吉马酮改善H_2O_2诱导的脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的作用

该文主要研究吉马酮对过氧化氢(H_2O_2)诱导的脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用并探讨其可能的作用机制。使用500μmol·L~(-1)H_2O_2诱导脐静脉内皮细胞3 h,从而建立氧化损伤模型,再用不同浓度吉马酮(20,40,100,150,200μmol·L~(-1))保护24 h。利用MTT法检测吉马酮对H_2O_2损伤HUVECs细胞活力的影响;ELISA法检测PGI2,TXB2,ET-1,t-PA,PAI-1,TNF-α和IL-6;硝酸还原酶法检测NO;比色法检测NOS及GSH-Px;再分别采用TBA法、WST-1法和微量酶标法检测MDA,SOD和LDH的含量等;Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡情况;RT-PCR检测细胞中Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA表达。结果表明500μmol·L~(-1)H_2O_2作用3 h细胞损伤率达到52%,而在20~200μmol·L~(-1)随着吉马酮浓度的增大被损伤细胞活性不断增强。与正常组比较,H_2O_2损伤使PGI2,NO,T-NOS,t-PA,SOD,GSH-Px和Bcl-2 mRNA降低,使PAI-1,ET-1,IL-6,TNF-α,TXB2,LDH,MDA,Bax mRNA和Caspase-3 mRNA增加;与模型组比较,吉马酮(200,100,50μmol·L~(-1))使PGI2,NO,T-NOS,t-PA,SOD,GSH-Px和Bcl-2 mRNA增加,使PAI-1,ET-1,IL-6,TNF-α,TXB2,LDH,MDA,Bax mRNA和Caspase-3mRNA减少。Hoechst 33258荧光染色与正常组比较,模型组细胞膜与细胞核呈浓缩致密的强蓝色荧光,细胞数量明显减少;与模型组比较,给药组的蓝色荧光强度降低等。以上研究结果表明,吉马酮可能通过抗氧化及抑制细胞凋亡等作用,从而改善H_2O_2诱导的脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的作用。     

黄芪桂枝五物汤对H_2O_2诱导人脐静脉细胞损伤的保护作用及机制

目的探讨黄芪桂枝五物汤对H_2O_2诱导人脐静脉细胞(HUVECs)损伤的保护作用及机制。方法 HUVECs分为正常组,模型组,阳性药组(卡维地洛),黄芪桂枝五物汤高、中、低剂量组,各组水提醇沉液培养24 h后加入H_2O_2溶液使终浓度达到400μmol/L)。MTT法检测细胞存活率;检测细胞上清LDH(乳酸脱氢酶)活性,细胞内T-SOD(总超氧化物歧化酶)、NO、GSH-Px(谷胱甘肽过氧化物酶)、ET-1(内皮素-1)水平;Real-time PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA表达;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组细胞存活率减低(P0.01);与模型组比较,黄芪桂枝五物汤各组存活率升高(P0.01);LDH活性降低、NO水平升高、T-SOD活力增强、GSH-Px水平升高、ET-1水平降低(P0.05)。Bax mRNA表达降低,Bcl-2 mRNA表达增加(P0.05);Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达增加(P0.05)。结论黄芪桂枝五物汤对H_2O_2损伤HUVECs有保护作用,其机制可能与提高内皮细胞T-SOD活性、促进细胞NO分泌、提高细胞内GSH-Px水平,降低细胞内ET-1水平以拮抗氧化应激造成的细胞损伤,调控凋亡相关基因及蛋白Bax、Bcl-2,抑制线粒体凋亡途径有关。     

桂郁金多糖对H2O2致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及机制

目的:通过体外实验研究不同质量浓度桂郁金多糖对过氧化氢(H_2O_2)致人脐静脉内皮细胞损伤的的保护作用及机制。方法:对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)进行体外培养,用不同浓度H_2O_2损伤HUVECs,采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8),确定H_2O_2最佳损伤浓度为500μmol·L~(-1)。然后给予不同浓度的桂郁金多糖对损伤的HUVECs进行保护,用CCK-8,确定62.5,125,250 mg·L~(-1)作为桂郁金多糖的低、中、高质量浓度组。采用CCK-8法检测桂郁金多糖对H_2O_2损伤HUVECs细胞活力的影响;采用试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),丙二醛(MDA);通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)的含量表达。采用Hoechst 33258荧光染色法对细胞凋亡情况进行观察;并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的表达情况。结果:CCK-8检测结果表明,给药时间24 h后,桂郁金多糖在15.625~500 mg·L~(-1),能够促进细胞增殖,而浓度增大后,桂郁金多糖则对细胞有一定的抑制作用。与模型组比较,桂郁金多糖能够使LDH,MDA,IL-6,TNF-α水平明显减少(P0.05,P0.01),使SOD和GSH-Px的含量明显增加(P0.05,P0.01)。Hoechst 33258荧光染色结果表明,与空白组比较,模型组HUVECs细胞核呈亮蓝色荧光,细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光,细胞密度降低;与模型组比较,桂郁金多糖给药组的蓝色荧光强度降低,细胞凋亡典型形态减少。Real-time PCR实验结果显示,与空白组比较,模型组减少Bcl-2 mRNA的表达,增加Bax,Caspase-3 mRNA的表达(P0.05,P0.01);与模型组比较,桂郁金多糖给药组能够增加Bcl-2 mRNA的表达(P0.05,P0.01),减少Bax,Caspase-3 mRNA的表达(P0.05,P0.01)。结论:桂郁金多糖通过抗氧化和抑制细胞凋亡等途径对H_2O_2损伤的人脐静脉内皮细胞进行保护。     

参芎葡萄糖注射液对H2O2诱导的HUVEC细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨参芎葡萄糖注射液(Shenxiong glucose injection,SGI)对H_2O_2诱导的人脐静脉上皮细胞(HUVEC)细胞氧化模型损伤的保护作用及其机制。方法:体外培养HUVEC人脐静脉内皮细胞,用H_2O_2(130 mmol·L~(-1))处理0.5 h,建立HUVEC细胞H_2O_2氧化损伤模型。SGI组HUVEC细胞用(6%,8%,10%)SGI预处理6 h后,再用H_2O_2处理0.5 h。用MTS法检测细胞存活率;用ELISA法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测凋亡相关基因及蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的mRNA和蛋白表达情况。结果:在130 mmol·L~(-1)H_2O_2作用细胞0.5 h的情况下,细胞存活率降低至50%左右,降低的程度合适,且实验结果重复性好,因此后续实验用该条件建立氧化损伤模型。与H_2O_2组比较,SGI预处理6 h能显著升高细胞存活率(P0.05,P0.01),减少LDH的外漏和MDA的生成(P0.05,P0.01),显著增加SOD,GSH-Px和CAT的活性(P0.05,P0.01)。RT-PCR和Western blot结果表明,SGI能显著上调Bcl-2的表达(P0.05,P0.01),下调Caspase-3,Bax的表达(P0.05,P0.01)。结论:参芎葡萄糖注射液能保护HUVEC细胞对抗H_2O_2诱导的氧化损伤,具有一定的剂量依赖关系,其作用机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

参麦饮含药血清对H_2O_2诱导的HUVEC细胞氧化损伤的保护作用

目的:通过观察参麦饮含药血清对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的影响,探讨参麦饮含药血清对损伤的HUVEC的保护作用及其机制。方法:15只SD大鼠随机分为3组:正常对照组及参麦饮1.1、5.4 g/kg组,每日3次灌胃给药,连续3 d。末次给药1 h后,腹主动脉取血,制备含药血清。使用不同浓度的H_2O_2诱导HUVEC细胞0.5 h,进行氧化应激损伤模型的建立,通过CCK-8法检测,明确H_2O_2的浓度为800μmo1/L时为最适的造模浓度;利用CCK-8试剂探讨含药血清作用不同时间对HUVEC细胞存活率的影响;利用CCK-8试剂进行含药血清对HUVEC细胞及H_2O_2损伤的HUVEC细胞存活率的影响;采用荧光染色法观察活性氧(ROS);利用试剂盒检测丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活力;采用Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞中PI3K、AKT、BAX、BCL-2、Caspase3的蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞存活率显著降低(P<0.01),ROS生成量、MDA含量、LDH活力显著升高(P<0.01),SOD活力、NO含量显著降低(P<0.01),细胞凋亡率升高,PI3K、AKT、BCL-2蛋白表达及BCL-2/BAX的比值显著降低(P<0.01),BAX、Caspase3蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型对照组比较,参麦饮1.1 g/kg 15%含药血清使细胞活力显著升高(P<0.01),ROS生成量、MDA含量、LDH活力明显降低(P<0.05或P<0.01),SOD活力、NO含量明显降低(P<0.05或P<0.01);细胞凋亡率明显降低;PI3K、AKT、BCL-2蛋白表达及BCL-2/BAX的比值明显升高(P<0.05或P<0.01),BAX、Caspase3蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:参麦饮含药血清对H_2O_2诱导损伤的血管内皮具有明显保护作用。     

银杏内酯B对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响

目的观察银杏内酯B(GB)对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法将对数生长期的H9C2心肌细胞随机分为5组:对照组、H_2O_2(200μmol/L)干预组、GB(50、100和200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组,每组设10个复孔。经药物干预16 h后,采用MTT法检测细胞存活率;测定培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)活性;检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;通过流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,采用RT-PCR法检测细胞中AKT mRNA、Bcl-2mRNA、Bax mRNA表达,计算Bcl-2/Bax表达比值,Western blot法检测细胞核因子-κB(NF-κB)蛋白表达并进行半定量分析,比色法检测细胞中Caspase-3、Caspase-9活性。结果与H_2O_2干预组比较,GB(100、200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞存活率显著升高(P0.01),培养液中AST、CPK、LDH活性显著降低(P0.05或P0.01),细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低(P0.05或P0.01);GB干预组细胞凋亡状况明显好转,其中GB(100、200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞凋亡率显著降低(P0.01),AKT mRNA和bcl-2 mRNA表达显著上调(P0.05或P0.01),Bax mRNA表达显著下调(P0.01),Bcl-2/Bax表达比值显著升高(P0.01),细胞中NF-k B蛋白表达量和Caspase-3、Caspase-9活性显著降低(P0.05或P0.01)。结论 GB对H_2O_2诱导损伤H9C2心肌细胞凋亡具有抑制作用;其作用机制可能与GB能够有效改善抗氧化酶活性、降低氧化应激损伤,下调NF-κB蛋白表达,上调抗凋亡基因AKT和bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达比值,降低Caspase-3、Caspase-9活性有关。     

荭草花提取物对H_2O_2诱导的HUVEC细胞氧化损伤的保护作用研究

该文首先建立了人脐静脉内皮细胞(HUVEC)过氧化氢(H_2O_2)氧化损伤模型,并筛选了荭草花提取物的低、中、高给药剂量来评价荭草花提取物对H_2O_2所致HUVEC细胞氧化损伤的保护作用并探讨其机制。采用MTS法检测HUVEC细胞活力;生化试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,细胞内丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力;qRT-PCR和Western blot法分别测定Bcl-2,Bax的mRNA及蛋白水平;Western blot法测定cleaved caspase-3的蛋白水平。结果表明,120μmol·L~(-1)H_2O_2作用0.5 h后,HUVEC细胞存活率下降至55%左右,并且使HUVEC细胞的LDH漏出量、MDA含量增加,SOD及CAT活性降低。此外,H_2O_2还能上调HUVEC细胞中促凋亡蛋白cleaved caspase-3蛋白水平和Bax的mRNA及蛋白水平,下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的mRNA及蛋白水平。与H_2O_2模型组相比,50~200 mg·L~(-1)荭草花提取物预处理24 h能明显增加氧化损伤后细胞存活率,降低LDH漏出量、MDA含量,提高SOD及CAT活性,下调促凋亡蛋白cleaved caspase-3蛋白水平和Bax的mRNA及蛋白水平,并上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的mRNA及蛋白水平。实验结果提示,荭草花提取物对H_2O_2所致的HUVEC细胞氧化损伤具有一定的保护作用,其机制可能与增强细胞清除自由基能力及抑制细胞凋亡有关。     

枸杞多糖通过抗氧化及抗凋亡作用对过氧化氢致血管内皮细胞损伤的保护作用研究

目的探讨枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)对氧化应激致大鼠主动脉血管内皮细胞(Rat Artery Endothelial Cells,RAEC)损伤的抗氧化及抗凋亡的保护作用,为进一步开发LBP的药用价值提供实验及理论依据。方法培养RAEC并随机分为3组:对照组、过氧化氢损伤组(H_2O_2组)、H_2O_2+LBP (440μg/ml)组,采用比色法检测培养细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)及NO(一氧化氮)水平;Western blot法检测细胞Bcl-2及Bax的表达水平。结果与对照组比较,H_2O_2组SOD活力与NO含量明显降低(P0.05)、MDA含量明显升高(P0.05);与H_2O_2组比较,H_2O_2+LBP组SOD活力及NO含量升高(P0.05)、MDA含量降低(P0.05)。与正常对照组比较,H_2O_2组Bcl-2表达下降,Bax表达升高,Bcl-2/Bax下降(P0.05);与H_2O_2组比较,H_2O_2+LBP组Bcl-2蛋白的表达升高、 Bax表达下降及Bcl-2/Bax升高(P0.05)。结论枸杞多糖可通过抗氧化和抗凋亡作用发挥对过氧化氢致主动脉血管内皮细胞损伤的保护作用。     

芳香新塔花总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的:探讨芳香新塔花总黄酮(Ziziphora clinopodioides flavonoids,ZCF)对大鼠心肌缺血再灌注损伤中氧自由基、一氧化氮(NO)和细胞凋亡的影响及其机制。方法:60只大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注模型组,复方丹参滴丸组(130 mg·kg-1),ZCF低、中、高剂量组(75,150,300 mg·kg-1)。通过结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支30 min,再灌注3 h建立缺血再灌注损伤模型,测定大鼠血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB),乳酸脱氢酶(LDH),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),丙二醛(MDA),NO和一氧化氮合酶(NOS)等相关指标的变化。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法评价心肌梗死程度,苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠心肌组织病理学改变,原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清中CK-MB,LDH,MDA的含量显著升高,SOD,GSH-Px,NO和NOS的活性显著降低,心肌梗死程度严重,出现明显的细胞凋亡,显著下调Bcl-2 mRNA表达,上调Bax mRNA表达(P0.01)。与模型组比较,ZCF给药组能明显降低大鼠血清中CK-MB,LDH,MDA的含量,提高SOD,GSH-Px,NO和NOS的活性,同时可降低心肌梗死面积,改善缺血心肌的病理变化,抑制细胞凋亡,显著上调Bcl-2 mRNA表达,下调Bax mRNA表达,提高Bcl-2/Bax水平(P0.05,P0.01)。结论:ZCF可减轻大鼠缺血心肌的损伤作用,其机制可能与减少氧自由基的产生,促进NO合成,上调Bcl-2mRNA的表达,下调Bax mRNA的表达,抑制细胞凋亡有关。     

稳心颗粒对心肌细胞氧化应激及凋亡损伤的影响

目的探讨稳心颗粒对过氧化氢(H_2O_2)诱导大鼠H9c2心肌细胞损伤的影响。方法实验分为3组,对照组H9c2细胞不加药物培养,H_2O_2组H9c2细胞加H_2O_2培养2 h,稳心颗粒组H9c2细胞加稳心颗粒溶液培养24 h后再给予H_2O_2培养2 h,检测各组心肌细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)水平、DHE染色阳性细胞量、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平、细胞凋亡率及Bcl-2、Bax、Caspase-3、phosphorylated Akt(p-Akt)、phosphorylated PI3K(p-PI3K)、蛋白表达水平。结果与H_2O_2组比较,稳心颗粒组培养24 h和48 h后的细胞活力OD值明显升高(P均0.05),LDH、MDA水平和Bax、 Caspase-3蛋白表达水平均明显降低(P均0.05),SOD水平和Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平均明显升高(P均0.05),细胞内DHE染色阳性细胞数明显减少(P0.05),细胞凋亡率明显降低(P0.05)。结论稳心颗粒可能通过PI3K/Akt途径对H_2O_2诱导的大鼠H9c2心肌细胞损伤起到保护作用。     

黄连解毒汤含药血清对Aβ_(25-35)诱导HT22细胞损伤的影响

目的探讨黄连解毒汤含药血清对Aβ_(25-35)诱导的HT22细胞损伤的影响。方法 HT22细胞随机分为空白组、模型组、多奈哌齐组(0.9 mg/kg)及黄连解毒汤低、高剂量组(2.7、8.1 g/kg),空白组、模型组加入空白血清,给药组加入含药血清1 h后,加入Aβ_(25-35)(40μmol/L)。24 h后,MTT法检测HT22细胞活性,比色法检测SOD、GSH-Px活性及MDA水平,Western blot检测Bax、Bcl-2、Cyt C、Caspase-3蛋白表达。结果与模型组比较,黄连解毒汤组HT22细胞活性、Bcl-2/Bax显著升高(P0.05,P0.01),MDA水平及Cyt C、Caspase-3蛋白表达显著降低(P0.05,P0.01),并呈剂量依赖性,其中高剂量组SOD、GSH-Px活性也显著升高(P0.01)。结论黄连解毒汤含药血清可减轻Aβ_(25-35)诱导HT22细胞毒性作用,降低细胞凋亡,其作用机制可能与减少氧化应激和线粒体凋亡途径有关。     

天麻钩藤饮含药血清对MPP~+诱导PC12细胞损伤保护作用的研究

目的:观察天麻钩藤饮含药血清对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机制。方法:将48只大鼠随机分为空白组、美多巴组、天麻钩藤饮2.85、5.7、11.4、22.8g/kg剂量组,天麻钩藤饮按照相应剂量灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,美多巴片(0.05g/kg)溶于生理盐水灌胃。采血制备含药和空白血清,常规培养PC12细胞,空白组和模型组给予空白血清,其他5组给予10%含药血清,孵育30min后,再加500μmol/L MPP+共孵育48h后收集细胞,采用MTT法检测细胞存活率,LDH释放检测细胞毒性,Annexin V/PI染色流式细胞术检测PC12细胞凋亡,Western blot检测Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平,分光光度法检测Caspase-3及Caspase-9活性。结果:模型组较空白组细胞活力明显降低,LDH释放率增加,诱导细胞发生凋亡,同时Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平增加,而Bcl-2蛋白表达降低,Caspase-3及Caspase-9活性明显增加。与模型组比较,10%的天麻钩藤饮5.7、11.4、22.8g/kg含药血清组细胞活力显著增加,LDH释放率减少,凋亡细胞量减少,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平降低,而Bcl-2蛋白表达升高,Caspase-3及Caspase-9活性降低;而10%的天麻钩藤饮2.85g/kg含药血清组无明显变化。结论:天麻钩藤饮含药血清对MPP+诱导的PC12细胞的凋亡具有保护作用,其机制可能与调节线粒体功能密切相关。     

地连二心颗粒对H_2O_2致小鼠成纤维细胞损伤的保护作用研究

目的:观察地连二心颗粒对H_2O_2致小鼠成纤维细胞损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法:用H_2O_2诱导L929细胞建立氧化损伤模型。MTT法检测不同浓度地连二心颗粒对L929细胞增殖的影响,荧光酶标仪和Hoechst33258染色检测地连二心颗粒对氧化应激诱导细胞凋亡及胞内活性氧(ROS)含量的影响,比色法测定上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量,用Griess法和ELISA法检测上清液中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)含量,比色法测定L929细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性,Western blot检测L929细胞中Bcl-2、Bcl-x L和Bax、Bad蛋白表达。结果:当地连二心颗粒浓度低于100μg/ml时,无论单用地连二心颗粒还是与H_2O_2联用均对L929细胞增殖具有促进作用,但是当其浓度大于400μg/ml或与H_2O_2联用大于200μg/ml时,均对其细胞生长具有抑制作用;地连二心颗粒(25、50、100μg/ml)可抑制L929细胞凋亡,降低细胞内ROS含量;升高上清液中SOD、CAT和GSH-Px活性,降低MDA含量,降低上清液中促炎因子i NOS、NO、TNF-α、IL-1β、IL-6含量,上调抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x L蛋白表达,下调促凋亡蛋白Bax、Bad蛋白表达,降低Caspase-3和Caspase-9的活性。结论:地连二心颗粒对H_2O_2致L929细胞氧化损伤具有较好的保护作用,它主要通过抑制损伤的L929细胞过量产生ROS,增强内源性抗氧化酶GSH-Px、SOD、CAT的活性,降低MDA含量,抑制其分泌i NOS、NO、TNF-α、IL-1β和IL-6等促炎因子,促进其分泌IL-4、IL-10抗炎因子,上调抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x L表达,下调促凋亡蛋白Bax、Bad蛋白表达及降低Caspase-3和Caspase-9活性,进而提高L929细胞存活率,来发挥对受损L929细胞的保护作用。     

四氢大麻酚对大鼠心肌梗死的保护作用

目的:观察四氢大麻酚对大鼠心肌梗死的保护作用及机制。方法:通过结扎左冠状动脉前降支建立大鼠心肌梗死模型,随机分为模型组、四氢大麻酚组(25和50 mg/kg),灌胃给予相应的药物,每天灌胃1次,连续给药4周。4周后进行心功能检测;取血清,检测乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)的含量;心脏经HE和Masson染色后,分析心肌组织形态学和计算心肌梗死面积、心室扩张程度;实时定量PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达。结果:四氢大麻酚25和50 mg/kg能明显改善心功能,降低血液中CK、LDH和MDA水平,增加SOD、GSH-Px、CAT酶的活性,降低心肌梗死面积和心室扩张程度,改善心脏组织形态学;下调Bax和Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达,上调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2/Bax的比值。结论:四氢大麻酚对大鼠心肌梗死具有保护作用,增强内源性抗氧化系统功能和抑制线粒体凋亡通路可能是其作用机制之一。     

基于AMPK-mTOR信号通路探讨甲亢宁胶囊干预Graves病的影响

目的?观察甲亢宁胶囊对人甲状腺正常细胞Nthy-ori-3-1凋亡的影响，基于磷酸腺甙活化蛋白激酶（AMPK）-雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路探讨甲亢宁胶囊干预Graves病（GD）的影响。方法?M22诱导人甲状腺滤泡上皮细胞株（Nthy-ori-3-1）建立GD细胞模型，设对照组、模型组、空白血清组、甲亢宁含药血清低剂量组、甲亢宁含药血清中剂量组和甲亢宁含药血清高剂量组。CCK8检测甲亢宁含药血清高、中、低浓度干预Nthy-ori-3-1增殖的抑制率；ELISA检测各组细胞上清液中cAMP释放量；流式细胞术检测各组Nthy-ori-3-1细胞凋亡情况；qRT-PCR检测各组B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2-相关X 蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3（Caspase-3）mRNA表达；Western Blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、AMPK、mTOR、p-AMPK、p-mTOR蛋白表达。结果?甲亢宁含药血清各剂量组Nthy-ori-3-1细胞凋亡率较模型组增高（P<0.05），且随着药物浓度升高，细胞凋亡率越高（P<0.05）。与对照组比较，模型组的cAMP释放量升高，Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达量及蛋白表达升高，p-AMPK、p-mTOR蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，甲亢宁含药血清低、中、高剂量组cAMP 释放量减低，Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达升高， Bcl-2 mRNA及蛋白表达、p-mTOR蛋白表达降低（P<0.01）；同时，甲亢宁含药血清中、高剂量组p-AMPK蛋白表达升高（P<0.01）。结论?甲亢宁含药血清促进细胞凋亡，对GD细胞凋亡的调控作用可能与通过激活AMPK-mTOR信号通路有关。     

人参-牡丹皮功效部位含药血清对H_2O_2诱导损伤的HUVEC的保护作用

探讨人参-牡丹皮功效部位含药血清对过氧化氢(H_2O_2)诱导损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的影响。实验采用H_2O_2诱导损伤HUVEC,分为6组[空白组、模型组、人参总皂苷(TGG)组、丹皮总苷(TGM)组、丹皮酚(P)组、TGG+TGM+P组],各组药物与H_2O_2共培养24 h后,微量酶标法检测细胞内琥珀酸脱氢酶(SDH)、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶的活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡率及细胞内Ca~(2+)浓度、活性氧(ROS)及线粒体膜电位(JC-1)水平;Western blot法检测线粒体凋亡通路相关蛋白Bax, Bcl-2,cytochrome C,caspase-3,caspase-9的表达情况。结果显示H_2O_2对HUVEC有明显的损伤作用,使细胞SDH和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶的活性显著降低(P0.01),细胞凋亡+坏死率、JC-1下降率、ROS升高率和Ca~(2+)浓度升高率显著升高(P0.01);人参-牡丹皮功效部位含药血清可不同程度地升高细胞内SDH和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性(P0.05或P0.01),降低细胞凋亡+坏死率、JC-1下降率、ROS升高率和Ca~(2+)浓度升高率(P0.05或P0.01);同时下调线粒体凋亡通路相关蛋白Bax, caspase-3,caspase-9,cytochrome C表达水平,上调Bcl-2蛋白表达水平。结果表明,人参-牡丹皮功效部位含药血清对ROS所致血管内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与改善线粒体功能,抑制线粒体凋亡通路被激活有关。     

金樱子总黄酮对过氧化氢损伤内皮细胞的保护作用

目的 研究金樱子总黄酮对过氧化氢损伤人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVEC)的保护作用.方法 体外培养HUVEC,用不同浓度H2O2诱导HUVEC损伤构建内皮细胞氧化损伤模型,采用MTT法测定各组细胞活力;用酶标仪测定各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;Western Blot检测各组细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2及促凋亡蛋白Bax的表达情况.结果 MTT观察结果表明600μmol/L H2O2为构建氧化损伤HUVEC模型的合适浓度.与H2O2损伤组比较,不同浓度总黄酮预处理组的细胞活力均显著升高(P＜0.01);不同浓度总黄酮预处理组细胞培养液中的SOD、CAT和GSH-Px活性均明显增加(P＜0.01),且随着总黄酮浓度的增大而升高.与H2O2损伤组比较,0.12 mg/ml处理组Bcl-2蛋白表达无显著升高,0.24 mg/ml和0.48 mg/ml处理组Bcl-2蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05);而各浓度预处理组Bax蛋白表达水平显著降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 金樱子总黄酮能保护氧化损伤的HUVEC,其保护机制与提高SOD、CAT、GSH-Px三种抗氧化酶的活性,上调Bcl-2蛋白的表达、下调Bax蛋白的表达来抑制细胞凋亡有关.     

麸炒前后茅苍术挥发油对缺氧/复氧损伤心肌细胞的抗氧化与抗凋亡作用

目的:考察茅苍术挥发油对缺氧/复氧(H/R)损伤H9c2心肌细胞的抗氧化与抗凋亡活性,并比较生品和麸炒品的作用差异。方法:以连二亚硫酸钠(Na_2S_2O_4)诱导H9c2缺氧/复氧损伤模型,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色评估细胞凋亡,酶联免疫吸附测定(Elisa)法检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2同源的水溶性相关蛋白(Bax)mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中裂解的Caspase-3(cleaved Caspase-3)、BAX、BCL-2的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组心肌细胞的存活率显著降低,SOD活力、Bcl-2 mRNA、蛋白表达明显降低,LDH、MDA含量、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA、cleaved Caspase-3、BAX蛋白表达明显升高(P<0.05)。生品及麸炒茅苍术挥发油1μg/mL～100μg/mL能够提高H9c2心肌细胞的存活率;提高SOD的活力,降低LDH和MDA的含量;上调Bcl-2 mRNA和蛋白的表达,下调Caspase-3、Bax mRNA的表达;下调cleaved Caspase-3、BAX的蛋白表达,与同剂量的生品挥发油比较,麸炒品挥发油具有更好的作用。结论:茅苍术挥发油对H/R损伤心肌细胞具有抗氧化和抗凋亡的作用,麸炒品挥发油的作用优于生品挥发油。     

半夏泻心汤对H2O2诱导的RIN-m5F细胞凋亡的影响及其机制研究

目的探讨半夏泻心汤对H_2O_2诱导的RIN-m5F细胞凋亡的影响及其机制。方法大鼠随机分组灌胃,取血收集含药血清,300μM H_2O_2干预RIN-m5F细胞,测定半夏泻心汤最佳浓度,后随机分组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率、Western blot检测各组蛋白表达。结果半夏泻心汤含药血清最佳浓度为10%(P0.05);与模型组比较,半夏泻心汤含药血清可显著降低RIN-m5F细胞凋亡率(P0.05),下调Caspase-3、Bax的表达(P0.05),上调Bcl-2、PAKT的表达(P0.05)。结论半夏泻心汤含药血清可抑制RIN-m5F细胞凋亡,其机制可能与PI3K/AKT通路的活化有关。     

特女贞苷对血管内皮细胞氧化损伤的作用研究

目的研究特女贞苷对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)中p66Shc及凋亡相关蛋白表达水平的作用。方法采用H_2O_2诱导EA.hy926形成氧化应激损伤的血管内皮细胞模型,随机分为空白组、模型组(H_2O_2)、特女贞苷组(H_2O_2+5、50、500μmol/L特女贞苷)、阴性对照组(H_2O_2+5、50、500μmol/L DMSO)、抗坏血酸组(H_2O_2+5、50、500μmol/L抗坏血酸)。检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、β-gal活性;采用Western blot法测定p66Shc、caspase-3活体剪切体、Bax、Bcl-2蛋白含量;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测p66mRNA含量。结果与空白组比较,模型组及阴性对照组SOD活性、Bcl-2表达量及Bcl-2/Bax比值下降,MDA含量、β-gal活性、p66Shc蛋白水平及mRNA含量、capase-3活性剪切体和Bax表达水平升高(均P0.05)。与模型组比较,特女贞苷组及抗坏血酸组SOD升高,MDA含量(除特女贞苷组浓度500μmol/L外)和β-gal活性降低(P0.01),抑制p66Shc表达及mRNA水平(P0.01);特女贞苷组Bax和capase-3活性剪切体(除浓度500μmol/L外)表达水平降低,Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值升高(均P0.01)。与同浓度的抗坏血酸组比较,特女贞苷组对Bax、Bcl-2蛋白水平、Bcl-2/Bax比率、p66mRNA的调节作用较明显(P0.05)。结论特女贞苷可能通过抑制p66Shc削弱血管内皮细胞的氧化损伤及降低凋亡相关蛋白的表达。