苗药金乌健骨方对CIA模型大鼠关节滑膜细胞NF-κB调控作用研究

目的观察苗药金乌健骨方对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜细胞核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法将60只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、苗药金乌健骨方高、中、低剂量组和雷公藤多苷对照组各10只,除空白对照组外,其余各组建立CIA大鼠模型,致炎第7天开始灌胃治疗,4周后处死大鼠,分离关节滑膜,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测滑膜组织中NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达。结果金乌健骨方高中剂量组和雷公藤多苷对照组NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα蛋白活性均低对于模型对照组(P0.05),金乌健骨方高剂量组最明显,低于雷公藤多苷对照组(P0.05)。结论苗药金乌健骨方对CIA大鼠关节滑膜细胞NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的蛋白活性有抑制作用。     

艾灸对类风湿性关节炎大鼠滑膜组织自噬相关分子表达的影响

目的:观察艾灸对类风湿性关节炎(RA)大鼠滑膜组织中自噬相关基因(Atg)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-失调51样激酶1(ULK1)、Beclin-1和微管相关蛋白轻链3(LC3)表达及滑膜细胞超微结构的影响,探讨艾灸通过细胞自噬途径发挥抗炎和调节细胞增殖作用的机制。方法:40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、香烟灸组和药物组,每组8只。采用风、寒、湿环境因素结合左后足跖皮下注射完全弗氏佐剂建立RA模型。艾灸组使用直径0.9 cm的艾条对"足三里"(左侧)施灸,施灸距离皮肤2 cm,每日1次,每穴每次灸20 min,共灸15 d;香烟灸组处理方法同艾灸组,用直径0.8 cm普通卷烟代替艾条;药物组予以雷公藤多苷片混悬液灌胃(0.8 mg/100 g),每日1次,连续给药15 d。用足跖容积测量仪测量各组大鼠左后肢足跖容积,透射电镜观察滑膜细胞超微结构,荧光定量PCR法检测滑膜组织Atg3、Atg5、Atg12、ULK1 mRNA的表达,Western blot法检测滑膜组织LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠左后肢足跖容积增加(P0.01),滑膜组织Atg3、Atg5、Atg12、ULK1 mRNA及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达均显著降低(P0.01)。与模型组比较,艾灸组和药物组大鼠足跖关节容积均显著降低(P0.01),Atg3、Atg5、Atg12、ULK1 mRNA及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达均显著升高(P0.01);香烟灸组Atg3、Atg12、ULK1 mRNA表达显著增加(P0.05,P0.01)。与艾灸组比较,药物组、香烟灸组大鼠左后肢足跖关节容积均增加(P0.05,P0.01),香烟灸组Atg3、Atg5、Atg12、ULK1 mRNA及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达均降低(P0.01,P0.05),药物组Atg3、ULK1 mRNA表达显著升高(P0.01)。与香烟灸组比较,药物组左后肢足跖关节容积显著降低(P0.01),Atg3、Atg5、Atg12、ULK1 mRNA及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达均显著升高(P0.01)。与正常组比较,模型组滑膜细胞损伤明显,出现病理性改变;与模型组比较,艾灸组、药物组和香烟灸组均有不同程度缓解。结论:RA模型大鼠关节滑膜细胞的自噬水平低于正常大鼠,艾灸和雷公藤多苷灌胃干预能改善关节肿胀和滑膜细胞损伤,增强其自噬水平,且艾灸的消肿作用强于雷公藤多苷。艾灸可能通过提高自噬水平发挥修复RA滑膜细胞损伤的作用。     

苗药金乌健骨方对类风湿关节炎滑膜细胞IL-17-STAT3信号影响的研究

探讨苗药金乌健骨方总提物对类风湿关节炎成纤维滑膜细胞(RASF)IL~(-1)7-STAT3信号的影响。培养原代RASF,分为正常血清组、金乌健骨方低、中、高剂量组(0.06,0.6,6.0 g·L~(-1))和雷公藤多苷(0.03 g·L~(-1))组,分别予相应浓度的金乌健骨方和雷公藤多苷干预24 h。PCR检测RORα,RORγt,STAT3 mRNA的表达,Western blot法检测IL-17R,p STAT3的蛋白活性。结果显示,与正常血清组比较,RASF中RORα,RORγt,IL-17R和STAT3 mRNA的表达量均有所下降,具有统计学意义(P0.01),与雷公藤多苷组比较,金乌健骨方高、中剂量组均能下调RORα,RORγt,IL-17R和STAT3 mRNA的表达,具有统计学意义(P0.05),金乌健骨方高剂量组作用更明显,具有统计学差异(P0.01)。与正常组比较,各给药组IL-17R,p STAT3的蛋白表达水平明显下降(P0.01)。与雷公藤多苷组比较,金乌健骨方高剂量组下调p STAT3蛋白表达的作用更强,具有统计学差异(P0.01)。由此可见,苗药金乌健骨方总提物能够下调RASF中RORα,RORγt,STAT3 mRNA的表达,抑制IL-17R,p STAT3的蛋白活性。     

苗药金乌健骨方对类风湿关节炎滑膜细胞IL-17-STAT3信号影响的研究北大核心CSCD

探讨苗药金乌健骨方总提物对类风湿关节炎成纤维滑膜细胞（RASF）IL^-17-STAT3信号的影响。培养原代RASF,分为正常血清组、金乌健骨方低、中、高剂量组（0.06,0.6,6.0 g·L^-1）和雷公藤多苷（0.03 g·L^-1）组,分别予相应浓度的金乌健骨方和雷公藤多苷干预24 h。PCR检测RORα,RORγt,STAT3 mRNA的表达,Western blot法检测IL-17R,p STAT3的蛋白活性。结果显示,与正常血清组比较,RASF中RORα,RORγt,IL-17R和STAT3 mRNA的表达量均有所下降,具有统计学意义（P〈0.01）,与雷公藤多苷组比较,金乌健骨方高、中剂量组均能下调RORα,RORγt,IL-17R和STAT3 mRNA的表达,具有统计学意义（P〈0.05）,金乌健骨方高剂量组作用更明显,具有统计学差异（P〈0.01）。与正常组比较,各给药组IL-17R,p STAT3的蛋白表达水平明显下降（P〈0.01）。与雷公藤多苷组比较,金乌健骨方高剂量组下调p STAT3蛋白表达的作用更强,具有统计学差异（P〈0.01）。由此可见,苗药金乌健骨方总提物能够下调RASF中RORα,RORγt,STAT3 mRNA的表达,抑制IL-17R,p STAT3的蛋白活性。     

扶脾柔肝方含药血清对大鼠原代肝星状细胞上皮间质转化及自噬的影响

目的观察扶脾柔肝方(FRR)含药血清对大鼠原代肝星状细胞(PHSC)上皮间质转化及自噬的影响。方法体外培养大鼠原代肝星状细胞,设立空白对照组,模型组,FRR低、中、高剂量组(20、40、80 g·kg~(-1),10%含药血清),氯喹组(CQ,50μmol·L~(-1)),采用转化生长因子-β1(TGF-β1,10 ng·mL~(-1))刺激PHSC发生上皮间质转化,给予相应药物干预24 h。RFP-GFP-LC3斑点法观察HSC自噬;脂滴染色观察脂质变化情况;实时荧光定量PCR法和Western Blot检测各组细胞中Beclin-1、LC3-Ⅱ、E-cadherin、α-SMA mRNA和蛋白表达。结果与空白对照比较,模型组HSC自噬增强(P0.01),脂质减少(P0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达水平明显升高(P0.01),E-cadherin降低(P0.01);与模型组比较,FRR中、高剂量组HSC自噬减弱(P0.01),脂质增加(P0.05,P0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达水平明显降低(P0.01),E-cadherin升高(P0.01);与氯喹组比较,FRR大剂量组Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达水平明显降低(P0.01),E-cadherin升高(P0.01)。结论 FRR药物血清可降低大鼠HSC自噬水平,增加细胞脂质,降低Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达,升高E-cadherin表达,具有逆转HSC上皮间质转化与抑制细胞自噬的功效。     

化瘀通络汤对脑小血管病致认知功能障碍患者执行功能的影响

目的观察扶脾柔肝方(FRR)含药血清对大鼠原代肝星状细胞(PHSC)上皮间质转化及自噬的影响。方法体外培养大鼠原代肝星状细胞,设立空白对照组,模型组,FRR低、中、高剂量组(20、40、80 g·kg~(-1),10%含药血清),氯喹组(CQ,50μmol·L~(-1)),采用转化生长因子-β1(TGF-β1,10 ng·mL~(-1))刺激PHSC发生上皮间质转化,给予相应药物干预24 h。RFP-GFP-LC3斑点法观察HSC自噬;脂滴染色观察脂质变化情况;实时荧光定量PCR法和Western Blot检测各组细胞中Beclin-1、LC3-Ⅱ、E-cadherin、α-SMA mRNA和蛋白表达。结果与空白对照比较,模型组HSC自噬增强(P0.01),脂质减少(P0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达水平明显升高(P0.01),E-cadherin降低(P0.01);与模型组比较,FRR中、高剂量组HSC自噬减弱(P0.01),脂质增加(P0.05,P0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达水平明显降低(P0.01),E-cadherin升高(P0.01);与氯喹组比较,FRR大剂量组Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达水平明显降低(P0.01),E-cadherin升高(P0.01)。结论 FRR药物血清可降低大鼠HSC自噬水平,增加细胞脂质,降低Beclin-1、LC3-Ⅱ、α-SMA mRNA及蛋白表达,升高E-cadherin表达,具有逆转HSC上皮间质转化与抑制细胞自噬的功效。     

苗药金乌健骨方对胶原诱导关节炎模型大鼠NF-κB及IL-17表达的影响

目的探讨苗药金乌健骨方对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型大鼠关节滑膜细胞核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)及血清IL-17表达的影响。方法将60只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、金乌健骨方高、中、低剂量组及雷公藤多苷组,每组10只,除空白对照组外,其余各组建立CIA大鼠模型,造模第7天开始灌胃治疗,用药4周后处死大鼠,收集血清,分离关节滑膜,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清IL-17水平,免疫印迹法(Western blot)检测关节滑膜组织NF-κB/P65、NF-κB/P50及IκBα蛋白的表达水平。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血清IL-17水平升高(P0.01);与模型组比较,金乌健骨方高、中剂量及雷公藤多苷组血清IL-17表达水平明显降低(P0.01)。Western blot结果显示,与空白对照组比较,模型组大鼠关节滑膜NF-κB/P65、NF-κB/P50及IκBα蛋白活性增强(P0.01);与模型组比较,金乌健骨方高、中剂量及雷公藤多苷组NF-κB/P65、NF-κB/P50蛋白活性明显降低(P0.05,P0.01),金乌健骨方低剂量组上述指标均高于雷公藤多苷组,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论苗药金乌健骨方能降低CIA模型大鼠血清IL-17表达,抑制NF-κB/P65、NF-κB/P50的蛋白活性。     

苗药金乌健骨方对类风湿关节炎滑膜细胞IL-17/IL-17R的影响

目的探讨苗药金乌健骨方总提物对类风湿关节炎滑膜组织成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)白细胞介素6(IL-6)、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素17(IL~(-1)7)分泌及IL~(-1)7受体(IL~(-1)7R)蛋白的影响。方法采用组织块法体外培养原代RA-FLS;分为金乌健骨方低、中、高剂量组(0.06,0.6,6.0 mg·m L~(-1)),雷公藤多苷组(0.03 mg·m L~(-1))及空白对照组,共5组。采用ELISA法检测IL-6、TGF-β、IL~(-1)7含量;PCR法检测IL~(-1)7R m RNA表达;Western Blot法检测IL~(-1)7R蛋白表达。结果与空白对照组比较,各给药组细胞培养上清液中IL-6、TGF-β、IL~(-1)7的浓度均有不同程度的降低(P0.01),IL~(-1)7R m RNA及蛋白表达水平均明显下降(P0.01)。与雷公藤多苷组比较,金乌健骨方高剂量组IL-6、TGF-β、IL~(-1)7水平及IL~(-1)7R蛋白表达量明显降低(P0.05),金乌健骨方中、高剂量组IL~(-1)7R m RNA表达水平明显降低(P0.05)。结论苗药金乌健骨方总提物能够下调RA-FLS中IL-6、TGF-β、IL~(-1)7的分泌,降低IL~(-1)7R m RNA及蛋白表达量。     

五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响

目的明确五味温通除痹胶囊(桂枝、茯苓、淫羊藿,等)对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响,探讨其防治类风湿关节炎的可能机制。方法雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、五味温通除痹胶囊(0.80、1.60、3.20 g/kg)组、阳性药雷公藤多苷片(40 mg/kg)组,每组10只。除正常组外,采用弗氏完全佐剂诱导佐剂性关节炎大鼠模型。致炎后第12天灌胃给药,连续12 d。实验结束后,取非致炎侧踝关节,HE染色观察病理学改变,实时定量荧光PCR测定滑膜组织中Beclin-1、LC3-ⅡmRNA的表达,免疫荧光组织化学染色和Western blot法检测滑膜组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果与模型组相比,五味温通除痹胶囊(1.60、3.20 g/kg)不仅可减轻佐剂性关节炎大鼠关节病理损伤程度,还可显著升高Beclin-1、LC3-ⅡmRNA和蛋白的表达水平。结论五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与促进细胞自噬,减少滑膜细胞的过度增殖,从而减轻关节软骨损伤有关。     

自拟蠲痹补肾方含药血清对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的研究

目的探讨不同浓度自拟蠲痹补肾方对类风湿关节滑膜炎症的影响机制,为临床应用提供实验依据。方法Wistar大鼠32只随机分为4组:空白对照组(灭菌用水灌胃)、自拟蠲痹补肾方高浓度组、自拟蠲痹补肾方低浓度组,雷公藤多苷片组。通过研究高低二个不同剂量的自拟蠲痹补肾方对类风湿关节炎的患者滑膜成纤维细胞的影响,探讨其可能的作用机制。结果与空白对照血清相比,自拟蠲痹补肾方含药血清均能显著抑制滑膜成纤维细胞PCNA mRNA、Bcl-2 mRNA表达(P<0.0001)。结论自拟蠲痹补肾方可能是通过调节滑膜成纤维细胞PCNA mRNA、Bcl-2 mRNA表达,抑制滑膜成纤维细胞增殖而发挥作用。     

痰瘀同治方对心肌缺血再灌注损伤过程中自噬与凋亡相关基因调节作用研究

目的:观察痰瘀同治方对心肌缺血再灌注损伤(IR)不同阶段自噬与凋亡相关基因的调控作用。方法:将80只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、痰瘀同治方组(43 g·kg~(-1)ig)及3-MA干预组(13.5 mg·kg~(-1)iv)。可逆性冠脉左前降支结扎缺血30 min,再灌注2 h复制心肌缺血(MI)及IR模型,利用全自动生化仪检测血清肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)含量;采用RT-PCR法检测各组大鼠心肌自噬基因Beclin-1,心肌微管相关蛋白轻链3蛋白(LC3)及抗凋亡蛋白Bcl-2表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠在缺血及再灌注阶段血清CK,LDH含量及心肌Beclin-1,LC3 mRNA表达均显著增强,且Bcl-2 mRNA表达减弱(P0.01);与模型组比较,痰瘀同治组能降低缺血期血清CK及再灌注期CK,LDH含量(P0.05),抑制缺血期Beclin-1 mRNA及再灌注期Beclin-1,LC3 mRNA表达,上调缺血期及再灌注期Bcl-2 mRNA表达(P0.05,P0.01);与假手术组,3-MA组比较,痰瘀同治组在缺血期可上调Beclin-1,LC3 mRNA表达(P0.01)。经相关性检验,缺血期及再灌注期Beclin-1与Bcl-2均呈负相关表达(P0.01)。结论:痰瘀同治方通过促进缺血期自噬发生及抑制再灌注期自噬过表达,同时促进抗凋亡蛋白Bcl-2表达而发挥其对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。     

月华胶囊对耐多药结核分支杆菌感染自噬的影响

目的:以月华胶囊含药血清对耐多药结核分支杆菌感染小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)进行干预,探讨其对耐多药结核分支杆菌感染巨噬细胞自噬的作用及其机制。方法:低温冷冻干燥法制备月华胶囊,大鼠按3.02 g·kg^-1灌胃给药7 d,制备月华胶囊含药血清。体外培养RAW264.7,耐多药结核分子杆菌。以细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测含药血清对RAW264.7的增殖能力并选定其有效浓度。细胞分为模型组(10%胎牛血清);月华胶囊含药血清组(10%月华胶囊);自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)+月华胶囊含药血清组(5 mg·L^-1的3-MA+10%月华胶囊含药血清);雷帕霉素(Rap)组(200 mg·L^-1的Rap+10%胎牛血清);正常组(10%胎牛血清)。除正常组外,各组细胞培养24 h后,按细胞-细菌1∶10感染4 h。透射电镜观察细胞自噬体的出现和形成;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中I型微管相关蛋白轻链3(LC-3Ⅰ),Ⅱ型微管相关蛋白轻链3/I型微管相关蛋白1轻链3(LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ),Beclin-1蛋白的表达;间接免疫荧光染色法观察细胞中LC3B荧光颗粒、斑点及亮度;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中LC3,Beclin-1 mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量均无显著变化,细胞无荧光颗粒、斑点,无荧光亮度。与模型组比较,月华胶囊含药血清组及Rap组细胞,均可观察到自噬体的形成,细胞LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均明显升高(P<0.05),月华胶囊含药血清组细胞荧光颗粒和荧光斑点明显增多,Rap组细胞荧光颗粒和荧光斑点增多非常明显,荧光闪亮,可判定细胞荧光呈现为阳性;自噬抑制剂3-MA+月华胶囊含药血清组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均无明显升高。结论:月华胶囊含药血清能使耐多药结核分支杆菌感染细胞产生自噬而发挥抗结核的免疫效应,其机制是通过调控自噬相关蛋白LC3,Beclin-1蛋白及其mRNA的表达水平,促使LC3-I趋向LC3-Ⅱ的转化加快而实现的。     

湿生扁蕾总(口山)酮通过调控TGF-β/Smad和自噬相关通路对NCM460细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨湿生扁蕾总(口山)酮介导TGF-β/Smad和自噬相关通路对NCM460细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法 采用2.5μg/mL脂多糖(LPS)持续干预细胞14 d建立EMT模型，CCK-8法筛选最佳湿生扁蕾总(口山)酮给药剂量。设计空白组、模型组、吡菲尼酮组(200μg/mL)和湿生扁蕾总(口山)酮低、中、高剂量组(50、100、200μg/mL),采用Western blot法检测细胞ZO-1、α-SMA、Beclin-1、P62、Bcl-2、LC3B蛋白表达，RT-qPCR法检测细胞ZO-1、α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3、Snail1 mRNA表达，免疫荧光观察细胞中α-SMA表达，TUNEL染色观察细胞凋亡情况，MDC染色和透射电镜分别观察细胞中自噬囊泡和自噬小体数目。结果 湿生扁蕾总(口山)酮质量浓度小于200μg/mL时对细胞活率无明显影响(P>0.05),故选择50、100、200μg/mL为低、中、高剂量组。与空白组比较，模型组细胞ZO-1、Beclin-1、Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白和ZO-1 mRNA表达降低(P&...     

参元丹含药血清对缺氧复氧心肌细胞自噬的影响

目的:观察参元丹含药血清对缺氧复氧心肌细胞自噬的影响,探讨参元丹心肌保护作用机制。方法:建立缺氧复氧心肌细胞损伤模型,采用免疫细胞化学法观察心肌细胞微管相关蛋白1轻链3(LC3)和磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)表达,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法测定自噬相关基因(Beclin-1)和半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达量。结果:与正常对照组相比,缺氧复氧组LC3和PI3K荧光表达增强,参元丹含药血清组与相应浓度空白血清组相比,细胞LC3和PI3K荧光表达强度减弱,其中参元丹含药血清10%组PI3K荧光强度明显降低,具有统计学意义(P0.05);缺氧复氧组细胞Beclin-1和Caspase-3 mRNA表达量明显升高,与相应浓度空白血清组相比,参元丹含药血清组Beclin-1 mRNA表达水平明显降低;参元丹含药血清5%组Caspase-3 mRNA表达量降低。结论:参元丹含药血清对缺氧复氧细胞自噬具有抑制作用,可能与抑制PI3K,下调Beclin-1和Caspase-3基因有关。     

丹参多酚酸盐诱导胶质瘤细胞自噬的实验研究

目的:研究丹参多酚酸盐对胶质瘤U251细胞自噬的影响。方法:丹参多酚酸盐作用胶质瘤U251细胞后,倒置显微镜动态观察细胞形态,CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,MDC荧光染色观察细胞自噬水平,Western-Blot检测自噬蛋白LC3的表达,qRT-PCR检测自噬基因Beclin-1的表达。结果:经丹参多酚酸盐处理后,胶质瘤U251细胞形态出现异常,CCK-8法检测发现细胞增殖能力下降,MDC荧光染色观察可见U251细胞质内有大量自噬体和自噬溶酶体,其自噬水平随丹参多酚酸盐作用时间的延长逐渐增强。Western-Blot法检测发现自噬相关蛋白LC3的表达随着丹参多酚酸盐浓度增加而增加,且随着药物浓度的增加,LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化增多。qRT-PCR法检测发现自噬相关基因Beclin-1 mRNA的表达随着丹参多酚酸盐浓度增加而增加。结论:丹参多酚酸盐可诱导胶质瘤U251细胞发生自噬,其诱导U251细胞发生自噬的机制可能与上调Beclin-1的表达有关。     

基于自噬-NLRP3炎症小体-IL-1β信号轴探究热补针法对类风湿关节炎寒证模型家兔滑膜炎症的影响

目的 观察热补针法对类风湿关节炎（RA）寒证模型家兔滑膜组织自噬-NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体-白细胞介素（IL）-1β信号轴的影响，探讨热补针法治疗RA滑膜炎症的作用机制。方法 48只新西兰家兔随机分为正常组、模型组、3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、雷帕霉素组、热补针法组及平补平泻组，每组8只。以弗氏完全佐剂+卵蛋白诱导联合低温冷冻法复制RA寒证家兔模型。热补针法组和平补平泻组于“足三里”分别施热补针法及平补平泻针法针刺，留针30 min,1次/d，连续14 d;3-MA组和雷帕霉素组分别耳缘静脉注射3-MA和雷帕霉素溶液，1次/2 d，共7次。免疫组化染色检测膝关节滑膜组织IL-1β表达，免疫荧光染色检测滑膜组织NLRP3表达，透射电镜观察滑膜细胞自噬小体形态，Western blot检测滑膜组织自噬蛋白5(Atg5)、UNC-51样激酶1(ULK1)、微管相关蛋白轻链3(LC3)、Beclin-1蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组家兔膝关节周径显著增加、皮温显著降低（P<0.05），滑膜组织IL-1β、NLRP3表达显著升高（P<0.05）,Atg5、UL...     

基于活性氧簇-自噬通路调控的加味黄芪赤风汤对肾小球足细胞的保护机制研究

目的观察加味黄芪赤风汤基于活性氧簇(ROS)-自噬通路对AngⅡ诱导肾小球足细胞损伤的保护机制。方法制备低、中、高剂量加味黄芪赤风汤(分别应用生药浓度为0.57、1.15、2.29 g/mL的加味黄芪赤风汤灌胃小鼠)含药血清及替米沙坦(0.83 mg/mL灌胃小鼠)含药血清,采用AngⅡ(1×10~(-7)mol/L)诱导足细胞损伤模型,分为空白组,模型组,加味黄芪赤风汤低、中、高剂量组以及替米沙坦组;为验证自噬与模型的关系,设置3MA与氯喹组。采用Western Blot检测足细胞损伤相关蛋白nephrin、podocin及自噬相关蛋白LC3、Beclin-1、P62表达,溶酶体荧光探针检测自噬流活性,透射电镜观察足细胞内自噬体的形成,流式细胞仪检测细胞内ROS平均荧光强度(MFI)。结果与空白组比较,模型组足细胞nephrin、podocin、P62表达下调(P0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1表达上调(P0.01),ROS的MFI增强(P0.01)。透射电镜及溶酶体荧光探针结果显示模型组自噬体数量增多,溶酶体表达增强。与模型组比较,加味黄芪赤风汤中、高剂量组及替米沙坦组nephrin、podocin、P62表达上调(P0.01,P0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1表达下调(P0.01,P0.05);3MA及氯喹组足细胞nephrin、podocin表达下调(P0.01,P0.05);加味黄芪赤风汤低剂量组Beclin-1表达下调(P0.05);各给药组ROS MFI减弱(P0.01,P0.05)。透射电镜及溶酶体荧光探针结果显示加味黄芪赤风汤组及替米沙坦组自噬体数量减少,溶酶体表达减弱。结论 AngⅡ通过下调nephrin、podocin表达损伤足细胞;加味黄芪赤风汤可上调AngⅡ诱导的nephrin、podocin表达,缓解足细胞损伤;加味黄芪赤风汤可能基于ROS-自噬通路,下调AngⅡ诱导的自噬流,拮抗肾小球足细胞损伤。     

基于自噬途径探讨加味麻杏石甘汤干预放射性肺损伤的分子机制

目的:从自噬相关因子的表达研究加味麻杏石甘汤干预放射性肺损伤的发生机制。方法:将肺泡细胞A549分为空白组、模型组及麻杏石甘汤低、中、高剂量组(以下简称低、中、高剂量组)。除空白组外,其余各组细胞进行X线照射,建立放射性肺损伤细胞模型。模型组细胞用10%正常大鼠血清培养,低、中、高剂量组分别用10%低、中、高剂量的含药血清培养。分别采用Western-blot及RT-PCR检测肺泡细胞A549中转化生长因子-β1 (TGF-β1)、Beclin-1、LC3蛋白及mRNA表达。结果:与空白组比较,模型组细胞中TGF-β1、Beclin-1、LC3蛋白及mRNA表达均升高(P0.05)。与模型组比较,低、中、高剂量组细胞中TGF-β1、Beclin-1、LC3 mRNA表达均下降(P0.05),且随着剂量的升高而下降(P0.05);低、中、高剂量组TGF-β1蛋白表达下降(P0.05),中、高剂量组Beclin-1、LC3蛋白表达下降(P0.05),且TGF-β1、Beclin-1、LC3蛋白表达随着剂量的升高而下降(P0.05)。结论:加味麻杏石甘汤可通过下调肺泡细胞A549内TGF-β1、LC3、Beclin-1水平,调控自噬过程,减轻放射性肺损伤。     

化痰消瘀方通过调节自噬对大鼠癌前病的改善作用

目的探究化痰消瘀方通过调节自噬对大鼠癌前病的改善作用。方法构建大鼠PLGC模型,将大鼠随机分为对照组、模型组、胃复春组(0.5 g/kg)及化痰消瘀方低、高剂量组(5、10 g/kg),灌胃给药4个月。记录大鼠在治疗过程的生存状况、体质量;HE染色观察胃窦部组织病理状态,免疫组化、Western blot及RT-PCR检测LC3、Raptor、Beclin-1蛋白及mRNA表达。结果与模型组比较,化痰消瘀方提高PLGC大鼠体质量(P0.05),抑制PLGC大鼠胃组织LC3、Raptor、Beclin-1蛋白及mRNA表达(P0.05),以上三者蛋白均在细胞核或细胞中表达,化痰消瘀方能改善PLGC大鼠胃窦部组织病理状态。结论化痰消瘀方能改善PLGC大鼠胃窦部组织病理状态,其可能机理在于降低胃组织LC3、Raptor、Beclin-1自噬相关蛋白及mRNA表达。     

石蒜碱诱导人肝癌HepG_2细胞自噬的体外实验研究

目的:探讨石蒜碱诱导人肝癌HepG_2细胞自噬的作用,为石蒜碱抗肿瘤研究提供实验依据。方法:体外培养人肝癌HepG_2细胞,采用CCK-8法测定细胞增殖抑制率。倒置显微镜观察细胞形态,荧光显微镜观察细胞自噬小体。流式细胞术测定细胞自噬率及加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用后的细胞自噬率变化。Western blot法检测与自噬相关的蛋白LC3-Ⅱ与Beclin-1的表达。结果:石蒜碱对HepG_2细胞增殖抑制作用随浓度的升高而增强,其作用72 h的IC_(50)为6.27μmol/L。倒置显微镜观察阴性对照组细胞形状完好且紧密排列。石蒜碱各组随给药浓度的升高,细胞变圆、漂浮、排列稀疏生长缓慢的状态越加明显;荧光显微镜可观察到细胞自噬小体的数量随石蒜碱浓度升高而升高。流式细胞仪检测石蒜碱组细胞自噬率与给药浓度呈正相关,加入抑制剂(3-MA)后细胞自噬受到抑制。Western blot法检测结果显示随石蒜碱浓度的升高LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达上调,均显著高于对照组(P0.01);3-MA抑制剂能显著拮抗其作用。结论:石蒜碱能诱导肝癌HepG_2细胞自噬,其机制可能是上调肝癌HepG_2细胞中LC3-Ⅱ与Beclin-1蛋白的表达,促使自噬小体形成与成熟,导致细胞过度自噬,最终使细胞凋亡。