丁苯酞对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨丁苯酞(NBP)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 不同浓度的NBP(0.1、1.0、10、100 μmol/L)作用到经Aβ诱导或未经诱导的PC12细胞上,然后分别采用细胞存活率检测(MTT)及PI单染、透射电镜方法检测细胞凋亡,采用western印迹法检测Bcl-2和Cyt-C蛋白的表达,进而观察NBP对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的保护作用.结果 MTT显示不同浓度(0.1、1.0、10、100 μmol/L)NBP组细胞存活率分别为76.5%±1.1%、84.2%±1.3%、89.5%±1.3%、81.9%±1.9%,明显高于模型组(71.7%±1.4%),其中10 μmol/LNBP组最明显,差异有统计学意义(P＜0.05);流式细胞学结果显示10 μmol/L NBP组细胞凋亡率明显低于模型组(P＜0.05);电镜下模型组细胞凋亡特征明显,10 μtmol/L NBP组细胞形态接近正常;Western印迹显示:10 μmol/L NBP组Bcl-2蛋白表达增加,而模型组Bcl-2表达明显减少(P＜0.05);模型组胞质Cyt-C表达最强,而10μmol/L NBP组有较弱的Cyt-C表达(P＜0.05).结论 NBP对Aβ诱导的PC12细胞凋亡有保护作用,其机制可能和NBP增加Bcl-2蛋白水平,抑制Cyt-C从线粒体的释放有关.     

芒果苷通过PI3K/Akt/mTOR通路对蛛网膜下腔出血后神经细胞的保护作用

目的 探讨芒果苷(MF)在蛛网膜下腔出血(SAH)后早期阶段对神经细胞的保护作用及机制.方法 采用小鼠来源神经瘤母细胞(Neuro-2a细胞)和氧合血红蛋白(OxyHb)建立体外SAH模型,分为对照组、蛛网膜下腔出血组(SAH)及芒果苷干预组(MF+SAH)3组,利用免疫荧光检测受损线粒体与溶酶体的结合;利用JC-1和DCFH-DA分别检测线粒体膜电位(Δψm)和活性氧(ROS);Western blot分别检测细胞内磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达,胞浆、线粒体中凋亡相关蛋白淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl2关联X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt-C)和Caspase-3的表达.结果 与对照组相比,SAH组线粒体膜电位(Δψm)明显去极化(P<0.05),细胞内ROS水平增多(P<0.01),p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的表达水平显著减少(P<0.05),胞浆内Cyt-C表达水平显著增加(P<0.05),线粒体内Cyt-C表达水平显著减少(P<0.05),Bax和Caspase-3表达水平显著增加(P<0.05),Bcl-2表达水平显著减少(P<0.05);与SAH组相比较,MF+SAH组Δψm和ROS明显恢复(P<0.05),p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的表达水平明显增加(P<0.05),胞浆内Cyt-C表达水平显著下降(P<0.05),线粒体内Cyt-C表达水平显著增加(P<0.05),Bax和Caspase-3表达显著减少(P<0.05),Bcl-2表达显著增加(P<0.05).结论 芒果苷可以通过稳定线粒体膜电位,减少ROS的产生,改善线粒体功能障碍,从而抑制SA H后早期阶段神经细胞的凋亡.     

促红细胞生成素对缺氧复氧心肌细胞的保护作用及其机制

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对缺氧复氧(H/R)心肌细胞是否具有保护作用及其机制。方法以乳鼠心肌细胞株(H9C2细胞)为研究对象,将其分为对照组、H/R组及EPO干预组。其中对照组常规培养;H/R组缺氧2 h后复氧24 h;EPO干预组在缺氧2 h后加入不同浓度的EPO(5、10、20 IU/ml)处理,然后复氧24 h。培养结束后分别检测各组细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)浓度,使用MTS法检测细胞存活率,使用Western blot检测细胞内Cleaved Caspase-3表达变化,使用线粒体和胞浆蛋白制备试剂盒分离线粒体和胞浆蛋白,使用Western blot分别检测线粒体和胞浆内Omi/HtrA2蛋白表达变化。结果与对照组比较,H/R组细胞存活率明显下降,细胞上清液LDH释放明显增加,细胞内Cleaved Caspase-3表达增强,胞浆内Omi/HtrA2蛋白表达增强,差异均有统计学意义(P0.05);而与H/R组相比,EPO干预组细胞存活率上升,细胞上清液LDH释放降低,Cleaved Caspase-3表达减弱,胞浆内Omi/HtrA2蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P0.05),但各指标均未恢复至对照组水平。结论 H/R可诱发心肌细胞凋亡,EPO可减轻H/R诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能为抑制线粒体内Omi/HtrA2蛋白的转位,从而抑制Caspases通路激活有关。     

阿司匹林对缺血性脑梗死神经元细胞凋亡的影响及机制

目的:探究阿司匹林对缺血性脑梗死大鼠神经元细胞凋亡的影响及其机制。方法:90 只健康 SD 大鼠随 机分为 3 组,分别为对照组、模型组、阿司匹林组(50 mg·kg-1),每组各 30 例,除对照组外,其余两组均采用颈总动脉 阻断的方法建立大鼠缺血性脑梗死模型。阿司匹林组造模前 5 天连续给予 50 mg·kg-1 剂量的阿司匹林灌胃,第 6 日处死 3 组大鼠,TUNEL 法检测大鼠脑组织神经元细胞凋亡情况;Western blot 技术检测大鼠脑组织神经元 Bcl-2、 Bax 蛋白表达及 Cyt-C 释放情况。结果:TUNEL 法检测结果显示阿司匹林组大鼠脑组织神经元细胞凋亡率明显少 于模型组,Western blot 技术检测结果显示阿司匹林组大鼠脑组织神经元 Bcl-2 蛋白表达量显著高于模型组,而 Bax 蛋白表达及 Cyt-C 释放量显著低于模型组,以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:阿司匹林能够有效减轻因 缺血性脑梗死引发的脑组织神经元细胞凋亡从而发挥神经保护作用,其机制可能与减少线粒体 Cyt-C 释放,同时升 高 Bcl-2 蛋白表达量以及降低 Bax 蛋白表达量有关。     

姜黄素联合多烯紫杉醇诱导PC-3细胞凋亡的实验研究

目的探讨姜黄素联合多烯紫杉醇对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将体外培养的PC-3细胞分为对照组(仅加培养基)、姜黄素组(5.0μmol/L姜黄素处理)、多烯紫杉醇组(2.5nmol/L多烯紫杉醇处理)及联合组(5.0μmol/L姜黄素与2.5nmol/L多烯紫杉醇联合处理),作用24h。用流式细胞仪分析PC-3细胞凋亡率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测Bcl-2及Bax mRNA和蛋白的表达情况。结果姜黄素和多烯紫杉醇均可诱导PC-3细胞凋亡,二者联合用药组的细胞凋亡率明显高于单药组(P<0.05);RT-PCR及Western blot显示姜黄素和多烯紫杉醇都可明显下调Bcl-2mRNA和蛋白的表达率,而上调Bax mRNA和蛋白表达率,且联合组细胞Bax与Bcl-2表达的改变更明显。结论姜黄素和多烯紫杉醇可能通过下调Bcl-2,上调Bax的表达协同诱导PC-3细胞的凋亡。     

丁苯酞拮抗Aβ1-42致原代培养皮层神经元凋亡的保护机制

目的 探讨丁苯酞(NBP)对Aβ1-42致原代培养皮层神经元凋亡线粒体的保护作用及其机制.方法 用0.1、1、10 μmol/L NBP预处理4h,Aβ1-42 10 μmoVL作用24h后,用MTT比色法检测细胞存活率,分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,免疫荧光法染色观察细胞形态、计算凋亡细胞比率,Western blot定量检测Bcl-2、Bax、Capsase-3、Cleaved caspase-3、Cytc等线粒体凋亡途径相关蛋白的表达水平.结果 Aβ1-42作用24h后细胞存活率显著下降,神经元凋亡率显著增加,MDA含量和LDH活性明显增高,SOD活性下降,Bax、Capsase-3、Cleaved easpase-3、胞浆中Cytc表达增加、Bcl-2和线粒体内Cytc表达下降(P＜0.05).NBP预处理可以使细胞存活率明显升高,细胞凋亡率明显降低,MDA含量和LDH活性下降、SOD活性增高(P＜0.05),NBP预处理可以拮抗Aβ1-42引起的Bax、Capsase-3、Cleaved caspase-3、胞浆中Cytc表达增加、Bcl-2和线粒体内Cytc表达下降(P＜0.05).结论 NBP可以减少Aβ1-42引起氧化损伤,通过线粒体凋亡途径抑制神经元凋亡.     

内毒素对过氧化氢引起的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响

目的：观察内毒素(LPS)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响,探讨其相关机制。方法：C6细胞按处理方法不同分为空白对照组、100 μmol•L^-1 LPS组、1 000 μmol•L^-1 H₂O₂组及1 000 μmol•L^-1 H₂O₂与100μmol•L^-1 LPS联合应用组。药物作用C6细胞6 h,取培养液上清与细胞沉淀,利用LDH检测试剂盒,采用紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;原位末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡率;应用RT-PCR检测相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、细胞色素C(Cyt-C)及CLIC4蛋白水平。结果：与空白对照组比较, 100 μmol•L^-1 LPS组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2、Bax表达率未见明显改变(P>0.05),而Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,与空白对照组比较,Bcl-2、Bax、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平未见明显变化(P>0.05) ,而Caspase-3蛋白水平高于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组比较,1 000 μmol•L^-1 H₂O₂组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05);在mRNA水平上Bcl-2表达率低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率高于空白对照组(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于空白对照组(P<0.05)。与H₂O₂组和LPS组比较,LPS与H₂O₂联合作用组细胞凋亡率及LDH释放率明显增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2表达率下降(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于对照组(P<0.05),而CLIC4蛋白水平变化不明显(P>0.05)。结论：单独应用LPS能够激活Caspase-3信号通路,引起C6细胞早期凋亡,同时LPS能促进H₂O₂引起的C6细胞损伤,其机制可能与凋亡相关的Bcl-2/Bax及Caspase-3途径过度激活有关。线粒体氯通道蛋白CLIC4在此过程中作用不明显。     

氯通道阻断剂DIDS对过氧化氢诱导PC12细胞凋亡的影响

目的:探讨氯通道阻断剂DIDS抗PC12细胞凋亡的作用机制。方法:取处于对数生长期的PC12细胞,随机分为对照组、模型组(用400 nmol/L H2O2诱导细胞凋亡)和DIDS组(H2O2+DIDS),培养12 h后,用MTT法测定各组细胞的存活率,Western blot法观察凋亡相关蛋白Caspase-3和Bcl-2蛋白的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:400 nmol/L H2O2可以明显诱导PC12细胞损伤,细胞存活率为(35.07±1.23)%;DIDS组细胞存活率明显高于模型组,且具有一定浓度依赖性(F=640.420,P<0.001)。与对照组比较,模型组细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,DIDS组Caspase-3表达降低,Bcl-2蛋白表达增加,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:DIDS可能通过抑制Caspase-3依赖性凋亡信号通路发挥抗凋亡作用。     

N-乙酰半胱氨酸萝卜硫素通过上调Bak和下调Bcl-2蛋白表达诱导前列腺癌细胞凋亡

目的探究N-乙酰半胱氨酸萝卜硫素(D,L-sulforaphane N-Acetyl-L-cysteine,SFN-NAC)诱导前列腺癌细胞凋亡的分子机制。方法将前列腺癌细胞DU145和PC-3分别培养在6孔板中,当细胞密度达到70%-80%时,分别随机分为对照组(不加SFN-NAC)和加药组(加入终浓度为30μmol/L的SFN-NAC),继续在37℃培养24 h。利用AnnexinⅤ异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(FITC/PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡程度;利用Western blot检测Bak、Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组相比,加药组的细胞凋亡率增高(P<0.01)。加药组细胞Bak蛋白表达较对照组升高(P<0.05);Bax蛋白表达也有少量增加,但与对照组相比,无统计学差异(P>0.05);Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05);Bax/Bcl-2比值增加(P<0.01);细胞cleaved Caspase-3表达水平升高(P<0.01)。结论 N-乙酰半胱氨酸萝卜硫素通过上调Bak、下调Bcl-2蛋白表达,活化Caspase-3,诱导前列腺癌细胞凋亡,说明N-乙酰半胱氨酸萝卜硫素通过线粒体途径发挥抗癌作用。     

地黄活性成分梓醇抗Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡作用

目的探讨地黄活性成分梓醇对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用。方法常规培养PC12细胞,加入不同浓度梓醇,24 h后加20μmol/L Aβ25-35,48 h后观察梓醇的作用,MTT法测定细胞存活率,TUNEL法测定细胞凋亡发生率,半定量RT-PCR检测细胞Bax和Bcl-2 mRNA表达。结果梓醇终浓度1×10-5mol/L和1×10-4mol/L显著提高PC12细胞存活率(P<0.05和P<0.01);1×10-4mol/L显著降低细胞凋亡发生率(P<0.01)。Aβ25-35损伤可引起凋亡相关蛋白BaxmRNA的表达增加,梓醇终浓度5×10-5mol/L和1×10-4mol/L有降低作用(P<0.05和P<0.01);同时Aβ25-35使Bcl-2 mRNA的表达降低,梓醇有提高作用(P<0.05和P<0.01)。结论地黄活性成分梓醇有对抗Aβ25-35损伤引起的PC12细胞凋亡作用。     

EPO预处理在心肌细胞缺氧复氧损伤中的抗凋亡作用研究

目的 观察促红细胞生成素(EPO)预处理在培养心肌细胞缺氧复氧损伤中的抗凋亡效应,进一步研究其可能机制.方法 建立大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型,将细胞分为对照组、EPO组[缺氧复氧前24h培养液中加入终浓度10u/mL重组人EPO(rhEPO)]、EPO+吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)组(缺氧复氧前24h加入终浓度10u/mL rhEPO和5μg/mL PDTC)及PDTC组(缺氧复氧前24h加入终浓度5μg/mLPDTC).于缺氧复氧损伤前后观察各组心肌细胞存活率(MTT法),用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,EMSA检测缺氧复氧损伤前后各组心肌细胞NF-κB活性变化,RT-PCR检测损伤前后各组心肌细胞bcl-2 mRNA表达变化.结果 缺氧复氧损伤后各组细胞存活率较损伤前对照组显著降低(P<0.01),EPO组高于其余各组(P<0.01);损伤后各组心肌细胞凋亡率较损伤前显著升高(P<0.01),EPO组凋亡率低于其余各组(P<0.01);损伤前EPO组心肌细胞NF-κB活性显著高于其余各组(P<0.01),损伤后各组NF-κB活性较损伤前显著升高(P<0.01),EPO组低于其余各组(P<0.05);损伤前EPO组bcl-2mRNA表达水平显著高于其余各组(P<0.01),损伤后各组心肌细胞bcl-2mRNA表达水平均较损伤前显著升高(P<0.01),EPO组仍高于其余各组(P<0.01).结论 EPO预处理在培养心肌细胞缺氧复氧损伤中具有显著抗凋亡效应;EPO预处理心肌细胞抗凋亡保护作用与预处理过程中NF-κB活化有关;EPO预处理过程中NF-κB活化,通过上调抗凋亡基因bcl-2表达,产生抗凋亡效应.     

果糖对电离辐射诱发AHH-1细胞凋亡的保护作用

目的：观察果糖对淋巴母细胞AHH-1辐射损伤保护作用。方法：照射前12 h给予不同浓度的腺嘌呤,再经4.0 Gy 60Coγ射线照射诱发细胞凋亡,采用MTS法计算细胞存活率;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;RT-PCR分析细胞Caspase-9、Bax、Bcl-2 mRNA表达的变化;Western blot 分析细胞Caspase-9、Bax、Bcl-2蛋白改变。结果：与正常组相比,电离辐射后细胞存活率78.0%显著下降（P<0.05）,细胞照射前加入果糖其存活率随浓度的增加而升高（P<0.05）,细胞中Caspase-9、Bax的mRNA和蛋白表达明显减少,Bcl-2的mRNA和蛋白表达明显增加,凋亡的各项指标均明显改善。结论：果糖对电离辐射诱发的细胞凋亡有保护作用,并对细胞凋亡的抑制呈剂量依赖正相关关系。     

瑞马唑仑诱导PC-12细胞炎症因子表达和凋亡

目的 探讨瑞马唑仑对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC-12炎症因子表达和凋亡的影响。方法 不同浓度的瑞马唑仑（25、50、125、250μmol/L）处理PC-12细胞,并设置对照组,细胞活力检测试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖,酶联免疫吸附测定（ELISA）检测肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素-6 (IL-6)、白细胞介素-1β (IL-1β)的水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果 与对照组相比,瑞马唑仑处理组的细胞增殖能力、Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,而炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平、细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论 瑞马唑仑可诱导PC-12细胞的炎症反应,并能通过调节凋亡相关蛋白的表达促进PC-12凋亡。     

褐藻素通过线粒体通路和氧化应激诱导前列腺癌细胞凋亡

目的 旨在探讨褐藻素（Fx）对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 采用相应的试剂盒检测PC-3细胞活力和细胞凋亡。荧光探针染色检测PC-3细胞中的线粒体膜电位、线粒体形态和线粒体超氧化物。同时采用相应的试剂盒检测PC-3细胞中三磷酸腺苷、过氧化氢、丙二醛和超氧化物的含量以及总抗氧化能力。Western blot方法检测PC-3细胞中Bcl-2、Bax和细胞色素c蛋白的表达。采用相应的试剂盒检测PC-3细胞中caspase-9和caspase-3/7活性。结果 Fx呈时间和剂量依赖性地抑制PC-3细胞活力,呈剂量依赖性地诱导PC-3细胞凋亡（P<0.05）。经Fx处理后,PC-3细胞中的线粒体膜电位水平降低,线粒体碎片化,线粒体超氧化物水平升高（P<0.05）,且Fx的作用效果成剂量依赖性。Fx剂量依赖性地降低PC-3细胞中的三磷酸腺苷水平和总抗氧化能力,剂量依赖性地增加过氧化氢、丙二醛和超氧化物的含量（P<0.05）。经Fx处理后,PC-3细胞中Bax和细胞质中细胞色素c的水平呈剂量依赖性增加,PC-3细胞中Bcl-2和线粒体中细胞色素c的水平呈剂量依赖性降低（P<0.05）。结论 Fx通过引发线粒体功能障碍导致氧化应激和激活线粒体介导的凋亡信号通路诱导PC-3细胞凋亡,提示Fx有望成为治疗前列腺癌的潜在药物。     

丁苯酞抑制大鼠急性心肌缺血导致的心肌损伤

目的探讨丁苯酞( NBP)在大鼠心肌梗死后对心肌细胞线粒体损伤、心肌梗死面积及心肌细胞凋亡的作用。方法92只雄性SD大鼠分为假手术组8只,模型组、NBP低剂量组、中剂量组和高剂量组各21只。其中模型组和NBP组通过结扎冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死模型,假手术组仅开胸,不结扎冠状动脉。采用TUNEL法检测模型组和NBP低、中、高剂量组大鼠梗死区心肌细胞凋亡。电子透射显微镜观察模型组和NBP高剂量组梗死交界区的心肌细胞超微结构。 TTC染色分析模型组和NBP高剂量组心肌梗死面积,Western blot法检测模型组和NBP高剂量组大鼠心肌梗死4 h后抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达水平。结果在大鼠急性心肌梗死实验过程中,NBP预处理过的大鼠与模型组相比,NBP中、高剂量组显著减少心肌细胞凋亡(P<0.05);NBP高剂量组可显著缩小大鼠急性心肌梗死面积(P<0.01),同时可有效抑制线粒体损伤(P<0.05);NBP高剂量组可显著提高Bcl-2蛋白表达水平( P<0.05)及Bcl-2/Bax的比值( P <0.05)。结论 NBP 通过提高 Bcl-2蛋白表达水平及Bcl-2/Bax的比值,减少线粒体损伤,降低心肌梗死过程中细胞凋亡指数,缩小心肌梗死面积,有效地抑制急性心肌缺血导致的心肌损伤。     

非小细胞肺癌EGFR基因突变与放射敏感性的相关性

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与非小细胞肺癌(NSCLC)放射敏感性的相关性及可能机制.方法 选取EGFR基因突变的NSCLC细胞株PC-9、H1975和EGFR野生型NSCLC细胞株A549.克隆成型实验检测放射敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测凋亡蛋白和修复蛋白表达.结果 PC-9、H1975细胞放射敏感性明显高于A549细胞,4Gy照射下克隆存活率分别为10.0％、5.5％和44.3％;4 Gy照射后48 h PC-9和H1975细胞凋亡率显著高于A549细胞,分别为18.300％、17.533％和11.733％.A549细胞发生G0/G1期阻滞显著高于PC-9、H1975细胞,4Gy照射后48 h G0/G1期细胞分别为74.480％、70.293％和57.016％.A549细胞在4Gy照射后促凋亡蛋白Bax表达缺失,凋亡蛋白Caspase-3、抗凋亡蛋白Bcl-2、修复蛋白DNA-PKcs在24 h仍有表达.而PC-9、H1975细胞在4Gy照射后Bax、Caspase-3表达增多,Bcl-2不表达,DNA-PKcs表达减少.结论 EGFR 19外显子缺失突变细胞PC-9和21外显子点突变细胞H1975,相对EGFR野生型细胞A549对放射线敏感,其机制与细胞周期G0/G1期阻滞、Bax表达增多、DNA-PKcs、Bcl-2表达降低有关.     

PPARγ在肾癌细胞凋亡中的调控作用

目的 探讨PPARγ激动剂罗格列酮和抑制剂T0070907对肾癌A498细胞促凋亡, 抗肿瘤的影响.方法 A498细胞分为3组, 分别加入含有PBS, 罗格列酮 (50μmol/L) 以及T0070907 (50μmol/L) 的完全培养液孵育24 h, MTT法检测各组细胞增殖情况, 应用Western Blot和RT-q PCR分析细胞中BAX、Caspase-3、Cyt-C和Bcl-2的表达水平, 分别在光镜和荧光显微镜下观察A498细胞形态变化.结果 MTT实验结果显示, 罗格列酮和T0070907能够明显抑制A498细胞增殖率 (P<0.05) , 上调A498细胞内Caspase-3、Cyt-C及Bax蛋白和m RNA的表达, 下调Bcl-2蛋白和m RNA的表达 (P<0.05) ;经光镜和Hochest染色观察也发现罗格列酮和T0070907能够促进A498细胞凋亡.结论 罗格列酮和T0070907均可抑制肾细胞癌A498细胞的增殖, 诱导其凋亡, 其抗肿瘤机制有可能与PPARγ的介导有关.     

氯喹增强乳腺癌细胞对他莫昔芬化疗敏感性的作用研究

目的:探讨氯喹(chloroquine,CQ)增强乳腺癌细胞对他莫昔芬(tamoxifen,TAM)化疗敏感性的作用及其机制.方法:以雌激素受体阳性乳腺癌细胞MCF-7为研究对象,分为空白对照组、TAM组、CQ组和CQ+TAM组,空白对照组不加药物,仅用培养基培养,其余各组加入相应药物培养.采用MTT法检测各组细胞存活率;通过集落克隆形成实验观察低浓度CQ、TAM及其联用对MCF-7细胞增殖的抑制作用;溴化丙啶单染检测各组细胞凋亡率;Western blot法检测各组蛋白表达情况.结果:TAM组、CQ组和TAM+CQ组24 h、48 h、72 h细胞存活率均明显低于空白对照组(P<0.01),TAM+CQ组24 h、48 h、72 h细胞存活率亦均明显低于TAM组和CQ组(P<0.01),TAM组24 h存活率低于CQ组(P<0.05).集落克隆形成实验结果显示,低浓度CQ抑制MCF-7细胞集落形成不明显,但CQ可明显增强TAM的抑制作用.4组间细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.01),其中TAM组、CQ组和TAM+CQ组细胞凋亡率均明显高于空白对照组(P<0.01),TAM+CQ组细胞凋亡率亦均明显高于TAM组和CQ组(P<0.01).Western blot结果显示,随时间增加,TAM组Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白表达升高,p62蛋白表达降低;与空白对照组比较,TAM组LC3Ⅱ蛋白表达明显升高,p62蛋白表达降低;而CQ+TAM组LC3Ⅱ、Beclin-1和p62蛋白表达均较TAM组升高,Bcl-2蛋白表达降低.结论:CQ可增强乳腺癌细胞对TAM化疗的敏感性,其机制可能是通过下调Bcl-2表达,抑制细胞自噬反应.     

促红细胞生成素对阿尔茨海默病样大鼠记忆能力及凋亡相关蛋白的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对阿尔茨海默病(AD)样大鼠记忆能力和凋亡相关蛋白的影响。方法雄性Wistar大鼠应用Y迷宫进行空间定向学习和记忆训练5 d后,将达到学会标准的48只大鼠随机分为4组:正常对照组、生理盐水(NS)组、模型组和EPO治疗组,每组12只。其中NS组大鼠双侧海马注射NS各5μL,模型组和EPO治疗组大鼠双侧海马注射凝聚态β-淀粉样蛋白(Aβ)各5μL造模。EPO治疗组大鼠从造模手术当天按5 000 IU·kg-1腹腔注射EPO,隔日1次。术后第10天Y迷宫法检测各组大鼠空间定向学习和记忆能力,透射电镜观察海马线粒体和突触结构的改变,采用免疫组织化学技术检测各组大鼠海马组织Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与NS组比较,模型组大鼠学习记忆能力显著下降(P<0.05);与模型组比较,EPO治疗组大鼠Y迷宫作业尝试次数减少,错误反应次数减少,全天总反应时间缩短,差异有统计学意义(P<0.05)。透射电镜结果显示,正常对照组和NS组大鼠神经细胞结构完整,线粒体膜、嵴完整,神经轴突和神经突触结构完整;EPO治疗组大鼠海马线粒体和神经突触基本正常;模型组大鼠海马线粒体结构破坏,线粒体肿胀,线粒体嵴断裂,结构紊乱,神经突触密度降低,突触膜增厚,突触间隙不清,突触小泡数量减少。与NS组比较,模型组大鼠海马Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强;与模型组比较,EPO治疗组大鼠海马Bcl-2蛋白表达增强,Bax蛋白表达减弱,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论EPO可以显著改善AD样大鼠的空间记忆能力,减轻Aβ对大鼠海马超微结构的破坏。EPO可能通过调节Bcl-2/Bax水平抑制神经元的凋亡,这可能是EPO改善AD大鼠认知功能障碍的机制之一。     

促红细胞生成素对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的预防作用研究

目的:研究促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)预防阿霉素(Doxorubicin,DOX)诱导的心肌细胞凋亡的作用.方法:原代培养乳鼠心肌细胞,随机分为空白对照组、模型对照组及不同浓度(6.25、25、100 IU/ml)EPO预处理组,各组预处理24 h后加人5 μg/ml的DOX.24 h后采用流式细胞术检测细胞凋亡率,甲基噻唑基四唑(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果:与空白对照组相比模型对照组细胞活力明显减低,凋亡率显著增高.不同浓度EPO预处理的心肌细胞活力较模型对照组显著增高,细胞凋亡率显著降低,并且凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达增高,凋亡蛋白Bax的表达降低.结论:EPO对DOX诱导的心肌细胞的损伤具有预防作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax有关.