鼠疫F1McAb纯化抗原固相放射免疫试验检测鼠疫抗体的应用

本文介绍了用鼠疫F1McAb亲和层析法纯化鼠疫F1抗原及用Lodogen法制备~(125)I-F1标记物的方法。并以此标记物为试剂,用于固相放射免疫试验检测鼠疫F1抗体。试验表明,固相放射免疫试验较间接血凝试验特异性强,敏感性高,而且可用于检测各种鼠疫动物血清。操作程序亦较放射免疫沉淀试验简单,主要省去了离心沉淀及抽吸游离~(125)I-F1的过程。     

鼠疫抗原检测新技术在鼠疫监测中的应用评价

目的通过在宁夏鼠疫疫源地，应用中国CDC建立的新技术抗原检测胶体金试纸条、酶联免疫检测技术，与细菌培养、反向血凝技术监测鼠疫的效果比较，研究出适合宁夏鼠疫监测快速、敏感、特异、稳定的检测方法。方法应用四种方法对相同的鼠脏器标本同时检验，进行统计分析及检验效果比较。结果四种方法的检出率没有差别。结论新技术方法快速、简便、敏感、安全，适宜基层及野外鼠疫监测应用。     

鼠疫菌质粒缺陷株的建立及66Mdal质粒的功能

本文报道了应用吖啶黄诱变鼠疫菌获得了53株缺失66Mdal 质粒的鼠疫菌突变株。经反相间接血凝试验证实66Mdal 质粒决定 F1和 F2抗原(鼠毒素)的产生。     

土壤保存鼠疫菌F1抗原的试验研究

本文报告利用放射免疫沉淀试验的竞争抑制原理,成功地从实验室保存了五年鼠疫菌的土壤中,检出F1抗原。检出F1抗原量可达340ng/ml。结果表明,该项试验较反向血凝方法敏感。     

亚热带地区鼠疫病例的临床分析

目的：对收治的腺鼠疫疑似病例进行临床分析，探讨亚热带地区鼠疫病例的临床特点。方法：对97例鼠疫疑似病例进行临床分析，测定血清F1抗体、体液标本F1抗原和细菌分离培养，鼠疫病例分别给予链霉素、四环素、环丙沙星和头孢噻肟钠等药物治疗。结果：97例鼠疫疑似病例中确诊为腺鼠疫34例，表现为高热、烦燥，强迫体位的典型腺鼠疫表现占32．3％，不典型病例为67．7％。腺鼠疫病例在儿童组和成年组呈均匀分布，分别为42．4％和57．6％。腺鼠疫多发于腹股沟淋巴结，为69．9％。F1抗原检测为1：10240。结论：不典型的腺鼠疫病例可按（GB－15991－1995鼠疫诊断标准）鼠疫血清学间接血凝试验（IHA）检测F1抗体来确诊,F1抗原检测有早期诊断的意义。     

果洛州20年鼠疫血清F1抗体检测结果分析

果洛州２０年鼠疫血清Ｆ１抗体检测结果分析季永珍１季翠英２（１．青海省果洛藏族自治州地方病防治所，８１４０００；２．果洛藏族自治州卫生学校）果洛是多次发生鼠间和人间鼠疫的历史疫区。为了探明疫源地分布，流行特征及其强度，从１９７４年开始进行了大量动物血清...     

鼠疫耶尔森氏菌F1抗原的表位预测

目的预测F1抗原的B细胞表位,为抗F1单克隆抗体的制备提供理论依据,探索适合我国鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)蛋白B细胞表位研究的可行性方案。方法采用EMBOSS网络平台以及DNAStar Protean软件分析F1蛋白的二级结构、可塑性、亲水性和抗原性指数等参数,进行B细胞表位的预测。结果F1蛋白的B细胞表位可能位于第106~132和141~155等区域内。结论预测结果为后续抗F1单克隆抗体的制备奠定一定理论基础,表位预测法有利于我国鼠疫菌B细胞表位研究平台的建立。     

胶体金免疫层析法检测鼠疫F1抗体技术的应用及效果评价

目的研究鼠疫胶体金免疫层析法(GICA)快速检测鼠疫F1抗体技术在鼠疫血清学诊断、监测及流行病学调查中的应用及效果评价。方法应用GICA、双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgS-ELISA)和间接血球凝集试验(IHA)对比检测190份啮齿动物血清和11份鼠疫免疫血清中鼠疫F1抗体。结果190份动物血清IHA检测结果均为阴性:GICA检测出1份阳性血清,滴度1:10;DAgS-ELISA检测出3份阳性血清,滴度1:4( ) 2份和1:16( )1份。3种方法检测11份鼠疫免疫血清均为9份阳性,但GICA敏感性低于IHA和DAgS-ELISA (GICA与IHA:t=3．257,P<0．05;GICA与ELISA:t=3．625,P<0．01;IHA与ELISA:t=1.437,P>0．05)。201份血清检测结果,GICA与IHA总符合率99．50％,与DAgS-ELISA总符合率99．00％,3种方法检测结果差异无统计学意义(x2=0．5,P>0．05)。结论GICA检测鼠疫F1抗体敏感特异、简便快速,与DAgS-ELISA同样为鼠疫血清学快速诊断和鼠疫监测中有应用价值的检测技术。     

从表达菌培养液中提取鼠疫菌重组F1抗原

目的从表达鼠疫耶尔森氏菌F1蛋白的诱导培养液中提取纯化重组F1并检测其免疫反应性。方法收集诱导培养后离心去除菌体的培养液,采用硫酸铵沉淀法和PEG浓缩法提取F1蛋白,产物经镍离子金属螯合亲和层析纯化,免疫印迹(Western blot)鉴定其免疫反应性。结果硫酸铵沉淀法和PEG浓缩法均能从培养液中提取到重组F1蛋白,产物经纯化后可与鼠疫疫苗株免疫兔血清和既往鼠疫患者血清发生特异性结合反应。结论该表达菌表达效能较高,在诱导培养液中存在大量具有免疫学活性的重组F1蛋白。     

鼠疫耶尔森氏菌快速检测研究进展

目的论述一套对鼠疫耶尔森氏菌特异性强、快速、灵敏度高的快速检测方法,对鼠疫做到早发现、早预防、早诊断、早治疗,预防和控制鼠疫的发生和流行。方法查阅和收集国内外相关鼠疫耶尔森氏菌快速检测的文献和资料。结果鼠疫耶尔森氏菌检测技术向着快速、敏感、特异的标准化和国际化方向发展,其检测技术更加先进、齐全、完备。结论鼠疫耶尔森氏菌的检测技术从细菌学、血清学及分子生物学等正向更快速、更先进的方向发展,这对鼠疫防治将发挥重要作用。     

重组鼠疫菌F1抗原制备胶体金免疫层析试纸条的研制与现场应用评价

目的 表达和纯化重组鼠疫菌F1抗原(rF1),构建胶体金免疫层析试纸条(GICA),检测和评价该试纸条的现场应用效果.方法 以镍离子金属螯合(Ni-NTA)亲和层析柱和脱盐柱对rF1进行纯化并构建GICA,应用GICA、双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接血球凝集试验(IHA)3种方法对1份鼠疫菌免疫兔血清和1 685份现场血清样本(包括94份人、939份犬、34份猫、609份鼠和9份旱獭)进行F1抗体检测.结果 rF1得到高效表达并实现较好纯化.GICA、ELISA、IHA 3种方法检测1份鼠疫菌免疫兔血清,结果均为阳性,最低检测滴度ELISA法高于GICA法(1∶10×211比1∶10×29),GICA法高于IHA法(1∶10×29比1∶10×28).对1 685份现场血清样本进行检测,GICA法阳性89份(5.28％),IHA法阳性53份(3.15％),ELISA法阳性101份(5.99％);GICA法与IHA法的总符合率为97.3％,与ELISA法的总符合率为97.9％.配对资料x2检验结果显示,GICA法阳性检出率高于IHA法(x2=26.63,P＜0.05),但与ELISA法比较,差异无统计学意义(x2=3.36,P＞0.05).结论 rF1表达和纯化成功,用其构建的GICA特异性强,敏感性高,与IHA、ELISA法结合应用,能有效提高鼠疫检测的速度和质量.     

多种抗生素组合治疗实验兔鼠疫的疗效

目的观察环丙沙星、头孢曲松钠与链霉素联合用药,治疗实验感染动物鼠疫的疗效。方法采用环丙沙星+链霉素、头孢曲松钠+链霉素组合,每种抗菌药物减量使用,环丙沙星10mg/kg/d,头孢曲松钠25mg/kg/d,链霉素25mg/kg/d,每d分2次给予,疗程7d。结果治疗组动物全部存活,治愈率100%。结论联合用药治疗实验感染动物鼠疫,可减少抗生素用量,缩短病程,动物恢复快,治疗效果良好。     

胶体金免疫层析法快速检测鼠疫耶尔森菌F1抗体

目的建立检测鼠疫耶尔森菌F1抗体的胶体金标记免疫层析方法。方法胶体金标记纯化鼠疫F1抗原,双抗原夹心法原理制成免疫层析检测试纸条,并对兔、羊、人和黄鼠血清进行检测评价。结果用80份不同动物种属的阴性血清进行检测,未出现非特异性反应,对5份恢复期病人血清、13份免疫兔血清和2份免疫羊血清检测也取得阳性结果,对于8份I HA临界阳性(滴度1∶20)的达乌尔黄鼠血清检出阳性6份。结论建立了可以用于现场快速检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析方法。     

胶体金免疫层析法快速诊断鼠疫的实验研究

目的建立一种快速、简易的检测鼠疫F1抗原的胶体金免疫层析法(GICA).方法采用直径为20nm胶体金颗粒,标记F1单克隆抗体,并将标记物以6μL/cm喷于玻璃纤维;将另1株F1单克隆抗体与羊抗鼠IgG以1μL/cm喷线固定于硝酸纤维素膜上,装配后以4mm/条切割制成免疫层析检测试条.分别用粗制F1抗原和EV菌对该试纸条的敏感性进行测定,同时用44株鼠疫近缘菌及昆明小鼠、黄胸鼠、褐家鼠、大足鼠的正常血清等标本进行特异性检测.结果本试纸条可在15min之内完成实验,检测粗制F1抗原的浓度可达0.5ng/mL,最小检出EV菌菌量为10万个;本方法的特异性为100%.结论 GICA检测鼠疫F1抗原特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有广泛应用价值.     

鼠疫耶尔森菌F1抗原免疫Balb/c小鼠方法的研究

目的 观察鼠疫耶尔森菌F1抗原(F1Ag)单克隆抗体制备过程中,F1Ag免疫Balb/c小鼠的免疫剂量和方法,探索操作性强、用时短和免疫效果好的方法.方法 7～9周龄Balb/c小鼠48只,按体质量随机分成6组:150、100、50、25μg组(第1次接种为皮下多点注射,F1Ag分别为150、100、50、25μg,第2、3次接种分别为皮下多点注射和腹腔注射,F1Ag量均为100 μg)、皮下接种组(3次F1Ag接种均采用皮下多点注射,每次100 μg)、腹腔接种组(3次F1Ag接种均采用腹腔注射,每次100 μg),每组8只.首次免疫接种F1Ag+等量弗氏完全佐剂(CFA)的乳化剂;3周后第2次接种F1Ag+等量弗氏不完全佐剂(IFA)的乳化剂;1周后第3次接种F1Ag(不加佐剂);1周后取小鼠尾血,用双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgS-ELISA)和间接血球凝集试验(IHA)微量法检测F1抗体.结果 不同剂量(150、100、50、25μg)组小鼠血清F1抗体效价(DAgS--ELISA法:G=12 173.87、13 440.37、15 024.19、4466.72;IHA微量法:G=19 972.32、18 089.40、23 170.47、4871.08)比较,差异有统计学意义(DAgS-ELISA法:F=3.11,P<0.05;IHA微量法:F=4.11,P<0.05).150、100、50 μg组小鼠血清F1抗体效价明显高于25μg组(DAgS-ELISA法:t值分别为2.18、2.39、2.73,P<0.05;IHA法:t值分别为2.54、2.73、3.13,P<0.05).不同接种途径条件下,皮下注射组、腹腔接种组、100μg组小鼠血清F1抗体效价呈渐次增高趋势(DAgS-ELISA法:G=8933.44、9986.16、13 440.37:IHA微量法:G=13 777.25、16 384.00、18 089.40),但差异无统计学意义(F值分别为0.66、0.25,P>0.05).结论 F1Ag免疫小鼠首次皮下多点注射50μg,加强免疫(腹腔注射)100μg,可以缩短整个免疫周期,免疫效果良好,抗体水平较高.     

基于上转发光免疫层析检测鼠疫抗体方-法的初步优化与评价

目的 优化基于上转发光免疫层析检测鼠疫抗体的方-法(YPAb-UPT-LF)并对其进行评价。方法 依据《中国生物制品规程》收录方-法改进制备的F1抗原免疫家兔,制备兔多抗作为质控品和质控带;通过筛选试纸上的最适F1抗原对YPAb-UPT-LF进行优化,再用健康人血清稀释的多种血清和多抗进行评价。结果 质控品兔抗F1抗体的ELISA效价为31.25 ~ 62.5 μg/L。优化后的YPAb-UPT-LF对质控品的检测灵敏度为1 mg/L,比之前提升了10倍;已被ELISA方-法滴定的F1疫苗接种者血清和多种鼠疫菌株兔免血清稀释100倍后均可被YPAb-UPT-LF检出,覆盖度良好;对F1免疫兔血清、兔抗EV76和羊抗EV76的检测灵敏度分别为1:40 960、1.25 mg/L、0.625 mg/L,考虑到免疫层析的样本需经10倍稀释处理,判定YPAb-UPT-LF的检测能力与ELISA基本持平。结论 本研究成功优化了YPAb-UPT-LF,为鼠疫免疫诊断和F1疫苗评估等提供了备选方-法。     

酶联免疫吸附试验检测大沙鼠心血冲洗液中鼠疫F1抗体的可行性分析

目的 分析酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大沙鼠心血冲洗液鼠疫F1抗体的可行性及其在鼠疫监测工作中的应用价值.方法 2007年,在准噶尔盆地大沙鼠鼠疫疫源地,采用弓形夹捕获大沙鼠.取大沙鼠血清、心血冲洗液和肝脾浸液,用ELISA法检测鼠疫F1抗体的阳性检出率和阳性滴度.数据处理用SPSS 17.0.结果 大沙鼠鼠疫F1抗体的阳性检出率与平均阳性滴度,血清分别为12.35%(20/162)和2535;心血冲洗液分别为10.49%(17/162)和23.75,肝脾浸液分别为6.79%(11/162)和2240.血清鼠疫F1抗体的阳性检出率与心血冲洗液比较,差异无统计学意义(χ2=1.333,P＞0.05),与肝脾浸液比较,差异有统计学意义(χ2=7.111,P＜0.0l);心血冲洗液与肝脾浸液比较,差异有统计学意义(χ2=6.250,P＜0.05).鼠疫F1抗体平均滴度,血清与心血冲洗液和肝脾浸液比较,差异有统计学意义(t值分别为2.290,3.612,P＜0.05或＜0.01).鼠疫F1抗体阳性符合率,血清与心血冲洗液为85.0%(17/20),与肝脾浸液为55.0%(11/20);心血冲洗液与肝脾浸液为64.7%(11/17).结论 ELISA法能检测到鼠心血冲洗液中鼠疫F1抗体,在鼠疫监测中,利用鼠心血冲洗液测定鼠疫F1抗体具有可行性.

Abstract：

Objective To analyse the feasibility of detecting F1 antibody to Yersinia pestis in flushing fluid of heart blood of Rhombomys opimus with enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) method and its application value in surveillance of the disease. Methods Serum, flushing fluid of heart blood and infusion fluid of liver and spleen of Rhombomys opimus, which were caught by capture in the plague focus of Zunger basin in 2007, were taken to carry out detection for F1 antibodies to Yersinia pestis with ELISA method. The data were processed with SPSS 17.0. Results Positive rate and average titer of serum were 12.35%(11/162) and 25.35, of flushing fluid of heart blood were 10.49%(17/162) and 23.75 and of the infusion fluid of liver and spleen 6.79%(17/162) and 2240,respectively. No statistical difference was found in positive detection rate when it was compared between serum and flushing fluid of heart blood(χ2 = 1.333, P ＞ 0.05), but it was obviously different between serum and infusion fluid of liver and spleen(χ2 = 7.111, P ＜ 0.01 ) and between flushing fluid of heart blood and infusion fluid of liver and spleen(x2 = 6.250, P ＜ 0.05). There was a significant difference in average titer between serum, flushing fluid of heart blood and infusion fluid of liver and spleen(t = 2.290, 3.612, P ＜ 0.05 or ＜ 0.01 ). The plague F1 antibody positive coincidence rate of serum and flushing fluid of heart blood was 85.0%(17/20), of serum and infusion fluid of liver and spleen was 55.0% (11/20), and of flushing fluid of heart blood and infusion fluid of liver and spleen was 64.7%(11/17). Conclusions The ELISA method can detect Fl antibody in flushing fluid of heart blood,and the method is feasible in plague surveillance.     

石渠县2001-2012年鼠疫检测结果分析

目的对石渠县2001-2012年鼠疫检测结果进行分析,为有效防治鼠疫提供科学依据。方法细菌学检测采用鼠疫细菌学四步检验法;血清学检测采用鼠疫间接血凝试验。结果 2001-2012年石渠县用鼠疫细菌学方法检验各种标本15 322份,分离鼠疫菌99株。用血清学方法检测各种动物血清2 451份,检出阳性血清172份。结论石渠县鼠间鼠疫一直处于活跃状态。