海南发现4株产NDM-1多重耐药的肺炎克雷伯菌

目的分离和鉴定海南地区临床上发现的耐碳青霉烯类药物的肺炎克雷伯菌携带新德里金属β-内酰胺酶-1（NDM-1）基因的细菌。方法使用法国梅里埃API20E生化鉴定条和VITEK2全自动细菌鉴定仪及其配套的GNS试剂,鉴定出临床上耐亚胺培南和美洛培南的肺炎克雷伯菌;并经改良Hodge试验和亚胺培南,亚胺培南＋EDTA纸片法协同试验检测产金属酶类碳青霉烯酶,对目的菌株进行NDM-1耐药基因PCR特异性扩增,扩增后产物进行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定;同时将目的菌株进行质粒接合转移试验分析其耐药机制,并对接合前后的药敏结果进行比较分析。结果从13株耐亚胺培南或美洛培南的肺炎克雷伯菌中,经亚胺培南,亚胺培南＋EDTA纸片法协同试验检出4株阳性,确定为产金属酶类碳青霉烯酶细菌。该4株产金属酶的肺炎克雷伯菌的改良Hodge试验均为阴性,NDM-1基因PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和测序分析,确认此4株目标菌株均为携带NDM-1的耐药基因的耐药菌株;这4株接合子E．coli J53（NDM-1）对所有β-内酰胺类药物的MIC值较受体菌E．coli J53耐药性均有很大提高,经PCR扩增其接合子NDM-1基因片段分析证实4株接合子均接合成功。结论海南发现的4株耐碳青霉烯酶类的肺炎克雷伯菌为携带blaNDM-1基因,且其NDM-1耐药基因可通过质粒在不同菌株之间传递。     

携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药致肺炎克雷伯菌感染的暴发

目的了解临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,Kpn）KPC型碳青霉烯酶基因blaKPC存在状况。方法在2008年11月至2009年7月间,从住院病人中分离出19株泛耐药肺炎克雷伯菌,采用改良Hodge试验检测菌株产碳青霉烯酶情况,采用PCR及序列分析的方法分析blaKPC基因。结果19株泛耐药肺炎克雷伯菌改良Hodge试验结果均阳性、blaKPC基因阳性率为100．0％,序列分析确认均blaKPC-2亚型,其HZ001号菌株（原始编号HZ9871）blaKPC-2基因序列已登录GenBank,注册号为GU086225。结论临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌均携带blaKPC-2基因,产KPC-2型碳青霉烯酶应该是本组菌株对碳青霉烯类抗生素耐药主要原因。     

碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌筛选及临床分析

目的 筛选碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(CRKP)及现状分析.方法 采用K-B法及配套GN卡上机鉴定、改良Hodge法试验、EDTA纸片协同试验筛选碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌.结果 2015年7月~2016年12月,本院临床科室送检标本分离碳青霉烯类肺炎克雷伯菌菌株36株.结果表明,碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌院内尤其是重症医学科病房感染严重,其多重耐药现象突出.结论 建议开展其同源性分析及监测肺炎克雷伯菌流行情况,应引起医院高度重视.     

产KPC肺炎克雷伯菌检测方法构建与耐药机制

目的 探讨产肺炎克雷伯型碳青霉烯酶(KPC)肺炎克雷伯菌检测方法以及肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制、可能的治疗药物.方法 选取K-B法证实的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌36株纳入本研究,使用改良Hodge试验、Carba NP试验对菌株进行验证,随后采用PCR扩增、产物琼脂糖凝胶电泳实验,并对电泳阳性条带进行基因测序鉴定.结果 K-B法药敏试验显示36株耐碳氢烯类肺炎克雷伯菌,随后行Hodge验证,33株(91.7%)是产KPC肺炎克雷伯菌,对碳氢烯类耐药而对替加环素及米诺环素仍然敏感.对Hodge试验阳性33株再行Carba NP试验确证,其中27株(87.9%)阳性,6株(12.1%)阴性;对Hodge试验阳性33株行PCR扩增及电泳实验,共有27株出现目标条带(340 bp)提示阳性,与Carba NP试验结果相一致.对出现目标条带的27株肺炎克雷伯菌再进行KPC-2耐药基因PCR扩增产物测序,均为KPC-2型耐药基因.结论 K-B法药敏试验加随后改良Hodge试验验证对于筛查、发现KPC肺炎克雷伯菌具有较高的符合度,为发现KPC肺炎克雷伯菌有效筛查方法.K-B法药敏试验证实对KPC肺炎克雷伯菌,替加环素等可能是有效治疗的药物之一.Hodge试验检测的KPC肺炎克雷伯菌,存在12.1%(6/33)的假阳性率.Carba NP 试验及PCR扩增检测一致性好,具有确证产KPC肺炎克雷伯菌作用.随后的测序研究结果表明检测出的KPC肺炎克雷伯菌均为KPC-2,该型是引起肺炎克雷伯菌对碳青酶烯酶耐药的主要机制.     

产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药性检测及变迁

目的探讨产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的流行及耐药情况,为临床合理使用抗生素提供依据。方法采用BD Phoenix 100全自动细菌鉴定药敏系统及纸片扩散法测定病原菌的耐药性,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶和Etest MBL确认纸条法表型筛查金属-内酰胺酶。结果近3年临床肺炎克雷伯菌检出株数并无明显变化,但改良Hodge试验阳性株检出率逐年增加,金属-内酰胺酶阳性株检出率也逐年增加。耐碳青霉烯类菌株对大多数抗生素的耐药率较高且逐年上升,但对氨基糖甙类抗生素的敏感性尚可。结论产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药情况日益严重,应加强院感的监测和预防。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药基因及分子特征研究

目的：探讨临床分离的耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌的耐药基因和分子流行病学情况。方法：收集2018年1月—2019年3月临床分离的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）,采用VITEK-2 compact微生物鉴定仪进行菌种鉴定和药敏检测;改良Hodge和碳青霉烯酶灭活（m CIM）试验对菌株进行碳青霉烯酶表型检测;PCR检测β内酰类胺类（碳青霉烯酶、ESBL、Amp C酶）和喹诺酮类（PMQR）共19种耐药基因;多位点序列分析（MLST）对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）进行分子分型及同源性分析。结果：共收集CRE 134株,其中肺炎克雷伯菌125株,阴沟肠杆菌4株,大肠埃希菌3株,普罗威登菌2株;改良Hodge试验示114株阳性,碳青霉烯酶灭活（m CIM）试验示125株阳性;所有检测菌株均携带碳青霉烯类耐药基因;125株肺炎克雷伯菌中有118株携带blaKPC-2基因,另有5株携带blaNDM基因（4株携带blaNDM-1、1株携带blaNDM-5）和4株携带blaIMP-4基因,4株阴沟肠杆菌中3株携带blaNDM基因（2株携blaNDM-1、1株携带blaNDM-5）,1株...     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制研究

目的:探讨耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因及耐药特性.方法:对42株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行药敏试验、改良Hodge试验,并采用聚合酶链反应(PCR)方法检测细菌肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)基因.结果:42株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中,药敏试验结果显示耐药情况严重,仅对替加环素、阿米卡星、妥布霉素、复方新诺明较敏感.改良Hodge试验及KPC基因检测全部阳性,基因测序为KPC-2型.结论:KPC-2是引起肺炎克雷伯菌耐药的主要原因,应引起临床及实验室的关注.     

碳青霉烯耐药克雷伯菌耐药机制研究

目的:探讨天津医科大学第二医院分离得到的碳青霉烯耐药克雷伯菌的耐药机制。方法:2013-2014年度临床微生物实验室分离到36株碳青霉烯耐药克雷伯菌,改良Hodge试验、EDTA协同试验及 PCR法检测碳青霉烯酶耐药基因,PCR法检测ESBLs及Ampc酶耐药基因,PCR、实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测外膜蛋白基因Ompk35及Ompk36存在及表达情况。结果:9株改良Hodge试验阳性,EDTA协同试验均阴性,碳青霉烯酶耐药基因均阴性;36株碳青霉烯耐药克雷伯菌至少存在1种β内酰胺酶耐药基因;外膜蛋白基因无缺失,33株存在外膜蛋白表达量下降。结论: 分离的碳青霉烯耐药克雷伯菌耐药机制可能为ESBLs及Ampc酶表达合并外膜蛋白表达下降。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药基因分析

目的分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药情况及其耐药基因,为该菌感染的治疗和预防提供参考。方法收集临床分离非重复耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌50株,采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定药敏分析仪进行常规药敏试验,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)检测碳青霉烯酶,乙二胺四乙酸(EDTA)协同法检测金属酶,PCR扩增和基因测序技术检测其耐药基因。结果药敏结果显示,肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素类及氨曲南等抗生素的耐药率高达80%以上。50株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中,mCIM试验结果阳性37株,其中EDTA协同试验阳性有3株。PCR结果显示,37株mCIM试验阳性耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中,检测出33株KPC-2型耐药基因,未检测出IMP、VIM、NDM-1、OXA-48等耐药基因。结论耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对常用抗生素表现出高水平耐药,耐药机制主要为产碳青霉烯酶,耐药基因型主要以KPC-2型为主。     

丽水市中心医院产KPC酶肺炎克雷伯菌的分子流行病学研究

目的明确丽水市中心医院产KPC酶肺炎克雷伯菌的分子流行病学特征,为临床抗感染治疗提供实验依据。方法收集2011年3月至2015年10月丽水市中心医院分离的碳青霉烯类抗生素耐药肺炎克雷伯菌（CR-KP）。采用Vitek2-compact系统鉴定菌株并联合纸片扩散法（K-B法）检测其药敏,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;PCR法扩增KPC基因,测序后利用BLAST比对确定基因型;肠杆菌科基因间重复序列分型法（ERIC-PCR）联合多位点序列分型（MLST）鉴定菌种同源性;进而探讨产KPC酶肺炎克雷伯菌的分子流行病学特征。结果共收集到70株CR-KP,其中68株改良Hodge试验阳性,扩增产物测序结果均为blaKPC-2基因。ERIC-PCR结果显示,70株KPC型肺炎克雷伯菌分为A、B、C、D、E5个克隆群分别为63株(90.0%)、3株、2株、1株、1株;MLST分成6个ST型,其中ST11型63株（90.0%),ST35型2株,ST1型2株,ST592、ST1883、ST494型均1株。结论丽水市中心医院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的主要克隆群为ST11型,是我院流行感染的主要原因。