IL-1α对体外培养人牙囊细胞TNF-α表达的影响

目的：研究白细胞介素-α（interleukin—1α,IL—1α）对体外培养的人牙囊细胞（dental follicle cells,DFC）分泌肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF—α）的影响,探讨TNF-α在牙齿萌出过程中的作用。方法：原代培养人牙囊细胞;取3-6代细胞,培养基中加入IL-1α,在不同浓度和时间点,MTT检测细胞增殖,免疫组化法检测细胞中TNF—α的表达,Sandwich ELISA测定培养上清中TNF-α的含量。结果：IL-1α在25ng／ml,促进人牙囊细胞的增殖,IL-1α与牙囊细胞共孵育,可使TNF-α表达和分泌增强。结论：IL-1α有增强人牙囊细胞TNF-α表达的作用。     

肿瘤坏死因子α对体外培养人牙囊细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对体外培养人牙囊细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法原代培养人牙囊细胞,传代至第4代,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测TNF-α对体外培养人牙囊细胞VEGF mRNA表达及上清液中VEGF含量改变的浓度和时间效应。结果①不同浓度TNF-α作用1h后,TNF-α处理组人牙囊细胞VEGF mRNA表达均较对照组增强(P<0.05),最佳效应浓度为25ng/ml;不同浓度TNF-α作用12h后,除1ng/ml组外,其余各组上清液中VEGF蛋白含量明显高于对照组(P<0.05)。②在时间效应上,25ng/mlTNF-α作用1h后人牙囊细胞VEGF mRNA表达最强,然后随时间延长其表达逐渐下降,但仍强于对照组(P<0.05);细胞培养上清液中VEGF蛋白含量随时间延长逐渐增加,但TNF-α处理组VEGF蛋白含量高于对照组(P<0.05)。结论TNF-α能够促进体外培养人牙囊细胞合成并分泌VEGF。     

重组人白介素-1α对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG影响的荧光定量RT-PCR研究

目的：通过观察重组人白介素-1α（rhIL-1α）对体外培养人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）核因子kB受体活化因子配基（RANKL）和骨保护素（OPG）表达的影响来探讨牙槽骨改建的调节机制。方法：以不同浓度rhIL-1α（0、5、10、20μg/L）作用于体外培养HPDLFs,于24 h后收集细胞,利用荧光定量RT-PCR技术检测RANKLmRNA和OPG mRNA的表达。结果：rhIL-1α同时上调HPDLFs表达RANKL mRNA和OPG mRNA,但RANKL/OPG的比值增加,这种调节作用在10μg/L的作用浓度时最明显。结论：rhIL-1α可在体外影响HP-DLFs表达RANKL mRNA和OPG mRNA,调节RANKL/OPG比值,与牙槽骨改建密切相关。     

白细胞介素-10对人牙囊细胞OPG表达的影响

目的：研究人牙囊细胞白细胞介素-10（IL-10）蛋白的表达及其对骨保护素（08teoprotegerin，OPG）表达的影响。方法：采用组织块加胶原酶消化法培养人牙囊细胞，进行IL-10免疫组化染色。将25ng／ml IL-10作用于牙囊细胞0h、1h,3h,6h,9h，用ELISA法检测上清液中OPG含量变化。结果：人牙囊细胞IL-10表达阳性。25ng／ml IL-10作用于人牙囊细胞3-6hOPG表达显著增加（P〈0．05）。结论：人牙囊细胞表达IL-10，IL-10通过增加人牙囊细胞OPG表达，在牙齿萌出过程中起重要的调控作用。     

肿瘤坏死因子-α诱导人牙囊细胞的凋亡作用

目的：研究不同浓度肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对体外培养人牙囊细胞凋亡的影响。方法：第五代HDFCs分别与浓度为0（对照组）、50、100、200 ng/mL的TNF-α共孵育24 h,流式细胞仪AnnexinⅤ-FITC/PI双染技术检测牙囊细胞凋亡细胞比率。结果：HDFCs的凋亡率随TNF-α浓度升高而上升,由对照组的2.3%增加到7.1%。结论：TNF-可诱导HDFCs的凋亡,这种作用可能在牙齿发育、萌出过程中起重要作用。     

甲状旁腺激素对人牙囊前体细胞核因子κB受体激活因子配体和骨保护素mRNA表达的影响

目的:研究不同浓度、不同作用时间的甲状旁腺激素(Parathyroid Hormone,PTH)对体外培养的人牙囊前体细胞表达核因子κB受体激活因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)mRNA的影响。方法:原代培养和纯化人牙囊前体细胞,取生长状况良好的第3～5代人牙囊前体细胞,与不同浓度(0.1、1、10、100 ng/mL)重组人PTH共孵育,分别用RT-PCR检测不同浓度PTH作用2 h和100 ng/mL PTH作用不同时间点人牙囊前体细胞RANKL、OPG的mRNA表达,以GAPDH作为内参,进行灰度值比较。结果:随着PTH浓度(0.1、1、10、100 ng/mL)和PTH作用时间(2、4、8 h)的增加,人牙囊前体细胞RANKL mRNA的表达逐渐增高,OPG mRNA的表达逐渐降低。不同浓度组间和不同时间之间相比,RANKL和OPG mRNA表达量均有显著性差异(P<0.05)。结论:PTH可增强体外培养的人牙囊前体细胞RANKL mRNA的表达,降低OPG mRNA的表达。     

白细胞介素-1α和集落刺激因子-1对大鼠牙囊细胞骨保护素的影响

目的:研究白细胞介素(IL)-1α和集落刺激因子(CSF)-1对体外培养大鼠牙囊细胞骨保护素(OPG)表达的影响。方法:组织块结合酶消化法体外培养原代牙囊细胞并传代。取50 ng/ml IL-1α或CSF-1刺激第4代牙囊细胞,western blot检测第0、1、3、6、12 h OPG表达。采用不同浓度(0、4、10、50、250 ng/ml)的IL-1α或CSF-1孵育第4代牙囊细胞12 h,western blot检测OPG表达。结果:western blot结果显示随着IL-1α刺激时间和浓度的增加,OPG条带逐渐加深。随着CSF-1刺激时间的增加,OPG条带变浅但高于对照组;各CSF-1浓度组OPG条带无明显变化趋势,但高于对照组。结论:IL-1α、CSF-1均可上调大鼠牙囊细胞内OPG蛋白水平。     

CSF-1对体外培养人牙囊细胞OPG表达的影响

目的研究集落刺激因子(CSF-1)对体外培养的人牙囊细胞骨保护素(OPG)表达的影响。方法原代培养人牙囊细胞,传代至第3代,制备细胞爬片,进行OPG免疫组化染色;3~6代人牙囊细胞长至80%时,用胰酶消化,离心,重悬,制成单细胞悬液,接种到细胞培养皿,细胞长满至80%时,培养基中加入25ng/ml的CSF-1,孵育0.5、1、3、6h,分别收集上清液,ELISA法检测OPG蛋白分泌量的变化,提取总RNA进行RT-PCR,检测OPG mRNA的表达变化。结果正常人牙囊细胞OPG蛋白表达阳性;25ng/ml的CSF-1可降低人牙囊细胞OPG的表达,共同孵育1h,OPG表达降至最低(P<0.05)。结论牙囊细胞表达OPG,同时在牙齿萌出的特定时期,CSF-1通过下调人牙囊细胞OPG,减弱对破骨细胞形成的抑制作用,促进破骨细胞分化成熟,调节牙齿萌出。     

CSF-1和PTHrP对人牙囊细胞OPG表达的影响

目的:研究集落刺激因子(colony-stimulating factor-1,CSF-1)和甲状旁腺相关蛋白(parathyroid hor-mone-related protein,PTHrP)对体外培养的人牙囊细胞(dental follicle cells,DFC)表达骨保护素(osteo prote gerin,OPG)的影响。方法:原代培养人牙囊细胞,选第3~6代细胞,培养基中分别加入不同浓度的CSF-1和PTHrP与牙囊细胞共同孵育,MTT法检测人牙囊细胞的增殖活性;Sandwich ELISA测定培养上清液中OPG的含量。结果:25ng/ml的CSF-1和10ng/ml的PTHrP可以促进DFC增殖,并且此浓度两种因子分别与DFC共培养OPG表达均降低(P<0.05)。结论:在牙齿萌出的某时期牙囊自分泌和旁分泌的CSF-1和PTHrP有降低人牙囊细胞OPG表达的作用。     

集落刺激因子在人牙囊细胞中的表达

目的：研究体外培养的人牙囊细胞中集落刺激因子（CSF-1）表达及定位，以及不同浓度的IL-1α对牙囊细胞分泌CSF-1的影响，探讨CSF-1在牙齿萌出中的作用，方法：取12岁患者因正畸需要拔除的埋藏阻生牙齿的牙囊进行人牙囊细胞培养，用免疫组织化学染色技术，观察CSF-1在细胞中的表达及定位。使用ELSIA方法观察0-100ng/ml的五个不同浓度的IL-1α对培养的牙囊细胞分泌CSF-1的影响。结果：培养的人牙囊细胞呈梭形，主要为成纤维样细胞，在牙囊细胞中CSF-1的表达呈阳性，定位于细胞的胞质中，围绕细胞核周围染色较强，细胞核内染色阴性，细胞外未见阳性表达。培养细胞加入IL-1α后，CSF-1的浓度明显增加并随IL-1α浓度的增加而增加。结论：培养的人牙囊成纤维细胞具有合成与分泌CSF-1的能力，IL-1α可以促进体外培养的人牙囊细胞CSF-1的分泌。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖和骨保护素mRNA表达的影响

目的：研究淫羊藿苷对人牙周膜细胞（periodontal ligament cells，PDLCs）增殖和骨保护素（osteoprotegerin，OPG）mRNA表达的影响。方法：体外培养人PDLCs，用MTT法检测不同浓度的淫羊藿苷（0．001、0．01、0、1μg／mL）、不同时间（24、48、72、96h）作用下人PDLCs的增殖水平；RT-PCR检测OPG mRNA的表达。结果：淫羊藿苷（0、001-0．1μg／mL）对人PDLCs增殖和OPG mRNA表达具有促进作用（P〈0．01），0．01μg／mL浓度作用最明显。结论：淫羊藿苷能够促进人PDLCs增殖和OPG mRNA表达。     

rhIL一1α与1，25一（OH）2D3联合作用对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG的影响

目的：研究rhIL-1α与1,25-（OH）2D3联合作用对HPDLFs表达RANKL和OPG的影响,探讨牙槽骨改建的调节机制。方法：10μg/L rhIL-1α与1×10-8 mol/L1,25-（OH）2D3联合作用于体外培养的HPDLFs,于48h后收集细胞,利用荧光定量RT-PCR技术检测RANKL mRNA和OPG mRNA的表达,探讨RANKL/OPG比值的变化。结果：rhIL-1α和1,25-（OH）2D3都调节HPDLFs表达RANKL和OPG。rhIL-1α单独作用上调HPDLFs表达RANKL和OPG,增加RANKL/OPG比值（P〈0.05）;1,25-（OH）2D3单独作用则上调表达RANKL,下调表达OPG,增加RANKL/OPG比值（P〈0.05）。这2种调节因子联合作用对HPDLFs RANKL表达有协同作用,但对RANKL/OPG比值的影响无协同效应。结论：rhIL-1α和1,25-（OH）2D3都通过RANKL-OPG途径调节HPDLFs参与牙槽骨改建,2种调节因子联合作用对RANKL表达的影响明显优于单因素诱导效果,但对RANKL/OPG比值的影响并没有产生协同效应或累加效应。     

巨噬细胞集落刺激因子对体外培养人牙囊细胞破骨细胞分化因子表达的影响

目的：研究巨噬细胞集落刺激因子对体外培养的人牙囊细胞破骨细胞分化因子（RANKL）mRNA表达的影响。方法：原代培养人牙囊细胞，传至第3代，制备细胞爬片，进行RANKL免疫组化染色；选取生长状态良好的第3-6代人牙囊细胞，胰酶消化后制成单细胞悬液，培养基中分别加入25ng／mL的巨噬细胞集落刺激因子，共同孵育0．5、1、3、6、12h，提取总RNA进行RT-PCR，灰度值半定量分析RANKL mRNA的变化。结果：正常人牙囊细胞RANKL蛋白表达阳性；25ng／mL的巨噬细胞集落刺激因子可升高人牙囊细胞RANKL的表达；共同孵育3h，RANKL表达最高。结论：巨噬细胞集落刺激因子对体外培养的人牙囊细胞表达RANKL，具有正向调节作用。     

TNF-α和PGE2联合在人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达中的作用

目的:探讨不同浓度组合的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和前列腺素E2(PGE2)在人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)及其饵受体骨保护素(OPG)mRNA表达中的作用。方法:将体外培养的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度组合的TNF-α和PGE2处理24h,通过荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)来观察人牙周膜成纤维细胞RANKL、OPG mRNA表达水平。结果:不同浓度组合对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达有促进作用,尤以10ng/mL TNF-α 10-7mol/L PGE2组合对RANKL mRNA表达的促进作用及RANKL/OPG比值的增强作用最为明显。结论:10ng/mL TNF-α和10-7mol/L PGE2联合具有协同作用,通过促进人牙周膜成纤维细胞RNAKL/OPG表达量,可能在调节牙周炎引起的牙槽骨吸收中起到重要的作用。     

TNF-α对人牙周膜细胞表达Asporin的影响

目的：检测TNF-α对人牙周膜细胞Asporin表达的影响,初步探讨Asporin在牙周炎致病过程中扮演的角色,为牙周炎的发病机制研究提供线索.方法：改良酶消化法体外分离培养人牙周膜细胞,qRT-PCR检测在不同浓度TNF-α （0.5、1、2、5、10 ng/mL）作用下牙周膜细胞Asporin的表达及使用1 ng/mL的TNF-α作用于牙周膜细胞3、6、24和48 h后,牙周膜细胞中Asporin的表达;应用免疫细胞化学检测Asporin在牙周膜细胞中表达定位和在TNF-α作用下的表达变化,其结果用Image-Pro Plus （IPP）软件分析.结果：qRT-PCR结果显示,1ng/mL TNF-o能最大程度降低人牙周膜细胞中Asporin的表达（P＜0.05）,TNF-α作用后3h开始,Asporin表达下降,作用24 h,48 h后,其表达降低最为明显（P＜0.05）.免疫细胞化学的检测结果与qRT-PCR一致.结论：TNF-α能显著下调人牙周膜细胞Asporin的表达,推测Asporin可能参与了牙周炎的发生发展过程.     

白细胞介素-10对体外培养人牙囊细胞集落刺激因子-1表达的影响

目的:研究白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)对体外培养人牙囊细胞集落刺激因子-1(colony stimulating factor-1,CSF-1)表达的影响.方法:体外培养人牙囊细胞,取第5代细胞加入25 ng/ml IL-0作用0、1、3、6、9、12 h,用RT-PCR法检测CSF-1 mRNA表达的变化.然后取第5代细胞,加入25 ng/ml IL-10作用0、2、4、6、8 h,用ELISA法检测上清液中CSF-1蛋白的含量.结果:牙囊细胞经IL-10作用后,CSF-1 mRNA表达在3～12 h降低,蛋白分泌在6～8 h减少.结论:IL-10通过降低CSF-1的表达,间接地对单核细胞进入牙囊并在其中聚集发挥抑制作用,从而抑制破骨细胞吸收牙槽骨和牙齿萌出通道的形成.     

bFGF对体外培养人牙囊细胞VEGF表达的影响

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外培养人牙囊细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法：选取生长状态良好的人牙囊细胞,与10ng／mlbFGF孵育不同时间后,采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）及酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测人牙囊细胞VEGFmRNA表达及上清液中VEGF蛋白分泌变化。结果：bFGF作用1、3、6、12h后人牙囊细胞VEGFmRNA表达均较0h组显著增强（p〈0．01）,其中bFGF作用6h后VEGFmRNA表达最强;细胞培养上清液中VEGF蛋白分泌量随时间延长逐渐增加,但bFGF处理组VEGF蛋白分泌量高于对照组（p〈0．01）。结论：bFGF能够促进体外培养人牙囊细胞VEGF的表达。     

IL-lβ和TNF-α对人牙周膜细胞内LIF表达的影响

目的：探讨白细胞介素-lβ（IL-lβ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对牙周膜细胞内白血病抑制因子（LIF）表达的影响。方法：体外分离培养鉴定人牙周韧带细胞（HPDLC）,取第3代细胞用于实验,利用牙周改建中高表达因子TNF-α和IL-1β刺激HPDLC后,实时定量反转录-聚合酶链反应检测LIF mRNA的表达。结果：IL-1β在浓度为0．1 ng/mL和5 ng/mL时,均显著促进LIF的分泌（P ＜0．01）。TNF-α在浓度为10 ng/mL时,明显促进LIF的分泌（P ＜0．05）。结论：牙周改建中高表达细胞因子IL-1β和TNF-α可促进牙周膜细胞中LIF的表达。     

体外培养的人牙周膜细胞在机械力作用下骨保护因子mRNA的表达

目的研究机械力对体外培养的人牙周膜细胞骨保护因子(osteoprotegerin,OPG)信使RNA(messenger RNA,mRNA)表达的影响.方法应用细胞加力装置对体外培养的人牙周膜细胞施予间歇性牵张力48小时,原位杂交检测细胞加力前后OPG mRNA的表达.结果机械力作用下人牙周膜细胞OPG mRNA表达下降.结论正畸骨改建过程中,机械力引起牙周膜细胞OPG表达的变化.这一结论为进一步研究人牙周膜细胞在机械力作用下参与骨改建的机理打下基础.     

LIM矿化蛋白1在成骨分化前后人牙囊细胞中的表达

目的：研究人牙囊细胞成骨分化前后LIM矿化蛋白-1的表达。探讨LIM矿化蛋白-1在牙囊细胞向牙周组织分化过程中的作用。方法：组织块加酶消化法分离培养人牙囊细胞,实验组培养液中加入矿化诱导剂,对照组不加矿化诱导剂。培养4周后,免疫细胞化学检测骨涎蛋白的表达;Von Kossa染色检测矿化结节的形成。矿化诱导前后,采用RT-PCR技术检测LIM矿化蛋白-1。结果：培养4周,实验组矿化结节形成,骨涎蛋白免疫细胞化学呈阳性表达, Von Kossa染色阳性;对照组未形成矿化结节,骨涎蛋白表达弱阳性,Von Kossa染色阴性。 RT-PCR结果显示LIM矿化蛋白-1在实验组强阳性表达,对照组弱表达。结论：LIM矿化蛋白-1与胚胎期人牙囊细胞的体外矿化过程相关,提示LIM矿化蛋白-1可能在胚胎期牙囊细胞的分化、矿化中发挥一定作用。