节及先决条件.在抗原递呈细胞(APC)向T细胞递呈抗原及激活T细胞的过程中,组织相容性复合物(MHC)分子及CD80、CD86、细胞内黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子(VCAM-1)等协同刺激分子起着关键作用[1].白血病细胞表面共刺激分子、HLA分子的调节研究对了解白血病逃避免疫作用和设计白血病免疫治疗方案有重要的意义.     

普通型急性淋巴细胞性白血病抗原组织分布特点

用单克隆抗体55,79检查了普通型急性淋巴细胞性白血病抗原(CALLA)的组织分布特点。CALLA除强烈地表达于普通型急性淋巴细胞性白血病(C-ALL)细胞表面外,某些T-ALL,个别B-ALL,以及一些具有淋巴细胞特点的慢粒急变白血细胞也表达此抗原。但个别正常骨髓细胞及大多数多形核白细胞也为CALLA~+细胞。非造血组织中,胎儿肾小球及近端曲管上皮、毛囊上皮细胞及小肠绒毛上保护性粘液也有CALLA表达。用免疫沉淀反应证明,多形核白细胞及非T非B细胞系Nalm-1表面CALLA分子量是完全相同的。     

急性淋巴细胞白血病免疫表型分析及其临床意义

目的探讨急性淋巴细胞白血病免疫表型及其临床意义。方法对43例急性淋巴细胞白血病患者进行免疫表型检测,记录结果并给予统计学分析。结果 CD34、HLA-DR表达均为阳性患者RR率30.00%,CD34、HLA-DR表达均为阴性患者RR率72.73%,提示CD34、HLA-DR表达均为阳性患者为临床RR率反而降低（P〈0.05）。结论临床医师应利用急性淋巴细胞白血病免疫分型特点准确诊断病情并采取有效措施,保障患者治疗效果及生命安全。     

眼眶小B细胞淋巴瘤组织病理学与免疫表型分析

 目的 研究眼眶小B细胞淋巴瘤病理诊断与肿瘤的分类、组织形态学和免疫特性.方法 对12例小B细胞淋巴瘤全部行CD3、CD43、CD20、CD79a、CD5、CD10、CD23、cyclin D1、Bcl-2、Bcl-6、Ki-67、TdT、免疫组化染色、分析,并按WHO肿瘤新分类标准重新阅片诊断.结果 12例淋巴瘤均呈示B细胞系免疫表型,12例中有8例为结外边缘区淋巴瘤中的黏膜相关淋巴组织淋巴瘤,1例套细胞淋巴瘤,1例滤泡性淋巴瘤,2例为弥漫性B小细胞淋巴瘤.结论 66.7%眼眶小B细胞淋巴瘤是黏膜相关淋巴组织淋巴瘤,免疫组化分析在眼眶小B细胞淋巴瘤诊断中重要的协助作用.     

抗伏马菌素B1单克隆抗体的制备和特性

目的建立敏感、特异和快速的针对伏马菌素B1(fumonisin B1, FB1)的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay ,ELISA)检测方法,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒.方法利用B细胞杂交瘤技术,建立能分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株.结果用伏马菌素B1-牛血清白蛋白(FB1-BSA)偶联物免疫8～10周龄雌性BALB/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,经过3～4次亚克隆建立了1个稳定分泌抗伏马菌素B1毒素抗体的杂交瘤细胞株,命名为5A9.将杂交瘤细胞打入BALB/c小鼠腹腔,获得含抗伏马菌素B1毒素单克隆抗体的腹水,并将腹水用饱和硫酸铵法进行纯化,得到单克隆抗体.该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,腹水中抗体的滴度分别为2.56×106,参考工作浓度为3.2×105.纯化后抗体的IgG含量为10.4 g/L,亲和常数为8.3×10-8 mol/L.该抗体与其他结构类似物无交叉反应,具有较高的特异性.结论制备了具有高特异性和亲和力的抗伏马菌素B1单克隆抗体,初步形成了针对伏马菌素B1的ELISA检测试剂盒.     

抗Salmonella minnesota R_(595)菌脂多糖杂交瘤的建立及其抗体特性的初步鉴定

将煮沸致死的R_(595)菌体免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞在PEG介导下与SP_(2/0)细胞融合,经筛选获得2个阳性孔2D_6、3H_4。将2D_6、3H_4阳性孔细胞克隆,传代最终获得8株能稳定分泌抗R_(595)内毒素单抗的杂交瘤株。经鉴定,杂交瘤细胞染色体数90余条,抗体效价(EL1SA法)10~4～10~5,2D_6B_1,2D_6E_7单抗的Ig类型为IgG_1,3H_42F_7、3H_42H_3单抗Ig类型为IgG2_b,轻链均为K链。类脂A抑制试验显示,单抗识别的表位为类脂A或KDO,表明抗体识别内毒素保守区域。间接EL1SA试验表明,抗体能与多种GNB交叉反应,提示抗体具广谱交叉反应性。玻片凝集试验显示,抗体仅能凝集R_(595)菌,不能凝集其它GNB菌。     

抗A型肉毒毒素鼠源性单克隆抗体的制备和鉴定

目的：制备与鉴定抗A型肉毒神经毒素重链C端（ heavy chain of botulinum neurotoxin serotype A, BoNT／AHc）特异性鼠单克隆抗体。方法通过纯化BoNT／AHc抗原、免疫BALB／c小鼠并建立杂交瘤细胞以制备鼠单抗,用ELISA、Western印迹实验和抗体分型试剂盒进行分析鉴定,并通过ELISA检测鼠单抗与BoNT／AHc突变体结合,初步鉴定其在BoNT／AHc的结合表位。结果得到纯度较高的BoNT／AHc抗原,制备了4株特异性鼠单抗1A4、3H3、3H7、5H8。间接ELISA结果显示,单抗细胞上清效价均＞3．0×103;Western印迹检测结果显示,单抗均能与BoNT／AHc特异性结合;抗体亚型鉴定结果为1A4、3H7属于IgG1（Κ）,3H3属于IgM（Κ）,而5H8属于IgG2b （Κ）;叠加ELISA实验表明,4株单抗抗原识别表位相近;用ELISA检测单抗与BoNT／AHc突变体结合实验结果初步确定了4株单抗与BoNT／AHc的结合表位。结论对抗A型肉毒毒素鼠源性抗体完成了制备和鉴定,为肉毒毒素中和抗体的开发与阐明中和抗体的表位奠定了基础。     

低剂量X射线对淋巴细胞及各亚群细胞功能的刺激作用

作者在研究低剂量辐射对全淋巴细胞刺激性效应的同时，用３种单克隆抗体分离出分化抗原簇＋－４，分化抗原簇＋－８和Ｂ细胞亚群，进一步探讨了低剂量辐射对３种亚群细胞的刺激作用。结果表明，Ｐａｎｎｉｎｇ法分离的各亚群细胞的纯度及存活率均在９０％以上；全淋巴细胞在０．１Ｇｙ剂量范围内有刺激作用，尤以０．１Ｇｙ剂量点效应最大；各亚群细胞在０．２Ｇｙ照射内均有刺激性效应的发生．分化抗原簇＋－４和Ｂ细胞在０．１Ｇｙ剂量点效应最强，而分化抗原簇＋－８在０．０５Ｇｙ点效应最强；相同剂量，分化抗原簇＋－４的刺激效应大于分化抗原簇＋－８；０．５Ｇｙ照射则表现出明显的抑制作用．     

抗人IgK和Igλ链单克隆抗体的制备及临床初步应用

用初乳和血清IgA免疫Balb/c小鼠的脾细胞与SP_2/O和NS-1瘤细胞融合,以ELISA双抗原夹心法检测获得5株杂交瘤细胞。其中3株(1D1、5C3、11A7)分泌抗人游离和结合型λ轻链;2株(4G12、14A6)分泌抗人游离和结合型K轻链。4G12与结合型K链反应比游离K链好。这些细胞株在长达1年的培养中仍能稳定分泌特异性单克隆抗体,经液氮冻存10个月后杂交瘤细胞仍保持原有的特性。用固相抗原竞争ELISA试验表明,两个抗K链McAb是针对不同的抗原位点,而3株抗λ链则针对相同的抗原位点。用于检测副蛋白和本周氏蛋白具有很好的特异性和敏感性。把McAb4G12-HRP和1D1-HRP混合,用于检测-EB病毒早期抗原(EA)和壳抗原(VCA)抗体被证明是满意的,同时试用于抗核抗体的检测也获得了初步的结果。     

Activation of immunological network by chronic low-dose-rate irradiation in wild-type mouse strains: analysis of immune cell populations and surface molecules

PURPOSE: To analyse the effects of chronic whole body low-dose-rate irradiation on the immune system in various wild-type mouse strains in comparison with the effects from acute high-dose-rate irradiation. MATERIALS AND METHODS: Wild-type mouse strains (C57BL/6, BALB/c, C3H/He, DBA/1, DBA/2 and CBA) were observed after chronic low-dose-rate gamma irradiation at 1.2 mGy hour(-1) by intensive analysis of immune cell populations and their various surface molecules, together with antibody-producing activity both with and without immunization by sheep red blood cells (SRBC). The cell surface functional molecules [cluster of differentiation (CD) 3, CD4, CD8, CD19, CD45R/B220, intercellular adhesion molecule (ICAM)-1, Fas, natural killer (NK)-1.1, chemokine [C-X-C motif] receptor 4 (CXCR4) and chemokine [C-C motif] receptor 5 (CCR5)] and activation molecules [thymocyte-activating molecule (THAM), CD28, CD40, CD44H, CD70, B7-1, B7-2, OX-40 antigen, cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4 (CTLA-4), CD30 ligand and CD40 ligand] were studied in the bone marrow, thymus, spleen, lymph nodes and peripheral blood by flow cytometry. RESULTS: By chronic low-dose-rate irradiation alone, CD4+ T cells and CD8 molecule expression increased significantly by a maximum of 30%, while CD40+ B cells decreased significantly. Increases of CD4+ T cells, CD40+ B cells and anti-SRBC antibody-producing cells by immunization were significantly enhanced by continuous low-dose-rate irradiation at 1.2 mGy hour(-1). CD3- CD4+ T cells, representative of abnormal immune cells, were absent in the chronically low-dose-rate-irradiated mice, while a dose-dependent increase of these cells was found in acutely high-dose-rate-irradiated mice given the same total doses. CONCLUSION: Chronic low-dose-rate radiation activated the immune system of the whole body.     

Activation of immunological network by chronic low-dose-rate irradiation in wild-type mouse strains: Analysis of immune cell populations and surface molecules

Purpose: To analyse the effects of chronic whole body low-dose-rate irradiation on the immune system in various wild-type mouse strains in comparison with the effects from acute high-dose-rate irradiation.

Materials and methods: Wild-type mouse strains (C57BL/6, BALB/c, C3H/He, DBA/1, DBA/2 and CBA) were observed after chronic low-dose-rate γ irradiation at 1.2 mGy hour^?1 by intensive analysis of immune cell populations and their various surface molecules, together with antibody-producing activity both with and without immunization by sheep red blood cells (SRBC). The cell surface functional molecules [cluster of differentiation (CD) 3, CD4, CD8, CD19, CD45R/B220, intercellular adhesion molecule (ICAM)-1, Fas, natural killer (NK)-1.1, chemokine {C-X-C motif } receptor 4 (CXCR4) and chemokine {C-C motif } receptor 5 (CCR5)] and activation molecules [thymocyte-activating molecule (THAM), CD28, CD40, CD44H, CD70, B7-1, B7-2, OX-40 antigen, cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4 (CTLA-4), CD30 ligand and CD40 ligand] were studied in the bone marrow, thymus, spleen, lymph nodes and peripheral blood by flow cytometry.

Results: By chronic low-dose-rate irradiation alone, CD4+ T cells and CD8 molecule expression increased significantly by a maximum of 30%, while CD40+ B cells decreased significantly. Increases of CD4+ T cells, CD40+ B cells and anti-SRBC antibody-producing cells by immunization were significantly enhanced by continuous low-dose-rate irradiation at 1.2 mGy hour^?1. CD3? CD4+ T cells, representative of abnormal immune cells, were absent in the chronically low-dose-rate-irradiated mice, while a dose-dependent increase of these cells was found in acutely high-dose-rate-irradiated mice given the same total doses.

Conclusion: Chronic low-dose-rate radiation activated the immune system of the whole body.     

抗-HIV单克隆抗体的筛选与鉴定

我们用HIV抗体阳性者血浆包被聚苯乙烯条,加入纯化的HIV组织培养抗原,通过夹心ELISA法,筛选出3株能分泌抗HIV单克隆抗体杂交瘤细胞,传代稳定。培养上清经Western blot染色鉴定含有抗-HIV gag蛋白。夹心ELISA法测得杂交瘤细胞培养上清中单克隆抗体滴度达到1∶6400,接种BALB/C小鼠获腹水抗体效价为1∶2430000。实验表明,用此单克隆抗体检测HIV病人血清抗体敏感、特异、稳定、重复性好,是一种良好的试剂。     

全身淋巴结X线照射预处理在活体肾脏移植中的应用

目的探讨非清髓性全身淋巴结照射（TLI）预处理在活体供肾肾移植中应用的安全性和有效性。方法共5例受体接受了TLI,平均年龄27岁。供受体的HLA-A、B、DR6个抗原中4个抗原错配1例,3个抗原错配2例,1个抗原错配2例。供肾切取均采用手辅助腹腔镜活体供肾切取手术。TLI治疗从移植手术前5天开始,90cGy／d,共5天。术中和术后的免疫抑制药物方案与同时期的活体或尸体肾移植相同,但剂量略减少。术后定期检测受体外周静脉血白细胞绝对值;流式细胞仪检测T细胞、CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞和Th1、Th2亚群的变化;观察免疫抑制药物的使用情况、移植肾状态、急性排斥反应频率和相关副作用。结果受体外周血白细胞在术后的1～2周达最低值,12周观察期内均未恢复到移植术前水平。T细胞总数和CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞在术后的1～2周内达最低值,300天的观察期内未恢复到移植前水平;在TLI治疗后Th1细胞百分比减少,Th2细胞百分比略有增加,因此Th2细胞相对增多。观察期内未发生移植肾排斥反应,移植肾功能正常。免疫抑制剂使用量低于同时期的其他活体肾脏移植和尸体肾脏移植受体。没有任何感染等并发症发生。结论非清髓性TLI是一种安全有效的免疫抑制治疗手段,可以获得较长时间的免疫抑制状态,在减少肾脏移植排斥反应的基础上,减少了其他非特异性免疫抑制剂的应用,是一个理想的活体肾脏移植的预处理方案。     

抗内甲基转移酶单克隆抗体的制备及临床应用研究

目的：建立抗人甲基转移酶单克隆抗体细胞株并建立相应的蛋白测定方法,观察脑瘤组织中O^6-甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移酶（MGMT）表达水平与亚硝脲药物疗效的关系,方法：采用细胞融合技术建立抗人甲基转移酶单克隆抗体细胞胞株,采用免疫组织化染色方法,检测60例脑瘤组织中MGMT表达水平,结果：得到了7株分泌抗人甲基转移酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并建立了测定MGMT免疫组化方法,观察的60例脑瘤组织中有27例MGMT阴性,经亚硝脲药物治疗,其中24例好转,3例复发,另3例MGMT可疑阳性的患者,经亚硝脲药物治疗,其中2例好转,1例复发,25例MGMT阳性患者,经亚硝脲药物治疗,5例好转,12例复发,8例死亡,5例MGMT为强阳性患者,使用亚硝脲药物治疗无效,全部死亡,结论：建立了7株稳定分泌抗人甲基转移酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株及MGMT蛋白测定方法,为临床开展亚硝脲预见性化疗提供了必要手段,初步结果显示,脑瘤组织中MGTM表达水平与亚硝脲药物疗效及预后有关,是肿瘤细胞对亚硝脲药物产生耐药性的基础。     

重组人IFN-γ诱导自身免疫性疾病机制的初步探讨

目的观察IFN-γ是否能诱导健康人外周血和脐带血中B细胞分泌产生抗体,以及两者产生抗体的差异,初探IFN-γ是否通过影响CD5＋BI细胞的功能而诱发自身免疫性疾病,为进-步阐明IFN-γ诱发自身免疫性疾病的机制、研究自身免疫性疾病的临床防治提供实验依据。方法无菌采集健康人外周血、脐带血,RosetteSeprTM法分离得到B细胞,流式细胞仪检测B细胞纯度,将分离得到的外周血B细胞和脐带血B细胞分别经IFN—γ刺激,于培养的第3、5、7dELISA法检测抗体的含量变化,对照组为未加任何刺激的外周血B细胞组和脐带血B细胞组。运用SAS统计软件将所得抗体的浓度进行统计学分析。结果经流式细胞仪检测,B细胞纯度为81．4％,两种来源B细胞经IFN-γ刺激后,于第3d开始产生IgM。但是,在同-时间段,外周血与脐带血来源B细胞经培养后所产生IgM的量的差异均无统计学意义（P〉0．05）;在血液来源相同的情况下随着时间的延长产生IgM的量逐步增加,三个时间段产生IgM的量进行两两比较的差异有统计学意义（P〈0．01）;所有实验组均未检测到IgG,空白对照组未检测到IsM、IsG。结论IFN-γ可刺激B细胞分泌产生抗体,且对B细胞的种类没有选择性;只刺激产生IgM,而无IgG产生,但其产生的抗体IgM的性质有待于进-步确定,其可能通过Ⅲ型超敏反应机制诱导自身免疫疾病的发生。