同种大鼠心脏移植急性排斥反应时诱生型一氧化氮合酶活性的实验研究

目的观察同种大鼠心脏移植急性排斥反应时诱生型一氧化氮合酶(iNOS)活性,及氨基胍(AG)与环孢素A(CsA)对其影响.方法 同种大鼠心脏移植动物模型,于术后4 d处死对照组、AG与高、低剂量CsA处理组的移植鼠, 测血清NO含量、心肌iNOS活性及进行移植物病理分析.结果对照组iNOS 活性及其移植物排斥反应等级均显著高于各处理组(P<0.05);AG与CsA对iNOS活性、NO 产生有抑制作用,并相应地缓解急性排斥反应.结论同种移植急性排斥反应早期移植物即有iNOS表达与NO产生,NO参与排斥反应;CsA抑制NO产生可能为其抗急性排斥作用的机制之一.     

抑制一氧化氮合酶/一氧化氮表达与减轻移植肾排斥反应

目的探讨氨基胍和骨化三醇联合抑制诱导型一氧化氮合酶/一氧化氮(iNOS/NO)表达与减轻肾移植急性排斥反应之间的关系。方法以健康雄性Wistar大鼠和SD大鼠作为供、受体建立肾移植模型。实验随机分为5组:I组为同基因移植组,II组为急性排斥对照组,III组为氨基胍治疗组,IV组为骨化三醇治疗组,V组为联合用药组;观察各组受鼠生存期和移植后5d肾组织病理学变化,检测血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及肾组织匀浆中iNOS/NO的变化。结果I～V组受者存活时间分别为(9.1±1.9)d、(5.3±0.8)d、(9.7±2.1)d、(8.6±1.6)d和(12.9±3.4)d。III、IV组受者存活期、肾功能、移植肾排斥反应程度及肾组织iNOS/NO表达水平较II组明显改善或降低(P<0.05);V组效果更佳(P<0.05),但对进一步减轻排斥反应无统计学意义(P>0.05)。结论氨基胍和骨化三醇联用对减少移植肾iNOS/NO的表达有正协同作用,但不能进一步减轻排斥反应。     

细胞和体液免疫抑制对大鼠异种肝移植急性排斥中一氧化氮及其合酶、同功酶的影响

目的：探讨一氧化氮、一氧化氮合酶（NOS）及其同功酶在大鼠异种肝移植中的免疫学作用及其表达意义。方法：本实验共分5组：I组（同基因组）;Ⅱ组（急性排斥组）;Ⅲ组（细胞免疫抑制组）;Ⅳ组（体液免疫抑制组）;Ⅴ组（双重免疫抑制组）;应用血清学检测移植术后受体血清ALT、TNF－α及NO代谢终产物（NOx),应用NADPH黄递酶组化及免疫组化检测NO合酶及其同功酶（iNOS,cNOS)的表达。结果：Ⅱ、Ⅳ组血清ALT,TNF－α及NOx均较Ⅰ、Ⅴ组明显升高4－11倍（P＜0．01）,环孢素A（Ⅲ组）能抑制细胞免疫及NO的合成与表达,但不能延长受体的生存期。Ⅱ、Ⅳ组NO合酶及其同功酶（iNOS,cNOS)在异种肝移植急性排斥时明显表达。结论：肝细胞NO在低免疫反应状态下可能具有肝细胞保护作用,而在高免疫反应状态下iNOS的持续高表达可能是肝损伤的原因。     

异丙酚对大鼠肝一氧化氮合酶的影响

目的　了解异丙酚对大鼠肝脏一氧化氮合酶的影响。方法　 40只SD大鼠 ,随机分为异丙酚组、对照组 ,分别腹腔注射等容积异丙酚 (10ml/kg ,即 10 0mg/kg)和生理盐水 (10ml/kg)。异丙酚组待鼠翻正反射消失后 ,微泵输注异丙酚 ,2 0min后处死 ;对照组鼠腹腔注射 2 0min后处死。检测肝脏组织匀浆中NO水平、NOS酶活性及内皮型NOS(eNOS)在肝脏内的表达与分布 (免疫组化法 )。结果　异丙酚组肝脏组织匀浆中NO水平、NOS酶活性均明显高于对照组 (P <0 0 1)。免疫组化结果显示 :异丙酚组肝脏血管内皮细胞eNOS染色表达强阳性 ,半定量比较有显著差异 (P <0 0 1)。结论　异丙酚可以刺激肝脏中NOS活性 ,升高肝脏内源性NO水平     

一氧化氮合酶在小鼠耳蜗的表达

目的：本实验用亲合免疫组织化学技术,研究了小鼠耳蜗内nNOS与eNOS的表达。方法：4％多聚甲醛心脏灌注固定后,取耳蜗、经脱钙,作10μm厚冰冻切片,进行nNOS和eNOS免疫组织化学染色,结果：小鼠耳蜗内、外毛细胸、内外柱细胞、螺旋神经节细胞nNOS、eNOS的表达呈强阳性。血管纹的基底和中间细胞、螺旋突起、螺旋韧带细胞处有阳性nNOS、eNOS的表达,耳蜗小球的内皮细胞无nNOS与的表达,但eNOS的表达呈阳性。结论：由nNOS和eNOS合成的NO在维持耳蜗正常神经传导及耳蜗正常血液供应中起着重要作用。     

一氧化氮合酶在小鼠脑内的表达

目的 :研究一氧化氮合酶 (NOS1)在小鼠脑内的表达。方法 :采用免疫组织化学技术 ,观察了一氧化氮合酶在正常小鼠脑内的表达。结果 :NOS1阳性神经元分布于中枢神经系统的广泛区域 ,包括大脑皮质、海马、齿状回、间脑和脑干。结论 :表明NO与中枢神经系统的诸多功能有关。     

肝硬化大鼠心脏诱导型一氧化氮合酶的表达与定位研究

为探讨肝硬化心肌病的发生机制。应用免疫组织化学法对胆管结扎诱导的胆汁性肝化大鼠和假手术大鼠心脏诱导型一氧化氮合酶（iNOS)的表达与定位进行比较研究,结果显示肝硬化大鼠心肌细胞、心肌血管内皮细胞和心内膜细胞iNOS均呈强阳性表达,假手术大鼠则为阴性。提示肝硬化大鼠心肌细胞、心肌血管内皮细胞和心内膜细胞iNOS表达显著增高,并由此推断NO途径可能在肝硬化心肌病发生机制中起重要作用。     

一氧化氮合酶在宫颈癌中的表达及意义

目的 探讨一氧化氮合酶（NOS）在宫颈癌的表达情况及其临床意义。方法 应用免疫组织化学（SP）方法，检测eNOS及iN0s在51例宫颈癌组织与50例正常宫颈组织中的表达情况。结果 eNOS、iNOS在宫颈癌组织中的表达明显高于其对照组织（P〈0．01）；eNOS、iNOS的表达与宫颈癌的病理分级有关（P〈0.05），随着宫颈癌分级的升高而呈上升趋势。结论 NOS在宫颈癌的发生、发展过程中起重要的作用。NOS可望成为早期诊断子宫颈癌的检测指标之一。     

慢性鼻炎鼻黏膜中一氧化氮合酶的表达

目的 :比较正常鼻黏膜和慢性鼻炎鼻黏膜中一氧化氮合酶 (NOS)的分布 ,探讨NOS与慢性鼻炎的关系。方法 :应用还原型尼克酰胺嘌呤二核苷酸磷酸 -黄递酶 (NADPH -d)组织化学染色与免疫组织化学技术 ,测定内皮型NOS(eNOS)和诱导型NOS (iNOS)在正常组和慢性鼻炎组鼻黏膜中的分布和表达。结果 :eNOS免疫组化显示正常鼻黏膜和慢性鼻炎鼻黏膜NOS均呈阳性反应 ,主要分布于表层上皮细胞 ,血管内皮细胞胞浆 ;iNOS免疫组化则显示慢性鼻炎表层上皮细胞 ,血管内皮细胞胞浆NOS阳性 ,部分炎性细胞亦呈阳性反应 ;而正常鼻黏膜NOS呈阴性。酶组织化学染色显示 ,NOS有同样的分布部位。结论 :正常鼻黏膜存在NOS分布 ,慢性鼻炎鼻黏膜中iNOS活性明显高于正常 ,由iNOS产生的NO和慢性鼻炎的鼻分泌物增多和黏膜水肿有关     

大鼠动脉粥样硬化时血小板内一氧化氮合酶的表达及其活性

目的:研究动脉粥样硬化形成时血小板内一氧化氮合酶(NOS)的表达特点和活性.方法:大鼠分为3组:第1组为正常对照组,以普通饮食饲养;第2组饲以高脂饲料(不含维生素D3);第3组为维生素D3 3×105 U/kg一次肌内注射、球囊损伤主动脉内皮和饲以含维生素D3 1.25×106 U/kg的高脂饲料.90 d后检测大鼠血小板内NOS的表达和活性.结果:第2组和第3组大鼠血小板中内皮型NOS(eNOS)均较第1组表达减弱、活性下降(P<0.01),而第2、3组之间无统计学差异;诱导型NOS(iNOS)表达和活性在第2组与第1组间无统计学差异,但第3组较前两组均显著增加(P<0.01).结论:结果提示,动脉粥样硬化时血小板eNOS表达和活性受到抑制,而iNOS的诱导表达与动脉粥样硬化的发展进程有一定关系.     

大鼠肝移植术后一氧化氮和白细胞介素2的变化

目的 :探讨一氧化氮 ( NO)在 BN至 Lew大鼠异种原位肝移植急性排斥反应中的价值。方法 :应用 BN至 Lew近交系大鼠异种原位肝移植急性排斥反应及同基因 ( Lew- Lew)肝移植动物模型 ,检测肝移植术后血浆 NO和白细胞介素 2 ( IL- 2 )的变化。结果 :大鼠异种原位肝移植急性排斥反应时血浆 NO含量明显升高 ,且变化早于 IL - 2 ;FK5 0 6显著抑制 NO的合成 ,氨基胍减轻排斥反应的程度 ;同基因组 NO不升高。结论 :NO可作为大鼠肝移植急性排斥反应的诊断指标     

肾移植术后由霉酚酸酯向硫唑嘌呤转换的必要性与安全性研究

目的探讨同种肾移植术后免疫抑制治疗由霉酚酸酯(MMF)转换为硫唑嘌呤(AzA)的必要性与安全性。方法对门诊随访的87例肾移植术后低危患者进行转换药物的前瞻性研究,按随机、开放原则分为两组：转换组42例,在术后满6个月从霉酚酸酯转换为硫唑嘌呤,对照组45例,在术后一直用霉酚酸酯。观察对比各组的移植肾功能指标、排斥反应、并发症及药物毒副作用情况至术后满18个月或出现终点事件为止,评价药物转换的安全性。结果转换组与对照组在移植肾无事件生存率及排斥反应发生率等治疗指标方面无显著差异;转换组的肝损害和白细胞减低发生率高于对照组,经调整药物剂量和辅助治疗后绝大多数可恢复。结论在我国现实经济状况和医疗体制下,部分患者在肾移植术后由MMF转换为硫唑嘌呤是有必要的,在一定条件下也是安全有效的;远期效果尚有待进一步研究。     

螺内酯对自发性高血压大鼠血管外膜诱导型一氧化氮合酶活性的影响

目的 观察醛固酮受体拮抗剂螺内酯干预自发性高血压大鼠(SHR)对血管外膜诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响,探讨醛固酮在血管损伤性疾病中的作用及机制.方法 10周龄雄性SHR大鼠20只,分成2组:螺内酯组(10只,20 mg·kg~(-1)·d~(-1)螺内酯灌胃)和对照SHR组(10只,等量自来水灌胃),10周龄雄性WKY大鼠10只作为正常对照组(等量自来水灌胃),共干预6周.各组均于干预前后每周测1次尾动脉收缩压.6周后处死,取主动脉,测定血管外膜L-精氨酸(L-Arg)摄取、iNOS活性(~3H-瓜氨酸生成法)及NOx含量(Griess 法测定).结果 对照SHR组血管外膜iNOS活性[(12.55±2.27)pmol·mg~(-1)·min~(-1)]、[~3H]-L-Arg摄取[(0.88±0.19)nmol·mg~(-1)·min~(-1)]及NOx含最[(2.07±0.39)μmol/L]较对照WKY组[分别为(5.96±1.87)pmol·mg~(-1)·min~(-1),(0.51±0.15)nmol·mg~(-1)·min~(-1)(1.55±0.32)μmol/L,均P<0.01]显著增高,与对照SHR组比较,螺内酯组血管外膜iNOS活性[(8.32±1.84)pmol·mg~(-1)·min~(-1)]、[~3H]-L-Arg摄取[(0.61±0.15)nmol·mg~(-1)·min~(-1)]和NOx含量[(1.64±0.27)μmol/L]显著下降(均P<0.01).结论 螺内酯能够抑制SHR血管外膜L-Arg-iNOS-NO系统.醛固酮参与血管外膜L-Arg-iNOS-NO通路的激活,这种激活除了通过参与血压升高间接发挥作用外,可能还具有直接作用.     

ALF大鼠eNOSmRNA,iNOSmRNA表达的实验研究

目的：从分子水平探讨急性肝功能衰竭（acute liver failure,ALF)大鼠机体重脏器eNOSmRNA,iNOSmRNA表达的变化,揭示其在ALF时多脏器功能障碍中的作用,方法：通过切除大鼠90％肝脏制备急性肝功能衰竭模型,并在ALF6h及应用NO供体或／和NOS抑制剂6h分别处死动物,取其肝,肺,肾,小肠和大肠制备组织切片,应用原位杂交方法测定每一组织eNOSmRNA和iNOSmRNA活性表达情况,结果：eNOSmRNA表达在ALF6h肺,大肠显示增加,而iNOSmRNA在肝,肺,肾,小肠和大肠表达明显增;ALF12h,应用NO供体和／或NOS抑制剂,肺,大肠表达eNOSmRNA下降,同时肝,肺,肾,小肠和大肠iNOSmRNA表达均明显降低。结论：急笥肝功能衰竭早期（6h)肺,大肠eNOSmRNA和肝,肺,肾,小肠和大肠iNOSmRNA表达显著增高,其翻译合成iNOS诱导产生的大量NO,可能参与早期脏器功能的损害,而应用NO供体和／或NOS抑制剂eNOSmRNA和iNOSmRNA的表达均明显降低,从而减轻对脏器的损害。     

吡格列酮对脂多糖所致大鼠海马损伤的保护作用及其对iNOS和IL-1β表达水平的影响

目的 研究过氧化体增殖物激活受体.y(PPARΥ)激动荆吡格列酮(pioglitazone,pio)对大鼠脑室注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致海马损伤的保护作用及对诱导型一氧化氮合酶(Inducibh Nitric Oxide Syn-thase,iNOS)和白介素-1β(Intedeukin-1β,IL-1β)表达水平的影响.方法 雄性大鼠40只,随机分为4组,每组10只,即对照组,LPS模型组,LPS Hio40mg/kg组和LPS pio80mg/kg组.大鼠灌胃给予pio(40,80mg/kg)3周,脑室内注射LPS(5μl,30μg)1周后,取脑组织,制成石蜡切片,进行尼氏(Nissl)染色和胶质纤维酸蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫组织化学染色.研究海马CA1区锥体神经元形态学改变和星形胶质细胞的活化、浸润情况.采用Western蛋白印迹检测方法观察IL-1β、iNOS的表达情况.结果 大鼠脑室内注射LPS可引起海马CA1区星形胶质细胞的激活和浸润及椎体神经元的损伤,同时伴有IL-1β,iNOS的表达增加.Pio(40、80mg/kg连续应用1周)能减轻海马CA1区椎体神经元的损伤及星形胶质细胞的激活和浸润,抑制鹏引起的IL-1β、iNOS表达增加.侧脑室注射LPS后1周,LPS组大鼠海马CAI区IL-1β蛋白表达水平较对照组差异有统计学意义(P＜0.01),LSP pio40mg/kg组和LSP Pio80mg,/kg组大鼠海马CAI区IL-1β表达量较LPS模型组差别有统计学意义(P＜0.01).LSP Pio40mg/kg组和LSP Pio80mg/kg组大鼠海马CA1区iNOS表达量较LPS模型组差别有统计学意义(P＜0.01).结论 Pio能够通过抑制LPS引起的IL-1β、iNOS的表达,减轻海马椎体神经元的损伤.     

肝移植麻醉的研究

肝功能衰竭是一种致死性疾病,在肝细胞培养成为可能之前,肝移植是惟一有效的治疗途径。过去的20年,肝移植手术在全球很多国家越来越普遍。供肝的存活在很大程度上取决于麻醉医师维持供肝活力的能力。因此,了解影响供肝活性的因素和事件对麻醉医师而言就显得非常重要。血流动力学、笑气和细胞因子是众多因素中需要考虑的几个因素。尽管现代麻醉的进展已经使肝移植手术成为可能,但有关这个领域的文献依然很少,还有待于进一步研究。     

乌司他丁对脂多糖诱导的巨噬细胞NO释放和iNOSmRNA表达的影响

目的 探讨乌司他丁对脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮(NO)释放和诱生型一氧化氮合酶(iNOS mRNA)表达的影响。方法 应用LPS激活RAW264.7细胞株,与不同浓度组乌司他丁(100～10000U/ml)共同孵育,Griess试剂法测定NO释放量;实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析iNOS mRNA的表达。结果 高浓度的乌司他丁(1000～10000U/ml)能抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的表达(P<0.05),下调iNOS mRNA含量(P<0.05);低浓度乌司他丁(100U/ml)对LPS诱导的RAW 264.7细胞NO、iNOS mRNA表达与LPS单独处理组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 高浓度乌司他丁抑制LPS诱导的巨噬细胞NO释放和iNOS mRNA表达,这种抑制与浓度相关。     

结肠癌中VEGF、NOS的表达及其与微血管形成的关系

目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF) ,Ⅱ型一氧化氮合酶 (iNOS)在结肠癌组织中的表达及其与肿瘤血管形成的关系。方法 :采用免疫组化方法检测 4 0例结肠癌患者手术切除及石蜡包埋标本中VEGF、iNOS的表达 ,并以抗CD34单克隆抗体显示血管内皮细胞 ,根据CD34阳性的血管内皮计数来判定微血管密度 (MVD)。结果 :VEGF在 70 .2 % (2 9/ 4 0 )的结肠癌组织表达 ,iNOS在 82 .5 %(33/ 4 0 )肠癌组织中表达。VEGF阳性的结肠癌组织MVD为 38.2± 1.4 /高倍视野 ,VEGF阴性组织中为 2 2 .1± 2 .2 /高倍视野 ,两者有显著差异 ,(P <0 .0 1)。iNOS阳性肠癌组织MVD为 36 .8± 1.2 /高倍视野 ,iNOS阴性肠癌组织为 30 .2± 2 .4 /高倍视野 ,两者亦有显著差异。 (P <0 .0 1)。结论 :结肠癌组织VEGF、iNOS与MVD形成有密切相关。