细胞凋亡及凋亡细胞的检测

近几年细胞凋亡逐渐为生命科学界所重视，在检测技术和实际应用等方面取得了很大进展，成为医学领域研究的热点之一。随着相关研究的深入将推动基础及临床医学的进展。１　生物学含义１．１　命名　１９７２年ＫｅｒｒＪＦＲ根据细胞发生与坏死不同的死亡现象，提出了凋亡的概念，称为Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ（ＡＰ）。该词根据希腊语ａｐｏ（脱离）、ｐｔｏｓｉｓ（下降）组成，意如秋天落叶，是生命的自然过程。因细胞凋亡按一定程序进行，故又称程序性死亡（ＰｒｏｇｒａｍｍｅｄＣｅｌｌＤｅａｔｈ，ＰＣＤ）［１，２］。目前，凋亡与程序性…     

脉冲磁场对γ射线诱导HL-60细胞凋亡的影响

细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）或程序性细胞死亡（ＰＣＤ），是一种不同于坏死且受基因指导的主动性细胞自我消亡的过程。许多外环境因素都可诱发细胞凋亡，如电离辐射［１１］等。发生凋亡的细胞显示出一系列特征性变化，诸如：染色质凝聚，核固缩，形成凋亡小体，染色...     

细胞凋亡检测方法的研究

细胞调亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是１９７２年由Ｋｅｒｒ等人首先提出的。细胞凋亡是一种细胞生理性死亡形式，是一个主动过程。现已证实细胞凋亡是基因调控的程序性细胞死亡，又称程序化细胞死亡（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｗｌｌｄｅａｔｈ）。细胞凋亡的概念提出后，引起了学者们的关注，逐渐成为生物学尤其是医学中的一个新的研究热点。文就近年研究细胞凋亡的常用检测方法做一概述。１　细胞凋亡的形态学研究方法１１　光镜观察　凋亡细胞体积变小，变圆，与邻周细胞脱离，细胞膜完整但出现发泡现象；核染色质浓缩，形成深染团块呈新月…     

辐射诱发白血病U937细胞凋亡基因的分离与鉴定

目的：愈来愈多的证据显示Ｃａｓｐａｓｅ家族蛋白酶在细胞凋亡执行程序中发挥重要功能，辐射可诱发肿瘤细胞凋亡，分离，鉴定辐射诱发肿瘤细胞凋亡中Ｃａｓｐａｓｅ家族成员，是肿瘤细胞凋亡调控机制关键所在，方法：根据已知的Ｃａｓｐａｓｅ家族蛋白保护保守的氨基酸序列，设计简并引物，逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），分离，鉴定参与辐射诱发细胞凋亡基因。结果：Ｃａｓｐａｓｅ家族蛋白酶特异的抑制剂能阻抑制线诱发的     

Bcl—2基因家庭与细胞凋亡

目前已知在多细胞生物体中细胞有两种不同的死亡形式 :坏死 (Ｎｅｃｒｏｓｉｓ)和凋亡 (Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)。细胞凋亡是指细胞在一定生理或病理条件下 ,由基因调控的主动而有序的自我消亡过程 ,在形态学、生化和分子水平上与细胞坏死有明显区别。目前公认的凋亡形态学改变为 :细胞体积缩小、胞浆浓缩、核固缩、染色质密度增高呈半月形并凝集于核膜周边、核仁裂解及凋亡小体的形态。细胞凋亡的生化特征是细胞核ＤＮＡ被核酸酶降解成 180～ 2 0 0ｂｐ左右的ＤＮＡ片段 ,电泳呈特征性梯状带 (ＤＮＡＬａｄｄｅｒ)。细胞凋亡与增殖的动态平衡…     

细胞凋亡及相关基因

细胞凋亡 (Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)作为一种细胞的死亡方式在近几年越来越得到医学研究者的重视和兴趣。所谓细胞凋亡是指细胞在基因的调控下 ,主要通过激活内源性ＤＮＡ内切酶的活性而发生的细胞自然死亡过程〔1〕,是生物体以一种与细胞有丝分裂相反的方式调节细胞群体相对衡定的主要方式。1　细胞凋亡的形态和生化特征　　凋亡与坏死 (ｎｅｃｒｏｓｉｓ)不同 ,凋亡是一种生理性死亡过程。其特征为细胞首先变圆 ,随即与邻近细胞脱离 ,胞浆收缩 ,内质网扩张呈泡状并与胞膜融合 ;核染色质密度增高聚集在核膜周边 ,呈半月形 ,核仁裂解 ;进而胞膜…     

X射线诱发大鼠小肠隐窝细胞凋谢死亡

Ｘ射线诱发大鼠小肠隐窝细胞凋谢死亡张宇光Ｃ．Ｓ．Ｐｏｔｔｅｎ，Ｃ．Ｃｈａｄｗｉｃｋ细胞死亡可以分为两种类型，坏死（ｎｅｃｒｏｓｉｓ）和凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）［１］。细胞坏死是由于环境非生理因素的损伤，发生细胞肿胀，细胞膜破裂等一系列炎性反应；而细...     

辐射与细胞凋亡及其基因调控

细胞凋亡是一种具有特征性形态和生化改变的细胞死亡过程。这些改变是一系列基因的程序性作用而引起生化联级反应（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃａｓｃａｄｅ Ｒｅａｃｔｉｏｎ）的结果。本就辐射及其它因素引起的细胞凋亡有关生物分子和基因做一讨论。     

辐射与细胞凋亡及其基因调控

细胞凋亡是一种具有特征性形态和生化改变的细胞死亡过程。这些改变是一系列基因的程序性作用而引起生化联级反应（ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＣａｓｃａｄｅＲｅａｃｔｉｏｎ）的结果。本文就辐射及其它因素引起的细胞凋亡有关生物分子和基因做一讨论。     

运动训练与心血管系统细胞凋亡现象

１心血管系统细胞凋亡的研究概况 细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ,ＡＰ）或程序化细胞死亡（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ　ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ,ＰＣＤ）是多细胞有机体为调控机体发育,维持内环境稳定,由基因控制的细胞主动死亡过程。１９７２年,Ｋｅｒｒ［１］等首次提出了细胞凋亡的概念; １９７７年,Ｄｏｎ ＭＭ注意到在生理或病理性刺激条件下,淋巴细胞发育过程中存在凋亡现象［４４］;１９８０年,Ｗｙｌｌｉｅ［２、３］研究胸腺细胞在糖皮质激素作用下引致的细胞凋亡变化,总结并归范出细胞凋亡的共同形态学特征,包括核固缩和ＤＮ…     

吸入性损伤对小鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的探讨细胞凋亡、促凋亡基因和凋亡抑制基因在吸入性损伤发生的作用及意义。方法以小鼠烟雾吸入性损伤为模型，应用RT—PCR和TUNEL技术，观察其损伤后肺组织中Bcl-2和Bax基因mRNA表达及细胞凋亡的变化。结果小鼠烟雾吸入性损伤后肺组织Bcl-2和Bax的表达增加，细胞凋亡指数升高，与对照组相比，差异有非常显著性（P〈0．01）。结论提示细胞凋亡可能参与了吸入性损伤肺组织的病理形成过程。     

创伤失血性休克早期大鼠胸腺和脾脏中的细胞凋亡

严重创伤导致免疫抑制的现象早已为人们所认识，免疫系统在创伤后多器官衰竭中的重要作用正逐渐受到重视。胸腺和脾脏是产生淋巴细胞和免疫应答的重要器官，细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）在淋巴细胞的选择、分化和成熟中起着至关重要的作用。笔者重点研究了细胞凋亡这一...     

前胶原基因与骨关节炎、骨质疏松症

随着分子生物学技术的发展，许多胶原基因的ｃＤＮＡ都得以克隆，为一些重要胶原的研究、之间的相互比较，以及一些胶原相关疾病发病的分子机制的阐明提供了可能。笔者重点讨论骨关节炎（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＯＡ）和骨质疏松症（ｓｔｅｏＰｏｒｏｓｉｓ，ＯＰ）这两种常见骨与关节疾病发病中有关胶原方面的分子机制。一、前胶原基因与骨关节炎（ＯＡ）首先，骨关节炎（ＯＡ）可以是一系列导致ＯＡ征象的疾病的总称，包括原发全身型ＯＡ、结节型ＯＡ、焦磷酸盐沉积病（ｃａｌｃｉｕｍｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｐｏ－ｓｉｔ…     

最新医学动态摘编

选择性杀癌细胞物：ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ－２Ｌ近期研究发现了一种能选择性诱导癌细胞发生自杀的蛋白ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ－２Ｌ（ＴＮＦ－ｒｅｌａｔｅｄａｐｏｐｌｔｏｓｉｓ－ｉｎｄｕｃｉｎｇ／Ａｐｏ－２ｌｉｇａｎｄ）。ＴＲＡＩＬ与肿瘤细胞表面高表达的ＤＲ４（ｄｅａｔｈｒｅｃｅｐｔｏｒ－４）、ＤＲ５结合而引起肿瘤细胞凋亡。而正常细胞表面高表达的ＤＣＲ１（Ｄｅｃｏｙｒｅｃｅｐｔｏｒ）也与ＴＲＡＩＬ结合但不引起细胞凋亡。ＴＲＡＩＬ能选择性地引起肿瘤细胞凋亡,但无严重的炎症反应及肝损害副作用,并且对肿瘤抑制基因Ｐ５…     

烟雾吸入伤大鼠肺组织细胞凋亡及凋亡调控基因表达的变化

探讨细胞凋亡及凋亡调控基因在大鼠烟雾吸入性损伤发生、发展中的作用及意义。以大鼠烟雾吸入伤为模型，应用TUNEL、免疫组化及RT－PCR技术，观察烟雾吸入伤后不同时相肺组织中Bcl-2、Bax、Fas、Fas配体（FasL)基因mRNA及蛋白的表达状态及其与细胞凋亡异常之间的关系。结果显示，烟雾吸入伤后细胞凋亡指数升高；烟雾吸入伤后可上调Bcl-2、Bax、Fas、FasL表达，mRNA表达在12h达峰值，蛋白表达在24h最高。在各时相点Bax、Fas、FasL基因表达与肺组织细胞凋亡有正相关关系。提示烟雾吸入伤后细胞凋亡增加，细胞存活同时受生存基因（Bcl-2)和死亡基因（Bax、Fas、FasL)的双重调控，凋亡相关基因参与了烟雾吸入伤过程细胞凋亡的调控。     

多药抗药基因mdrl探针的基因克隆

多药抗药基因（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｔｇｅｎｅ，ｍｄｒｌ）的表达水平与细胞的耐药性直接相关，检测ＭＤＲ１的表达水平可预测化疗的效果以及预后。用分子原位杂交的方法可检测单个细胞中ＭＤＲ１的表达水平。采用ＰＣＫ扩增方法获得了一段特异的ＤＮＡ片段，并将其克隆到ｐＵＣ１８载体中，经ＤＮＡ序列分析证明与文献一致。此探针可用于临床标本的分子杂交检测。     

创伤性脑损伤后细胞凋亡及Bcl-2基因治疗

目的 研究创伤性脑损伤（TBI）后的细胞凋亡情况，并探讨Bcl-2基因治疗对凋亡的作用。方法 60只SD大鼠随机分成TBI组（15只）、假处理组（15只）、基因治疗组（15只）和空载体对照组（15只）。除了假处理组外，所有大鼠均用Feeney自由落体致伤装置制成TBI模型。通过RT—PCR法克隆Bcl-2基因cDNA，并利用重组真核表达载体转染受损的脑细胞。用免疫荧光法检测Bcl-2基因的表达。原位末端标记法和电镜检测细胞凋亡情况。结果 与假处理组相比，TBI组的伤灶周围可以发现更多凋亡细胞，并且两者之间的凋亡指数差异有统计学意义（P〈0．01）。通过脂质转染，Bcl-2基因成功在体内表达。基因治疗组的Bcl-2（＋）细胞的标记指数为（8．3±0．7）％，而在空载体对照组中仅为（0．9±0．2）％（P〈0．01）。结论 细胞凋亡存在于损伤的脑组织中，而Bcl-2基因治疗能抑制这种凋亡的发生，后者为TBI后早期干预促进脑细胞存活提供了一种可行的方法。     

p53与HBV相互作用对7721细胞凋亡及p21启动子的影响

为了观察HBV与p53是否存在相互作用的关系，以进一步揭示与原发性肝细胞肝癌发生发展的相关机制，选用7721肝癌细胞系（表达野生型p53，HBV阴性）为靶细胞，应用磷酸钙转染法，将pCMVp53单独或者与野生型HBV质粒（pCMVHBVa）、突变型HBV质粒（pCMVHBVb）共转染细胞，用annexin-V-FITC标记及流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。各组另与含有p21基因启动子的荧光素酶报告基因质粒p21-luc共转染细胞，通过检测荧光毒酶的表达，了解p21启动子的活化情况。结果表明，单独的pCMVp53质粒转染7721细胞系能够促进p21报告基因的表达，细胞凋亡率升高；pCMVp53与pCMVHBV。共同转染时，对p21基因启动子的激活作用增强、细胞凋亡率明显增加，而与pCMVHBVb共转染时则否。提示HBV在该细胞内的复制能够诱导增强p53的作用并对其下游基因p21的转录有促进作用，导致细胞凋亡的增强。     

bcl-2基因转染对大鼠胰岛细胞培养的影响

目的探讨bcl-2基因转染对培养的胰岛细胞凋亡和生物活性的影响。方法用腺病毒介导的基因转染方法把bcl-2转染人胰岛细胞，用RT—PCR和免疫细胞化学方法检测转染细胞中bcl-2的表达，原位末端标记（TUNEL）检测细胞凋亡，台盼蓝测定细胞活度，放免法测定培养液巾胰岛素水平了解胰岛功能。结果转染的胰岛细胞中70％的细胞有bcl-2蛋白的表达，转染细胞的凋亡率为6％，对照组为22死，转染胰岛细胞的活度为91％，对照组为68％，转染胰岛细胞在高糖培养基中胰岛素水平高于对照组。结论腺病毒介导的基冈转染方法能成功转染胰岛细胞，bcl-2基因转染能降低细胞凋亡率，改善胰岛细胞功能。     

去纤酶对血管损伤后内膜sis基因转录及PDGF—BB表达的影响

为探讨ｓｉｓ基因及其表达产物在血管损伤后内膜增生反应中的作用及去纤酶对该癌基因转录和表达的影响，在１９只犬冠状动脉内植入过大钽丝支架。随机分为去纤酶组（ｎ＝１０）及对照组（ｎ＝９），分别用去纤酶及肝素治疗。２８天后取材作血小板源生长因子－ＢＢ（ＰＤＧＦ－ＢＢ）免疫组化及ｓｉｓ基因ｍＲＮＡ原位杂交，用图像分析系统测定染色密度指数。结果支架植入后２８天，新生内膜中可检测到ｓｉｓ基因的转录和表达。去纤酶