基于ITS2条形码的两面针药材及其混伪品的鉴别

目的 利用ITS2条形码鉴别两面针药材及其混伪品,为两面针药材鉴定提供新方法.方法 采用PCR法扩增ITS2(转录第二间隔区)序列,双向测序后运用CodonCode Aligner、MEGA软件进行数据处理,构建系统聚类树(NJ树).结果 两面针药材及其混伪品基因组DNA降解明显,但不影响ITS2条形码的PCR扩增和测序,ITS2条形码序列分析表明种内与种间遗传距离具有较大差异,基于ITS2条形码构建NJ树可鉴别两面针药材及其混伪品.结论 ITS2条形码适用于两面针药材及其混伪品的鉴别,为两面针药材快速、准确鉴定提供新方法;为两面针基原研究提供重要的分子鉴定证据;同时为DNA条形码技术应用于其他根、茎类中药材的鉴定提供了示范作用.     

叶底红的显微鉴别

目的:为叶底红药材的鉴别提供参考依据。方法:对叶底红的植物形态、显微构造(徒手切片、粉末特征、叶表皮撕片)进行鉴别。结果:红色的叶背可作为叶底红形态鉴别的依据;根、茎横切面凯氏点明显、中柱鞘不明显、木质部木质化范围广,粉末含纤维状石细胞;全草各器官粉末都含有细长的多细胞非腺毛和基部膨大、腺头为圆形的多细胞腺毛。结论:叶底红的根、茎、叶中脉的横切面构造及其粉末特征可作为鉴别特征,为其研究和利用提供参考。     

畲药搁公扭根基原植物及其同属易混种的ITS2条形码鉴别

目的基于ITS2条形码序列对畲药搁公扭根及其同属易混种进行分子鉴定,以保证药材使用的正确性和临床疗效。方法分别于浙江、广西、江西和安徽等地采集搁公扭根基原植物掌叶覆盆子及其9种同属易混种高粱泡、山莓、蓬蘽、茅莓、插田泡、寒莓、东南悬钩子、三花悬钩子和武夷悬钩子样品共140份。对采集样品进行基因组DNA提取、ITS2基因片段PCR扩增并双向测序、拼接获得相应序列,基于HMMer方法注释获取ITS2序列,同时下载Gen Bank相应物种ITS2序列37条,使用Gene Tool软件分析ITS2序列长度、GC量、变异位点等情况,利用Clustal X和MEGA7.0软件计算种内、种间遗传距离,构建邻接(NJ)系统发育树。结果搁公扭根及其9种同属易混种ITS2序列长度为211~213 bp,GC量为52.1%~58.0%;搁公扭根基原植物与其他物种共有14个变异位点,一处插入/缺失;搁公扭根种内平均K2P遗传距离为0.007 2,显著小于其他9个易混种,其中与山莓和武夷悬钩子进化距离最近,与蓬蘽最远;NJ进化树中搁公扭根各单倍型序列单独聚为一支,可与其他物种成功区分。结论 ITS2序列能够成功鉴别搁公扭根基原植物及其9种同属易混种,为畲药DNA条形码分子鉴别提供了有力佐证,助力畲药流通信息监管。     

岩黄连的显微鉴别及生物碱的组织化学定位

目的:确定岩黄连的显微鉴别特征及药材中总生物碱的分布位置,为岩黄连鉴定和资源开发利用提供参考依据。方法:应用表皮制片法制作表面装片,水合氯醛透化装片法制作粉末装片,优化石蜡切片法制备根、茎、叶切片,化学显色反应法确定生物碱在根、茎、叶中的分布。结果:根中中柱明显,木质部导管直径较大;茎中存在多个外韧型维管束;叶的表皮细胞体积膨大,附有腺鳞、腺毛;粉末中的螺纹导管明显,草酸钙方晶散在,数量众多。滴加改良碘化铋钾溶液后,根、茎、叶中都有橙红色沉淀生成,生物碱主要存在于根、茎的木质部及叶的栅栏组织中。结论:本研究结果可作为岩黄连的显微鉴别特征;生物碱化学显色结果表明根、茎、叶中都有生物碱存在,本方法可对岩黄连根、茎、叶中生物碱进行定性以及含量的估测。     

鸡冠花的生药学研究

目的:对苋科植物鸡冠花Celosia cristata L.进行显微鉴别观察,为进一步研究提供参考依据。方法:采集药材标本,采用传统鉴别方法和常规显微技术对标本进行原植物鉴定、显微鉴别。结果:鸡冠花的根、茎、叶显微特征明显,根和茎中均有异形维管束存在,薄壁细胞中有草酸钙方晶存在;叶含有腺毛、非腺毛和不定式气孔;粉末中含有众多螺纹导管和草酸钙方晶。鸡冠花的性状及组织构造具有一定的专属性。结论:以上特征可作为鸡冠花的显微鉴别依据,可为制定其质量标准提供参考依据。     

壮药三角泡的显微及紫外光谱鉴别

目的:对壮药三角泡进行显微及紫外光谱鉴别。方法:显微鉴别,紫外光谱鉴别。结果:根皮层中的纤维群断续排列成环;茎皮层中有纤维环;叶主脉维管束有两束;叶表皮可见非腺毛和腺毛;粉末中纤维有2种形态,可见腺毛和较多的非腺毛以及方晶、簇晶。紫外-可见光谱在200～800 nm扫描,发现6种不同的提取液都有吸收峰。结论:该方法可为其质量标准的制定及进一步研究提供参考依据。     

九头狮子草显微结构鉴别研究

目的：研究九头狮子草显微结构鉴别特征,为鉴定、开发利用和制定其质量标准提供参考依据。方法：对九头狮子草的根、茎、叶横切面组织构造和粉末特征进行显微鉴别。结果：九头狮子草根、茎、叶横切面表皮细胞含钟乳体;茎、叶横切面表皮外着生非腺毛、腺鳞和少量腺毛;叶横切面栅栏组织1列过主脉,主脉维管束外韧性;粉末中钟乳体腺鳞,头部多4个,细胞薄壁细胞中均含草酸钙小针晶和小片状结晶。结论：以上特征具有鉴别意义,可做为鉴别九头狮子草的参考依据。     

龙珠果的显微鉴定

目的:对西番莲科药用植物龙珠果进行显微鉴别研究。方法:采用石蜡切片、粉末制片对药材的根、茎、叶横切面组织结构及全草粉末特征进行研究。结果:龙珠果根横切面中皮层较宽,薄壁细胞中可见石细胞;茎横切面中可见非腺毛,皮层较窄,其间有数个纤维束排列成环,薄壁细胞中可见草酸钙簇晶;全草粉末中非腺毛多,顶端尖,表面有疣状突起,纤维细胞壁增厚明显,石细胞较多,孔沟明显,可见草酸钙簇晶及砂晶,偶见方晶,尚可见棕色块。结论:上述特征可作为龙珠果显微鉴定依据,为该药材的质量评价及进一步开发利用提供了依据。     

白钩藤与大叶钩藤的生药鉴别

目的:通过对白钩藤与大叶钩藤显微结构进行比较研究,为鉴别和进一步开发利用这两种药用植物提供理论依据。方法:用常规显微技术对白钩藤与大叶钩藤药材进行组织结构和显微特征观察。结果:(1)在性状上,两者的根、茎及钩的大小、形状、颜色、质地皆相似。但白钩藤和大叶钩藤在茎和叶片有明显的区别,白钩藤茎髓松软,叶下表面灰白色;而大叶钩藤茎表面有灰色硬毛,髓多中空,叶下表面黄褐色且被硬毛。(2)在显微特征上,两种钩藤的组织构造基本相似,两者根的皮层与韧皮部均有纤维束散在;茎切面观都为四方形,韧皮部外方纤维排列成环;叶主脉大,均只含有1个维管束。但两种钩藤各自有明显的鉴别特征,白钩藤根韧皮部纤维成环不明显;茎髓部切面观菱形,角较尖,皮层无石细胞;叶维管束外韧型,呈"U"形,上表皮无非腺毛;粉末具嵌晶纤维。大叶钩藤根韧皮部狭窄且外侧纤维明显断续成环;茎髓部切面四方形,角圆滑,皮层有少量石细胞;叶维管束双韧型,呈圆形,上表皮有非腺毛;粉末中具较多的分隔纤维、非腺毛和少数石细胞。结论:以上研究结果可作为白钩藤和大叶钩藤的主要鉴别依据。     

粗叶悬钩子根的导数光谱测定

目的:对粗叶悬钩子根的导数光谱进行测定。方法:采用导数光谱法。结果:粗叶悬钩子的一阶、二阶导数光谱图有一定的特征吸收。结论:为粗叶悬钩子根的鉴别提供科学的依据。     

蔓性千斤拔与大叶千斤拔的鉴别研究

目的:对蔓性千斤拔及大叶千斤拔进行鉴别研究,建立其全面、准确的鉴别方法。方法:采用薄层色谱法和高效液相色谱法对两种千斤拔干燥根中的染料木苷进行定性定量分析,通过DNA分子鉴定技术建立其DNA条形码。结果:在TLC的基础上,运用HPLC建立了检测千斤拔药材中染料木苷含量的方法;建立了基于ITS2序列的蔓性千斤拔与大叶千斤拔的DNA条形码,从分子水平上将二者区分。结论:运用不同的鉴定方法可对蔓性千斤拔及大叶千斤拔进行准确、全面、快速的鉴定,避免了因为方法的局限性影响鉴别的准确性,为千斤拔药材的鉴别提供新的科学依据。     

基于中药系统鉴定法进行青葙子药材的鉴别研究

目的:利用中药系统鉴定法鉴别青葙子及其混伪品,为青葙子药材的准确鉴定及质量控制提供参考。方法:通过性状、微性状、显微鉴别和DNA条形码分析等方法,对青葙子药材及其混伪品进行比对分析,利用MEGA 7.0软件计算物种DNA条形码序列的种内、种间Kimura 2-Parameter遗传距离、评估序列的条形码间距,采用邻接法构建系统聚类树。结果:仅凭性状鉴别难以区分青葙子与混伪品;青葙子及其混伪品的微性状、显微特征差异明显,可作为其鉴定的重要依据之一;经筛选,推荐ITS序列作为青葙子及其混伪品的DNA条形码候选序列,trnL序列作为补充序列。结论:中药系统鉴定法能够完成对青葙子药材的精准鉴别。     

壮药百脉根的显微鉴别

目的:研究百脉根的显微结构特征,为鉴定、开发利用和制定其质量标准提供参考依据.方法:对百脉根的根、茎、叶横切面组织构造和粉末特征进行显微鉴别.结果:根韧皮部散有纤维束,具初生射线;茎射线宽广,髓部宽大或破裂成空洞状;叶栅栏组织过中脉;粉末中易见棕色块.结论:以上特征具有鉴别意义,可做为鉴别百脉根的参考依据.     

基于ITS2、trnH-psbA条形码的不同产地连翘及其伪品DNA分子鉴定

目的:研究探讨基于ITS2、trnH-psbA条形码的不同产地连翘及其伪品DNA分子鉴定新技术。方法:采用植物DNA条形码候选序列中的ITS2、trnH-psbA作为目标条形码,探讨了其对不同产地连翘、正品连翘与其易混伪品金钟花的鉴别。结果:从聚类树形图可见,连翘与金钟花能够明显地分为两支,不同产地的连翘也表现出了一定的区域相似性。结论:基于ITS2序列、trnH-psbA序列可以作为连翘药材真伪鉴别的一种有效的分子鉴定手段。其中trnH-psbA序列构建的NJ树、UP树不仅能实现连翘真伪鉴别,而且可以用于不同产地连翘区域性的鉴别。     

农吉利的显微鉴别

目的:对中药农吉利的原植物野百合进行性状和显微鉴别研究,总结其鉴别特征,为农吉利的鉴别及进一步研究奠定基础。方法:通过对农吉利原植物及药材进行形态描述,对根茎叶的横切面、叶的表皮撕片及各部位的粉末等进行显微鉴别。结果:农吉利的植株形态特征有茎上被长柔毛,单叶互生,上面近无毛,下面密被短柔毛,总状花序,花萼二唇形,花冠蓝色或紫蓝色,荚果;横切面特征有根木质部宽广,占根的主要部分;茎的髓部发达;叶中脉维管束外韧型,叶的上下表皮均可见气孔,多为不等式;粉末特征可观察到导管、纤维、腺毛、非腺毛、花粉粒等,其中非腺毛很长。结论:农吉利的植株形态特征、横切面显微构造、粉末特征等可以作为其鉴别依据。     

基于DNA条形码的甘草属植物的分子鉴别

目的:评价不同DNA条形码序列对甘草属的鉴定能力。方法:应用5条常用DNA条形码序列ITS、ITS2、psbA-trnH、matK与rbcL对甘草属进行PCR扩增与序列测序,结合在GenBank数据库下载的序列数据,通过分析各序列种内与种间变异与遗传距离,构建系统发育树,并基于相似性搜索算法和最近距离法计算各序列鉴定成功率,以分析比较各序列对甘草属的鉴定效率。结果:matk序列因扩增与测序成功率均较低,没有加入后续的数据分析。各个序列的鉴定成功率由高到低的顺序为psbA-trnH、ITS、ITS2、rbcL。ITS和ITS2序列种间最小变异均大于种内最大变异,且种内变异最小。Barcoding gap检验结果显示,ITS、ITS2的重叠区较小。NJ树结果显示,只有psbA-trnH序列能把甘草属不同物种分开。结论:利用DNA条形码序列可准确鉴别甘草属植物,psbA-trnH和ITS组合序列可作为鉴定甘草属植物的较优序列组合。本研究为甘草属植物的分子鉴别提供科学依据。     

壮药饭汤子的生药学研究

目的 对饭汤子进行生药学研究,为临床和进一步开发利用提供鉴别依据.方法 用传统的方法对药材性状进行鉴定;用滑走切片法和徒手切片法对根、茎、叶进行切片;用常规的显微技术观察组织构造和显微特征;用一般理化方法进行理化鉴定.结果 发现根横切面韧皮纤维断续成环.茎髓部大,约占横切面的1/2.根、茎皮层和韧皮部内均含草酸钙簇晶.叶横切面上下表皮均分布有非腺毛和腺毛,中脉维管束为"V"形.粉末中具腺毛、非腺毛,导管主为具缘纹孔导管和螺纹导管,气孔平轴式.结论 运用以上方法进行鉴定具有快速、简便、省时、准确的优点.     

桂林唇柱苣苔的显微鉴别

目的:为桂林唇柱苣苔的开发利用提供生药鉴别资料。方法:采用显微鉴定的方法对桂林唇柱苣苔的根状茎和叶进行生药鉴别。结果:桂林唇柱苣苔根状茎横切面上木质部呈不连续环状;根迹维管束可见。叶横切面上栅栏组织和海绵组织界限不明显。根状茎粉末中纤维长条形;网纹导管成群;淀粉粒和方晶较多。叶粉末中导管多为网纹导管;非腺毛和方晶多见。结论:本实验研究的组织特征及粉末鉴别特征可作为该种药用植物质量标准的主要鉴别依据。     

藏药材榜嘎及其混伪品的DNA条形码鉴定研究

目的:利用DNA条形码技术对榜嘎及其混伪品进行鉴别,为藏药榜嘎的鉴定提供准确可靠的依据。方法:通过分析榜嘎及其混伪品ITS和ITS2序列的遗传距离、种内种间变异并构建NJ系统发育树,以评价ITS2和ITS序列的鉴定效率。结果:本研究中ITS2和ITS序列扩增效率相同,在blast比对和遗传距离距离分析上,ITS序列表现出更强的鉴定能力;通过K2P距离构建NJ树,ITS2和ITS序列在榜嘎与混伪品间的种间变异无统计学意义,但ITS序列对易混物种的鉴定效率较高。结论:ITS序列可作为鉴定榜嘎及其混伪品的有效条形码。     

武当山区重楼属植物基于ITS2的种内鉴别研究

目的对武当山区重楼属植物进行种内分子鉴定研究,以DNA条形码技术解决重楼因种内形态差异小而难以鉴别的问题,规范重楼的正品来源,确保本地药材的质量以及临床用药的有效性。方法对ITS(internal transcribed spacers)序列进行克隆测序,以核基因ITS2片段作为DNA条形码,对研究材料进行PCR(polymerase chain reaction)扩增并双向测序,所得序列经Codon Code Aligner拼接后,用软件MEGA6.0(Molecular Evolutionary Genetics Analysis 6.0)进行相关数据分析,并构建NJ邻接树(neighbor-joining tree),利用Keller等建立的ITS2数据库及其网站预测ITS2的二级结构。结果经BLAST鉴定,采集的武当山区重楼样本来源准确;武当山区重楼属植物ITS2序列长度均为232 bp,与七叶一枝花的基因序列相比,球药隔重楼有16个变异位点,华重楼只有1个变异位点;武当山区重楼的ITS2序列种内K2P(Kimura-2-parameter)距离为0~0.073 6,种内平均K2P距离为0.027 2;由所构建的系统聚类树可以看出,本地区重楼主要分为七叶一枝花和球药隔重楼2大类,华重楼为七叶一枝花的变种,宽叶重楼、狭叶重楼与七叶一枝花为一支,不支持宽叶重楼、狭叶重楼成为独立的变种;比较ITS2二级结构发现,武当山区重楼属植物螺旋区的茎环数目、大小、位置有明显差异。结论 DNA条形码为重楼属药用植物鉴别开辟一条新途径,不论是相似性搜索法、最近距离法还是NJ系统发育树等方法,其分析结果均充分表明,ITS2序列可将不同品种重楼药材很好地区分开;七叶一枝花、狭叶重楼、宽叶重楼的ITS2基因232个碱基序列完全相同,MEGA 6.0的分析结果也表明宽叶重楼、狭叶重楼与七叶一枝花属于一支,不支持宽叶重楼、狭叶重楼成为独立的变种,建议作为七叶一枝花的变型处理;ITS2作为DNA条形码序列能够有效地区别重楼属植物,在中药材的鉴定中具有重要的应用前景,在实现规范化种植规程中可用于种质种源的正确鉴定。