基于谱效相关法探究酒炙丹参增强抗凝血活性的物质基础

目的通过谱效相关法探究酒炙丹参增强抗凝血活性的物质基础。方法采用HPLC法建立丹参生品与酒炙品指纹图谱,并进行相似度评价。测定不同批丹参生品与酒炙品的体外抗凝血效价,包括活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原(FIB)含量。以丹参生品与酒炙品的HPLC图谱的峰面积及其抗凝血效价为基础,采用偏最小二乘判别分析(PLS-DA)法对HPLC图谱和抗凝血效价进行相关性分析。结果10批生丹参饮片HPLC指纹图谱相似度为0.991~0.999,10批酒丹参饮片与对照图谱的相似度为0.982~0.999。丹参酒炙后抗凝血活性显著增强。PLS-DA法分析得出,指纹图谱中7(丹酚酸B)、6(紫草酸)、5(迷迭香酸)、15(VIP均大于1)号峰是导致丹参酒炙后抗凝血活性增强的主要成分。结论该方法能较精准地找到丹参酒炙增强抗凝血活性的主要贡献成分。     

基于“内外结合”分析马钱子的炮制火候

目的:通过机器视觉和电子鼻技术实现生马钱子饮片及其不同炮制火候砂炒马钱子饮片的鉴别与区分,并研究其颜色、气味与内在成分的相关性。方法:采用机器视觉技术和电子鼻技术获取生马钱子及其炮制品的颜色和气味信息,结合化学计量学方法(主成分分析、判别因子分析)分析炮制过程中的变化规律;采用HPLC测定不同炮制程度的马钱子饮片中生物碱成分士的宁和马钱子碱的含量;通过相关性分析法分析不同样品颜色值、气味值与成分的相关性。结果:马钱子炮制过程中随着炮制程度的加深,色调H值逐渐变小,饱和度S值逐渐变大,亮度V值逐渐变小,通过主成分分析和判别因子分析可实现炮制品的区分和判别;不同炮制程度的马钱子气味呈一定规律性变化;随着炮制程度的加深,马钱子中士的宁和马钱子碱的含量不断降低;通过相关性分析得出色调H及亮度V的颜色值变化与士的宁和马钱子碱的变化呈显著相关性,而气味与2种成分变化之间的相关性不显著。结论:通过机器视觉与电子鼻技术对颜色、气味的客观化评价,可实现马钱子与其不同炮制火候饮片的鉴别区分。传统以颜色作为马钱子炮制过程中的控制指标具有一定的科学性。     

水提取法和仿生提取法研究菲牛蛭不同炮制品的体外抗凝活性

目的:采取不同的提取方法研究菲牛蛭炮制前后抗凝活性变化。方法:分别采用水提取法及模拟胃肠道环境的仿生提取法提取菲牛蛭活体冻干品、清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的活性成分,测定活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性4个凝血指标,并采用Lorry法测定其蛋白含量,综合评价2种提取方法下的菲牛蛭及其炮制品的抗凝活性。结果:无论是水提取法,还是仿生提取法,APTT、PT、TT均显示炮制后抗凝活性降低,抗凝活性顺序为活体冻干品>清水吊干品>酒浸闷烘品>滑石粉烫制品,此结果与抗凝血酶活性及蛋白含量顺序一致。结论:高温炮制方法会降低菲牛蛭的抗凝活性。     

丹参不同炮制品饮片与标准汤剂的物性参数及化学成分相关性

目的探究丹参不同炮制品饮片与标准汤剂的物性参数及化学成分间的相关性。方法制备丹参不同炮制品标准汤剂,测定饮片与标准汤剂的物性参数(pH值、相对密度、过氧化值);紫外分光光度法测总黄酮含量;HPLC测隐丹参酮含量;测定丹参不同炮制品饮片出膏率、计算隐丹参酮转移率;运用SPSS 24.0结合Excel及Graphad Prims6.0进行物性参数及化学成分间相关性分析,建立相应回归模型。结果除酒醋盐丹参饮片的pH值、醋丹参饮片的相对密度、酒丹参标准汤剂的过氧化值及总黄酮含量与其对应的标准汤剂或饮片的物性参数及化学成分无相关性外,丹参不同炮制品饮片与标准汤剂的物性参数及化学成分间具有显著相关性(P<0.05);依据相关性建立的8个回归模型分析所得R2均大于0.9,模型拟合度高,有较好的准确性。结论该研究选用物性参数、大分子和小分子化学成分3种指标进行综合考察,预测丹参不同炮制品饮片制备所得标准汤剂的质量,可为制定其标准汤剂的质量标准提供一定参考。     

水提取法和仿生提取法研究水蛭不同炮制品的体外抗凝活性

为确定水蛭传统炮制的科学性,分别采用水提取法和仿生提取法提取水蛭清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的抗凝活性成分,以活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性作为活性指标进行抗凝测定,并采用考马斯亮蓝法,测定各炮制品提取物中的蛋白含量以初步解释抗凝活性变化原因。对比发现,采用水提取法时,APTT,PT,TT,抗凝血酶活性4种指标结果均显示,滑石粉烫制或酒浸闷烘后水蛭的抗凝活性降低,活性顺序为清水吊干品酒浸闷烘品滑石粉烫制品,此结果与水蛭不同炮制品水提物蛋白含量顺序一致;而采用仿生提取法时,除滑石粉烫制后APTT缩短外,其他结果均显示炮制使水蛭抗凝活性升高,且活性顺序为酒浸闷烘品滑石粉烫制品清水吊干品。仿生提取法与水提取法相比更符合水蛭口服后在人体内的吸收过程,结果更具科学性。所以,传统的炮制方法不仅可以矫味矫臭,还可增强水蛭的抗凝活性作用。     

丹参生品及不同炮制品的体外抗菌活性研究

目的研究丹参不同炮制品(清炒、炒炭、米炒、酒炙和醋制丹参)的体外抗菌活性。方法采用纸片扩散法研究丹参不同炮制品对金黄色葡萄球菌(SA)、耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)和β-内酰胺酶阳性金黄色葡萄球菌(ESBLs)的抑制活性。结果丹参生品及不同炮制品对SA和MRSA的抑制作用略强于ESBLs,对SA的抗菌效果最强;其中炒丹参的甲醇总提取物质量浓度在50 mg/mL对SA、MRSA、ESBLs的抑菌圈直径最大且相同;对相应样品的MIC值进行比较,显示各样品体外抗菌活性大小依次为:丹参生品及炮制品的甲醇提取物>石油醚和乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物。结论本实验证明炒丹参和酒丹参的抗菌活性明显增强,而丹参炭的抗菌活性明显减弱,但仍具有一定的抗菌活性。     

6种人参属药材体外抗凝血活性与皂苷含量的相关性研究

目的分析不同功效的6种人参属药材提取物的体外凝抗血活性差异。方法采用凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)实验,探讨6种人参属药材提取物抗凝血活性的差异性;分析其抗凝血活性与皂苷含量的相关性。结果竹节参、珠子参及三七可显著延长PT、APTT,降低FIB水平,呈现明显的量效关系;而人参、西洋参及屏边三七无显著变化。竹节参、珠子参提取物的抗凝血活性明显强于三七提取物。6种人参属药材中人参皂苷含量与其抗凝血活性的相关性分析表明,PT与人参皂苷Rb2含量呈现显著的正相关;且人参皂苷Rb2可显著延长PT、APTT。结论 6种人参属药材抗凝血活性存在差异,且抗凝血活性与人参皂苷Rb2含量相关。     

荷叶不同饮片黄酮和生物碱类成分对兔体外凝血功能影响的比较

目的研究比较荷叶生、炭饮片总黄酮、总生物碱及4种化合物对兔体外凝血功能的影响。方法以正常新西兰大耳白兔为实验对象,观察荷叶生、炭饮片总黄酮、总生物碱及金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素、荷叶碱对家兔血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和纤维蛋白原(FIB)水平的影响。结果与空白对照组比较,荷叶生、炭饮片总黄酮及金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素均可显著缩短PT和APTT,而荷叶碱、生荷叶总生物碱均可明显延长APTT和PT,但各组对FIB均无明显影响;荷叶炭总黄酮与生荷叶总黄酮比较,APTT、PT显著缩短;槲皮素与金丝桃苷和异槲皮苷比较,APTT、PT也显著缩短。结论黄酮类成分为荷叶生、炭饮片止血活性成分,槲皮素的止血活性强于金丝桃苷和异槲皮苷,荷叶碱、生荷叶总生物碱具有抗凝血活性。为阐明荷叶炭止血炮制机理及制订荷叶饮片的质量标准,提供了科学依据。     

蒙古黄芪药材、生饮片及其炮制品质量差异性研究

目的对蒙古黄芪原药材、生饮片及其炮制品进行质量差异性研究。方法选取道地蒙古黄芪的药用部位根,制备成生饮片及炮制品,进行炮制前后黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芒柄花素、总多糖、总黄酮和总皂苷量的比较研究,分析质量差异性原因。结果成分量由高到低分别为黄芪甲苷:原药材生饮片蜜炙品酒炙品盐炙品炒制品;毛蕊异黄酮苷、芒柄花素和总多糖:原药材生饮片酒炙品盐炙品蜜炙品炒制品;总黄酮:原药材酒炙品生饮片盐炙品蜜炙品炒制品;总皂苷:原药材蜜炙品生饮片酒炙品盐炙品炒制品。结论温度和辅料保护可能是影响蒙古黄芪原药材、生饮片及其炮制品质量差异的主要因素。     

川芎及其中成药抗凝血作用测定方法的研究

目的以延长活化部分凝血活酶时间(APTT)为指标,建立定量测定川芎抗凝血作用的方法,评价川芎及其中成药的质量。方法川芎先后用乙醇和水定量提取,以总提取物为供试品,体外测定延长APTT值。家兔心脏取血,制备血浆,加入APTT试剂后,测定凝结时间。以APTT延长率为抗凝血活性的评价指标,用阿魏酸钠标定川芎的延长APTT活性。根据量反应平行线法(2.2)计算川芎的抗凝血活性。并测定了9份川芎药材、饮片及中成药的抗凝血活性。结果阿魏酸钠和川芎总提取物均具有显著的抗凝血活性,且可靠性检验结果成立。阿魏酸钠的给药质量浓度(1~5 mg/m L)与其APTT延长率呈良好的线性关系(r=0.995 5)。供试品重复测定抗凝血活性的RSD为9.34%(n=6),可信限率为15.98%(n=6)。不同川芎样品的抗凝血活性不同,5份川芎药材的抗凝血效价分别为5.431~7.620 U/g,川芎饮片及川芎酒炙饮片分别为5.910、3.017 U/g,通脉颗粒和血府逐瘀丸分别为14.516、29.035 U/g。结论建立的方法能准确测定川芎药材、饮片及其中成药的抗凝血活性并评价其质量。     

不同炮制方法对白芍中芍药苷含量的影响

目的考察不同炮制方法对白芍中芍药苷含量的影响。方法应用清炒、酒炙、醋炙3种炮制方法加工白芍饮片，采用HPLC法测定各种炮制品中的芍药苷含量。结果各炮制品中芍药苷含量由高到低依次为：生白芍〉炒白芍〉酒白芍〉醋白芍。结论不同炮制方法对白芍中芍药苷含量有较大影响。     

结合传统性状客观化分析何首乌不同炮制方式与炮制程度的色彩色差

目的:结合传统性状观察,对不同炮制方式下不同炮制程度的制何首乌进行色彩色差分析,为何首乌饮片颜色的客观数据化提供研究基础。方法:观察何首乌炮制品性状,采用CM-5型测色仪测定样品的L,a,b,计算色差值ΔE与总色值E,运用SAS 9.2统计软件进行聚类分析,分析炮制程度与色差检测结果的相关性。结果:2个产地的何首乌生品及其对照饮片粉末均为黄白色,E为70.31±3;制何首乌对照饮片粉末为棕褐色,E为52.24,与生何首乌对照饮片比较,ΔE为18.63;何首乌炮制后颜色加深,E降低,4种炮制方式显示相同的变化规律;且随炮制时间延长,颜色逐渐由棕黄色、浅棕色、深棕色、棕褐色直至变为棕黑色,其E也由61.11逐渐降至30.45,说明总色值能够表明何首乌的炮制程度。通过聚类分析可区分生品与炮制品,并将不同炮制程度的炮制品聚为一类。结论:色差仪的检测数据可以准确区分生何首乌与制何首乌,且能够客观准确地表达不同炮制程度的制何首乌粉末颜色变化。色彩色差检测可用于何首乌饮片的质量评价。     

炮制因素对蜜炙党参的影响北大核心CSCD

考察蜜炙过程中加热、加蜜因素对党参饮片外观性状、化学成分含量及药理活性的影响,探讨蜜炙党参的炮制机制。对生品、清炒品、拌蜜品、蜜炙品4种党参炮制品的颜色、甜度、大分子成分(低聚糖、多糖)和小分子成分(党参炔苷、苍术内酯Ⅲ)的含量进行测定,并比较4种炮制品水提物、多糖、低聚糖的体外抗氧化活性。结果显示,在外观性状方面,清炒品较生品的颜色及甜度变化不大,拌蜜品有较大变化,蜜炙后变化更加显著。化学成分方面,党参炔苷、苍术内酯Ⅲ、多糖提取物含量均表现为生品>清炒品>拌蜜品>蜜炙品,表明加热和加蜜均会引起3种成分含量的降低;低聚糖提取物含量表现为蜜炙品≈拌蜜品>清炒品≈生品,表明加蜜会使低聚糖含量增高。体外抗氧化活性方面,水提物、多糖及低聚糖的ABTS自由基清除能力均以蜜炙品最高,其他3种党参炮制品的各提取物体外抗氧化活性强弱变化各不相同。总体来看,加热或加蜜均会对党参饮片的外观性状、成分含量及体外抗氧化活性产生影响,但不及两因素的共同作用效果。综合分析两因素对党参饮片各方面的影响,可以看出引入炼蜜后高温加热,是蜜炙党参活性增强的必要条件,两因素缺一不可。     

补骨脂生品及炮制品体外抑菌活性研究

目的 以中药补骨脂为研究对象,研究补骨脂生品及炮制品对金黄色葡萄球菌(SA)、耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(M RSA)和β-内酰胺酶阳性的金黄色葡萄球菌(ESBLs-SA)的体外抑菌活性.方法 以小檗碱为阳性对照,利用K-B法和液体培养法进行体外抑菌活性研究.结果 石油醚部位是补骨脂生品主要的抑菌活性部位,补骨脂生品及炮制品对SA的抑制活性＞MRSA＞ ESBLs-SA,酒炙补骨脂(甲醇总提取物)和酒炙补骨脂(石油醚部位)在质量浓度为50 mg/mL对3种菌的抑菌圈均为12 mm,活性较好;液体培养法中,酒炙补骨脂石油醚部位(IC50 =0.10 mg/mL)活性最好.结论 不同炮制方法对补骨脂抑菌作用有明显的影响,尤其是酒炙补骨脂抑菌活性增强的较显著.     

丹参不同炮制品α-葡萄糖苷酶抑制活性

目的:考察丹参生品及5种炮制品的α-葡萄糖苷酶的抑制活性变化。方法:通过采用体外α-葡萄糖苷酶抑制模型,以阿卡波糖为阳性对照,测定α-葡萄糖苷酶抑制活性。结果:丹参生品和炮制品各部位均存在一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性,且均高于阳性对照药阿卡波糖。除丹参炭甲醇(ME)提取物外,其他炮制丹参ME提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性均大于丹参生品ME提取物;丹参炮制品石油醚(PE)部位抑制活性与丹参生品PE部位接近;丹参炮制品乙酸乙酯(EA)部位抑制活性均低于丹参生品EA部位;丹参炮制品参正丁醇(BU)部位对α-葡萄糖苷酶的抑制活性均高于丹参生品BU部位,各部位的抑制活性均与质量浓度呈正相关性,具有浓度依赖性。结论:丹参炮制品可不同程度的增加α-葡萄糖苷酶抑制活性。     

基于颜色数字化和多成分测定的生、炙甘草质量快速评价研究北大核心CSCD

为了探究甘草蜜炙前后饮片颜色值变化规律,及与内在成分的关联性,建立生、炙甘草饮片质量快速评价方法。该研究采用分光测色技术对生、炙甘草饮片进行颜色值数字化,建立生、炙甘草颜色值标准范围,确立生、炙甘草饮片的判别分析模型,进而快速准确判别生、炙甘草饮片。利用HPLC对生、炙甘草中9种黄酮类及1种三萜类成分进行含量测定,并通过Pearson相关性分析将饮片断面颜色值与10种成分含量进行关联分析。最终建立的生甘草饮片颜色值L^(*)、a^(*)、b^(*)的标准范围分别为65.539 6~68.305 8,7.296 3~8.467 3,29.998 8~32.212 8;炙甘草饮片颜色值标准范围为43.654 3~47.166 4,14.050 0~15.133 8,16.424 6~20.984 8;与生甘草相比,炙甘草颜色值L^(*)、b^(*)降低,a^(*)升高,可见甘草蜜炙后,白、黄色值降低,红色值升高。建立的不同炮制品判别分析模型原始及交叉验证均符合要求,模型外验证也能100%正确预测炮制品类别。Pearson相关性分析结果表明颜色值a^(*)与芹糖甘草苷和芹糖异甘草苷含量呈显著正相关(P<0.05),而颜色值L^(*)、b^(*)与上述2种成分含量呈显著负相关(P<0.05)。甘草蜜炙之后L^(*)、b^(*)降低,a^(*)升高,芹糖甘草苷、芹糖异甘草苷含量均升高,与含量测定结果一致。该研究揭示了甘草蜜炙前后饮片颜色值变化规律,以及颜色与内在成分的关联性,为甘草蜜炙前后饮片质量快速评价提供科学依据。     

UPLC-QE/MS法分析丹参酒炙前后5种质变化合物

目的通过UPLC-QE/MS法分析丹参Salvia miltiorrhiza Bge.酒炙前后5种质变化合物(迷迭香酸、丹酚酸B、隐丹参酮、二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ_A)的转化机制。方法采用已知对照品模拟炮制技术,制备丹参酒炙前后5种质变化合物的模拟炮制品,其80%甲醇溶液的分析采用Halo C_(18)柱(100 mm×2.1 mm,2.7μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;柱温45℃;体积流量0.25 mL/min;检测波长280 nm。结果丹参中5种主要成分发生了质变,丹酚酸B模拟炮制品中检出了丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸C;隐丹参酮模拟炮制品中检出了丹参酮Ⅱ_A;二氢丹参酮Ⅰ模拟炮制品中检出了极少的丹参酮Ⅰ;丹参酮Ⅱ_A模拟炮制品中检出了二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅰ;迷迭香酸模拟炮制品中检出了丹参素、咖啡酸、阿魏酸。结论丹参酒炙后主要酚酸类成分和丹参酮类成分均发生了质变。     

狗脊微波炮制过程中指标成分与粉末颜色关联性分析

目的研究狗脊Cibotium baronetz(L.)J.sm.微波炮制过程中指标成分含有量与粉末颜色的相关性。方法采用Adobe Photoshop软件获取各炮制品色度值(L、a、b),采用HPLC法测定狗脊微波炮制过程中原儿茶酸、5-羟甲基糠醛的含有量变化,并考察指标成分含有量与色度值的相关性。结果随着炮制时间的延长,温度逐渐升高,原儿茶酸、5-羟甲基糠醛含有量逐渐升高,当温度高于215℃时,其含有量逐渐降低。原儿茶酸、5-羟甲基糠醛含有量与色度值L值呈负相关,与色度值a值呈正相关。结论狗脊微波炮制品粉末颜色与指标成分含有量之间具有一定相关性,可作为微波炮制过程中监测炮制品质量评价的依据。     

不同炮制法对大黄活血化瘀作用影响的比对研究

目的:比较和分析大黄四种炮制品(生大黄、酒大黄、熟大黄、大黄炭)的活血化瘀作用异同。方法:皮下注射大量盐酸肾上腺素附加冰水浴造成大鼠急性血瘀模型,观察大黄四种炮制品对急性血瘀模型大鼠血液流变学各指标的影响。结果:大黄四种炮制品对急性血瘀大鼠的全血黏度、血浆黏度、红细胞压积、血浆纤维蛋白原(FIB)以及凝血酶原时间(PT)、凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)等指标均具有不同程度的改善作用。其中,生大黄低剂量(1.75g/kg)能显著降低全血黏度低切值、血浆黏度、RBC压积、FIB和血小板聚集性,同时延长TT;生大黄高剂量(3.5g/kg)能够显著降低全血黏度高切值、RBC压积、FIB,同时延长PT和APTT。酒大黄低剂量(1.75g/kg)给药即可见血浆黏度显著降低、TT显著延长;酒大黄高剂量(3.5g/kg)可下调全血黏度低切值、RBC压积、并延长PT。熟大黄低剂量(1.75g/kg)给药可下调血浆黏度;熟大黄高剂量(3.5g/kg)能够延长PT和TT。大黄炭高低剂量组对各血瘀指标均未见显著影响。结论:除大黄炭组外,大黄各炮制品对血瘀大鼠均有一定的活血作用,但对活血化瘀各指标的作用各有不同,体现出了中药多成分通过多部位、多靶点产生多效应的作用特点;它们影响机体活血指标不尽相同,且在某些指标上表现出显著差异,也表明不同的炮制方法可能通过改变大黄的物质基础形成了各炮制品的药性差异,而最终显示出不同的生物活性。     

不同种类酒炙对牛膝饮片甜菜碱含量的影响

目的:比较牛膝不同种类、不同乙醇浓度酒炮制品中甜菜碱含量,探讨酒炙对牛膝甜菜碱含量的影响。方法:高效液相色谱-蒸发光散射检测器分析法。结果:不同种类、不同乙醇浓度酒炮炙的牛膝饮片中甜菜碱的含量从高到低趋势为:生品>白酒炙品>花雕酒炙品>加饭酒炙品>河南黄酒炙品。结论:牛膝不同种类、不同浓度酒炮制品中甜菜碱的含量发生变化,酒炙后甜菜碱的含量有减低的趋势,但酒的乙醇含量与甜菜碱的含量变化之间没有明显规律性。